När och hur kan man mäta koagulationsfaktor III?

Transkript

1 När och hur kan man mäta koagulationsfaktor III? Carola Elisabeth Henriksson seksjonsleder, overlege Seksjon for hemostase og trombose Avdeling for medisinsk biokjemi Oslo Universitetssykehus, Rikshospitalet, Norge Tissue factor (TF) 13. mars 2015, EQUALIS användarmöte för koagulation, Stockholm

2 Protrombintid (PT) = INR XI ime

3 Protrombintid (PT) = INR XI Tissue factor (TF) ime Koagulasjonsfaktor III CD 142

4 Tissue factor er koagulasjonens fyrstikk 4

5 Tissue factor i hemostasen Tissue factor (TF) uttrykkes normalt kun på celler utenfor blodbanen såsom vaskulære glatte muskelceller, pericytter og fibroblaster Barriere - blod/vev TF TF Fibroblast Koagulasjonsfaktorer 5

6 Tissue Factor i hemostasen Tissue factor (TF) uttrykkes normalt kun på celler utenfor blodbanen såsom vaskulære glatte muskelceller, pericytter og fibroblaster Barriere - blod/vev TF TF Fibroblast Koagulasjonsfaktorer Når karskade skjer, kommer TF i kontakt med koagulasjonsfaktorene i blod og hemostasen er igang 6

7 Tissue Factor - hemostatic envelope Vitale organer som er utsatte for store påkjenninger har mye TF å sine ekstravaskulære celler Drake et al., Am J Pathol

8 Tissue factor er essentielt for liv TF deficiency i mus resulterer i embryonal død TF deficiency i menneske har ikke blitt rapportert 8

9 Tissue Factor i blodbanen ved sykdom Ved ulike sykdomstilstander kan TF (koagulasjonens fyrstikk) induseres på monocytter (inne i blodbanen).

10 Tissue Factor i blodbanen ved sykdom Ved ulike sykdomstilstander kan TF (koagulasjonens fyrstikk) induseres på monocytter (inne i blodbanen). Monocyttene kan i sin tur avgi avsnørte membrandeler (mikropartikler) med TF på overflaten. Disse mikropartiklene kan bidra til propagasjon av tromber. Mackman N. Blood Cells, Molecules, and Diseases 36(2006)

11 Mikropartikkel (MP) Definition = fragments released from stimulated or apoptotic cells after plasmamembrane remodeling = µm Morel et al, ATVB 2006;26:2549 Hugel et al., Physiology 20:22 27, 2005

12 Tissue Factor positive Mikropartikler (MPs) i klinisk sammenheng - markører på økt trombose-risiko?

13 Owens A P, Mackman N Circulation Research 2011;108:

14 Måling av «blood borne» TF Antigen: Flow cytometri ELISA Aktivitet: Clot formation assays - Selvkomponerte (fibrin generation assay, Faktor Xa-generating assay) - Komersielle med egen vri (CAT/ROTEM) Komersielle assays (antistoff/faktor basert)

15 Måling av «blood borne» TF Antigen: Flow cytometri ELISA Aktivitet: Clot formation assays - Selvkomponerte (fibrin generation assay, Faktor Xa-generating assay) - Komersielle med egen vri (CAT/ROTEM) Komersielle assays (antistoff/faktor basert) Mange utfordringer!

16 Måling av «blood borne» TF Antigen: Flow cytometri ELISA Aktivitet: Clot formation assays - Selvkomponerte (fibrin generation assay, Faktor Xa-generating assay) - Komersielle med egen vri (CAT/ROTEM) Komersielle assays (antistoff/faktor basert) Meningokokksykdom pasientprøver

17 Meningokokk sykdom Meningitis Nm-bacteria i meningiene Bra prognos Sepsis Nm-bacteria i blodet Dårlig prognos Massive koagulationsforstyrrelser

18 Norwegian biobank register no. 948 Studies in meningococcal disease 13 sepsis 10 meningitis

19 CAT (Calibrated automated thrombogram) 1. Mikropartikler (MPs) 2. Citratplasma (Corn trypsin inhibitor) 3. Ca ++ Ca ++ Ca ++ Ca ++ Ca ++ Ca ++ A: Lagtime (min.) B: Peak height (nm thrombin) C: ETP area under curve D: slope (nm thrombin/time) E: time to peak (min.)

20 Sepsis Meningitis Sepsis Meningitis SEPSIS: efficient & TF-dependent thrombin generation MENINGITIS: low & TF-independent thrombin generation

21 Non-survivor Survivor Hellum and Henriksson, Thromb Research, 2013

22

23 Predikere trombose ved cancersykdom?

24 Predikere trombose ved cancersykdom? Vi må modifiere CAT metoden så att TF positive mikropartikler gir mest mulig trombin generering

25 Hur skall vi gøra det?

26 Hur skall vi gøra det?

27 Tissue factor (TF) positiv Mikropartikkel

28 = Tissue factor (TF) positiv Mikropartikkel

29 = Tissue factor (TF) positiv Mikropartikkel

30 Tissue Factor Pathway inhibitor (TFPI) = = Tissue factor (TF) positiv Mikropartikkel

31 Tissue Factor Pathway inhibitor (TFPI) = = Tissue factor (TF) positiv Mikropartikkel

32 Tissue factor (TF) positiv Mikropartikkel =

33 CAT (Calibrated automated thrombogram) 1. Mikropartikler (MPs) 2. Citratplasma (corn trypsin inhibitor) med anti- TFPI antibodies 3. Ca ++ Ca ++ Ca ++ Ca ++ Ca ++ Ca ++

34 Stimulerte citratfullblod med meningokokkbakterier Sentrifugerte 2x2000g, avpipetterte plasma (= innhåller TF positive Mikropartikler)

35 Stimulerte citratfullblod med meningokokkbakterier Sentrifugerte 2x2000g, avpipetterte plasma (= innhåller TF positive Mikropartikler) PICTURE NOT SHOWN Økning i konsentrasjon av anti-tfpi antistoffer gir økning i trombin generering

36 Stimulerte citratfullblod med meningokokkbakterier Sentrifugerte 2x2000g, avpipetterte plasma (= innhåller TF positive Mikropartikler) PICTURE NOT SHOWN Økning i konsentrasjon av anti-tfpi antistoffer gir økning i trombin generering Fungerer metoden på pasientprøver?

37 Takk for oppmerksomheten