Utfordringer i den daglige kromatografien Undis Ellevog, M.Sc NITO, 04.02.2015
Senter for Psykofarmakologi Visjon: Den enkelte pasient skal få optimal behandling Legemiddelanalyser og farmakogenetiske analyser Leger, farmasøyter, bioingeniører, helsesekretærer og kjemikere Ca 140 000 analyser pr år
Utgangspunkt for foredraget Væskekromatografi: UPLC-MS/MS Ferdige metoder/prosedyrer ingen metodeutvikling Rutineanalyser Antidepressiva Antipsykotika Antiepileptika Benzodiazepiner Rusmidler Min egen hverdag Ingen detaljerte beskrivelser av løsninger Gir noen tips
Utfordringer i den daglige kromatografien Kolonner Reproduserbarhet Sekundære interaksjoner Endrede egenskaper Toppform Flere kokker - mer søl Eierskap Oppdage endringer Menneskelig å feile Person Løsninger Kvalitet Vann Buffer Vekst i flasker Utfordringer Respons Rask nok? Temperatur Prosessering Deteksjon Prøvematerialet Pumpe Matrikseffekter Prøveopparbeidelse Ukjente analytter Lekkasjer Tette sjekkventiler Softwarefeil
Kolonner Kolonner Reproduserbarhet Sekundære interaksjoner Endrede egenskaper Toppform Flere kokker - mer søl Eierskap Oppdage endringer Menneskelig å feile Person Løsninger Kvalitet Vann Buffer Vekst i flasker Utfordringer Respons Rask nok? Temperatur Prosessering Deteksjon Prøvematerialet Pumpe Matrikseffekter Prøveopparbeidelse Ukjente analytter Lekkasjer Tette sjekkventiler Softwarefeil
Kolonner Reproduserbarhet mellom kolonner Blir kromatografien lik fra kolonne til kolonne? Endrer egenskaper over tid Dette gjør at retensjonstid kan endre seg Dette igjen fører til eluering sammen med andre analytter. Dette må også tenkes på ved validering av metodene. Sekundære interaksjoner Omvendt fase: Analytten interagerer med rest-silanolgrupper Fører til endret toppform
Kolonner Inj. 500 Inj. 50 Inj. 10
Løsninger Kolonner Reproduserbarhet Sekundære interaksjoner Endrede egenskaper Toppform Flere kokker - mer søl Eierskap Oppdage endringer Menneskelig å feile Person Løsninger Kvalitet Vann Buffer Vekst i flasker Utfordringer Respons Rask nok? Temperatur Prosessering Deteksjon Prøvematerialet Pumpe Matrikseffekter Prøveopparbeidelse Ukjente analytter Lekkasjer Tette sjekkventiler Softwarefeil
Løsninger Kvalitet Løsningsmidler fra forskjellige leverandører Urene løsningsmidler gir mer bakgrunnsstøy Ved bruk av buffer gå via vann for å unngå utfelling av salter Vann Vann vi ser forskjell på vann kjøpt fra leverandør og milliq-vann Visstnok også forskjell på hvor lenge en flaske har stått åpnet Vekst i flasker Husk å bytte flasker!! Ikke bare fyll på.
Løsninger Blank Serum AP1 40626 Smooth(Mn,1x2) HL 100 4.44 F4:MRM of 4 channels,es+ 446.1 > 285.15 1.829e+003 4.20 4.16 4.32 3.51 3.60 3.92 4.00 4.11 4.37 % 2.59 2.71 2.64 2.80 2.90 3.01 2.95 3.05 3.09 3.18 3.15 3.48 3.36 3.46 3.31 3.53 3.70 3.74 3.83 4.06 4.25 4.49 4.51 4.59 4.68 4.74 4.82 0 min 2.60 2.70 2.80 2.90 3.00 3.10 3.20 3.30 3.40 3.50 3.60 3.70 3.80 3.90 4.00 4.10 4.20 4.30 4.40 4.50 4.60 4.70 4.80 4.90 Blank Serum AP1 inj2 Smooth(Mn,1x2) F4:MRM of 4 channels,es+ HL 446.1 > 285.15 SDHA 3.524e+005 100 2.72 32807.36 347236 % 3.59 3.98 3.85 0 2.60 2.70 2.80 2.90 3.00 3.10 3.20 3.30 3.40 3.50 3.60 3.70 3.80 3.90 4.00 4.10 4.20 4.30 4.40 4.50 4.60 4.70 4.80 4.90 min
Løsninger Kvalitet Løsningsmidler fra forskjellige leverandører Urene løsningsmidler gir mer bakgrunnsstøy Ved bruk av buffer gå via vann for å unngå utfelling av salter Vann Vann vi ser forskjell på vann kjøpt fra leverandør og milliq-vann Vissnok også forskjell på hvor lenge en flaske har stått åpnet Vekst i flasker Husk å bytte flasker!! Ikke bare fyll på.
Pumpe Kolonner Reproduserbarhet Sekundære interaksjoner Endrede egenskaper Toppform Flere kokker - mer søl Eierskap Oppdage endringer Menneskelig å feile Person Løsninger Kvalitet Vann Buffer Vekst i flasker Utfordringer Respons Rask nok? Temperatur Prosessering Deteksjon Prøvematerialet Pumpe Matrikseffekter Prøveopparbeidelse Ukjente analytter Lekkasjer Tette sjekkventiler Softwarefeil
Pumpe Lekkasjer Sjekkventiler Tette tubinger Leverer ikke riktig løsningsmiddelfordeling Feil injeksjonsvolum Softwarefeil
Prøvematerialet Kolonner Reproduserbarhet Sekundære interaksjoner Endrede egenskaper Toppform Flere kokker - mer søl Eierskap Oppdage endringer Menneskelig å feile Person Løsninger Kvalitet Vann Buffer Vekst i flasker Utfordringer Respons Rask nok? Temperatur Prosessering Deteksjon Prøvematerialet Pumpe Matrikseffekter Prøveopparbeidelse Ukjente analytter Lekkasjer Tette sjekkventiler Softwarefeil
Prøvematerialet Serum er en skitten matriks Kan unngå mye urenheter ved å ha en grundig prøveopparbeidelse Tid er kostbart Proteinfelling rask men skitten Noen oppkonsentreringer oppkonsentrerer også urenheter/bakgrunn/matriks Store partikler kan tette kolonner Vet aldri hva «pasienten» har tatt Internstandarden korrigerer ikke alltid
Deteksjon Kolonner Reproduserbarhet Sekundære interaksjoner Endrede egenskaper Toppform Flere kokker - mer søl Eierskap Oppdage endringer Menneskelig å feile Person Løsninger Kvalitet Vann Buffer Vekst i flasker Utfordringer Respons Rask nok? Temperatur Prosessering Deteksjon Prøvematerialet Pumpe Matrikseffekter Prøveopparbeidelse Ukjente analytter Lekkasjer Tette sjekkventiler Softwarefeil
Person Kolonner Reproduserbarhet Sekundære interaksjoner Endrede egenskaper Toppform Flere kokker - mer søl Eierskap Oppdage endringer Menneskelig å feile Person Løsninger Kvalitet Vann Buffer Vekst i flasker Utfordringer Respons Rask nok? Temperatur Prosessering Deteksjon Prøvematerialet Pumpe Matrikseffekter Prøveopparbeidelse Ukjente analytter Lekkasjer Tette sjekkventiler Softwarefeil
Person ø Følge prøven Bli kjent med analysene Lettere å oppdage noe unormalt Vær nøye Ha ferdig utarbeidede prosedyrer og følg dem! Et krav ved akkreditering
Preventivt vedlikehold Jevnlig vask/vedlikehold av instrumentering Vask pumpen Vask tubinger Gjennomfør lekkasjetester Vask ionekilde Kontroller vakuum i MS Utfør kontrollanalyser for å godkjenne vedlikeholdet Vask Heksapol Vask Kollisjonscelle Holder mange problemer borte og lengre nedetid på systemet kan unngås.
Loggføring Ha en egen logg for hvert instrument Bytte av løsninger Lot-nummer på løsninger Kolonnebytte Instrumentstans Vedlikehold Service Hvem har gjort det? Når er det gjort? Dersom alt som gjøres på instrumentet loggføres blir det lettere å feilsøke Avviksregistrering Enda en mulighet for tilbakeblikk og å lære av tidligere feil
Labnissen Av og til skjer det merkelige ting Problemene løser seg av seg selv Det eksisterer teorier om en egen art av nisseslekten: Labnissen! Den har dessverre aldri blitt observert.
«Og mannen ville fra nissen flytte, men reisen ble ham til ingen nytte, for høyt på vognlasset nissen lo: Jeg tror vi flytter i dag, vi to.» - barneregle Takk for oppmerksomheten!