CSAII. Cyclosporine II Ordreinformasjon TDM. Analyseinstrument(er) hvor cobas c pack kan brukes COBAS INTEGRA 400 plus COBAS INTEGRA 800

Transkript

1 Ordreinformasjon (100 analyser) System-ID Cyclosporine Calibrators 0 (1 2.5 ml) 50, 100, 200, 350, 500 (5 2.0 ml) Cyclosporine Calibrator 0 (3 2.5 ml) COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent (4 40 ml) System-ID System-ID System-ID Analyseinstrument(er) hvor cobas c pack kan brukes COBAS INTEGRA 400 plus COBAS INTEGRA 800 Norsk Systeminformasjon, test ID Tilsiktet bruk In vitro diagnostisk analyse til kvantitativ bestemmelse av cyklosporin A i humant fullblod som en hjelp ved monitorering av cyklosporinterapi hos pasienter som har gjennomgått transplantering. Sammendrag Cyklosporin er et syklisk undecapeptid, opprinnelig fra sopp, og er et kraftig immunsuppressivt stoff. Siden introduksjonen i 1983 har cyklosporin forbedret overlevelsesraten signifikant hos pasienter etter hjerte-, nyre-, lever-, pankreas- eller lungetransplantasjoner. Mange studier har dokumentert effekten av cyklosporin i kampen mot organavstøting. Utilstrekkelige doser og konsentrasjoner kan føre til avstøting av det transplanterte organ. Toksiske konsentrasjoner av cyklosporin er forbundet med mange alvorlige bivirkninger f.eks nefrotoksisitet, levertosisitet og en rekke andre komplikasjoner. Ved nyretransplantasjon er legene spesielt bekymret for de nefrotoksiske virkningene av medikamentet, da det er vanskelig å skille mellom organfrastøting og cyklosporintoksisitet. 1,2 Den mest effektive måte å sikre tilstrekkelig immunsuppressiv behandling av pasienter som får organtransplantasjon, er monitorering av cyklosporinkonsentrasjonen i fullblod og vurdere denne konsentrasjon i tillegg til andre laboratoriedata og kliniske betraktninger. Fullblod foretrekkes fremfor plasma til måling av cyklosporin da medikamentet raskt fordeles til erythrocyttene. Cyklosporinkonsentrasjonen bør måles med en metode som er spesifikk for det opprinnelige stoffet, da rollen til de mer enn 30 metabolittene i forbindelse med immunsuppressjonen og toksisiteten fortsatt er uavklart. De klassiske metodene til monitorering av cyklosporinkonsentrasjonen i blod er bla. høytrykksvæskekromatografi (HPLC), radio immunologisk analyse (RIA) og fluorescenspolarisering immunologisk analyse (FPIA). Analyseprinsipp Enzyme Multiplied Immunoassay Technique (EMIT) Reagenset COBAS INTEGRA bruker en homogen enzymimmunologisk analyseteknikk til analysering av cyklosporin i fullblod. Analysen inneholder monoklonale antistoffer fra mus med høy spesifisitet for cyklosporin. COBAS INTEGRA -reagenset er basert på konkurranse om cyklosporinantistoffets bindingssteder. Cyklosporin i prøven konkurrerer med cyklosporin i enzymreagenset som er merket med enzymet glukose 6 fosfatdehydrogenase (G6PDH). Aktivt (ubundet) enzym forandrer oksidert nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD) i antistoffreagenset til NADH som medfører en kinetisk absorbansendring. Denne kan måles spektrofotometrisk. Enzymaktiviteten faller ved binding til antistoffet, slik at cyklosporinkonsentrasjonen i prøven kan måles ved hjelp av enzymaktiviteten. Endogent serum-g6pdh interferer ikke, ettersom coenzymet NAD kun reagerer med det bakterielle (Leuconostoc mesenteroides) enzym, som brukes i analysen. Før analysering med COBAS INTEGRA -analysen skal prøver, kalibratorer og kontroller forbehandles med COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent. Reagenset lyserer cellene, ekstraherer cyklosporinet og utfeller proteinene i blodet. De forbehandlede prøvene sentrifugeres og en avpippetert mengde av supernantanten inneholdende cyklosporin analyseres med COBAS INTEGRA -analysen. Reagenser - arbeidsløsninger R1 SR Antistoffreagens Monoklonale anti-cyklosporin antistoffer (mus), nikotinamid-adenindinukleotid, glukose 6 fosfat, natriumklorid, avspenningsmiddel og konserveringsmidler inkludert 0.1 natriumazid og streptomycinsulfat. Enzymreagens cyklosporin merket med bakterielt (Leuconostoc mesenteroides) glukose 6 fosfatdehydrogenase, TRIS buffer, stabilisatorer og konserveringsmidler inkludert 0.1 natriumazid og streptomycinsulfat. R1 er i posisjon B og SR er i posisjon C. Forholdsregler og advarsler Vær oppmerksom på alle advarsler og forholdsregler i avsnittet 1/ Innledning i denne metodemanual. For USA: Kun til foreskrevet bruk. Reagenshåndtering Klar til bruk Oppbevaring og holdbarhet Holdbarhet ved 2 8 C COBAS INTEGRA 400 plus system I bruk ved C COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument I bruk ved 8 C Se utløpsdatoen på etiketten på cobas c pack 4 uker 4 uker Ikke frys reagenser eller utsett dem for temperaturer over 27 C. Cyklosporinkalibratorer er transportert på tørris og må lagres i frossen tilstand. Før bruk første gang skal kalibratorene tine ved romtemperatur i minst en time. Prøvetaking og -forberedelse Benytt kun egnede prøvetakingsrør til prøvetaking og -forberedelse. Kun de nedenfor oppførte prøvematerialer er analysert og funnet akseptable: Fullblod Den eneste akseptable antikoagulant er EDTA. Prøver som analyseres bør ikke ha en hematokrit høyere enn 54. Farmakokinetiske faktorer påvirker det korrekte tidspunktet for prøvetaking etter siste medikamentdose. Disse faktorene inkluderer dosering, behandlingsmetode, annen samtidig behandling og andre biologiske variasjoner som påvirker nedbryting av medikamentet. Til bestemmelse av cyklosporin anbefales en prøve med minimumskonsentrasjon. Hepariniserte prøver anbefales ikke da de kan danne koagler ved oppbevaring. Bruk ferske prøver. Hvis prøver skal analyseres før det har gått 8 timer etter prøvetaking, kan de oppbevares ved romtemperatur C. De kan oppbevares avkjølt ved 2 8 C opp til en uke. Hvis det er nødvendig med lengre oppbevaring kan prøvene fryses ved 20 C. 1 / 5

2 Cyklosporin er stabil i fullblodsprøver i minst 3 måneder ved oppbevaring ved 20 C. 3,4 Frosne prøver skal tines og blandes grundig før analysering. Unngå gjentatt frysing/tining. Uoppløselig materiale som er dannet i de frosne prøvene, skal unngås ved pipettering. NØDVENDIG HANDLING Kalibratorer, kontroller og/eller prøvene skal forbehandles med reagenset COBAS INTEGRA Cyclosporine Pretreatment Reagent, kat. No , system-id , før analysering. Følg trinnene i veiledningen til COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent til forbehandling av kalibratorer, kontroller og/eller prøver. De tekniske kommentarene er en vesentlig del av veiledningen og skal leses grundig før hvert trinn. Fortynning av prøver med høye konsentrasjoner Prøver med høye konsentrasjoner (> 500 ) skal fortynnes enten med nullkalibratoren eller cyklosporinnegativt EDTA-fullblod. 1. Vend eller bland på et vippeapparat fullblodsprøven med høy konsentrasjon og diluenten (nullkalibrator eller cyklosporinnegativt EDTA-fullblod) forsiktig, men grundig umiddelbart før bruk. 2. Bland en del fullblodprøve med høy konsentrasjon med to deler diluent. 3. Bland den fortynnede prøven forsiktig, men grundig ved å vende flere ganger. 4. Forbehandle den fortynnede prøven ved å følge trinnene i veiledningen til COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent. 5. Analyser prøven og multipliser resultatet med 3 for å beregne cyklosporinkonsentrasjonen. Medfølgende materialer Vennligst se avsnittet "Reagenser - arbeidsløsninger" med hensyn til reagenser. Nødvendige (men ikke medfølgende) materialer Til forbehandling av kalibratorer, kontroller, og/eller prøver skal det brukes COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent, kat. No , system-id Analyse For en optimal ytelse av analysen skal anvisningene for det aktuelle analyseinstrument følges. Vennligst se den aktuelle brukermanualen for instrumentspesifikke analyseinstruksjoner. Applikasjon til fullblod COBAS INTEGRA 400 plus analysedefinisjon Målemetode Abs. beregningsmetode Reaksjonsmetode Reaksjonsretning Bølgelengde A/B Absorbans Kinetisk R1-S-SR Stigende 340/378 nm Kalk. først/sist 50/102 Etterfortynningsfaktor Enhet Nei Cyklosporin er en langtidsanalyse (varighet ca. 17 minutter). Pipetteringsparametere Diluent (H 2 O) R1 65 µl 2 µl Prøve 9 µl 11 µl SR 26 µl 14 µl Totalvolum 127 µl COBAS INTEGRA 800 analysedefinisjon Målemetode Absorbans Abs. beregningsmetode Reaksjonsmetode Reaksjonsretning Bølgelengde A/B Kinetisk R1-S-SR Stigende 340/378 nm Kalk. først/sist 74/170 Etterfortynningsfaktor Enhet Nei Cyklosporin er en langtidsanalyse (varighet ca. 17 minutter). Pipetteringsparametere Diluent (H 2 O) R1 65 µl 2 µl Prøve 9 µl 11 µl SR 26 µl 14 µl Totalvolum 127 µl Kalibrering Kalibrator Cyklosporin kons. Kalibreringsmetode Logit/log 4 Kalibreringsreplikat Avvik lavt/høyt Kalibreringsintervall Cyclosporine Calibrators 0, 50, 100, 200, 350, 500 (0, 41.6, 83.3, 167, 291, 416 nmol/l) Duplikatmålinger anbefales < 10 ved 50 (41.6 nmol/l) Hver cobas c pack og som påkrevet ifølge kvalitetskontrollprosedyrene Det skal fremstilles en kalibreringskurve ved å bruke Cyclosporine Calibrators. Kalibratorene plasseres med den høyeste konsentrasjon (F) først og den laveste (A) sist på CAL/QC rack. Kalibreringskurven lagres i COBAS INTEGRA systemet. Sporbarhet: Cyclosporine Calibrators er fremstilt til å inneholde kjente mengder av cyklosporin i normalt humant serum og er sporbare til USP referansestandarder. Kvalitetskontroll Kvalitetskontroll Kontrollintervall Kontrollrekkefølge Kontroll etter kalibrering BIO-RAD Lyphochek Whole Blood Immunosuppressant Controls Ved hver pasientprøve Brukerdefineres Anbefales Kontrollintervallene og -grensene bør tilpasses hvert enkelt laboratoriums individuelle krav. Oppnådde kontrollverdier skal ligge innenfor definerte grenser. Hvert laboratorium bør innføre korrigerende tiltak dersom verdier faller utenfor de definerte grensene. Følg gjeldende offentlige forskrifter og lokale retningslinjer for kvalitetskontroll. Beregning COBAS INTEGRA analyseinstrumenter beregner automatisk analyttkonsentrasjonen i hver prøve. For ytterligere informasjon, vises til Dataanalyse i Online Help (COBAS INTEGRA 400 plus/800 analyseinstrumenter). Omregningsfaktor: = nmol/l Begrensninger - interferens Se avsnittet "Spesifikk ytelsesevne" i dette dokumentet for opplysninger om stoffer som er testet med denne analysen. Andre stoffer og/eller faktorer kan interferere med analysen og gi feilaktige resultater (f.eks. tekniske eller prosedyremessige feil). COBAS INTEGRA cobas c pack inneholder in vitro diagnostiske reagenser til måling av cyklosporin i fullblod. Analysen er ikke egnet til måling av cyklosporin i serum eller plasma. Effekten av carry-over skal tas i betraktning ved evaluering av en prøve med lav konsentrasjon 2 / 5

3 som kommer etter en prøve med en cyklosporinkonsentrasjon på 500 eller høyere. Omfanget av carry-over variererer fra instrument til instrument. For å minimere carry-over skal instrumentet og prøvehåndteringsutstyret vedlikeholdes grundig og analyseprosedyrene skal følges nøye. Kriterium: Gjenfinning innen ± 10 av den opprinnelige verdi ved en cyklosporin-konsentrasjon på 85 (70.8 nmol/l). Ikterus: Ingen signifikant interferens opp til en bilirubinkonsentrasjon på 855 µmol/l eller 50 mg/dl. Hemolyse: Ingen signifikant interferens over et hematokrittområde fra Lipemi: Ingen signifikant interferens opp til en triglyseridkonsentrasjon på 1500 mg/dl. Urinsyre: Ingen signifikant interferens opp til en urinsyrekonsentrasjon på 20 mg/dl. Kolesterol: Ingen signifikant interferens opp til en kolesterolkonsentrasjon på 500 mg/dl. I meget sjeldne tilfeller kan gammopati, særlig type IgM (Waldenströms makroglobulinemi), forårsake upålitelige resultater. 5 Til diagnostiske formål skal resultatene alltid sees i sammenheng med pasientens anamnese, kliniske undersøkelser og andre resultater. NØDVENDIG HANDLING Spesielle vaskeprogrammer: Bruk av spesielle vaskesyklus er obligatoriske når visse analysekombinasjoner utføres på COBAS INTEGRA analyseinstrumenter. For ytterligere instruksjoner se metodearket CLEAN og den seneste versjonen av Extra wash cycle list. Ved behov skal spesielle vaske/carry-over program implementeres før det rapporteres resultater på denne analysen. Grenser og akseptert grense for avvik Måleområde ( nmol/l) Nedre grense for måleområdet Nedre deteksjonsgrense for analysen: 15 (12.5 nmol/l) Den nedre deteksjonsgrensen representerer den lavest målbare konsentrasjonen som kan skilles fra nullkalibratoren ved et konfidensnivå på 95. Den er bestemt med nullkalibrator. Resultatet ble oppnådd på alle COBAS INTEGRA analyseinstrumenter. Referanseintervaller Det finnes ikke noe fast terapeutisk område for cyklosporin i fullblod. Ved fastleggelse av den optimale konsentrasjon av cyklosporin i blodet skal det tas høyde for kompleksiteten av den kliniske tilstand, individuelle forskjeller i sensitiviteten overfor cyklosporins immunsuppressive og nefrotoksiske virkninger, kombinasjonsbehandling med andre immunsuppressiva, transplantattype, tidsrommet etter transplantasjon og en rekke andre faktorer. Enkeltstående cyklosporinverdier kan ikke brukes som den eneste indikator for en endring av behandlingsregimet. Hver pasient skal gjennomgå en grundig klinisk undersøkelse før behandlingen justeres, og hver bruker av analysen skal fastsette sine egne områder basert på de kliniske erfaringer. Disse områdene vil variere avhengig av den benyttede in vitro diagnostiske analyse. Områdene skal fastsettes for hver kommersielle analyse. Hvert enkelt laboratorium bør undersøke om referanseintervallene kan overføres til egne pasientgrupper og om nødvendig fastsette egne referanseintervaller. Spesifikk ytelsesevne Representativ ytelsesevne på COBAS INTEGRA analyseinstrumentene er oppført nedenfor. Resultatene kan variere fra laboratorium til laboratorium. Presisjon Presisjon ble fastsatt ved hjelp av Bio-Rad Lyphochek Whole Blood Controls ifølge CLSI retningslinjene EP05 A2 6 med repeterbarhet (n = 84) og intermediær presisjon (2 pipetteringer pr. kjøring, 2 kjøringer pr. dag, 21 dager). Følgende resultater ble oppnådd på et COBAS INTEGRA 400 analyseinstrument: Repeterbarhet Nivå (75.5) 6.1 (5.1) 6.7 Nivå (154) 8 (6.7) 4.6 Nivå (288) 18 (15.0) 5.1 Intermediær presisjon Nivå (75.5) 9.0 (7.5) 9.9 Nivå (154) 13 (10.8) 6.9 Nivå (288) 24 (20.0) 6.9 Følgende resultater ble oppnådd på COBAS INTEGRA 800 analyseinstrumentet: Repeterbarhet Nivå (77.2) 6.9 (5.7) 7.5 Nivå (159) 10 (8.3) 5.2 Nivå (298) 19 (15.8) 5.2 Intermediær presisjon Nivå (77.2) 10 (8.3) 11.1 Nivå (159) 14 (11.7) 7.5 Nivå (298) 21 (17.5) 6.0 Metodesammenligning COBAS INTEGRA Cyclosporine- og COBAS INTEGRA analysene med COBAS INTEGRA Cyclosporine Pretreatment Reagent ble sammenlignet på COBAS MIRA analyseinstrumentet med en kommersielt tilgjengelig EMIT-analyse som brukte både en metanol (MeOH)- ekstraksjonsmetode og et kommersielt tilgjengelig reagens til prøveforbehandling til EMIT cyklosporinanalysen. COBAS INTEGRA Cyclosporine- og COBAS INTEGRA -analysene svarte til hverandre sammenlignet med EMIT Cyclosporine-analysen. Dataene under er representative for sammenligningene. Prøvene som ble brukt til metodesammenligning kom fra 277 fullblodsprøver innsamlet fra posttransplanterte pasienter. I noen tilfeller ble det tatt mer enn en prøve fra den samme pasient på forskjellige tidspunkter etter transplantasjonen. Prøvene ble frosset ved 20 C og analysert innen en måned etter prøvetaking. Av disse 277 prøvene inneholdt 14 prøver fra MeOH-sammenligningen og 15 prøver fra den nye forbehandlingssammenligningen cyklosporinkonsentrasjoner på < 40 (EMIT sensitivitet) eller > 500 (deteksjonsgrense), og ble utelatt fra den statistiske analysen. Den resterende prøvepopulasjonen var sammensatt av tre typer transplantasjoner, 24 lever, 93 hjerte og 145 nyre (til COBAS INTEGRA 700 analyseinstrument cyklosporin sammenlignet med EMIT med forbehandlingsreagens) eller 146 nyre (til COBAS INTEGRA 700 analyseinstrument cyklosporin sammenlignet med EMIT med metanolekstraksjon). Statistisk analyse ved hjelp av Deming regressjonsmetode er oppført under. EMIT MeOH EMIT Sample Pretreatment Reagent Antall prøver Verdiområde min maks / 5

4 Slope konfidensintervall nedre grense øvre grense Intercept () konfidensintervall nedre grense øvre grense Korrelasjonskoeffisient Samme data er vist grafisk under ifølge Bland-Altman metoden. COBAS INTEGRA 700 analyseinstrument cyklosporin sammenlignet med EMIT med metanolekstraksjon N = 263 (Y-X) = -0.3 (Y-X) = = = = COBAS INTEGRA 700 analyseinstrument cyklosporin sammenlignet med EMIT med Pretreatment Reagent N = 262 (Y-X) = 0.4 (Y-X) = = = = Analytisk spesifisitet 3 Følgende metabolitter, kryssreagerende stoffer og strukturelt beslektede eller potensielle medikamenter med samme virkning ble evaluert på COBAS INTEGRA systemene i en normal human EDTA-fullblodsprøvepool beriket med cyklosporin på 200 (166.5 nmol/l). Ifølge protokollen beskrevet av NCCLS ble hver substans analysert i en konsentrasjon som tilsvarer 10 ganger den høyeste konsentrasjonen for det terapeutiske området eller normalområdet. 7 Det ble tatt høyde for analysens unøyaktighet ved bestemmelse av kryssreaktiviten. en er betegnet som "ikke påviselig" (IP) hvis den oppnådde verdi ligger under sensitiviteten til analysen. () = 100 (analytisk resultat - analyttkonsentrasjon) konsentrasjon av interferende stoff (AM9) M (AM19) M (AM1) M IP (AM4N) M IP = Ikke påviselig Acetaminofen 200 IP Albuterol 0.18 IP Allopurinol 600 IP Alprazolam 0.37 IP Amfoteracin B 20 IP Atenolol 40 IP Azatiopoprin 10 IP Kaptopril 50 IP Karbamazepin 120 IP Ceflacor 230 IP Kloramfenikol 250 IP Cimetidin 100 IP Cyclofosfamid 250 IP Digoksin 0.02 IP Dipyridamol 25 IP Disopyramidin 30 IP Erytromycin 200 IP Furosemid 20 IP Gancyclovir 400 IP Gentamicin 120 IP Heparin 800 U/L IP Hydralazin 32 IP Hydroklorotiazid 40 IP Isoniazid 70 IP Isoproterenolhydroklorid 0.06 IP Lidokain 600 IP Metylprednisolon 12 IP Metoclopramid 4 IP Mykofenolsyre 100 IP Naproksen / 5

5 Fenobarbital 150 IP Fenytoin Piperacillin 8 IP Prazosin 3 IP Prednisolon 12 IP Prednison 12 IP Prometazin 10 IP Salisylsyre 500 IP Sulfametoksazol 400 IP Teofyllin 250 IP Triamteren 2.8 IP Trimetoprim 20 IP Vancomycin 630 IP IP = Ikke påviselig Linearitet For å bestemme lineariteten til analysen ble det fremstilt en fortynningsrekke med 7 konsentrasjoner ved å fortynne en fullblodsprøve med negativt humant fullblod. Fullblodsprøven var fra en pasient som hadde fått cyklosporin. Resultatene ble evaluert ved Passing/Bablok regresjon. 8 GTIN Tilføyelser, slettinger eller endringer er merket med en strek i margen. 2015, Roche Diagnostics Volum etter rekonstitusjon eller blanding Artikkelnummer for global handel Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim Distribueres i USA av: Roche Diagnostics, Indianapolis, IN US Customer Technical Support y = 0.998x r = 1.0 Slope 95 CI (0.971, 1.02) Intercept 95 CI (-0.610, 11.1) Områdets nedre grense = 28.1 Eventuelle modifikasjoner av instrumentet som beskrevet her skal valideres av laboratoriet. Referanser 1 McMillan MA. Clinical pharmacokinetics of cyclosporine. Pharmac Ther 1989;42: Kahan BD. Cyclosporine. N Engl J Med 1989;321: Schran HF, Rosano TG, Hassell AE, et al. Determination of cyclosporine concentrations with monoclonal antibodies. Clin Chem 1987;33: Wong PY, Mee AV, Glenn J, et al. Quality assessment of cyclosporine monitoring Canadian validations. Transplant Proc 1990;22: Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry assays: mechanisms, detection and prevention. Clin Chem Lab Med 2007;45(9): Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision of Quantitative Measurement Methods:Approved Guideline, EP05 A National Committee for Clinical Laboratory Standards. Interference Testing in Clinical Chemistry; Proposed Guideline. Villanova, PA.: NCCLS; 1986;6(13). NCCLS Publication EP7-P. 8 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): Et punktum (punktum/stopp) brukes alltid i dette metodearket som desimalskilletegn for å skille mellom heltalls- og fraksjonsdelen av et desimaltall. Skilletegn for tusengrupper brukes ikke. Symboler Roche Diagnostics bruker følgende symboler og tegn i tillegg til de som er listet opp i ISO standarden Pakningsinnhold 5 / 5