Svarrutiner kl

Transkript

1 TB QuantiFERON Svarrutiner kl Fremlegg av artikkel: "T-cell Assays for Tuberculosis Infection: Deriving Cut-Offs for Conversions Using Reproducibility Data" Konklusjon på om mikrobiologen her svarer ut med titer eller ikke Begrunnelser på hvorfor det å svare ut titer er problematisk Sten Egil Sigurdsen og Tore Jarl Gutteberg

2 Acid-fast stains of Mycobacterium tuberculosis. A, Stained with carbolfuchsin using the Kinyoun method; B, Stained with the fluorescent dyes auramine and rhodamine using the Truant fluorochrome method. Printed from: Medical Microbiology 5E (on( 03 February 2009) 2009 Elsevier

3

4

5

6 1) What is the reproducibility (reliability) of T cell responses over time (within-person variability over time)? 2) What is a IGRA* reversion and what is the clinical significance of a IGRA reversion? 3) What is a IGRA conversion and what threshold (cut-off) should be used to define conversion? 4) How can IGRA conversions be distinguished from non-specific (random) variations in T cell responses over time? 5) What is the prognosis of a IGRA conversion and will treatment of individuals with IGRA conversions reduce their subsequent risk of progression to active TB? *in-vitro assays for LTBI interferon-gamma (IFN-c) release assays (IGRAs) Veerapathran. PLoS ONE 2008; 3: e1850

7

8 Hva gjør vi per i dag? POSITIV (Tyder på smitte med bakterier innen M. tuberculosis-komplekset (M. tuberculosis,, M. bovis,, M. africanum,, M. microti,, M. canettii). Analysen skiller ikke mellom latent og aktiv sykdom. Positivt resultat må vurderes i en klinisk sammenheng. Testen kan også bli positiv etter smitte med non- tuberkuløse mykobakterier (M. kansasii,, M. szulgai og M. marinum). NEGATIV (Tidligere smitte eller aktuell infeksjon med M. tuberculosis- komplekset er ikke sannsynlig. OBS! Testen kan bli falsk negativ ved immunsuppresjon og i anergisk fase) INKONKLUSIV (Inkonklusiv resultat kan tyde på feilbehandling av prøven hos rekvirent/under transport. Vennligst gjennomgå rutinen for prøvebehandling før ny prøve sendes (se vedlagte informasjonsskriv). iv). Testen kan også bli inkonklusiv ved nedsatt cellemediert immunforsvar.

9 Hva er i de forskjellige rør? Nil (grå kork); negativ kontroll TB antigen(rød kork); inneholder antigen som stimulerer interferon-γ respons fra vertens T-lymfoc Mitogen (lilla kork); positiv ktr,, kontroll på immunstatus.

10 1N prøve 1 Nil control (grå kork) 1A prøve 1 TB Antigen (rød kork) 1M prøve 1 Mitogen Control (lilla kork) Prinsipp: Metode basert påp T-celle stimulering og Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Når Mycobacterium tuberculosis vokser vil den skille ut proteinene ESAT-6 6 og CFP-10 og TB7.7. Disse har evnen til å provosere fram en immunrespons i form av produksjon av interferon-γ fra vertens T-T lymfocytter. Blodprøve tas påp prøveglass som er dekket påp innsiden med en peptidblanding som representerer antigenene ESAT-6, CFP-10 og TB7.7. Hvis en person tidligere har vært v smittet av bakterier i M. tuberculosis komplexet (M.tuberculosis, M.africanum, M.bovis, M.microti og M.canettii,, vil vedkommendes T-lymfocytter T danne en viss mengde interferon-γ som detekteres og kvantiteres ved hjelp av ELISA. En blodprøve som måler m interferon-γ respons som følge f av ESAT-6/ CFP-10/TB7.7 stimulering, vil ikke bli positiv som følge f av BCG-vaksine. Den vil heller ikke slå ut ved infeksjon av de fleste atypiske mykobakterier. Unntak er M. kansasii,, M. szulgai og M. marinum.

11 Svar fra oppsett:

12 Svar fra oppsett:

13 Tolkning av resultater: Nil prøve IU/ml TB antigen Nil prøve IU/ml Mitogen Nil prøve IU/ml Resultat 8,0 < 0,35 0,5 Negativ 0,35 og < 25 % av Nil prøve 0,5 0,35 og 25 % av Nil prøve Alle verdier Positiv < 0,35 < 0,5 Inkonklusiv 0,35 og < 25 % av Nil prøve < 0,5 > 8,0 Alle verdier Alle verdier

14 Hva gjør andre norske lab er? HAUKELAND, BERGEN: Gir ut TB Ag-Nil som tallverdi der den er POSITIV (>0,35). Der TB Ag-Nil er <0,35 gis svaret ut som NEGATIV RIKSHOSPITALET Gir ut mer informasjon om testens komponenter i tillegg til tallverdier.

15 UNN Vi synes at Haukeland har den beste løsningen dersom en skal gi ut tall. Med henvisning til litteraturen kan en med varsomhet tolke forskjeller på større enn 30%. T-cellenes evne til å produsere interferon har stor individ variasjon og metoden har stor dag til dag (betweeen( tests) variasjon Veerapathran. PLoS ONE 2008; 3: e1850

16 Veerapathran. PLoS ONE 2008; 3: e1850 Conclusions: Conservatively assuming that long-term variability might be at least twice higher than short-term, we hypothesize that a QFT conversion requires two conditions to be met: 1) change from negative to positive result, and 2) at least 30% increase in the baseline IFN-c response. Larger studies are needed to confirm our preliminary findings, and determine the conversion thresholds for IGRAs.