(12) Oversettelse av europeisk patentskrift

Transkript

1 (12) Oversettelse av europeisk patentskrift (11) NO/EP B1 (19) NO NORGE (1) Int Cl. A61K 31/ (06.01) A61K 31/7048 (06.01) A61P 9/14 (06.01) Patentstyret (21) Oversettelse publisert (80) Dato for Den Europeiske Patentmyndighets publisering av det meddelte patentet (86) Europeisk søknadsnr (86) Europeisk innleveringsdag (87) Den europeiske søknadens Publiseringsdato (30) Prioritet.02.02, EP, , US, P (84) Utpekte stater Utpekte samarbeidende stater AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR BA ME (73) Innehaver Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A., Viale Shakespeare 47, Rome, Italia (72) Oppfinner VIRMANI, Mohamed, Ashraf, Viale Shakespeare 47, I Rome, Italia KOVERECH, Aleardo, Viale Shakespeare 47, I Rome, Italia (74) Fullmektig Jesper Levin A/S, Enrum Slot, Vedbæk Strandvej 341, DK-290 VEDBÆK, Danmark (4) Benevnelse Kombinasjonssammensetning, omfattende som virkestoff L-karnitin eller propionyl-lkarnitin, med henblikk på profylakse eller behandling av kronisk venøs insuffisiens (6) Anførte publikasjoner WO-A1-00/28986 WO-A1-06/ WO-A1-09/ US-A

2 Beskrivelse OPPFINNELSENS OMRÅDE [0001] Den foreliggende oppfinnelse angår en kombinasjonssammensetning som omfatter som virkestoffer L-karnitin eller propionyl-l-karnitin, eller et salt derav, trokserutin, diosmin og hesperidin, nyttige for profylaksen og/eller behandlingen av kronisk venøs insuffisiens (CVI). BAKGRUNNEN FOR OPPFINNELSEN [0002] Hos mennesker fører arterier oksygenrikt blod fra hjertet til resten av kroppen, mens vener fører oksygenfattig blod tilbake til hjertet. Når venene i menneskeben ikke kan pumpe tilstrekkelig blod tilbake til hjertet, medfører det inntreden av kronisk venøs insuffisiens (CVI). Noen ganger benevnes CVI også kronisk venesykdom, eller CVD. 1 [0003] Mennesker har tre typer vener: overfladiske vener, som ligger nær huden, dype vener, som ligger i muskelgrupper, og perforerende vener, som forbinder de overfladiske og de dype vener. Dype vener fører til hulvenen, den største venen i menneskekroppen, som fører direkte til hjertet. 2 [0004] Når mennesker står i posisjon rett opp og ned, må blodet i venene i bena gå mot tyngdekraften for å vende tilbake til hjertet. For å oppnå dette trekker benmusklene sammen de dype venene i bena og føttene for å bidra til å føre blodet tilbake til hjertet. Enveisventiler kalt klaffer i venene, sørger for at blodet strømmer i riktig retning. Når benmusklene slapper av, lukker klaffene inne i venene seg. Dette forhindrer at blodet strømmer tilbake ned i benene. Hele prosessen av å sende blod tilbake til hjertet, kalles muskelvenepumpen. 30 [000] Når mennesker går og benmusklene trekker seg sammen, virker muskelvenepumpen godt. Men når pasienten sitter eller står, spesielt over lengre tid, kan blodet i benene samle seg og øke blodtrykket i venene. Dype vener og perforerende vener er vanligvis i stand til å holde ut korte perioder 1

3 med økt trykk. Sitting eller ståing i lang tid kan imidlertid strekke veneveggene, da de er fleksible. Over tid kan dette hos disponerte personer svekke veggene i venene og skade veneklaffene, idet CVI bevirkes. [0006] Ved CVI kan anklene svulme opp og leggene kan føles stramme. Benene kan også føles tunge, trette, rastløse eller verkende. Pasienten kan føles smerte ved gange eller kort etter stansing. [0007] CVI kan være assosiert med åreknuter. Åreknuter er utvidede vener som er synlige gjennom huden. De har ofte et blått, svulmende og snodd utseende. Store åreknuter kan føre til hudendringer, slik som utslett, rødhet og sår [0008] CVI kan også medføre problemer med oppsvulmede ben på grunn av trykket fra blodkonsentrasjonen i venene. Det lymfatiske system kan også produsere fluid, kalt lymfevæske, for å kompensere for CVI. Benvev hos mennesker kan deretter absorbere noe av dette fluidet, hvilket kan øke tendensen til at bena svulmer opp. I alvorlige tilfeller kan CVI og oppsvulmingen av ben bevirke at det danner seg ulcus på de nedre deler av benet. [0009] Blodtrykk som er høyere enn normalt inne i benvenene, forårsaker på lengre sikt CVI. Andre årsaker til CVI innbefatter dyp venetrombose (DVT) og flebitt, som begge forårsaker forhøyet trykk i venene idet de obstruerer den frie strøm av blod gjennom venene. [00] DVT oppstår når en blodpropp (egentlig benevnt en trombe) blokkerer blod fra å strømme mot hjertet, ut av en dyp eller perforerende vene. Blodet som forsøker å passere gjennom de blokkerte vener, kan øke blodtrykket i venen, noe som i sin tur overbelaster klaffene. Veneklaffer som ikke fungerer korrekt, kalles inkompetente fordi de strekker seg og ikke lenger arbeider på en effektiv måte, og inkompetente klaffer bidrar til CVI. DVT er en potensielt alvorlig tilstand som forårsaker oppsvulmede ben og krever øyeblikkelig 2

4 medisinsk hjelp, fordi blodproppene i venene noen ganger kan løsne og bli ført til lungene. Denne tilstanden kalles en lungeembolus. [0011] Flebitt oppstår når en overfladisk vene eller en dyp vene svulmer opp og blir betent. Denne betennelsen bevirker at det dannes en blodpropp, noe som også kan føre til DVT. [0012] Faktorer som kan øke risikoen for CVI, innbefatter en familiehistorie på åreknuter; overvekt, graviditet, for lite mosjon, røyking og stå eller sitte i lange perioder. Selv om CVI kan ramme alle, er alder og kjønn også faktorer som kan øke tendensen til å utvikle CVI; kvinner over 0 år rammes oftest av CVI. 1 [0013] For milde tilfeller av CVI kan legen anbefale kompresjonsstrømper. Kompresjonsstrømper er elastiske strømper som trekker sammen venene og hindrer at overskytende blod strømmer tilbake. På denne måten kan kompresjonsstrømper ofte også bidra til å lege hudsår samt forebygge at sårene vender tilbake. Det kan være nødvendig for pasienten å bruke kompresjonsstrømper hver dag resten av livet [0014] Mer alvorlige tilfeller av CVI kan behandles med injeksjoner, såkalt skleroterapi, eller med kirurgiske fremgangsmåter. Mindre enn prosent av pasienter med CVI trenger kirurgi for å korrigere problemet. Kirurgiske behandlinger innbefatter ablasjon, venestripping, bypass-kirurgi, klaffereparasjon og angioplastikk eller stenting av en vene. [001] Flavonoidene trokserutin, diosmin og hesperidin, også referert til som rutiner okserutiner eller rutosider, er velkjente for deres antioksiderende egenskaper, i tillegg til at de også fremviser andre egenskaper som virker inn på sirkulasjonssystemet, dvs. blod og mikrovaskulære endotelceller (G.I.O.T. 09;3:23-33). [0016] Mange epidemiologiske studier antyder at disse flavonoider er assosiert 3

5 med forbedret sirkulasjon og en generelt nedsatt risiko for hjerte- og karsykdommer. Mekanismene som ligger bak disse beskyttende virkninger, innbefatter antitrombotiske, antiiskemiske, antioksiderende og vasorelaksante egenskaper. Disse flavonoider har især virkninger som forbedrer sirkulasjon ved hjelp av vasodilatasjon, idet koagulering av blodplater forminskes og idet det forebygges at lipoproteiner med lav tetthet (LDL-er) oksiderer (Journal of Agricultural and Food Chemistry 08 6 (1), pp 618-6). 1 [0017] Disse flavonoidene utviser også sterke antiinflammatoriske egenskaper som antas å være resultatet av inhiberingen av syntesen og de biologiske aktiviteter av forskjellige proinflammatoriske mediatorsubstanser, hovedsakelig arakidonsyrederivatene prostaglandin E2, F2 og tromboksan A2. Disse prosessene forbedrer venetonus og lymfatisk drenasje, og reduserer kapillær hyperpermeabilitet ved å beskytte mikrosirkulasjonen mot inflammatoriske prosesser. [0018] Denne virkningen har også blitt påvist i kliniske studier. Studien av Belcaro et al (Angiology, 9; S) viste at disse flavonoidene var effektive i kontroll og behandling av ødem og økte kapillarfiltrering i venøs hypertensjon og diabetisk mikroangiopati. 2 [0019] En annen studie av Belcaro et al. (Angiology, March 1, 08; 9 (1) supply. 7S-13S) undersøkte også anvendelsen av disse flavonoidene i behandlingen av kronisk venesykdom samt tegn og symptomer på kronisk venøs insuffisiens (CVI), åreknuter og dyp venesykdom. 30 [00] I Rev Fr Gynecol Obstet Feb 2; 86 (2 Pt 2) : 9-12 rapporteres det at trokserutin hos kvinner (halvparten i sammenheng med premenstruelt syndrom og halvparten hos gravide) var nyttig i behandlingen av varikositeter i vulva og venøs insuffisiens i underekstremitetene. [0021] I Br. J. Surg. 00, 87; rapporteres det at diosmin har 4

6 antiinflammatoriske egenskaper som spiller en rolle i beskyttelse av blodkar, og bidrar til opprettholdelse av god blodsirkulasjon og opprettholder venetonus. [0022] I Farmaco, 40 (11); , rapporteres det at hesperidin har en antioksiderende virkning og sammen med trokserutin og diosmin fremmer sunne karfunksjoner. - [0023] I US rapporteres det at L-karnitin er nyttig for å øke HDLkolesterolet og for å behandle sykdommer forbundet med høyt kolesterolnivå. [0024] I WO rapporteres det at L-karnitin er nyttig i behandlingen av hjerte- og karsykdommer. 1 [002] I US rapporteres det at propionyl-l-karnitin er nyttig i behandlingen av kronisk arteriosklerose obliterans [0026] I WO rapporteres det at propionyl-l-karnitin er nyttig i behandlingen av venstresidig ventrikulær hypertrofi hos dialysepasienter. [0027] I US rapporteres det at propionyl-l-karnitin er nyttig i behandlingen av perifere vaskulære sykdommer. 2 [0028] Videre, selv om det finnes tilgjengelig andre publikasjoner hvori det påvises at forbindelsene ifølge oppfinnelsen er nyttige for behandlingen av sykdommer i venene, er det ingen av disse som nevner eller antyder noe om den uventede synergistiske effekt som utvises av sammensetningen ifølge den foreliggende oppfinnelse. BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN 30 [0029] Det har nå vist seg at en kombinasjonssammensetning som omfatter som virkestoffer L-karnitin eller et derivat derav (f.eks. propionyl-l-karnitin) eller et salt derav, trokserutin, diosmin og hesperidin, er utstyrt med en overraskende

7 synergistisk effekt for profylaksen og/eller behandlingen av sykdommer i venene valgt blant kronisk venøs insuffisiens (CVI) og kronisk venesykdom (CVD) eller komplikasjoner av disse. [0030] Et eksempel på komplikasjoner eller sykdommer i venene (som følge av CVI eller CVD) er rapportert i de følgende: oppsvulming og betennelse av vener i rektum, anus og vulva; venøs hypertensjon; økt permeabilitet; ødem; kapillærskade; hudendringer; venøse bensår; oppsvulmede ankler; tunge ben; åreknuter; oppsvulmede ben; ulcus; venetrombose; flebitt; tromboflebitt; lungeembolus; hemorroider. 1 [0031] Et formål ifølge den foreliggende oppfinnelse er derfor en kombinasjonssammensetning som omfatter som virkestoffer L-karnitin eller et salt derav, trokserutin, diosmin og hesperidin. [0032] Et ytterligere formål ifølge den foreliggende er en kombinasjonssammensetning som omfatter som virkestoffer propionyl-l-karnitin eller et salt derav, trokserutin, diosmin og hesperidin. [0033] De ovennevnte sammensetninger kan videre omfatte andre virkestoffer som er nyttige for behandling av sykdommer i venene. [0034] Et ytterligere formål ifølge den foreliggende oppfinnelse er en sammensetning som omfatter: 2 (a) L-karnitin eller propionyl-l-karnitin, i en dose på fra til 3000 mg, foretrukne doser er på fra 0 mg til 400 mg, den mest foretrukne dose er på 136 mg. (b) trokserutin, i en dose på fra 900 mg til 0 mg, foretrukne doser er på fra 400 mg til 0 mg, den mest foretrukne dose er på 300 mg; 6

8 (c) diosmin, i en dose på fra 900 mg til 0 mg, foretrukne doser er på fra 400 mg til 0 mg, den mest foretrukne dose er på 300 mg; og (b) hesperidin i en dose på fra mg til 00 mg, foretrukne doser er på fra 0 mg til 0 mg, den mest foretrukne dose er på 0 mg. [003] Et ytterligere formål ifølge den foreliggende oppfinnelse er den ovennevnte sammensetning til anvendelse mot kronisk veneinsuffisiens og komplikasjoner derav. [0036] Et ytterligere formål ifølge den foreliggende oppfinnelse er den ovennevnte sammensetning til anvendelse mot kronisk venesykdom og komplikasjoner derav. 1 [0037] Et ytterligere formål ifølge den foreliggende oppfinnelse er anvendelsen av den ovennevnte sammensetning med henblikk på fremstilling av et medikament for profylakse eller behandling av kronisk venøs insuffisiens, kronisk venesykdom og komplikasjoner derav, hvori komplikasjonene velges fra gruppen som består av: oppsvulming og inflammasjon av venene i rektum, anus og vulva; venøs hypertensjon; økt permeabilitet; ødem; kapillærskade; hudendringer; venøse bensår; oppsvulmede ankler; tunge ben; åreknuter; oppsvulmede ben; ulcus; venetrombose; flebitt; tromboflebitt; lungeembolus eller hemorroider. 2 [0038] Et ytterligere formål ifølge den foreliggende oppfinnelse er anvendelsen av den ovennevnte sammensetning med henblikk på fremstilling av et kosttilskudd med henblikk på profylakse eller behandling av kronisk venøs insuffisiens, kronisk venesykdom og komplikasjoner derav. 30 [0039] Sammensetningen ifølge oppfinnelsen kan videre omfatte koenzymer, mineralske substanser, antioksidanter, vitaminer, antikoagulerende midler og midler som er nyttige i behandling av sykdommer i venene. 7

9 [0040] Det som menes med salt av L-karnitin, er et hvilket som helst salt av denne med en syre som ikke fremkaller toksiske virkninger eller bivirkninger. [0041] Ikke-begrensende eksempler på slike salter er: klorid, bromid, orotat, aspartat, syreaspartat, syrecitrat, magnesiumcitrat, fosfat, syrefosfat, fumarat og syrefumarat, magnesiumfumarat, laktat, maleat og syremaleat, oksalat, syreoksalat, pamoat, syrepamoat, sulfat, syresulfat, glukosefosfat, tartrat og syretartrat, glyserofosfat, mukat, magnesiumtartrat, 2-amino-etansulfonat, magnesium 2-amino-etansulfonat, metansulfonat, kolintartrat, trikloracetat og trifluoracetat. 1 2 [0042] En liste over FDA-godkjente farmasøytisk akseptable salter er anført i publikasjonen Int. J. of Pharm. 33 (1986), [0043] L-karnitin, propionyl-l-karnitin, trokserutin, diosmin og hesperidin ifølge den foreliggende oppfinnelse kan administreres på en "koordinert måte". Det som menes med "koordinert måte" av de førnevnte forbindelser er, uten forskjell, enten koadministrasjon, dvs. det i det vesentlige konkomitante eller sekvensielle tilskudd av L-karnitin eller propionyl-l-karnitin og i det minste én trokserutin, diosmin, hesperidin, eller administrasjonen av en sammensetning som omfatter de førnevnte virkestoffer i kombinasjon og i en blanding som valgfritt ytterligere omfatter én eller flere eksipienser eller diluenter som er farmasøytisk akseptable. [0044] Sammensetningen ifølge den foreliggende oppfinnelse kan administreres oralt, parenteralt, intravenøst, topisk og/eller transdermalt på en hvilken som helst passende måte. Oral administrasjon er foretrukket. 30 [004] Et eksempel på administrasjonsform er i en flytende form, halvt flytende form eller fast form i poser, piller, ampuller, salve, gel eller liposom. 8

10 [0046] L-karnitin og propionyl-l-karnitin er kjente forbindelser, og deres fremstillingsprosess er beskrevet i US 4,24,03. [0047] Trokserutin, diosmin og hesperidin er allment tilgjengelig for salg, og deres CAS-nr. er henholdsvis ; og [0048] Den farmasøytiske sammensetning ifølge den foreliggende oppfinnelse utgjøres av virkestoffer som er kjente for teknikere på medisinfeltet og er allerede i bruk. 1 [0049] Deres fremskaffelse er derfor svært enkel, all den tid dette er produkter som nå har vært på markedet i lang tid og som er av en kvalitet som egner seg for administrasjon til mennesker. [000] For en hvilken som helst forbindelse kan den terapeutisk effektive dose beregnes til å begynne med, enten i cellekulturanalyser eller på dyremodeller, vanligvis mus eller rotter. [001] Dyremodellen kan også anvendes til å bestemme det riktige konsentrasjonsområde og den riktige administrasjonsveien. Slik informasjon kan deretter anvendes til å bestemme nyttige doser og veier for administrasjon hos mennesker [002] Den nøyaktige effektive dose for en menneskelig pasient vil avhenge av sykdomstilstandens alvorlighetsgrad, pasientens generelle helsetilstand, pasientens alder, vekt og kjønn, kosthold, tid og frekvens av administrasjon, legemiddelkombinasjon(er), reaksjonssensitiviteter og toleranse/respons på behandling. Denne mengden kan bestemmes ved rutinemessige forsøk og er innenfor legens skjønn. [003] - De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen ytterligere. 9

11 EKSEMPEL 1 Reduksjon av oppsvulmingen i rekto-anus, i krotonoljeindusert hemorroidmodell hos rotter. 1 [004] SD-hannrotter (6 uker gamle, cirka 140 g) ble anskaffet fra Harlan Sprague Dawley og latt akklimatisere seg i 1 uke. Rottene ble holdt i et patogenfritt anlegg i overensstemmelse med retningslinjene for pleie og anvendelse fra National Research Council of Laboratory Animal. Hvert forsøk ble utført med aldersmatchede rotter 7-8 uker gamle. Den krotonoljeinduserte hemorroidmodell hos rotter ble utført i henhold til den av Nishiki offentliggjorte fremgangsmåte (Nishiki el al. (1988) Folia Pharmacology Japan 92:21-22; Nishiki et al. (1988) Folia Pharmacol. Japan 92: ). Kort fortalt ble en bomullspinne med en diameter på 4 mm fuktet med 0,16 ml induser (avionisert vann: pyridin: etyleter: 6% krotonolje/etyleter (1:4::), påført på rottens anus i 12 sekunder. Sluttkonsentrasjonen av krotonolje var 3%. Ødemet utviklet seg lineært helt til 7-8 timer etter påføring, og ødemets alvorlighetsgrad ble opprettholdt i mer enn 24 timer. Tjuefire timer senere ble rekto-anus-vev (ca. mm langt) isolert etter at rottene var avlivet. Vekten av rottekropp og rekto-anus ble målt. Rekto-anus-koeffisienten (RAC) ble beregnet under anvendelse av formelen: vekt av rekto-anus (mg)/kroppsvekt (g). 2 [00] Forbindelsene ifølge oppfinnelsen ble administrert oralt suspendert i saltløsning (1 ml) én gang daglig i fem dager. Siste behandling med forbindelsene ifølge oppfinnelsen ble foretatt på dagen for induksjon av ødem med krotonolje. 30 [006] Forbindelsene ifølge oppfinnelsen ble administrert alene eller i kombinasjon i de følgende doser: mg/kg propionyl-l-karnitin eller L-karnitin; 30 mg/kg trokserutin, diosmin eller hesperidin.

12 [007] Tjuefire timer etter hemorroidinduksjon med krotonolje, ble rottenes RAC bestemt. [008] De oppnådde resultater er rapportert i den følgende tabell 1. TABELL 1 n= rotter per gruppe; frihetsgrader= 8. RAC SE P< 1 Vehikkel alene 1,28 0,14-2 Ingen behandling 0,97 0,11 - NS vs 1 3 L-karnitin + Trokserutin + diosmin + hesperidin. mg/kg + 30 mg/kg + 30 mg/kg + 30 mg/kg. 4 Propionyl-L-karnitin + Trokserutin + diosmin + hesperidin. mg/kg + 30 mg/kg + 30 mg/kg + 30 mg/kg. 1,33 0,12 - NS vs 1 1,31 0,11 - NS vs 1 krotonolje (3%) 23 0,18 0,001 vs 1 6 L-karnitin + Trokserutin + diosmin + hesperidin + krotonolje. 1,34 0,09 - NS vs 1 - NS vs 3 -NS vs 4-0,001 vs - 0,001 vs 8-0,001 vs 9-0,001 vs - 0,001 vs 11-0,001 vs 12-0,0 vs 21 11

13 n= rotter per gruppe; frihetsgrader= 8. RAC SE P< 7 Propionyl-L-karnitin + Trokserutin + diosmin + hesperidin + krotonolje. 1,32 0,11 - NS vs 1 - NS vs 3 -NS vs 4-0,001 vs - 0,001 vs 8-0,001 vs 9-0,001 vs - 0,001 vs 11-0,001 vs 12-0,0 vs 21 8 Trokserutin + krotonolje 2,11 0,19 0,0 vs 1 9 Diosmin + krotonolje 2,02 0,18 0,0 vs 1 Hesperidin + krotonolje 2,07 0, 0,0 vs 1 11 L-karnitin + krotonolje 1,99 0,18 0,0 vs 1 12 Propionyl-L-karnitin + krotonolje 1,96 0,16 0,0 vs 1 13 Trokserutin + diosmin + krotonolje 2,00 0, 0,0 vs 1 14 Trokserutin + hesperidin + krotonolje 1,99 0,18 0,0 vs 1 1 trokserutin + L-karnitin + krotonolje 1,91 0,17 0,0 vs 1 16 Trokserutin + propionyl 1-karnitin + krotonolje 1,89 0,17 0,0 vs 1 17 Diosmin + hesperidin + krotonolje 2,01 0,21 0,0 vs 1 18 Diosmin + L-karnitin + krotonolje 1,87 0,1 0,0 vs 1 19 Diosmin + propionyl-l-karnitin 1,83 0,13 0,0 vs 1 Hesperidin + L-karnitin + krotonolje 1,84 0,14 0,0 vs 1 Hesperidin + propionyl-l-karnitin + krotonolje 1,84 0,13 0,0 vs 1 12

14 n= rotter per gruppe; frihetsgrader= 8. RAC SE P< 21 Trokserutin + hesperidin + diosmin + krotonolje 1,6 0,14 NS vs 1-0,0 vs [009] De i tabell 1 rapporterte resultater viser at ved å anvende sammensetningene ifølge oppfinnelsen ble det oppnådd resultater som var statistisk signifikant mer aktive (i forhold til anvendelsen av singelkomponent). [0060] De i tabell 1 rapporterte resultater viser faktisk at sammensetningene ifølge oppfinnelsen fullstendig inhiberte oppsvulmingen av rekto-anus indusert av krotonolje. EKSEMPEL 2 Relaksant effekt på aortaringer av de testede forbindelser. 1 [0061] Formålet med denne studien var å undersøke vasoarelaksasjonsvirkningene av sammensetningene ifølge oppfinnelsen under anvendelse av isolert aorta fra spontant hypertensive rotter. Materialer og metoder [0062] De testede forbindelser ble anvendt ved en konsentrasjon uttrykt som sluttkonsentrasjon i organkammeret. Dyr [0063] Spontant hypertensive rotter (SHR) av hannkjønn, -12 uker gamle, vekt -300 g, ble oppbevart ved 24 ± 2 C med 60±% relativ fuktighet, på 13

15 en 12/12-timers lys/mørke-syklus. Rotter ble gitt fri adgang til en diett av standardfôr og vann. Alle forsøk ble utført i overensstemmelse med Den europeiske unions retningslinjer for etisk behandling av dyr. Rottene ble avlivet ved cervikal dislokasjon, og aortaene ble hurtig dissekert. Klargjøring av aortaring 1 [0064] Den nedadstigende del av brystaorta ble plassert i en modifisert Krebs- Henseleit-løsning (PSS) inneholdende (mm): NaCl 118, KC1 4,7, NaHCO 3 2, MgSO 4 1,2, CaCl 2 1,8, KH 2 PO 4 1,2 og glukose 11. [006] Etter at overskytende fett og bindevev var fjernet, ble aortaene kuttet til ringer på 2-3-mm. Aortaringer ble anbrakt under en basalspenning på 2 g i ml organbad inneholdende PSS, og festet til en isometrisk transduser (Harvard UF-1); signalet ble registrert av et Powerlab-datafangssystem (AD-Instruments). Vevsbadet ble holdt ved 37 C og boblet med en gassblanding av 9% O 2 og % CO 2. Relaksant virkning av de testede forbindelser. [0066] De testede forbindelsers relaksante virkning ble vurdert ved å tilsette forbindelsen til aortaringer som var pre-kontraktert ved hjelp av fenylefrin (1 mikromolar). 2 [0067] Etter at aortaene var kontraktert med fenylefrin og når kontraktil respons var nådd, ble testforbindelsen tilsatt til badet. Alle resultater ble uttrykt som en prosentandel av den maksimale kontraksjon av fenylefrininduserte responser. Statistisk analyse 14

16 [0068] Resultater er uttrykt som prosentandeler fra det initiale prekontraksjonsnivå. [0069] Signifikansen ble beregnet ut fra de faktiske kontraksjonsverdiers gjennomsnitt ± SE (n = 8 aortaklargjøringer per gruppe). Åtte klargjøringer ble undersøkt fra en enkelt aorta. Student t-test-en ble anvendt som en sammenligningstest med henblikk på statistisk analyse. [0070] p < 0,0 Verdier ble betraktet som utgjørende et signifikant avvik: [0071] De oppnådde resultater er rapportert i den følgende tabell 2. 1

17 TABELL 2 BEHANDLING % RELAKSASJON P< 1 Saltløsning 0-2 L-karnitin + trokserutin + hesperidin + diosmin (0 mikromolar + 0 mikromolar + 0 mikromolar + 0 mikromolar). 3 Propionyl-L-karnitin + trokserutin + hesperidin + diosmin. (0 mikromolar + 0 mikromolar + 0 mikromolar + 0 mikromolar). 2-0,001 vs 1-0,01 vs 4-0,01 vs - 0,01 vs 6-0,0 vs 7-0,0 vs 8-0,0 vs ,001 vs 1-0,01 vs 4-0,01 vs - 0,01 vs 6-0,0 vs 7-0,0 vs 8-0,0 vs 18 4 Trokserutin (0 mikromolar). 0,0 vs 1 Diosmin (0 mikromolar). 0,0 vs 1 6 Hesperidin (0 mikromolar). 9 0,0 vs 1 7 L-karnitin (0 mikromolar). 2 0,01 vs 1 8 Propionyl-L-karnitin (0 mikromolar). 28 0,01 vs 1 9 Trokserutin + diosmin 12 0,0 vs 1 Trokserutin + hesperidin 13 0,0 vs 1 11 Trokserutin + L-karnitin 27 0,01 vs 1 12 Trokserutin + propionyl-l-karnitin 29 0,01 vs 1 13 Diosmin + hesperidin 14 0,0 vs 1 16

18 BEHANDLING % RELAKSASJON P< 14 Diosmin + L-karnitin 26 0,01 vs 1 1 Diosmin + propionyl-l-karnitin 28 0,01 vs 1 16 Hesperidin + L-karnitin 26 0,01 vs 1 17 Hesperidin + propionyl-l-karnitin 29 0,01 vs 1 18 Trokserutin + hesperidin + diosmin 3 0,001 vs 1 [0072] De i tabell 2 rapporterte resultater viser at tilsetningen av sammensetninger ifølge oppfinnelsen til aortaringer som var prekontraktert med fenylefrin, utløste endotelium-avhengig relaksasjon som i statistisk signifikant grad var mer aktiv i forhold til enkeltkomponentene. [0073] I det følgende rapporteres noen ikke-begrensende eksempler på sammensetningene ifølge oppfinnelsen. Sammensetning 1 [0074] - L-karnitintartrat 0 mg Ekvivalent til L-karnitin 136 mg - Trokserutin NEC 700 mg 1 Omfattende Troxerutina 300 mg - Diosmin 300 mg - Hesperidin 98% 0 mg 17

19 Ekvivalent til hesperidin 98 mg. Sammensetning 2 [007] - Propionyl-L-karnitintartrat mg Ekvivalent til propionyl-l-karnitin 136 mg - Trokserutin NEC 700 mg Omfattende Troxerutina 300 mg - Diosmin 300 mg - Hesperidin 98% 0 mg Ekvivalent til hesperidin 98 mg Sammensetning 3 [0076] 1 - L-karnitinfumarat 0 mg Ekvivalent til L-karnitin 136 mg - Trokserutin NEC 700 mg Omfattende Troxerutina 300 mg - Diosmin 300 mg 18

20 - Hesperidin 98% 0 mg Ekvivalent til hesperidin 98 mg Sammensetning 4 [0077] - Propionyl-L-karnitinfumarat mg Ekvivalent til propionyl-l-karnitin 136 mg - Trokserutin NEC 700 mg Omfattende Troxerutina 300 mg - Diosmin 300 mg - Hesperidin 98% 0 mg Ekvivalent til hesperidin 98 mg 1 19

21 Patentkrav 1. Kombinasjonssammensetning omfattende som virkestoffer L-karnitin eller propionyl-l-karnitin eller et salt derav, trokserutin, diosmin, hesperidin og eventuelt én eller flere farmasøytisk akseptabelt eksipienser. 2. Kombinasjonssammensetning ifølge krav 1, hvilken kombinasjonssammensetning omfatter: - L-karnitin eller propionyl-l-karnitin i en dose på fra til 3000 mg, foretrukne doser er på fra 0 mg til 400 mg, den mest foretrukne dose er på 136 mg; - trokserutin, i en dose på fra 900 mg til 0 mg, foretrukne doser er på fra 400 mg til 0 mg, den mest foretrukne dose er på 300 mg; - diosmin, i en dose på fra 900 mg til 0 mg, foretrukne doser er på fra 400 mg til 0 mg, den mest foretrukne dose er på 300 mg; og 1 - hisperidin, i en dose på fra mg til 00 mg, foretrukne doser er på fra 0 mg til 0 mg, den mest foretrukne dose er på 0 mg. 3. Kombinasjonssammensetning ifølge krav 1 som et kosttilskudd. 4. Kombinasjonstilsetning ifølge krav 1 som et medikament. 2. Kombinasjonssammensetning ifølge krav 1, som ytterligere omfatter koenzymer, mineralske substanser, antioksidanter, vitaminer, antikoagulerende midler og midler som er nyttige i behandling av sykdommer i venene. 6. Kombinasjonssammensetning ifølge krav 1 eller 2 til anvendelse i profylakse eller behandling av sykdommer i venene.

22 7. Anvendelse av en kombinasjonssammensetning som omfatter som virkestoffer L-karnitin eller propionyl-l-karnitin eller et salt derav, trokserutin, diosmin og hesperidin, med henblikk på fremstilling av et medikament for profylakse eller behandling av sykdommer i venene. 8. Anvendelse ifølge krav 7, hvor venesykdommen velges fra gruppen bestående av: kronisk venøs insuffisiens, kronisk venesykdom og komplikasjon derav Anvendelse ifølge krav 8, hvor den nevnte komplikasjon velges fra gruppen bestående av: oppsvulming og betennelse av vener i rektum, anus og vulva; venøs hypertensjon; økt permeabilitet; ødem; kapillærskade; hudendringer; venøse bensår; oppsvulmede ankler; tunge ben; åreknuter; oppsvulmede ben; sår; venetrombose; flebitt; tromboflebitt; lungeembolus eller hemorroider.. Anvendelse ifølge krav 7, hvor saltet av L-karnitin eller propionyl-l-karnitin velges fra gruppen bestående av: klorid, bromid, orotat, aspartat, syreaspartat, syrecitrat, magnesiumcitrat, fosfat, syrefosfat, fumarat og syrefumarat, magnesiumfumarat, laktat, maleat og syremaleat, oksalat, syreoksalat, pamoat, syrepamoat, sulfat, syresulfat, glukosefosfat, tartrat og syretartrat, glycerofosfat, mukat, magnesiumtartrat, 2-amino-etansulfonat, magnesium 2-aminoetansulfonat, metansulfonat, kolintartrat, trikloracetat eller trifluoracetat Anvendelse ifølge krav 7 for oral, parenteral, intravenøs, topisk og/eller transdermal administrasjon. 12. Anvendelse ifølge krav 7 for oral administrasjon. 21