MAX Enteric Parasite Panel

Transkript

1 MAX Enteric Parasite Panel Til in vitro-diagnostisk bruk P0219(01) Skal brukes med BD MAX System Norsk 4 I BRUKSOMRÅDE BD MAX Enteric Parasite Panel (tarmparasittpanel), utført på BD MAX System, er en automatisert in vitro diagnostisk test for direkte kvalitativ påvisning av tarmparasittpatogener. BD MAX Enteric Parasite Panel påviser nukleinsyrer fra: Giardia lamblia Cryptosporidium (kun C. hominis and C. parvum) Entamoeba histolytica Testing utføres på avføringsprøver som ikke er konservert eller som er fiksert med 10 % formalin, fra symptomatiske pasienter med mistanke om gastroenteritt, enteritt eller kolitt. Analysen er tiltenkt som en hjelp til diagnose av gastrointestinal infeksjon når den blir brukt i forbindelse med klinisk evaluering og andre laboratoriefunn. Testen blir utført direkte på prøven ved bruk av polymerasekjedereaksjon (PCR) i sanntid for oppformering av spesifikke mål. Testen benytter hybridiseringsprober som er spesifikke for fluorogene gener, til påvisning av oppformert DNA. Denne testen er tiltenkt for bruk, i forbindelse med klinisk presentasjon, laboratoriefunn og epidemiologisk informasjon, som en hjelp til differensierende diagnose av infeksjoner med Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis og C. parvum, as well as Entamoeba histolytica. Resultater av denne testen skal ikke brukes som eneste grunnlag for diagnose, behandling eller andre beslutninger om pasienthåndtering. Positive resultater utelukker ikke samtidig infeksjon med andre organismer som ikke påvises med denne testen, og er kanskje ikke den eneste eller definitive årsaken til pasientens sykdom. Negative resultater i en situasjon med klinisk sykdom som er kompatibel med gastroenteritt og/eller kolitt, kan skyldes infeksjon med patogener som ikke påvises med denne testen, eller ikke-infeksiøse årsaker, som ulcerøs kolitt, irritabel tarm-syndrom eller Crohns sykdom. SAMMENDRAG OG FORKLARING AV PROSEDYREN Organismer som forårsaker tarmsykdommer, er en signifikant årsak til sykdom og død på verdensbasis. Tarminfeksjoner kommer inn i kroppen via mage-tarm-kanalen og blir vanligvis spredd via kontaminert mat eller vann eller kontakt med oppkast eller avføring. CDC anslår at det er 48 millioner tilfeller av matbåren sykdom i USA årlig, som forårsaker sykehusinnleggelser og dødsfall. 1 I utviklingsland forårsaker disse sykdommene ca. 2,5 millioner dødsfall årlig hos små barn. 2 De enkelte årsaksstoffene kan føre til litt forskjellige symptomer inkludert magekramper eller -smerter, dårlig appetitt, kvalme eller brekninger, men alle fører til diaré. 3 Gjentatte tilfeller av diaré og vedvarende sykdom med diaré forstyrrer tarmfunksjonen og -absorpsjonen og kan føre til feilernæring hos barn og forsinket vekst. 4 Diareens etiologi omfatter virus, bakterier og parasitter. Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis and C. parvum samt Entamoeba histolytica anses som viktige diaréfremkallende parasitter. Alle disse organismene overføres fra avføring gjennom munnen via fortæring av kontaminert mat eller vann og er ofte knyttet til utbrudd. Globalt er Giardia én av de hyppigst identifiserte parasittene forbundet med utbrudd av vannbåren sykdom. 5 Giardiasis er karakterisert ved diaré, magekramper, oppblåsthet, vekttap og malabsorpsjon. Tarmsykdom, allergier og reaktiv artritt er blitt forbundet med giardiasis. Sykdommen er vanligvis selvbegrensende, og asymptomatiske infeksjoner kan også forekomme. Cryptosporidium hominis og C. parvum forårsaker kryptosporidiose karakterisert ved vandig diaré forbundet med magekramper, feber, kvalme, brekninger og vekttap. Hos pasienter med svekket immunforsvar kan kolangitt eller pankreatitt utvikles som et resultat av infeksjonen. 5,6 Imidlertid kan det også forekomme asymptomatiske infeksjoner. Entamoeba histolytica-infeksjoner er ofte asymptomatiske. Når symptomer forekommer, er mild til alvorlig diaré og oppblåsthet vanlig. Når sykdommen vedvarer, kan den utvikle seg til å omfatte vekttap og utmattelse. 6 Infeksjon med Entamoeba histolytica kan også bli invasiv og resultere i vevsdestruksjon og leverabscess. 7 Mikroskopisk påvisning av disse parasittene er lite følsom og krever mye tid, utstyr og opplæring. Dessuten kan ikke mikroskopi skille Entamoeba histolytica fra den ikke-patogene arten Entamoeba dispar. 8 PCR er mer følsom enn tradisjonelle metoder og kan gi mulighet for tidligere påvisning, noe som kan redusere behovet for å teste flere avføringsprøver og kan bedre pasientbehandling og infeksjonskontroll. 9 1

2 BD MAX Enteric Parasite Panel er en multipleksanalyse som, samtidig og differensierende, påviser Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis og C. parvum samt Entamoeba histolytica. BD MAX Enteric Parasite Panel, brukt sammen med BD MAX System kan gi resultater for 24 prøver på ca. 4,5 timer. BD MAX Enteric Parasite Panel strømlinjeformer og forenkler testingsprosessen ved at operatøren ikke trenger å gripe inn fra prøven blir plassert i BD MAX System til resultater er tilgjengelig. En avføringsprøve blir innhentet og sendt til laboratoriet, homogenisert og overført med en løkke til et BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube (prøvebufferrør for tarmparasittpanel). Prøvebufferrøret lukkes med en septumkork og varmes deretter opp på BD Pre-warm Heater for å stimulere lysering av parasittorganismene. Prøvebufferrøret blir deretter kjørt på virvelblander og overført til BD MAX System, der følgende automatiserte prosedyrer utføres: Cellene lyseres og nukleinsyrer trekkes ut på magnetiske kuler og konsentreres. Deretter tilføres en alikvot av de eluterte nukleinsyrene til PCR-reagenser som inneholder de målspesifikke primerne som brukes til å oppformere de genetiske målene i BD MAX PCR Cartridge (PCR-kassett), hvis disse er til stede. Analysen inkluderer også en Sample Processing Control (prøvebehandlingskontroll). Prøvebehandlingskontrollen er til stede i BD MAX Extraction Tube (ekstraksjonsrør) og gjennomgår trinnene ekstraksjon, konsentrasjon og oppformering for å overvåke for hemmende stoffer og instrument- eller reagenssvikt. Operatøren trenger ikke gripe inn når prøven, BD MAX Unitized Reagent Strip (modulreagensstrimmel) og PCR-kassetten er lastet inn i BD MAX System. BD MAX System utfører automatisk prøvelysering, nukleinsyreekstraksjon og -konsentrasjon, reagensrehydrering, oppformering av nukleinsyrer og påvisning av målsekvensen for nukleinsyrer ved bruk av polymerasekjedereaksjon (PCR) i sanntid. Oppformerte mål påvises med hydrolyseprober som er merket med slukkede fluoroforer. Oppformeringen, påvisningen og tolkingen av signalene utføres automatisk av BD MAX System. PROSEDYREPRINSIPPER Avføringsprøver blir innhentet fra pasienter og transportert til laboratoriet ukonservert i en ren beholder eller fiksert med 10 % formalin. Prøven virvelblandes, en løkke på 10 µl blir satt inn i sin helhet i prøven, og prøvematerialet presses ut med en virvelbevegelse i et BD MAX Sample Buffer Tube. Prøvebufferrøret lukkes med en septumkork og varmes deretter opp på BD Pre-warm Heater for å stimulere lysering av parasittorganismene. Prøvebufferrøret blir deretter virvelblandet og overført til BD MAX System. Når arbeidslistene er generert og prøven er lastet på BD MAX-instrumentet med en modulreagensstrimmel for BD MAX Enteric Parasite Panel og PCR-kassett, startes kjøringen, og operatøren trenger ikke å gripe inn etter dette. BD MAX System utfører automatisk prøveklargjøring, inkludert lysering av målorganismen, DNA-ekstraksjon og -konsentrasjon, reagensrehydrering samt oppformering og påvisning av målnukleinsyresekvens ved bruk av PCR i sanntid. Tolkningen av signalet utføres automatisk av BD MAX System. Analysen omfatter også en prøvebehandlingskontroll som finnes i ekstraksjonsrøret, og som det blir utført ekstraksjons-, konsentrasjons- og oppformeringstrinn for. Prøvebehandlingskontrollen inkorporeres i lyserings-, ekstraksjons-, konsentrasjons- og oppformeringstrinnene for å overvåke for forekomsten av potensielt hemmende stoffer samt system- og reagensfeil. Etter enzymatisk cellelysering ved forhøyet temperatur blir de frigjorte nukleinsyrene bundet til kuler med magnetiske affinitet. Kulene med de bundne nukleinsyrene vaskes, og nukleinsyrene eluteres med varme og høy ph eluteringsbufferen. Elutert DNA blir nøytralisert og overført til Master Mix-røret for å rehydrere PCR-reagensene. Etter rehydrering dispenserer BD MAX System et fast volum av PCR-klar oppløsning i BD MAX PCR Cartridge. Systemet lukker mikroventiler i BD MAX PCR Cartridge før PCR blir initiert, for å lukke inne oppformeringsblandingen og dermed hindre fordampning og kontaminasjon. De oppformerte DNA-målene påvises ved bruk av hydrolyseprober (TaqMan) som er merket i den ene siden med et fluorescerende rapporteringsfargestoff (fluorofor) og i den andre enden med en slukkerdel. Prober merket med ulike fluoroforer brukes til å påvise amplikoner for tarmparasittmål og prøvebehandlingskontroll i fire ulike optiske kanaler i BD MAX System. Giardia lambliamålamplikoner påvises i FAM-kanalen, Cryptosporidium hominis/parvum-målamplikoner påvises i ROX-kanalen, Entamoeba histolytica-målamplikoner påvises i VIC-kanalen og prøvebehandlingskontrollamplikoner påvises i Cy5.5-kanalen. Når probene er i sin opprinnelige tilstand, blir fluorescensen til fluoroforen undertrykt på grunn av nærheten til slukkeren. Ved forekomst av mål-dna hybridiserer imidlertid probene til sin komplementære sekvens og blir hydrolysert av 5-3 -eksonukleaseaktiviteten til DNA-polymerase når den syntetiserer den nascerende tråden langs DNA-templaten. Dette fører til at fluoroforene blir separert fra slukkermolekylene, og fluorescens blir utstrålt. BD MAX System overvåker disse signalene i hver syklus og tolker dataene ved avslutningen av programmet for å rapportere de endelige resultatene. REAGENSER OG MATERIALER REF Innhold Mengde BD MAX Enteric Parasite Master Mix (A7) Ovnstørket PCR Master Mix som inneholder TaqMan spesifikke molekylære prober og primere sammen med en prøvebehandlingskontrollspesifikk TaqMan-probe og primere. BD MAX Enteric Parasite Unitized Reagent Strips (modulreagensstrimler) Modulreagensstrimmel som inneholder alle flytende reagenser og engangspipettespisser som er nødvendige for DNA-ekstraksjon. BD MAX Enteric Parasite Extraction Tube (B2) Ovnstørket pellet som inneholder kuler med magnetisk affinitet for DNA, proteasereagenser samt prøvebehandlingskontroll. BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube 24 tester 24 tester 24 tester 24 tester Korker med septum 25 2

3 NØDVENDIG UTSTYR OG MATERIALER SOM IKKE FØLGER MED BD Pre-warm Heater (BD Diagnostic Systems katalognr ) BD PCR Catridges (BD Diagnostic Systems katalognr ) VWR Multi-Tube Vortex Mixer eller tilsvarende Vortex Genie 2 eller tilsvarende Nalgene Cryogenic Vial Holder eller tilsvarende Pulverfrie engangshansker 10 µl løkker (BD Diagnostic Systems, katalognr ) For ukonserverte avføringsprøvetyper: Tørre, rene beholdere for innhenting av avføringsprøver For avføringsprøvetyper fiksert med 10 % formalin: Transportbeholder med 10 % formalin (15 ml) ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Fare H319 Gir alvorlig øyeirritasjon. H360 Kan skade forplantningsevnen eller gi fosterskade. P280 Benytt vernehansker/verneklær/vernebriller/ansiktsskjerm. P305+P351+P338 VED KONTAKT MED ØYNENE: Skyll forsiktig med vann i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser dersom dette enkelt lar seg gjøre. Fortsett å skylle. P405 Oppbevares innelåst. P501 Innholdet/beholderen skal kasseres i henhold til lokale/regionale/nasjonale/internasjonale bestemmelser. BD MAX Enteric Parasite Panel er til in vitro-diagnostisk bruk. Nasjonale og lokale offentlige helsemyndigheter har publisert retningslinjer for melding om sykdommer som skal rapporteres i deres jurisdiksjon, blant annet Giardia, Cryptosporidium og Entamoeba for å fastslå nødvendige tiltak for verifisering av resultater for å identifisere og spore utbrudd. Laboratorier er ansvarlige for å følge nasjonale og lokale bestemmelser for innsending av klinisk materiale eller isolater av positive prøver til myndighetenes helselaboratorier. Forholdsregel knyttet til rapportering til helsemyndigheter: Offentlige bestemmelser for varsling av rapporterbare sykdommer oppdateres av og til og omfatter en rekke organismer for overvåkning og undersøkelse av utbrudd. 18,19 I tillegg anbefaler Centers for Disease Control (CDC) at laboratoriet, når det påvises patogener fra rapporterbare sykdommer ved en kulturuavhengig diagnostisk test (CIDT), bør bidra til å innhente isolat eller klinisk materiale for innsending til et relevant offentlig helselaboratorium for å bidra til påvisning av utbrudd og epidemiologiske undersøkelser. Laboratorier har ansvaret for å følge offentlige bestemmelser og bør rådføre seg med offentlige helselaboratorier når det gjelder retningslinjer for innsending av isolater og/eller kliniske prøver. Ikke bruk utløpte reagenser og/eller materialer. Ikke bruk settet hvis etiketten som forsegler ytterkartongen, er skadet ved levering. Du må ikke bruke reagenser hvis beskyttelsesposer er åpne eller skadet ved levering. Ikke bruk reagensen hvis tørkemiddelposen ikke er til stede eller er skadet inne i reagensposene. Ikke fjern tørkemiddelet fra reagensposene. Lukk posene som beskytter reagensene raskt med glidelåslukningen etter hver bruk. Fjern eventuell overskytende luft fra posene før forsegling. Beskytt reagenser mot varme og fuktighet. Langvarig eksponering for fuktighet kan påvirke produktets ytelse. Du må ikke bruke reagenser hvis folien er brutt eller skadet. Ikke bland reagenser fra forskjellige poser og/eller pakker og/eller lotnummer. Du må ikke bytte om på eller gjenbruke korker, da det kan oppstå kontaminering som forstyrrer testresultatene. Kontroller at modulreagensstrimlene har korrekte væskenivåer (påse at væskene er på bunnen av rørene) (se figur 1). Kontroller at modulreagensstrimlene har alle pipettespissene på plass (se figur 1). Gå frem med varsomhet når du bruker kjemiske løsninger, da lesbarheten til strekkoder på Master Mix- og ekstraksjonsrøret kan bli endret. God laboratorieteknikk er avgjørende for korrekt ytelse for denne analysen. På grunn av den høye analytiske sensitiviteten til denne testen må det utvises meget stor forsiktighet for å bevare renheten til alle materialer og reagenser. I tilfeller der andre PCR-tester utføres i samme generelle område av laboratoriet, må du være forsiktig, slik at ikke BD MAX Enteric Parasite Panel, eventuelle andre reagenser som er nødvendige for testing, og BD MAX System kontamineres. Unngå alltid kontaminasjon av reagenser med mikrober og deoksyribonuklease (DNase). Du må skifte hansker før du håndterer reagenser og kassetter. For å unngå kontaminasjon av miljøet med oppformeringer må du ikke brekke i stykker BD MAX PCR Cartridges etter bruk. Forseglingene på BD MAX PCR Cartridges er utformet for å hindre kontaminasjon. Hvis du bruker BD MAX Enteric Parasite Panel utenfor de anbefalte tidsområdene, kan det oppstå ugyldige resultater. Analyser som ikke utføres innenfor de spesifiserte tidsområdene, må gjentas. 3

4 Ytterligere kontroller kan testes i samsvar med retningslinjer eller krav i lokale, statlige og/eller kommunale forskrifter eller godkjenningsorganisasjoner. Håndter alltid prøver som om de var smittebærende, og i samsvar med sikre laboratorieprosedyrer som dem som er beskrevet i CLSI-dokument M29 10 og i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. 11 Bruk beskyttelsesklær og engangshansker mens du håndterer alle reagenser. Vask hendene godt etter at testen er utført. Du må ikke pipettere med munnen. Du må ikke røyke, drikke, tygge eller spise i områder der prøver eller settreagenser håndteres. Kasser ubrukte reagenser og avfall i samsvar med lokale eller nasjonale bestemmelser. Se i brukerhåndboken for BD MAX System 12 for ytterligere advarsler, forsiktighetsregler og prosedyrer. OPPBEVARING OG STABILITET Innhentede prøver, enten ukonservert avføring eller avføring fiksert med 10 % formalin, skal holdes mellom 2 C og 25 C under transport. Beskytt dem mot frost og eksponering for høye temperaturer. Prøver, avføring som enten er ukonservert eller fiksert med 10 % formalin, kan oppbevares i opptil 120 timer (5 dager) ved 2 8 C eller maksimalt 48 timer ved 2 25 C før testing. Før eller etter forvarming kan inokulerte prøvebufferrør totalt oppbevares for testing (eller gjentatt testing) opptil: Tid Temperatur 120 timer (5 dager) 2 8 C 48 timer 2 25 C BD MAX Enteric Parasite Panel-komponenter er stabile ved 2 25 C til og med oppgitt utløpsdato. Ikke bruk komponenter etter utløpsdatoen. BD MAX Enteric Parasite Master Mix og Extraction Tubes leveres i forseglede poser. Forsegl posen igjen umiddelbart etter åpning for å beskytte produktet mot fuktighet. Reagensrør er stabile i opptil 14 dager ved 2 25 C etter første åpning og lukking eller til utløpsdatoen, avhengig av hva som inntreffer først. BRUKSANVISNING Prøvetaking/transport For å innhente en akseptabel prøve må man følge prosedyren for prøveinnhenting nøye. Avføringsprøver innhentes i henhold til følgende prosedyre: Ukonserverte prøver: Overfør avføringsprøven til en tørr, ren beholder. Unngå kontaminering med vann eller urin. Merk beholderen, og transporter den til laboratoriet i samsvar med institusjonens standard driftsprosedyrer (se delen Oppbevaring og stabilitet). Unngå å blande prøven med toalettpapir, vann eller såpe. Prøver fiksert med 10 % formalin: Overfør avføringsprøven til fikseringsenheten i samsvar med produsentens instruksjoner. Unngå kontaminering med vann eller urin. Merk beholderen, og transporter den til laboratoriet i samsvar med institusjonens standard driftsprosedyrer (se delen Oppbevaring og stabilitet). Unngå å blande prøven med toalettpapir, vann eller såpe. Prøveklargjøring 1. Merk et strekkodet BD MAX Sample Buffer Tube (klar kork) med korrekt prøveidentifikasjon. Ikke gjør strekkoden utydelig. 2. Kjør ukonserverte eller fikserte prøver på virvelblander med høy hastighet i 15 sekunder. Utvis varsomhet ved åpning av virvelblandede prøver, da materiale kan henge fast på lokket til beholderen. 3. Ta den klare korken av prøvebufferrøret. 4. Inokulering av BD MAX Sample Buffer Tube: a. For ukonserverte avføringsprøver: i. Dypp en 10 µl engangsinokuleringsløkke til hele løkkedelen er nede i prøven. Ikke dypp forbi løkken, da eventuell ekstra avføring på skaftet kan overbelaste PCR-reaksjonen. ii. Sett den fylte løkken ned i prøvebufferrøret, og frigjør prøven ved å bruke en virvlende bevegelse. iii. Fjern og kast løkken. MERK: Det er ikke nødvendig å fjerne hele prøven fra løkken. Den resulterende oppløsningen i prøvebufferrøret skal ikke ha mørkere farge enn lett tefarget. b. For avføringsprøver fiksert med 10 % formalin: i. Dypp en 10 µl engangsinokuleringsløkke til hele løkkedelen er nede i prøven. Det kan være vanskelig å danne en stabil boble i løkken med fikserte prøver. ii. Sett den fylte løkken ned i prøvebufferrøret, og frigjør prøven ved å bruke en virvlende bevegelse. iii. Fjern og kast løkken. 5. Sett kork på det inokulerte prøvebufferrøret igjen; bruk en blå kork med septum. 6. Klargjør eventuelle ytterligere prøver for testing ved å gjenta trinn 1 til og med 5, og gå deretter videre til Bruk av BD Pre-warm Heater. 4

5 Bruk av BD Pre-warm Heater (Se i håndboken for BD Pre-warm Heater 13 for bruksanvisning.) 1. Velg alternativet <BD MAX ENT PARA 53 > i panelet Run > Worklist (Kjøring > Arbeidsliste). 2. Velg sett-lot-nummeret for BD MAX Enteric Parasite Panel (for sporing av lot) (vær oppmerksom på at settets LOTnummerinformasjon må leses inn separat før den slås opp i den ventende arbeidslisten). NOTE: Påse at sporing av lot-nummer er aktivert i Configuration (Konfigurasjon) > System. 3. Legg inn strekkoden fra hvert BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube ved hjelp av strekkodeleseren eller ved manuell innlegging sammen med pasientens aksesjons-id. 4. Ventearbeidslisten blir nå oppdatert og viser en avmerkingsboksen for tidsplanlegging av forvarmingstrinnet. 5. Tidsplanlegg prøven ved å avmerke boksen i arbeidslisten. 6. Plasser BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube (som inneholder prøven) på BD Pre-warm Heater. Stasjonen har plass til opptil 24 prøvebufferrør. 7. Lukk lokket på BD Pre-warm Heater, og velg Start Pre-warm (Start forvarming) på panelet Run > Worklist (Kjøring > Arbeidsliste). En spesifikk oppvarmings- og avkjølingsprofil for BD MAX Enteric Parasite Panel startes. MERK: Bekreft at rør ble plassert fysisk i forvarmingsracket, og at racket ble lastet på BD Pre-warm Heater, og velg deretter OK ved meldingen om å starte forvarming. 8. Gjennomføringstiden for forvarmingskjøringen vises i statusskjermbildet, og arbeidslisteskjermbildet vil indikere at forvarmingen har status In progress (Pågår). 9. I skjermbildet for arbeidslisten vises den valgte prøven/testen nå som Pre-warm Complete (Forvarming fullført) etter vellykket forvarming. 10. Etter fullføring av forvarmetrinnet fjerner du prøverøret fra BD Pre-warm Heater og virvelblander hvert prøvebufferrør kort i 5 sekunder, eller plasserer alternativt alle prøvebufferrør på en virvelblander for flere rør i opptil 1 minutt. 11. Gå til Bruk av BD MAX System for å sette opp BD MAX System Rack. MERK: Hvis forvarmingstrinnet ikke var vellykket, viser timeren på BD MAX System statusen Failed / Cooling (Mislykket/ Avkjøler). Det kan være nødvendig å gjenta forvarmingstrinnet før testing på BD MAX System. Når kjølingstrinnet etter mislykket forvarming er fullført, ser du på arbeidslisteskjermbildet. Hvis forvarmingsstatusen er Failed (Mislykket) for prøvene det gjelder, må forvarmingstrinnet gjentas. Hvis forvarmingsstatusen er Complete (Fullført), kan testing av disse rørene med BD MAX Enteric Parasite Panel fortsette. MERK: Test med BD MAX Enteric Parasite Panel kan kun utføres etter vellykket fullføring av forvarmingstrinnet ovenfor. Prøver som har gjennomgått forvarmingssyklusen på vellykket måte, trenger ikke varmes opp på nytt hvis ny testing er nødvendig (se avsnittet Oppbevaring og stabilitet). MERK: For laboratorier med flere enn ett BD MAX System med BD Pre-warm Heater må prøver testes og/eller testes på nytt på samme BD MAX System som forvarmingstrinnet ble utført på. MERK: Etter forvarming må testing med BD MAX Enteric Parasite Panel utføres innen tidsfristene som er angitt under Oppbevaring og stabilitet. If retesting is necessary, re-vortex sample(s). Bruk av BD MAX System MERK: Se brukerhåndboken for BD MAX System 12 for detaljerte instruksjoner (delen Bruk). MERK: Ett (1) prøvebufferrør, én (1) kork med septum, én (1) Master Mix (A7), ett (1) ekstraksjonsrør (B2) og én (1) modulreagensstrimmel må brukes for hver prøve og hver ekstern kontroll som skal testes. Ta ut det nødvendige antallet av BD MAX-materialer fra sine beskyttelsesposer eller esker. For å oppbevare åpnede poser med Master Mix eller ekstraksjonsrør fjerner du overflødig luft og bruker glidelåslukningen idet du påser at pakken med tørkemiddel er i posen. 1. Slå på BD MAX System (hvis det ikke allerede er gjort), og logg på ved å oppgi <user name> (brukernavn) og <password> (passord). 2. Du må skifte hansker før du håndterer reagenser og kassetter. 3. Ta ut det nødvendige antallet modulreagensstrimler fra BD MAX Enteric Parasite Panel-settet. Bank hver modulreagensstrimmel lett mot en hard overflate for å sikre at alle væskene er i bunnen av rørene. 4. Ta det nødvendige antallet ekstraksjonsrør og Master Mix-rør ut av de beskyttende posene. Fjern overflødig luft, og lukk posene med vakuumforseglingen. 5. For hver prøve som skal testes, plasserer du én (1) modulreagensstrimmel på i et rack på BD MAX system og starter med posisjon 1 på rack A. 6. Klikk ett (1) ekstraksjonsrør (hvit folie) inn i hver modulreagensstrimmel i posisjon 1 som vist i figur Klikk ett (1) Master Mix-rør (grønn folie) inn i hver modulreagensstrimmel i posisjon 2 som vist i figur 1. 5

6 Figur 1: Klikk BD MAX Enteric Parasite Panel-ekstraksjonsrør og Master Mix-rør inn i modulreagensstrimler. 8. Plasser prøvebufferrørene i rack på BD MAX System som svarer til modulreagensstrimlene som er klargjort i trinn 5 til 7. MERK: Sett inn prøvebufferrørene i prøverack med 1D-strekkodeetikettene vendt utover (dette gjør det lettere å skanne prøvebufferrørene under prøveinnloggingen). 9. Plasser nødvendig antall BD MAX PCR-kassetter i BD MAX System (se figur 2). Hver kassett har plass til 2 serier på opptil 12 prøver, totalt 24 prøver. BD MAX System vil automatisk velge plassering og rad på PCR-kassetten for hver kjøring. PCR-kassettene brukes etter modellen "per kjøring OG rack" (2 kjøringer per kassett, og 1 kassett per rack). Figur 2: Sette inn BD MAX PCR-kassetter. 10. Sett inn rack i BD MAX System (se figur 3). Side A Side B Figur 3: Sette inn rack i BD MAX System. 6

7 11. Lukk lokket på BD MAX System, og klikk på <Start> for å begynne behandling. 12. Ved slutten av hver kjøring må du kontrollere resultatene straks eller oppbevare prøvebufferrør ved 2 8 C i opptil 120 timer (5 dager) ELLER ved 2 25 C i maksimalt 48 timer til resultatene er kontrollert. MERK: Hvis et septumlokk blir ødelagt under kjøringen, må du bytte det ut med et nytt før prøven oppbevares. MERK: Klargjorte BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tubes kan oppbevares ved 2 8 C i opptil 120 timer (5 dager) ELLER ved 2 25 C i maksimalt 48 timer etter at prøven er blitt tilsatt prøvebufferrør. Hvis du oppnår et ubestemt (IND), uavklart (UNR) eller ufullstendig (INC) resultat, eller hvis det oppstår en ekstern kontroll-feil, må du utføre en gjentatt test av det klargjorte prøvebufferrøret innenfor denne tidsrammen (se delen Prosedyre for gjentatt test). KVALITETSKONTROLL Kvalitetskontrollprosedyrer overvåker ytelsen til enheten. Laboratorier må fastsette antall, type og hyppighet av testing av kontrollmateriale i henhold til retningslinjer eller krav i nasjonale eller lokale bestemmelser eller fra akkrediteringsorganer for å overvåke effektiviteten av hele analyseprosessen. For generell veiledning om kvalitetskontroll kan det være hensiktsmessig for brukeren å se i CLSI MM3 14 og EP Materialer for ekstern kontroll leveres ikke fra BD. BD MAX System-programvaren bruker ikke eksterne positive og negative kontroller i den hensikt å tolke resultatene av prøvetester. Eksterne kontroller behandles som om de var pasientprøver. Se tabellen i delen Tolkning av resultater for tolkning av analyseresultater for ekstern kontroll. 2. Én (1) ekstern positiv kontroll og én (1) ekstern negativ kontroll skal kjøres minst daglig inntil tilstrekkelig prosessvalidering oppnås på BD MAX System i hver laboratoriesetting. Redusert hyppighet av kontrolltesting skal være i samsvar med gjeldende bestemmelser. 3. Hensikten med ekstern positiv kontroll er å overvåke for vesentlige reagensfeil. Hensikten med ekstern negativ kontroll er å påvise kontaminasjon av reagens eller omgivelser (eller overføring) av målnukleinsyrer. 4. Ulike typer eksterne kontroller anbefales for å gjøre det mulig for brukeren å velge den som passer best for laboratoriets kvalitetskontrollprogram. a. Ekstern negativ kontroll: Et BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube som ikke er inokulert. BD anbefaler at ekstern negativ kontroll klargjøres før ekstern positiv kontroll for å redusere potensialet for kontaminasjon som følge av kontrollklargjøringen. b. Ekstern positiv kontroll: På grunn av mangel på kommersielt tilgjengelige organismeoocyster/cyster for alle mål og brysomme dyrkningsmetoder for den trofozoite formen av målorganismene anbefaler BD bruk av preparater med genomisk DNA i henhold til tabell 1 nedenfor. Tabell 1: Kommersielt tilgjengelige stammer for ekstern positiv kontroll Stamme for ekstern positiv kontroll Giardia intestinalis (Lambl) (ATCC 30888D) Cryptosporidium parvum (ATCC PRA-67D) Entamoeba histolytica (ATCC 30459D) Konsentrasjon av genomisk DNA pg/ml pg/ml 150 pg/ml MERK: Når de blir oppbevart som anbefalt av produsenten, kan de kvantifiserte beholdningene av oppløsning av genomisk DNA brukes til å klargjøre flere blandinger som beskrevet nedenfor. (1) Hvis stoffet mottas i tørket form, skal innholdet i beholderen rehydreres som beskrevet i leverandørens produktark med 50 µl av 1X TE-buffer (10 mm tris-hcl, 1 mm EDTA, ph = 8,0, molekylærbiologistandard). (2) Kvantifiser hvert DNA-preparat med spektrofotometri ved bruk av absorbans ved 260 nm. (3) Klargjør en blanding av de tre DNA-preparatene, ved seriefortynning i 1X TE-buffer, i henhold til de endelige konsentrasjonene av genomisk DNA som er oppgitt i tabellen ovenfor. (4) Virvelbland løsningen til den er godt blandet, og tilfør 10 µl av løsningen til det tilsvarende BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube ved å bruke en kalibrert pipette. Genomisk DNA fra hver målorgansime vil være til stede i prøvebufferrøret med 5 X sin spesifikke LOD. (5) Sett en blå kork med septum på prøvebufferrøret og virvelbland i 5 sekunder. 5. Alle eksterne kontroller skal gi forventede resultater (positive for ekstern positiv kontroll, negative for ekstern negativ kontroll) og ingen ikke-beståtte eksterne kontroller (uavklart-, ubestemt- eller ufullstendig-resultater). 6. En ekstern negativ kontroll som gir et positivt testresultat, er indikativ for en prøvehåndterings- og/eller kontamineringshendelse. Gå gjennom teknikken for prøvehåndtering for å unngå forvekslinger og/eller kontaminering. En ekstern positiv kontroll som gir et negativt resultat, indikerer et problem med prøvehåndteringen/-klargjøringen eller feil ved reagens. Gå gjennom teknikken for prøvehåndtering/-klargjøring. 7. En ekstern kontroll som gir et testresultat som er uavklart, ubestemt eller ufullstendig, indikerer en feil ved reagens eller BD MAX System. Kontroller om det er feilmeldinger på monitoren til BD MAX System. Se i delen Oversikt over systemfeil i brukerhåndboken for BD MAX System 12 for tolkning av advarsels- og feilkoder. Hvis problemet vedvarer, bruk reagenser fra en uåpnet pose eller bruk en et nytt analysesett. 7

8 8. Hvert ekstraksjonsrør inneholder en prøvebehandlingskontroll som er et plasmid som inneholder en syntetisk mål-dnasekvens. Prøvebehandlingskontrollen vil bli trukket ut, elutert og oppformert sammen med eventuelt DNA som er til stede i den behandlede prøven, noe som sikrer forutsigbarhet for analysen. Prøvebehandlingskontrollen overvåker effektiviteten ved DNA-innhenting, -vasking og -elutering under prøvebehandlingstrinnene samt effektiviteten av DNA-oppformering og -påvisning under PCR-analyse. Hvis resultatet av prøvebehandlingskontrollen ikke oppfyller akseptanskriteriene, rapporteres for prøven som uavklart, men alle positive (POS) analyseresultater blir rapportert, og ingen mål blir betegnet som negative (NEG). Et resultat som er uavklart, indikerer prøverelatert inhibering eller reagenssvikt. Gjenta kjøringen av eventuelle prøver som rapporteres som uavklart, i henhold til delen Prosedyre for gjentatt test nedenfor. TOLKNING AV RESULTATER Resultater vises i kategorien <Results> (Resultater) i vinduet <Results> (Resultater) på monitoren til BD MAX System. BD MAX System-programvaren tolker testresultatene automatisk. Resultater blir rapportert for hver av analyttene og for prøvebehandlingskontrollen. Et testresultat kan betegnes NEG (negativt), POS (positivt) eller UNR (uavklart) basert på oppformeringsstatusen til målet og til prøvebehandlingskontrollen. IND (ubestemte) eller INC (ufullstendige) resultater skyldes svikt i BD MAX System. Ved et delvis UNR-resultat, når ett eller flere mål har et POS-resultat, og alle andre mål har et UNR-resultat, vil ingen mål bli kalt NEG. Tabell 2: Tolkning av resultater for BD MAX Enteric Parasite Panel Rapportert analyseresultat Tolkning av resultatet a Glamb POS Giardia lamblia-dna påvist Glamb NEG Intet Giardia lamblia-dna påvist Glamb UNR Uavklart prøve med hemming eller reagensfeil; ingen oppformering av mål eller prøvebehandlingskontroll Crypto POS Cryptosporidium parvum- eller hominis-dna påvist Crypto NEG Intet Cryptosporidium parvum- eller hominis-dna påvist Crypto UNR Uavklart prøve med hemming eller reagensfeil; ingen oppformering av mål eller prøvebehandlingskontroll Ehist POS Entamoeba histolytica-dna påvist Ehist NEG Intet Entamoeba histolytica-dna påvist Ehist UNR IND INC Uavklart prøve med hemming eller reagensfeil; ingen oppformering av mål eller prøvebehandlingskontroll Ubestemt resultat på grunn av svikt i BD MAX-systemet (med advarsel- eller feilkoder b ) Ufullstendig kjøring (med advarsel- eller feilkoder b ) a BD MAX Enteric Parasite Panel-resultater kan brukes til å styre nivået for forholdsregler i samsvar med institusjonens programmer og praksis. b Se i delen Feilsøking i brukerhåndboken for BD MAX-systemet 12 når det gjelder tolkning av advarsel- og feilkoder. 8

9 PROSEDYRE FOR GJENTATT TEST MERK: Det er tilstrekkelig volum tilgjengelig for én gjentatt test fra prøvebufferrøret. For prøvebufferrør oppbevart ved 2 25 C må gjentatt testing utføres innen 48 timer etter den opprinnelige inokuleringen av prøvebufferrør med prøven samt forvarming. Alternativt, for prøvebufferrør oppbevart ved 2 8 C, må gjentatt testing utføres innen 120 timer (5 dager). Den gjenværende avføringsprøven kan også brukes til gjentatt testing innen 5 dager etter innhenting hvis den er oppbevart ved 2 8 C, eller innen 48 timer hvis den er oppbevart ved 2 25 C. MERK: Nye prøver kan bli testet i samme kjøring som gjentatte prøver. Uavklart resultat Uavklarte resultater kan forekomme hvis prøverelatert hemming eller en reagensfeil hindrer riktig oppformering av mål eller prøvebehandlingskontroll. Hvis prøvebehandlingskontrollen ikke oppformeres, blir prøven rapportert som UNR, men alle positive (POS) analyseresultater vil bli rapportert, og ingen mål vil bli kalt NEG. BD MAX System rapporterer resultater for hvert mål individuelt, og et UNR-resultat kan forekomme for ett eller flere BD MAX Enteric Parasite Panel-mål. I tilfelle et fullstendig UNR-resultat, der alle mål har resultatet UNR, er det nødvendig å gjenta testen. Ved et delvis UNR-resultat, når ett eller flere mål har et POS-resultat, og andre mål har et UNR-resultat, anbefales det at testen gjentas som beskrevet ovenfor. I sjeldne tilfeller kan avvikende resultater observeres når en gjentatt test kjøres for de målene som opprinnelig ble rapportert som POS. Følg korrekte prosedyrer i henhold til gjeldende laboratorieprosedyrer. Prøven(e) kan gjentas fra sine korresponderende prøvebufferrør innenfor tidsrammene som er definert ovenfor. Virvelbland prøven(e) i ett (1) minutt, og start på nytt fra delen Bruk av BD MAX System. Den gjenværende avføringsprøven kan også brukes til gjentatt testing med et nytt prøvebufferrør innenfor tidsrammene som er angitt ovenfor. Start på nytt fra delen Klargjøring av prøve. Ubestemt resultat Ubestemte resultater kan oppstå hvis det forekommer en systemsvikt. Prøven(e) kan gjentas fra sine korresponderende prøvebufferrør innenfor tidsrammen som er angitt ovenfor. Virvelbland prøven(e) i ett (1) minutt, og start på nytt fra delen Bruk av BD MAX System. Den gjenværende avføringsprøven, med et nytt prøvebufferrør, kan også brukes til gjentatt testing innenfor tidsrammen som er angitt ovenfor. Start på nytt fra delen Klargjøring av prøve. Når det gjelder tolkning av advarsel- eller feilkodemelinger, se i brukerhåndboken for BD MAX System 12 (delen Feilsøking). Ufullstendig resultat Ufullstendig-resultater kan forekomme hvis prøveklargjøringen eller PCR ikke blir fullført. Prøven(e) kan gjentas fra sine korresponderende prøvebufferrør innenfor tillatte tidsrammer som er angitt ovenfor. Virvelbland prøven(e) i ett (1) min, og start på nytt fra delen Bruk av BD MAX System. Den gjenværende avføringsprøven kan også brukes til gjentatt testing med et nytt prøvebufferrør innenfor tidsrammene som er angitt ovenfor. Start på nytt fra delen Klargjøring av prøve. Når det gjelder tolkning av advarsel- eller feilkodemelinger, se i brukerhåndboken for BD MAX System 12 (delen Feilsøking). Feil ved ekstern kontroll External Controls bør gi forventede resultater når de testes. Hvis prøver må gjentas som følge av et feilaktig resultat for ekstern kontroll, må de gjentas fra sitt prøvebufferrør sammen med nylig klargjorte eksterne kontroller innenfor de tillatte tidsrammene som er angitt ovenfor. Virvelbland prøver i ett (1) min, og start på nytt fra delen Bruk av BD MAX System. Feil ved forvarming Ved en forvarmingsfeil bør berørte prøvebufferrør bli værende i forvarmeapparatet i hele nedkjølingssyklusen på 30 minutter. Når nedkjølingssyklusen er fullført, starter du forvarmingsprosedyren med de samme prøvebufferrørene som beskrevet i delen Bruk av BD Pre-warm Heater, forutsatt at prøvebufferrørene er innefor tidsgrensene som er angitt i delen Oppbevaring og stabilitet. Hvis de er utenfor den angitte tidsrammen for oppbevaring og stabilitet for prøvebufferrør, klargjøres nye prøvebufferrør fra den opprinnelige prøven med start fra delen Klargjøring av prøve. BEGRENSNINGER VED PROSEDYREN Dette produktet er tiltenkt for bruk bare med humane avføringsprøver som er ukonservert eller fiksert med 10 % formalin. Avføringsprøver fra rektalpensler og avføring kontaminert med barium er ikke blitt validert med BD MAX Enteric Parasite Panel. Feilaktige testresultater kan forekomme som følge av uegnet prøvetaking, -håndtering eller -oppbevaring, teknisk svikt eller forveksling av prøver, eller fordi antallet organismer i prøven er under den analytiske sensitiviteten til testen. Hvis BD MAX Enteric Parasite Panel gir IND, INC eller UNR, bør testen gjentas. Et positivt resultat av BD MAX Enteric Parasite Panel er ikke nødvendigvis noen indikasjon på tilstedeværelse av levedyktige organismer. Det indikerer imidlertid forekomst av DNA fra Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium hominis eller Entamoeba histolytica og muliggjør identifikasjon av BD MAX Enteric Parasite Panel-organismene. Mutasjoner eller polymorfismer i primer- eller probebindingsområder kan påvirke påvisning av målorganismene og kan føre til et falskt negativt resultat med BD MAX Enteric Parasite Panel. Som for alle PCR-baserte in vitro-diagnostiske tester kan det påvises svært lave nivåer av målet under den analytiske følsomheten for analysen, men det er ikke sikkert at resultatene kan reproduseres. Falske negative resultater kan forekomme som følge av tap av nukleinsyre grunnet utilstrekkelig innhenting, transport eller oppbevaring av prøver, eller som følge av utilstrekkelig lysering av organisme. Prøvebehandlingskontrollen er lagt til testen for å bistå i identifiseringen av prøver som inneholder hemmere for PCR-oppformering. Prøvebehandlingskontrollen gir ingen indikasjoner på om nukleinsyre har gått tapt som følge av utilstrekkelig innhenting, transport eller oppbevaring av prøver, eller om celler har blitt utilstrekkelig lysert. 9

10 Resultater fra BD MAX Enteric Parasite Panel skal brukes som et supplement til kliniske observasjoner og annen informasjon som er tilgjengelig for legen. Som for alle diagnostiske in vitro-tester er positive og negative prediktive verdier svært avhengig av prevalens. Ytelsen til BD MAX Enteric Parasite Panel kan variere avhengig av prevalens og testet populasjon. BD MAX Sample Buffer Tube er ikke utformet for å støtte undersøkelse av organismers morfologi. Morfologiske undersøkelser og/eller farging må gjøres fra den opprinnelige prøven. Ytelsen til denne testen er ikke blitt fastslått for overvåkning av behandling mot Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium hominis eller Entamoeba histolytica. BD MAX Enteric Parasite Panel er tiltenkt for påvisning av DNA fra C. hominis og C. parvum uten å skille mellom disse to artene. Denne testen er ikke tiltenkt for påvisning av DNA fra andre arter av Cryptosporidium. Denne testen er en kvalitativ test, den gir ikke kvantitative verdier, og den indikerer ikke mengden av organismer som er til stede. Ytelsen til denne testen er ikke blitt evaluert for personer med svekket immunforsvar eller for pasienter uten symptomer på gastrointestinal infeksjon. Virkningen av interfererende stoffer er evaluert kun for stoffene sop er oppgitt i delen Interfererende stoffer nedenfor. Mulig interferens er ikke blitt evaluert for andre stoffer enn dem som er beskrevet i delen Interfererende stoffer nedenfor. Kryssreaktivitet med andre organismer enn dem som er oppgitt i delen Analytisk spesifisitet nedenfor, er ikke blitt evaluert. YTELSESKARAKTERISTIKK Ytelseskarakteristikk for BD MAX Enteric Parasite Panel ble fastslått i en undersøkelsesstudie på flere steder. Studien omfattet totalt fem (5) kliniske steder der prøver ble innhentet som en del av rutinemessig pasientpleie, ble inkludert i studien og ble testet med BD MAX Enteric Bacterial Panel. Ved ytterligere syv (7) sentre ble det innhentet og inkludert prøver som ble evaluert på et sentralt sted. Prøver ble innhentet fra pediatriske eller voksne pasienter med mistanke om akutt gastroenteritt eller kolitt, som helsepersonell hadde bestilt diagnostiske parasittmåltester for. For prospektive prøver ble det benyttet en standardisert referansemetode (DFA-mikroskopi trikromfarging) for identifikasjon av tarmparasittpatogener etterfulgt av alternerende PCR-analyse og toveis sekvensering, som utgjorde den sammensatte referansemetoden. Fordi DFA identifiserer Cryptosporidium på artsnivå, ble DFApositive prøver som ved toveis sekvensering ble identifisert som noe annet enn C. hominis eller C. parvum, ansett som negative for referansemetoden. Testing med referansemetoden ble utført i samsvar med pakningsvedlegget for hvert produkt. For retrospektive prøver ble de historiske resultatene registrert på innhentingsstedet, og prøvene blir ikke evaluert på nytt. De historiske resultatene ble bekreftet ved bruk av en alternerende PCR-analyse og toveis sekvensering som en del av den sammensatte referansemetoden for å bekrefte forekomsten av mål-dna. Totalt prospektive prøver (1 128 fiksert med 10 % formalin, ukonserverte og 18 ikke-samsvarende) og 411 retrospektive prøver (148 fiksert med 10 % formalin, 251 ukonserverte og 12 ikke-samsvarende) ble inkludert i den kliniske evalueringen. I tabell 3 beskrives antallet samsvarende prøver som ble inkludert etter pasientalder og prøvetype. Totalt 128 retrospektive prøver ble ikke inkludert i ytelsesberegningene nedenfor, siden historiske resultater ikke ble bekreftet med en alternerende PCR-analyse og toveis sekvensering. I tabell 4 til 7 beskrives ytelseskarakteristikkene for BD MAX Enteric Bacterial Panel som ble observert i den kliniske studien. Tabell 3: Sammendrag for inkludering i klinisk studie etter aldersgruppe og prøvetype Aldersgruppe Prøvetype Formalin 10 % Ukonservert Kombinert 0 1 måned måned til 2 år år år år Over 21 år Ukjent Totalt

11 For prøvetypen fiksert med 10 % formalin identifiserte BD MAX Enteric Parasite Panel henholdsvis 95,5 % og 99,7 % av prospektive prøver som var positive og negative for Giardia lamblia og 100 % og 100 % av retrospektive prøver som var henholdsvis positive og negative. For den ukonserverte prøvetypen identifiserte BD MAX Enteric Parasite Panel henholdsvis 94,4 % og 100 % av prospektive prøver som var positive og negative for Giardia lamblia og henholdsvis 98,6 % og 94,9 % av retrospektive prøver som var positive og negative (tabell 4). Tabell 4: Giardia lamblia klinisk ytelse Prøvetype Prøvens opprinnelse BD MAX Enteric Parasite Panel P Referansemetode N Totalt Fiksert med 10 % formalin Ukonservert Prospektive Retrospektive Prospektive Retrospektive P N Totalt SENSITIVITET (95 % KI): 95,5 % (78,2 %, 99,2 %) SPESIFISITET (95 % KI): 99,7 % (99,1 %, 99,9 %) P N Totalt PPA (95 % KI): 100,0 % (93,5 %, 100,0 %) NPA (95 % KI): 100,0 % (94,9 %, 100,0 %) P N Totalt SENSITIVITET (95 % KI): 94,4 % (74,2 %, 99,0 %) SPESIFISITET (95 % KI): 100,0 % (99,4 %, 100,0 %) P ,6 79 N Totalt PPA (95 % KI): 98,6 % (92,6 %, 99,8 %) NPA (95 % KI): 94,9 % (89,8 %, 97,5 %) 1 Den alternerende komponenten av referansemetoden, med PCR-analyse og toveis sekvensering, var negativ for denne prøven. DFA-komponenten av referansemetoden var positiv. Gjentatt avvikstesting med en alternerende PCR-analyse og toveis sekvensering ble utført og gav et negativt resultat. Gjentatt avvikstesting med DFA ble utført og gav et negativt resultat. Gjentatt avvikstesting med BD MAX Enteric Parasite Panel ble utført med tolv (12) replikater, og alle gav negative resultater (0/12). Prøven ble også testet ved bruk av engiardia-antigen-eia som avvikstesting og gav et negativt resultat. 2 Én (1) prøve ble også testet ved bruk av engiardia-antigenpåvisnings-eia som avvikstesting og gav et negativt resultat. Gjentatt avvikstesting med BD MAX Enteric Parasite Panel ble utført med seks (6) replikater av denne prøven og gav positivt resultat med 1/6. Ingen avvikstesting ble utført for de andre to (2) prøvene. 3 Den alternerende komponenten av referansemetoden, med PCR-analyse og toveis sekvensering, var negativ for denne prøven. DFA-segmentet av referansemetoden var positiv. Gjentatt avvikstesting med alternerende PCR-analyse og toveis sekvensering ble utført og gav et negativt resultat. Gjentatt avvikstesting med DFA ble utført og gav positivt resultat. Gjentatt avvikstesting med BD MAX Enteric Parasite Panel ble utført med seks (6) replikater, og alle gav negative resultater (0/6). Denne prøven ble også testet ved bruk av en antigenpåvisnings-eia som avvikstesting og gav et negativt resultat. 4 Ingen avvikstesting ble utført for denne prøven. 5 Én (1) prøve ble testet ved bruk av en antigenpåvisnings-eia og en kommersielt tilgjengelig molekylær analyse som avvikstesting og gav positivt resultat for begge. Gjentatt avvikstesting med BD MAX Enteric Parasite Panel ble utført med seks (6) replikater av denne prøven, og alle gav positive resultater med (6/6). 6 Én (1) prøve ble testet ved bruk av en EIA og en kommersielt tilgjengelig molekylær analyse som avvikstesting. EIA gav positivt resultat, og den molekylære analysen gav negativt resultat. Gjentatt avvikstesting med BD MAX Enteric Parasite Panel ble utført med elleve (11) replikater av denne prøven og gav 5 positive resultater (5/11). Ingen avvikstesting ble utført for de andre fem (5) prøvene. 11

12 For prøvetypen fiksert med 10 % formalin identifiserte BD MAX Enteric Parasite Panel henholdsvis 90,3 % og 99,8 % av prospektive prøver som var positive og negative for Cryptosporidium hominis/parvum og henholdsvis 93 % og 100 % av retrospektive prøver som var positive og negative. For den ukonserverte prøvetypen identifiserte BD MAX Enteric Parasite Panel henholdsvis 100 % og 99,5 % av de prospektive prøvene som var positive og negative for Cryptosporidium hominis/parvum og henholdsvis 97,7 % og 98,4 % av de retrospektive positive og negative prøvene (tabell 5). Tabell 5: Cryptosporidium hominis/parvum klinisk ytelse Prøvetype Prøvens opprinnelse BD MAX Enteric Parasite Panel P Referansemetode N Totalt Fiksert med 10 % formalin Ukonservert Prospektive Retrospektive Prospektive Retrospektive P N 6 1, Totalt SENSITIVITET: 90,3 % (80,5 %, 95,5 %) SPESIFISITET: 99,8 % (99,2 %, 99,9 %) P N Totalt PPA: 93 % (81,4 %, 97,6 %) NPA: 100 % (95,3 %, 100 %) P N Totalt SENSITIVITET: 100 % (90,1 %, 100 %) SPESIFISITET: 99,5 % (98,6 %, 99,8 %) P N Totalt PPA: 97,7 % (88,2 %, 99,6 %) NPA: 98,4 % (95,3 %, 99,4 %) 1 Alle seks (6) prøver var positive for DFA-komponenten av den sammensatte referansemetoden. Én (1) prøve som ble sekvensert som C. parvum, tre (3) prøver var negative og to (2) var ikke-rapporterbare for de alternerende komponentene med PCR-analyse og toveis sekvensering i den sammensatte referansemetoden. 2 Gjentatt avvikstesting med alternerende PCR-analyse og toveis sekvensering ble utført på alle seks (6) prøver. Én (1) prøve ble sekvensert som Cryptosporidium parvum, én (1) prøve ble sekvensert som Cryptosporidium felis, og de gjenværende fire (4) var PCR ved gjentatt avvikstesting. Avvikstesting ble også utført med bruk av en antigenpåvisnings-eia som ikke skiller mellom Cryptosporidium og Giardia. To prøver var EIA-negative, og fire prøver var EIA-positive, der to var positive for Giardia med andre testmetoder. 3 Én DFA-positiv prøve ble klassifisert som negativ med referansemetoden basert på resultater av alternerende PCR-analyse og toveis sekvensering, som identifiserte Cryptosporidium meleagridis. 4 Seks DFA-positive prøver ble klassifisert som negative med referansemetoden basert på resultater av alternerende PCR-analyse og toveis sekvensering, som identifiserte (4) Cryptosporidium canis, (1) C. meleagridis og (1) Cryptosporidium-art. (udefinert). 5 Gjentatt avvikstesting ble utført med BD MAX Enteric Parasite Panel for tolv (12) replikater per prøve. Én prøve var positiv for fem (5) av tolv (12) replikater, og én prøve var positiv for to (2) av tolv (12) replikater. 6 Gjentatt avvikstesting ble utført med BD MAX Enteric Parasite Panel for seks (6) replikater per prøve. Én prøve var positiv for fem (5) av seks (6) replikater, og én prøve var positiv for tre (3) av sels (6) replikater. En tredje prøve var negativ for seks (6) av seks (6) replikater. 7 Gjentatt avvikstesting ble utført med BD MAX Enteric Parasite Panel for seks (6) replikater per prøve. To prøver var negative for sels (6) av seks (6) replikater. 12

13 For prøvetypen som var fiksert med 10 % formalin, identifiserte BD MAX Enteric Parasite Panel 100 % av prøvene som var negative for Entamoeba histolytica for både prospektive og retrospektive prøver. Det ble ikke funnet noen prospektive eller retrospektive prøver fiksert med 10 % formalin som var positive for Entamoeba histolytica under den kliniske evalueringen. For den ukonserverte prøvetypen identifiserte BD MAX Enteric Parasite Panel 100 % av prospektive prøver som var negative for Entamoeba histolytica og henholdsvis 100 % og 100 % av de retrospektive positive og negative prøvene (Table 6). Det ble ikke funnet noen prospektive eller retrospektive ukonserverte prøver som var positive for Entamoeba histolytica under den kliniske evalueringen. Tabell 6: Entamoeba histolytica klinisk ytelse Prøvetype Prøvens opprinnelse BD MAX Enteric Parasite Panel P Referansemetode N Totalt Fiksert med 10 % formalin Ukonservert Prospektive Retrospektive Prospektive Retrospektive P N Totalt SENSITIVITET (95 % KI): Ingen data for beregning SPESIFISITET (95 % KI): 100 % (99,5 %, 100 %) P N Totalt PPA (95 % KI): Ingen data for beregning NPA (95 % KI): 100 % (93,4 %, 100 %) P N Totalt SENSITIVITET (95 % KI): Ingen data for beregning SPESIFISITET (95 % KI): 100 % (99,3 %, 100 %) P N Totalt PPA (95 % KI): 100 % (74,1 %, 100 %) NPA (95 % KI): 100 % (98,0 %, 100 %) Siden Entamoeba histolytica er en sjelden analytt, var det umulig, både ved prospektiv og negativ testing, å dokumentere positivt prosentvis samsvar for BD MAX Enteric Parasite Panel. For å supplere de prospektive og retrospektive dataene ble det utført en evaluering av konstruerte prøver. Kliniske surrogatprøver ble klargjort ved bruk av restprøver som tidligere hadde testet negativt for alle BD MAX Enteric Parasite Panel-mål. Prøver ble tilsatt materiale ved klinisk relevante nivåer ved ulike konsentrasjoner for deteksjonsgrensen for hver prøvetype. Brukere som analyserte prøvene, ble blindet når det gjaldt prøvenes status. For både prøvetyper fiksert med 10 % formalin og ukonserverte prøvetyper identifiserte BD MAX Enteric Parasite Panel nøyaktig 100 % av både de positive og negative prøvene. Resultatene av den konstruerte studien med BD MAX Enteric Parasite Panel bla sammenlignet med forventede resultater, og dette er sammenfattet i tabell 7. Tabell 7: Entamoeba histolytica konstruert studie, klinisk ytelse Prøvetype Formalin 10% Ukonservert BD MAX Enteric Parasite Panel Forventet resultat P N Totalt P N Totalt PPA (95 % KI): 100 % (92,9 %, 100 %) NPA (95 % KI): 100 % (92,9 %, 100 %) P N Totalt PPA (95 % KI): 100 % (92,9 %, 100 %) NPA (95 % KI): 100 % (92,9 %, 100 %) 13