cobas CMV Kvantitativ nukleinsyretest for bruk på cobas 6800/8800 Systems For bruk til in vitro-diagnostikk cobas CMV P/N:

Transkript

1 Kvantitativ nukleinsyretest for bruk på cobas 6800/8800 Systems For bruk til in vitro-diagnostikk cobas CMV P/N: cobas CMV Control Kit P/N: cobas NHP Negative Control Kit P/N:

2 Innholdsfortegnelse Tiltenkt bruk... 4 Oppsummering og forklaring av testen... 4 Reagenser og materialer... 7 cobas CMV reagenser og kontroller... 7 cobas omni-reagenser for prøveklargjøring Krav til oppbevaring og håndtering av reagenser Ytterligere materiell som kreves Instrumentering og programvare som kreves Krav til oppbevaring og håndtering Advarsler og forholdsregler Håndtering av reagenser God laboratoriepraksis Prøvetaking, -transport og -oppbevaring Prøver Bruksanvisning Merknader til prosedyren Kjøre cobas CMV Resultater Kvalitetskontroll og gyldighet av resultater Tolkning av resultater Testens begrensninger Vurdering av analytisk ytelse Viktige ytelsesegenskaper Deteksjonsgrense (LoD) Lineært område Presisjon innen laboratoriet Doc Rev

3 Verifisering av genotype Verifisering for legemiddelresistente CMV-prøver Spesifisitet Analytisk spesifisitet Analytisk spesifisitet interfererende substanser Ytelse sammenlignet med COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan CMV-testen Systemfeil Krysskontaminering Tilleggsinformasjon Viktigste analysefunksjoner Produsent og distributører Varemerker og patenter Copyright Referanser Dokumentrevisjon cobas CMV Doc Rev

4 Tiltenkt bruk cobas CMV er en in vitro-nukleinsyreamplifikasjonstest for kvantitering av cytomegalovirus-dna (CMV-DNA) i humant EDTA-plasma. cobas CMV skal brukes som et hjelpemiddel for diagnostisering og behandling av CMV hos organtransplanterte pasienter og pasienter som har fått transplantasjon av hematopoietiske stamceller. Testen kan brukes i disse populasjonene for å vurdere behovet for å starte antiviral behandling. Hos pasienter som får anti-cmv-behandling, kan serielle DNA-målinger brukes for å vurdere viral respons på behandlingen. Resultatene fra cobas CMV må tolkes i sammenheng med alle relevante kliniske funn og laboratoriefunn. Oppsummering og forklaring av testen Bakgrunn Humant cytomegalovirus (CMV) er et viruspatogen som tilhører herpesvirusfamilien og finnes over hele verden. 1,2 Hos immunkompetente verter er infeksjon med CMV ofte asymptomatisk, men primær lytisk infeksjon kan fremstå som et akutt mononukleoselignende syndrom. Når en person først er infisert med CMV, vil det vanligvis vare hele livet som en latent infeksjon som kan reaktiveres sporadisk. Mononukleære celler fra perifert blod i den myeloide linjen (men ikke lymfocytter) og endotelceller ser ut til å være de mest fremtredende stedene for CMV-infeksjon. 3 CMV forblir i et latent stadium i monocytter/makrofager hos mennesker. 2 Latent infiserte personer kan periodevis spre viruset med kroppsvæsker (f.eks. urin, spytt) og på den måten infisere andre. Personer med svekket immunforsvar, deriblant nyfødte, transplantasjonspasienter og AIDS-pasienter, har høy risiko for å utvikle alvorlige primære CMV-infeksjoner eller reaktivering av latente CMV-infeksjoner, som kan medføre en økt sykdoms- og dødelighetsrate. 4 Alvorlige manifestasjoner av CMV-sykdom omfatter retinitt, polyradikulopati, gastroenteritt, hepatitt, encefalitt, øsofagitt, enterokolitt, pankreatitt, nefritt, avvisning av donororgan, pneumonitt og CMV-virussyndrom. 5-7 Eksisterende kunnskap om klinisk relevante terskler for utvikling av CMV-sykdom er basert på flere ulike studier, med bruk av ulike teknologier, studiepopulasjoner og endepunkter Høye virusmengder er generelt nært forbundet med økt risiko for å utvikle CMV-sykdom. Forholdet mellom viremi og sykdom er sigmoidalt, dvs. at risikoen for å utvikle CMVsykdom øker betydelig etter at en CMV-virusmengde når en "kritisk terskel". Ved bruk av en laboratorieutviklet fullblod CMV-DNA-analyse for å teste levertransplantasjonspasienter var for eksempel den kritiske terskelen 5 log 10 kopier/ml med CMV-DNA. 13 Hos pasienter med HIV/AIDS er det korrelasjon mellom nivåene av CMV-DNA og risikoen for CMVsykdom og samlet dødelighet Eksisterende laboratorieutviklede metoder for kvantitering av CMV-DNA begrenses imidlertid av en mangel på standardiserte resultater, noe som kan føre til en høy grad av variabilitet mellom laboratorier og analyser. 20 Validering av reproduserbarheten for CMV-DNA-virusmengde er avgjørende for å sikre konsekvente resultater ved behandling av pasienter med CMV-sykdom. Gjeldende retningslinjer basert på presisjonen til PCR-tester tyder på at endringene i serielle målinger av virusmengde bør være minst tredoblet (0,5 log 10) for å representere biologisk viktige endringer. Siden variabiliteten er størst i lave konsentrasjoner, er det mulig at endringene i virusmengde må være mer enn femdoblet (0,7 log 10) når titerverdiene er nær analysens nedre kvantiteringsgrense, for å kunne anses som signifikant. 11,12 Doc Rev

5 Selv om den eksakte terskelen fortsatt er usikker grunnet variabilitet fra analyse til analyse, ser konseptet med den kritiske terskelen fortsatt ut til å være gyldig. Den er rapportert i langtidsstudier av det naturlige forløpet og viser at høyere virusmengder samsvarer med økt risiko for å utvikle CMV-sykdom En studie som brukte COBAS AMPLICOR CMV MONITOR-testen, fastslo en cutoff-verdi for å forutsi sykdom på mellom 2000 og 5000 kopier/ml hos CMV-seropositive levertransplantasjonspasienter. 10 Begrunnelse for NAT-testing Laboratoriemetoder som brukes til å diagnostisere disseminert infeksjon og aktiv visceral sykdom forårsaket av humant CMV, omfatter isolering av virus ved dyrkning fra leukocytter fra perifert blod (PBL), histologi av biopsier, serologiske metoder, måling av pp65-antigen og deteksjon av CMV-DNA ved hjelp av polymerasekjedereaksjon (PCR). 21 Serologi er bare én av verdiene for å finne ut om en pasient har vært infisert med CMV med risiko for reaktivering. Dyrkningsmetoder har dårlig prediktiv verdi, tar mer enn 48 timer å gjennomføre og har begrenset nytteverdi for pasienter med svekket immunforsvar. pp65-antigenemianalysen er arbeidskrevende og krever at blodet behandles innen 6 timer etter prøvetaking, fordi antigennivået synker ved lagring. 22 pp65-analysen er også vanskelig å utføre på pasienter med nøytropeni. Direkte deteksjon av CMV-DNA med sanntids-pcr-metoder kan gi et resultat over et stort dynamisk område, presisjon og høy sensitivitet. Forklaring av testen cobas CMV er en kvantitativ test som kjøres på cobas 6800 System og cobas 8800 System. Med cobas CMV er det mulig å detektere og kvantitere CMV-DNA i EDTA-plasma fra infiserte pasienter. Virusmengden kvantiteres i forhold til en non-cmv-dna kvantiteringsstandard (DNA-QS), som tilsettes i hver prøve under prøvebehandling. DNA-QS overvåker også hele prøveklargjøringen og PCR-amplifikasjonsprosessen. I tillegg bruker testen tre eksterne kontroller: en høytitret positiv kontroll, en lavtitret positiv kontroll og en negativ kontroll. Testprinsipper cobas CMV er basert på helautomatisk prøveklargjøring (nukleinsyreekstraksjon og rensing) etterfulgt av PCRamplifikasjon og deteksjon. cobas 6800/8800 Systems består av prøveforsyningsmodulen, overføringsmodulen, prosesseringsmodulen og analysemodulen. Automatisk databehandling utføres av cobas 6800/8800-programvaren, som tilordner analyseresultater for alle analyser som enten "Target not detected", "CMV DNA detected < LLoQ" (nedre kvantiteringsgrense), "CMV DNA detected > ULoQ" (øvre kvantiteringsgrense) eller en verdi i linearitetsområdet LloQ < x < ULoQ. Resultatene kan vises direkte på systemskjermen, eksporteres eller skrives ut som en rapport. Nukleinsyren fra pasientprøvene og tilsatte lambda-dna-qs-molekyler blir ekstrahert samtidig. Virusnukleinsyren blir frigjort ved å tilsette proteinase og lyseringsreagens i prøven. Den frigjorte nukleinsyren bindes til silikaoverflaten på de tilsatte magnetiske glasspartiklene. Ubundne substanser og urenheter, som denaturert protein, cellerester og potensielle PCR-hemmere, fjernes under de påfølgende vaskereagenstrinnene, og rensede nukleinsyrer elueres fra glasspartiklene med elueringsbuffer ved høy temperatur. Doc Rev

6 Målnukleinsyren amplifiseres selektivt fra prøven ved bruk av målvirusspesifikke oppstrøms- og nedstrømsprimere som er utvalgt fra høykonserverte regioner av CMV-DNA-polymerasegenet (UL54). DNA-QS amplifiseres selektivt ved bruk av sekvensspesifikke oppstrøms- og nedstrømsprimere som er utvalgt fordi de ikke har noen homologi med CMV-genomet. Et termostabilt DNA-polymeraseenzym brukes til amplifikasjon. Mål- og DNA-QS-sekvensene amplifiseres samtidig ved bruk av en universell PCR-amplifikasjonsprofil med forhåndsdefinerte temperaturtrinn og antall sykluser. Master Mix inneholder deoksyuridintrifosfat (dutp) i stedet for deoksytymidintrifosfat (dttp), som inngår i det nylig syntetiserte DNA-et (amplicon) Eventuelle kontaminerende amplicon fra tidligere PCR-kjøringer elimineres av AmpEraseenzymet, som er inkludert i PCR-blandingen, under temperaturøkningen i det første varmetrinnet. Det nydannede ampliconet blir imidlertid ikke eliminert, siden AmpErase-enzymet blir deaktivert når det eksponeres for temperaturer over 55 C. cobas CMV Master Mix inneholder én deteksjonsprobe som er spesifikk for CMV-målsekvensen, samt én for DNA-QS. Probene er merket med målspesifikke rapporteringsfluoroforer, som muliggjør samtidig deteksjon av CMV-mål og DNA-QS i to ulike målkanaler. 26,27 Fluorescenssignalet for de intakte probene undertrykkes av slukkerfluoroforen. Under PCR-amplifikasjonstrinnet hybridiseres probene til de spesifikke enkelttrådete DNA-templatene, og blir deretter splittet av 5'-til-3'-nukleaseaktiviteten til DNA-polymerasen. Dette fører til at rapporterings- og slukkerfluoroforene separeres og at det genereres et fluorescenssignal. Med hver PCR-syklus blir det generert stadig flere splittede prober, og det samlede signalet for rapporteringsfluoroforen økes samtidig. Sanntidsdeteksjon og skjelning av PCR-produkter oppnås ved å måle fluorescensen i de frigjorte rapporteringsfluoroforene for virusmålene og DNA-QS. Doc Rev

7 Reagenser og materialer cobas CMV reagenser og kontroller Alle uåpnede reagenser og kontroller skal oppbevares som anbefalt i Tabell 1 til Tabell 4. Tabell 1 cobas CMV cobas CMV Oppbevares ved 2-8 C Kassett med 96 tester (P/N ) Komponenter i kitet Reagensingredienser Antall per kit 96 tester Proteinaseløsning (PASE) DNA-kvantiteringsstandard (DNA-QS) Elueringsbuffer (EB) Master Mix-reagens 1 (MMX-R1) CMV Master Mix-reagens 2 (CMV MMX-R2) Tris-buffer, < 0,05 % EDTA, kalsiumklorid, kalsiumacetat, 8 % proteinase EUH210: Sikkerhetsdatablader er tilgjengelige på forespørsel. EUH208: Kan utløse en allergisk reaksjon. Inneholder: Subtilisin, Tris-buffer, < 0,05 % EDTA, < 0,001 % non-cmv-dnakonstruksjon som inneholder non-cmvprimerbindingsregion og en unik proberegion (ikkeinfeksiøst DNA), < 0,002 % Poly ra RNA (syntetisk), < 0,1 % natriumazid Tris-buffer, 0,2 % metyl-4-hydroksybenzoat Manganacetat, kaliumhydroksid, < 0,1 % natriumazid Trisinbuffer, kaliumacetat, < 18 % dimetylsulfoksid, glyserol, < 0,1 % Tween 20, EDTA, < 0,12 % datp, dctp, dgtp, dutps, < 0,01 % oppstrøms og nedstrøms CMV-primere, < 0,01 % kvantiteringsstandard oppstrøms- og nedstrømsprimere, < 0,01 % fluoroformerkede oligonukleotidprober spesifikke for CMV og CMVkvantiteringsstandard,< 0,01 % oligonukleotidaptamer, < 0,1 % Z05D DNA-polymerase, < 0,10 % AmpErase-enzym (uracil-n-glykosylase) (mikrobiell), < 0,1 % natriumazid 13 ml 13 ml 13 ml 5,5 ml 6 ml Doc Rev

8 Tabell 2 cobas CMV Control Kit cobas CMV Control Kit Oppbevar ved 2 til 8 C (P/N ) Komponenter i kitet Reagensingredienser Antall per kit Sikkerhetssymbol og advarsel CMV lav positiv kontroll (CMV L(+)C) < 0,001 % syntetisk (plasmid) CMV-DNA innkapslet i Lambda-bakteriofagbelagt protein, normalt humant plasma, ikkereaktivt med lisensierte tester for antistoff mot HCV, antistoff mot HIV-1/2, HBsAg, antistoff mot HBc; HIV-1-RNA, HIV-2-RNA, HCV-RNA, HBV-DNA, HEV-RNA, WNV- RNA og CMV-DNA ikke detekterbart med PCR-metoder. 0,1 % ProClin 300 konserveringsvæske 4 ml (8 x 0,5 ml) Advarsel H317: Kan utløse en allergisk hudreaksjon. P261: Unngå innånding av støv/røyk/gass/ tåke/damp/aerosoler. P272: Tilsølte arbeidsklær må ikke fjernes fra arbeidsplassen. P280: Bruk vernehansker. P302 + P352: VED HUDKONTAKT: Vask med mye såpe og vann. P333 + P313: Ved hudirritasjon eller utslett: Søk legehjelp. P363: Tilsølte klær må vaskes før de brukes på nytt. CMV høy positiv kontroll (CMV H(+)C) < 0,001 % høytitret syntetisk (plasmid) CMV-DNA innkapslet i Lambdabakteriofagbelagt protein, normalt humant plasma, ikke-reaktivt med lisensierte tester for antistoff mot HCV, antistoff mot HIV-1/2, HBsAg, antistoff mot HBc; HIV-1-RNA, HIV- 2-RNA, HCV-RNA, HBV-DNA, HEV-RNA, WNV-RNA og CMV-DNA ikke detekterbart med PCR-metoder. 0,1 % ProClin 300 konserveringsvæske 4 ml (8 x 0,5 ml) Advarsel H317: Kan utløse en allergisk hudreaksjon. P261: Unngå innånding av støv/røyk/gass/ tåke/damp/aerosoler. P272: Tilsølte arbeidsklær må ikke fjernes fra arbeidsplassen. P280: Bruk vernehansker. P302 + P352: VED HUDKONTAKT: Vask med mye såpe og vann. P333 + P313: Ved hudirritasjon eller utslett: Søk legehjelp. P363: Tilsølte klær må vaskes før de brukes på nytt. Doc Rev

9 Tabell 3 cobas NHP Negative Control Kit cobas NHP Negative Control Kit Oppbevares ved 2-8 C (P/N ) Komponenter i kitet Reagensingredienser Antall per kit Sikkerhetssymbol og advarsel Negativ kontroll med normalt humant plasma (NHP-NC) Normalt humant plasma, ikke-reaktivt med lisensierte tester for antistoff mot HCV, antistoff mot HIV-1/2, HBsAg, antistoff mot HBc; HIV-1-RNA, HIV-2-RNA, HCV-RNA, HBV-DNA, HEV-RNA, WNV-RNA og CMV- DNA ikke detekterbart med PCR-metoder. < 0,1 % ProClin 300 konserveringsvæske 16 ml (16 x 1 ml) Advarsel H317: Kan utløse en allergisk hudreaksjon. P261: Unngå innånding av støv/røyk/gass/ tåke/damp/aerosoler. P272: Tilsølte arbeidsklær må ikke fjernes fra arbeidsplassen. P280: Bruk vernehansker. P302 + P352: VED HUDKONTAKT: Vask med mye såpe og vann. P333 + P313: Ved hudirritasjon eller utslett: Søk legehjelp. P363: Tilsølte klær må vaskes før de brukes på nytt. Doc Rev

10 cobas omni-reagenser for prøveklargjøring Tabell 4 cobas omni-reagenser for prøveklargjøring* Reagenser Reagensingredienser Antall per kit Sikkerhetssymbol og advarsel cobas omni MGP Reagent (MGP) Oppbevar ved 2 til 8 C (P/N ) cobas omni Specimen Diluent (SPEC DIL) Oppbevar ved 2 til 8 C (P/N ) cobas omni Lysis Reagent (LYS) Oppbevar ved 2 til 8 C (P/N ) cobas omni Wash Reagent (WASH) Oppbevar ved 15 til 30 C (P/N ) Magnetiske glasspartikler, Tris-buffer, 0,1 % metyl-4-hydroksybenzoat, < 0,1 % natriumazid Tris-buffer, 0,1 % metyl-4- hydroksybenzoat, < 0,1 % natriumazid 42,56 % (vekt per vekt) guanidintiocyanat, 5 % (vekt/volum) polydocanol, 2 % (vekt/volum) ditiotreitol, dihydronatriumsitrat Natriumsitratdihydrat, 0,1 % metyl-4 hydroksybenzoat 480 tester Ikke gjeldende 4 x 875 ml Ikke gjeldende 4 x 875 ml Fare H302: Farlig ved svelging. H318: Gir alvorlig øyeskade. H412: Skadelig, med langtidsvirkning, for liv i vann. EUH032: Ved kontakt med syre utvikles meget giftig gass. P301 + P312: VED SVELGING: Kontakt et GIFTINFORMASJONSSENTER eller lege ved ubehag. P264: Vask huden grundig etter håndtering. P270: Ikke spis, drikk eller røyk ved bruk av produktet. P273: Unngå utslipp til miljøet. P280: Bruk vernehansker/vernebriller/ansiktsskjerm. P305 + P351 + P338: VED KONTAKT MED ØYNENE: Skyll forsiktig med vann i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser dersom dette enkelt lar seg gjøre. Fortsett skyllingen. P310: Kontakt umiddelbart Giftinformasjonssentralen eller lege ved ubehag. P330: Skyll munnen. 4,2 l Ikke gjeldende * Disse reagensene er ikke inkludert i cobas CMV-testkitet. Se listen over ytterligere materiell som kreves (Tabell 7). Doc Rev

11 Krav til oppbevaring og håndtering av reagenser Reagenser skal oppbevares og håndteres som beskrevet i Tabell 5 og Tabell 6. Når reagenser ikke er plassert i cobas 6800/8800 Systems, skal de oppbevares ved temperaturene som er angitt i Tabell 5. Tabell 5 Oppbevaring av reagenser (som ikke er plassert i systemet) Reagens cobas CMV 96 cobas CMV Control Kit cobas NHP Negative Control Kit cobas omni Lysis Reagent cobas omni MGP Reagent cobas omni Specimen Diluent cobas omni Wash Reagent Oppbevaringstemperatur 2-8 C 2-8 C 2-8 C 2-8 C 2-8 C 2-8 C C Reagenser som er plassert på cobas 6800/8800 Systems, oppbevares ved riktige temperaturer, og utløpsdatoen overvåkes av systemet. cobas 6800/8800 Systems tillater kun at reagenser brukes hvis alle betingelsene som vises i Tabell 6, er oppfylt. Systemet hindrer automatisk bruk av utløpte reagenser. Tabell 6 informerer brukeren om betingelsene for reagensoppbevaring som håndheves av cobas 6800/8800 Systems. Tabell 6 Betingelser for reagensholdbarhet som håndheves av cobas 6800/8800 Systems Reagens Kitets utløpsdato Holdbarhet for åpnet kit Antall kjøringer som dette kitet kan brukes for Holdbarhet på systemet (samlet tid på systemet ute av kjøleskap) cobas CMV 96 Dato ikke passert 30 dager fra første gangs bruk Maks. 10 kjøringer Maks. 8 timer cobas CMV Control Kit cobas NHP Negative Control Kit Dato ikke passert Dato ikke passert Ikke gjeldende Ikke gjeldende Maks. 8 timer Ikke gjeldende Ikke gjeldende Maks. 10 timer cobas omni Lysis Reagent Dato ikke passert 30 dager etter innsetting* Ikke gjeldende Ikke gjeldende cobas omni MGP Reagent Dato ikke passert 30 dager etter innsetting* Ikke gjeldende Ikke gjeldende cobas omni Specimen Diluent Dato ikke passert 30 dager etter innsetting* Ikke gjeldende Ikke gjeldende cobas omni Wash Reagent Dato ikke passert 30 dager etter innsetting* Ikke gjeldende Ikke gjeldende * Tiden måles fra første gang reagenset settes inn i cobas 6800/8800 Systems. Doc Rev

12 Ytterligere materiell som kreves Tabell 7 Materialer og forbruksartikler som brukes på cobas 6800/8800 Systems Materiale P/N cobas omni prosesseringsbrett cobas omni mikrobrønnplate cobas omni pipettespisser cobas omni væskeavfallsbeholder cobas omni Lysis Reagent cobas omni MGP Reagent cobas omni Specimen Diluent cobas omni Wash Reagent Pose for fast avfall Beholder for fast avfall Instrumentering og programvare som kreves cobas 6800/8800-programvare og cobas CMV-analysepakke må være installert på instrumentet/instrumentene. IG-serveren (Instrument Gateway-server) følger med systemet. Tabell 8 Instrumentering Utstyr P/N cobas 6800 System (flyttbart alternativ) og cobas 6800 System (fast) og cobas 8800 System Prøveforsyningsmodul Se brukermanualen for cobas 6800/8800 Systems for ytterligere informasjon om primære og sekundære prøverør som kan brukes på instrumentene. Merk: Kontakt din lokale Roche-representant for en detaljert liste over hvilke prøverack, rack for tilstoppede spisser og rackbrett som kan brukes på instrumentene. Doc Rev

13 Krav til oppbevaring og håndtering Advarsler og forholdsregler Som med alle laboratorieprosedyrer er god laboratoriepraksis essensielt for å sikre optimal ytelse for denne analysen. På grunn av testens høye sensitivitet, må det utvises aktsomhet for å sikre at reagenser og amplifikasjonsblandinger ikke kontamineres. Kun for bruk til in vitro-diagnostikk. cobas CMV er ikke evaluert for bruk som screeningtest for tilstedeværelse av CMV i blod eller blodprodukter. Alle pasientprøver må håndteres som potensielt infeksiøse, og gode laboratorierutiner må følges. Disse er beskrevet i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories og i CLSI-dokumentet M29-A4. 28,29 Kun personell som har opplæring i håndtering av infeksiøst materiale og i bruk av cobas CMV og cobas 6800/8800 Systems, skal utføre denne prosedyren. Alt materiale med human opprinnelse skal betraktes som potensielt infeksiøst og skal håndteres i samsvar med universelle forholdsregler. Hvis det oppstår søl, desinfiser umiddelbart med en nylaget løsning av 0,5 % natriumhypokloritt i destillert eller deionisert vann (fortynn klormiddel til husholdningsbruk i forholdet 1:10) eller følg gjeldende laboratorieprosedyrer. cobas CMV Control Kit og cobas NHP Negative Control Kit inneholder plasma med opprinnelse i humant blod. Kildematerialet er testet med godkjente antistofftester og har vist seg å være ikke-reaktivt for antistoffer mot HCV, antistoffer mot HIV-1/2, HBsAg og antistoffer mot HBc. Testing av normalt humant plasma med PCR-metoden viste heller ikke noe detekterbart HIV-1-RNA (gruppe M og O), HIV-2-RNA, HCV-RNA, HBV-DNA, HEV-RNA, WNV-RNA eller CMV-DNA. Ingen kjente testmetoder kan garantere helt at produkter fra humant blod ikke vil kunne overføre infeksiøse agens. Ikke frys fullblod eller prøver som har vært oppbevart i primærrør. Bruk kun medfølgende eller spesifiserte forbruksartikler for å sikre optimal testytelse. Sikkerhetsdatablader (SDS) er tilgjengelige på forespørsel fra din lokale Roche-representant. Følg angitte prosedyrer og retningslinjer nøye for å sikre at testen utføres korrekt. Eventuelle avvik fra prosedyrene og retningslinjene kan påvirke testytelsen, slik at den ikke blir optimal. Falske positive resultater kan oppstå hvis krysskontaminering av prøver ikke forhindres under prøvehåndtering og prøvebehandling. Håndtering av reagenser Håndter alle reagenser, kontroller og prøver i henhold til god laboratoriepraksis for å unngå krysskontaminering av prøver eller kontroller. Inspiser visuelt alle reagenskassetter, fortynningsvæsker, lyseringsreagenser og vaskereagenser før bruk for å sikre at det ikke er tegn på lekkasje. Ikke bruk materialet til testing hvis det er tegn på lekkasje. cobas omni Lysis Reagent inneholder guanidintiocyanat, et potensielt farlig kjemikalium. Unngå at reagensene kommer i kontakt med hud, øyne eller slimhinner. Skyll umiddelbart med mye vann hvis slik kontakt oppstår, ellers kan det oppstå brannskade. Doc Rev

14 cobas CMV-testkit, cobas omni MGP Reagent og cobas omni Specimen Diluent inneholder natriumazid som konserveringsmiddel. Unngå at reagensene kommer i kontakt med hud, øyne eller slimhinner. Skyll umiddelbart med mye vann hvis slik kontakt oppstår, ellers kan det oppstå brannskade. Fortynn med vann før du tørker opp eventuelt søl fra reagensene. Sørg for at cobas omni Lysis Reagent, som inneholder guanidintiocyanat, ikke kommer i kontakt med natriumhypoklorittløsningen (klormiddelløsningen). Denne blandingen kan produsere en svært giftig gass. Kast alle materialer som har vært i kontakt med prøver og reagenser, i henhold til nasjonalt, regionalt, og lokalt regelverk. God laboratoriepraksis Ikke pipetter med munnen. Ikke spis, drikk eller røyk i angitte arbeidsområder. Bruk laboratoriehansker, laboratoriefrakk og vernebriller når du håndterer prøver og reagenser. Hansker må byttes mellom håndtering av prøver og cobas CMV-kit og cobas omni-reagenser for å hindre kontaminering. Unngå kontaminering av hanskene når prøver og kontroller håndteres. Vask hendene nøye etter håndtering av prøver og reagenser og etter at hanskene er tatt av. Rengjør og desinfiser alle arbeidsoverflater nøye med en nylaget løsning av 0,5 % natriumhypokloritt i destillert eller de-ionisert vann (fortynn blekemiddel til husholdningsbruk i forholdet 1:10). Tørk deretter av overflaten med 70 % etanol. Hvis det søles på cobas 6800/8800-instrumentet, følg instruksjonene i brukermanualen for cobas 6800/8800 Systems for å sørge for tilstrekkelig rengjøring og dekontaminering av instrumentoverflatene. Prøvetaking, -transport og -oppbevaring Prøver Merk: Alle prøver og kontroller må behandles som om de er potensielt infeksiøse. Oppbevar alle prøver ved angitte temperaturer. Prøvens holdbarhet blir redusert ved høye temperaturer. Hvis det brukes frosne prøver i sekundærrør, plasser prøvene i romtemperatur (15-30 C) til de er helt tint, og sentrifuger deretter prøvene for å samle alt prøvemateriale i bunnen av røret. Blodprøver skal tas i BD Vacutainer PPT plasmaprepareringsrør for molekylære diagnostiske testmetoder eller i sterile rør med EDTA som antikoagulant. Følg instruksjonene fra produsenten av prøvetakingsrøret. Se Figur 1. Fullblod som er tatt i BD Vacutainer PPT plasmaprepareringsrør for molekylære diagnostiske testmetoder eller i sterile rør med EDTA som antikoagulant, kan oppbevares og/eller transporteres i opptil 24 timer ved 2-25 C før plasmapreparering. Sentrifugering skal utføres i samsvar med produsentens instruksjoner. Etter separering kan plasmaprøver oppbevares i opptil 6 dager ved 2-8 C eller opptil 12 uker ved -18 C. Plasmaprøver er stabile i opptil fire fryse-/tinesykluser når de fryses ved -18 C. Doc Rev

15 Figur 1 Betingelser for prøveoppbevaring 25 Temperatur ( C) 8 2 <-18 Fullblod Plasma 1 6 Dager Frossent plasma (kan fryses/tines opptil 4 ganger) 0 Uker 12 Hvis prøver skal sendes, må de pakkes og merkes i henhold til gjeldende nasjonalt og internasjonalt regelverk for transport av prøver og biologisk materiale. Merk: Fullblod som er tatt i BD Vacutainer PPT plasmaprepareringsrør for molekylære diagnostiske testmetoder eller i sterile rør med EDTA som antikoagulant, kan alternativt oppbevares og/eller transporteres i opptil 36 timer ved 2-25 C før plasmapreparering. Hvis dette gjøres, kan ikke separert plasma oppbevares lenger, men må analyseres straks. Doc Rev

16 Bruksanvisning Merknader til prosedyren Ikke bruk cobas CMV-testreagenser, cobas CMV Control Kit, cobas NHP Negative Control Kit eller cobas omni-reagenser etter utløpsdatoen. Forbruksartikler skal ikke gjenbrukes. De er kun for engangsbruk. Se brukermanualen for cobas 6800/8800 Systems for informasjon om riktig vedlikehold av instrumenter. Kjøre cobas CMV cobas CMV kan kjøres med ett påkrevd prøvevolum på 500 µl. Testprosedyren beskrives i detalj i brukermanualen for cobas 6800/8800 Systems. Figur 2 nedenfor viser et sammendrag av prosedyren. Figur 2 cobas CMV-prosedyre Doc Rev

17 Resultater cobas 6800/8800 Systems beregner automatisk CMV-DNA-konsentrasjonen for prøver og kontroller. CMV-DNAkonsentrasjonen uttrykkes i internasjonale enheter per milliliter (IU/ml). Kvalitetskontroll og gyldighet av resultater En negativ kontroll [( ) C] og to positive kontroller, en lav positiv kontroll [CMV L(+)C ] og en høy positiv kontroll [CMV H(+)C] behandles med hver batch. Sjekk for flagg og deres tilhørende resultater i cobas 6800/8800-programvaren og/eller rapporten for å sikre at batchen er gyldig. Batchen er gyldig hvis det ikke vises noen flagg for noen av de tre kontrollene, som omfatter en negativ kontroll og to positive kontroller: CMV L(+)C, CMV H(+)C. Resultatet for den negative kontrollen vises som ( ) C, og resultatene for den lave og høye positive kontrollen vises som CMV L(+)C og CMV H(+)C. Resultatene gjøres automatisk ugyldige av cobas 6800/8800-programvaren hvis den negative og positive kontrollen ikke blir godkjent. Kontrollflagg Tabell 9 Kontrollflagg for negative og positive kontroller Negativ kontroll Flagg Resultat Tolkning ( ) C Q02 (Kontrollbatch ikke godkjent) Invalid Et ugyldig resultat, eller det beregnede titerresultatet for den negative kontrollen er ikke negativt. Positiv kontroll Flagg Resultat Tolkning CMV L(+)C Q02 (Kontrollbatch ikke godkjent) Invalid Et ugyldig resultat eller beregnet titerresultat for den lave positive kontrollen er ikke innenfor akseptområdet. CMV H(+)C Q02 (Kontrollbatch ikke godkjent) Invalid Et ugyldig resultat eller beregnet titerresultat for den høye positive kontrollen er ikke innenfor akseptområdet. Hvis batchen er ugyldig, må hele batchen, inkludert prøver og kontroller, testes på nytt. Doc Rev

18 Tolkning av resultater For en gyldig batch, sjekk hver enkelt prøve for flagg i cobas 6800/8800-programvaren eller rapporten. Resultatene skal tolkes på følgende måte: En gyldig batch kan omfatte både gyldige og ugyldige prøveresultater. Tabell 10 Resultater Målresultater for tolkning av individuelle målresultater Tolkning Target Not Detected CMV-DNA ikke detektert. Rapporter resultatene som "CMV ikke detektert". < Titer Min Beregnet titer er under analysens nedre kvantiteringsgrense (LLoQ). Rapporter resultatene som "CMV detektert, mindre enn (Titer Min)" Titer min = 34,5 IU/ml Titer Beregnet titer er innenfor analysens linearitetsområde større enn eller lik Titer Min og mindre enn eller lik Titer Max. Rapporter resultatene som "(Titer) CMV detektert". > Titer Max a Beregnet titer er over analysens øvre kvantiteringsgrense (ULoQ). Rapporter resultatene som "CMV detektert, større enn (Titer Max)" Titer max = 1,0 E+07 IU/ml a Prøveresultat "> Titer Max" henviser til CMV-positive prøver som er detektert med titre over den øvre kvantiteringsgrensen (ULoQ). Hvis det er ønskelig med et kvantitativt resultat, kan den opprinnelige prøven fortynnes med CMV-negativt humant EDTA-plasma og analyseres på nytt. Multipliser det rapporterte resultatet med fortynningsfaktoren. Testens begrensninger cobas CMV er kun evaluert for bruk i kombinasjon med cobas CMV Control Kit, cobas NHP Negative Control Kit, cobas omni MGP Reagent, cobas omni Lysis Reagent, cobas omni Specimen Diluent og cobas omni Wash Reagent for bruk på cobas 6800/8800 Systems. Pålitelige resultater avhenger av riktige prosedyrer for prøvetaking, oppbevaring og håndtering av prøver. Denne testen er kun validert for bruk med EDTA-plasma. Testing av andre prøvematerialer med cobas CMV kan føre til unøyaktige resultater. Måling av virusmengde i plasma kan ikke direkte sammenlignes med måling av andre prøvematerialer. Kvantitering av CMV-DNA kan påvirkes av prøvetakingsmetoder, pasientfaktorer (dvs. alder, symptomer) og/eller infeksjonsstadium. Selv om det er sjelden, kan mutasjoner innenfor høyt konserverte regioner av CMV-DNA-polymerasegenet (UL54) som cobas CMV er rettet mot, påvirke primer- og/eller probebinding, noe som kan føre til underkvantitering av viruset eller manglende evne til å detektere viruset. På grunn av iboende forskjeller mellom teknologier anbefales det at brukerne utfører metodekorrelasjonsstudier i laboratoriet for å bestemme de teknologiske forskjellene før en ny teknologi tas i bruk. Brukere skal følge arbeidsstedets egne retningslinjer/prosedyrer. cobas CMV-testen er ikke ment brukt som en screeningtest for forekomst av CMV i blod eller blodprodukter og er ikke evaluert som diagnostisk test for å bekrefte CMV-infeksjon. Doc Rev

19 Vurdering av analytisk ytelse Viktige ytelsesegenskaper Deteksjonsgrense (LoD) WHO International Standard Deteksjonsgrensen for cobas CMV ble bestemt ved å analysere serielle fortynninger av 1 st WHO International Standard for Human Cytomegalovirus DNA for Nucleic Acid Amplification Technology Assays (1 st HCMV WHO International Standard) anskaffet fra NIBSC, i CMV-negativt humant EDTA-plasma. Paneler med åtte konsentrasjonsnivåer pluss en blank ble testet over tre lot med cobas CMV-testreagenser, over flere kjøringer, dager, brukere og instrumenter. Resultatene for EDTA-plasma vises i Tabell 11. Studien viser at cobas CMV detekterte CMV-DNA i en konsentrasjon på 23 IU/ml eller høyere, med en treffrate på ³ 95 %. Tabell 11 Deteksjonsgrense i EDTA-plasma Innmatet titerkonsentrasjon (CMV-DNA IU/ml) Antall gyldige replikater Antall positive Treffrate i % 92, ,00 46, ,47 34, ,47 23, ,77 11, ,60 5, ,60 2, ,92 1, ,81 0, ,00 LoD med PROBIT ved 95 % treffrate 20,6 IU/ml 95 % konfidensintervall: 17,9 24,3 IU/ml Doc Rev

20 Lineært område Lineariteten for cobas CMV ble vurdert ved å bruke en fortynningsserie som besto av 10 panelprøver med CMVgenotype gb-1 DNA-konsentrasjoner over hele linearitetsområdet for analysen (2,45 E+01 IU/ml til 1,34 E+07 IU/ml). Hver panelprøve ble testet i 48 replikater over tre lot med cobas CMV-testreagenser, og resultatene av studien vises i Figur 3. cobas CMV viste seg å være lineær fra 2,45 E+01 IU/ml til 1,34 E+07 IU/ml. Figur 3 Bestemmelse av lineært område i EDTA-plasma Observert Log-titer [konsentrasjonsenheter] Observasjoner I det spesifiserte området Regresjonslinje Øvre avviksgrense Nedre avviksgrense Tilordnet Log-titer [konsentrasjonsenheter] Doc Rev

21 Presisjon innen laboratoriet cobas CMV Presisjonen til cobas CMV ble bestemt ved å analysere serielle fortynninger av høytitrede dyrkede virus (Merlin, genotype gb-1) i CMV-negativt EDTA-plasma. Ti fortynningsnivåer ble testet i 48 replikater for hvert nivå over tre lot av cobas CMV-testreagenser ved bruk av tre instrumenter og tre brukere over 12 dager. Hver prøve ble kjørt gjennom hele cobas CMVprosedyren på et helautomatisk cobas 6800/8800-system. Derfor representerer presisjonen som er vist her, alle aspekter av testprosedyren. Resultatene vises i Tabell 12. cobas CMV viste høy presisjon for tre lot av reagenser som ble testet over et konsentrasjonsområde på 2,45 E+01 IU/ml til 1,34+07 IU/ml. Tabell 12 Presisjon innen laboratoriet for cobas CMV Nominell konsentrasjon (IU/ml) Tilordnet konsentrasjon (IU/ml) EDTA-plasma Lot 1 Lot 2 Lot 3 Alle lot SD SD SD Sammenslåtte SD 2,00E+07 1,34E+07 0,03 0,06 0,02 0,04 9,11E+06 6,11E+06 0,04 0,04 0,03 0,04 1,00E+06 6,71E+05 0,05 0,03 0,06 0,05 1,00E+05 6,71E+04 0,06 0,05 0,03 0,05 1,80E+04 1,21E+04 0,06 0,04 0,05 0,05 1,80E+03 1,21E+03 0,04 0,03 0,04 0,04 2,00E+02 1,34E+02 0,13 0,10 0,11 0,12 1,00E+02 6,71E+01 0,14 0,11 0,09 0,12 4,60E+01 3,09E+01 0,20 0,23 0,17 0,20 3,65E+01 2,45E+01 0,22 0,20 0,23 0,22 Verifisering av genotype Ytelsen til cobas CMV med CMV-glykoprotein B-genotyper ble vurdert ved: Verifisering av deteksjonsgrensen for glykoprotein B-genotype 2 til 4 Verifisering av linearitetsområdet for genotype 2 til 4 Verifisering av deteksjonsgrensen for glykoprotein B-genotype gb-2, gb-3 og gb-4 CMV-cellekultursupernatanter for tre ulike glykoprotein B-genotyper (gb-2, gb-3 og gb-4) ble fortynnet til tre ulike konsentrasjonsnivåer i CMV-negativt EDTA-plasma. Treffraten ble bestemt med 63 replikater for hvert nivå. Testingen ble utført med tre lot av cobas CMV-reagenser. Resultatene vises i Tabell 13. Disse resultatene bekrefter at cobas CMV detekterte CMV-DNA for tre ulike genotyper i konsentrasjoner på 34,5 IU/ml med en treffrate på ³ 95 %. Doc Rev

22 Tabell 13 Verifisering av deteksjonsgrense for CMV-DNA-genotype 17,25 IU/ml 34,5 IU/ml 51,75 IU/ml Genotype Antall gyldige replikater Antall positive Treffrate i % (95 % Kl*) gb ,8 (99,6 %) gb ,5 (96,4 %) gb ,3 (94,4 %) * Ensidig øvre 95 % konfidensintervall Antall gyldige replikater Antall positive Treffrate i % (95 % Kl*) ,0 (100,0) ,0 (100,0) ,0 (100,0) Antall gyldige replikater Antall positive Treffrate i % (95 % Kl*) ,0 (100,0) ,0 (100,0) ,0 (100,0) Verifisering av linearitetsområde for genotype gb-2, gb-3 og gb-4 Fortynningsserien som ble brukt ved verifisering av genotypelinearitetsstudien for cobas CMV, besto av sju panelprøver over hele linearitetsområdet for analysen. Testingen ble utført med to lot av cobas CMV-reagenser. 16 replikater per nivå ble testet i EDTA-plasma. Linearitetsområdet for cobas CMV ble bekreftet for alle de tre genotypene (gb-2, gb-3 og gb-4). Verifisering for legemiddelresistente CMV-prøver Ytelsen til cobas CMV med legemiddelresistente CMV-prøver ble evaluert ved: Verifisering av deteksjonsgrensen for legemiddelresistente CMV-prøver (resistente mot ganciklovir, valganciklovir, cidofovir eller foscarnet) Verifisering av linearitetsområdet for legemiddelresistente CMV-prøver (resistente mot ganciklovir, valganciklovir, cidofovir eller foscarnet) Verifisering av deteksjonsgrensen for legemiddelresistente CMV-prøver (resistente mot foscarnet eller ganciklovir, valganciklovir og cidofovir) Cellekultursupernatanter for to ulike legemiddelresistente CMV-prøver (resistente mot foscarnet eller ganciklovir, valganciklovir og cidofovir) ble fortynnet til tre ulike konsentrasjonsnivåer i CMV-negativ EDTA-plasma. Treffraten ble bestemt med 63 replikater for hvert nivå. Testingen ble utført med tre lot av cobas CMV-reagenser. Resultatene vises i Tabell 14. Disse resultatene bekrefter at cobas CMV detekterte CMV-DNA for to ulike prøver som var resistente mot foscarnet eller ganciklovir, valganciklovir og cidofovir, i konsentrasjoner på 34,5 IU/ml med en treffrate på ³ 95 %. Doc Rev

23 Tabell 14 Verifisering av deteksjonsgrense for legemiddelresistente CMV-prøver 17,25 IU/ml 34,5 IU/ml 51,75 IU/ml Legemiddelresistens Mutasjonssted i UL54 Antall gyldige replikater Antall positive Treffrate i % (95 % Kl*) Foscarnet E756Q ,1 (97,4 %) Antall gyldige replikater Antall positive Treffrate i % (95 % Kl*) ,0 (100,0) Antall gyldige replikater Antall positive Treffrate i % (95 % Kl*) ,0 (100,0) Ganciclovir, Valganciclovir, Cidofovir L545S ,7 (98,2 %) ,0 (100,0) ,0 (100,0) * Ensidig øvre 95 % konfidensintervall Verifisering av linearitetsområde for legemiddelresistente CMV-prøver (resistente mot foscarnet eller ganciklovir, valganciklovir og cidofovir) Fortynningsserien som ble brukt ved verifisering av linearitetsstudien for legemiddelresistente CMV-prøver for cobas CMV, besto av sju panelprøver over hele linearitetsområdet for analysen. Testingen ble utført med to lot av cobas CMVreagenser. 16 replikater per nivå ble testet i EDTA-plasma. Linearitetsområdet for cobas CMV ble verifisert for begge de to legemiddelresistente CMV-prøvene (resistente mot foscarnet eller ganciklovir, valganciklovir og cidofovir). Spesifisitet Spesifisiteten for cobas CMV ble bestemt ved å analysere CMV-negative EDTA-plasmaprøver fra individuelle donorer. 608 individuelle EDTA-plasmaprøver ble testet med to lot av cobas CMV-reagenser. Alle prøvene testet negativt for CMV-DNA. I testpanelet var spesifisiteten for cobas CMV 100 % (ensidig nedre 95 % konfidensgrense: 99,5 %). Analytisk spesifisitet Den analytiske spesifisiteten for cobas CMV ble evaluert ved å fortynne et panel med mikroorganismer til en konsentrasjon på 1,00 E+06 partikler, kopier, IU, genomekvivalenter eller CFU/ml med CMV-DNA-positivt og CMV- DNA-negativt EDTA-plasma. De spesifikke organismene som ble testet, vises i tabell 15. Hver panelprøve ble evaluert med cobas CMV. Ingen av non-cmv-patogenene interfererte med testens ytelse. Doc Rev

24 Tabell 15 Mikroorganismer som ble testet for kryssreaktivitet Virus Bakterier Gjærsopp Adenovirus type 5 Propionibacterium acnes Aspergillus niger BK polyomavirus Staphylococcus aureus Candida albicans Epstein-Barr-virus Chlamydia trachomatis Cryptococcus neoformans Hepatitt B-virus Hepatitt C-virus Herpes simplex-virus type 1 Herpes simplex-virus type 2 Humant herpesvirus, type 6 Humant herpesvirus, type 7 Humant herpesvirus, type 8 Humant immunsviktvirus 1 Humant immunsviktvirus 2 Humant papillomavirus JC-virus Parvovirus B19 Varicella-Zoster-virus Clostridium perfringens Enterococcus faecalis Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Listeria monocytogenes Mycobacterium avium Neisseria gonorrhoeae Staphylococcus epidermidis Streptococcus pyogenes Mycoplasma pneumoniae Salmonella typhimurium Streptococcus pneumoniae Analytisk spesifisitet interfererende substanser Forhøyede nivåer av triglycerider (34,5 g/l), konjugert bilirubin (0,25 g/l), ukonjugert bilirubin (0,25 g/l), albumin (58,7 g/l), hemoglobin (2,9 g/l) og humant DNA (2 mg/l) i prøver ble testet ved nærvær og fravær av CMV-DNA. De testede endogene interfererende substansene viste seg ikke å interferere med testens ytelse for cobas CMV. Virkningen av tilstedeværelse av autoimmune sykdommer som systemisk lupus erythematosus (SLE), revmatoid artritt (RA) og antinukleært antistoff ble også evaluert ved nærvær og fravær av CMV-DNA. I tillegg ble legemiddelkomponentene som er oppført i Tabell 16, testet ved tre ganger Cmax ved nærvær og fravær av CMV-DNA. Alle potensielt interfererende substanser har vist seg ikke å interferere med testens ytelse. Doc Rev

25 Tabell 16 Legemiddelkomponenter som ble testet for interferens med kvantitering av CMV-DNA med cobas CMV Legemiddelklasse Generisk legemiddelnavn Antimikrobielle midler Cefotetan Sulfametoxazol Klavulanatkalium Ticarcillindinatrium Flukonazol Trimetoprim Piperacillin Vancomycin Tazobaktamnatrium Preparater for behandling av herpesvirus Ganciklovir Cidofovir Valganciklovir Foscarnet Immundempende legemidler Azatioprin Prednison Cyklosporin Sirolimus Everolimus Takrolimus Mykofenolatmofetil Mykofenolsyre Ytelse sammenlignet med COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan CMV-testen Ytelsen til cobas CMV-testen og COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan CMV-testen ble sammenlignet ved å analysere EDTA-plasmaprøver fra CMV-infiserte pasienter. Totalt 275 EDTA-plasmaprøver som ble testet i duplikat og som representerer alle CMV-genotyper, var gyldige og innenfor kvantiteringsområdet for begge testene. Demingregresjonsanalyse ble utført. Resultatene av Deming-regresjonsanalysen vises i Figur 4. Figur 4 Regresjonsanalyse for cobas CMV sammenlignet med CAP/CTM CMV Quantitative Test y = 0,94x + 0,43 R 2 = 0,91 Gjennomsnittlig Log10 Titer cobas CMV Linjer Deming-regresjonslinje Gjennomsnittlig Log10 Titer COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan CMV-testen Doc Rev

26 Systemfeil Systemfeilfrekvensen ble bestemt for cobas CMV ved å teste 100 replikater av EDTA-plasma tilsatt en CMV-positiv klinisk prøve. Disse prøvene ble testet i en konsentrasjon på ca. 3 x LoD. Resultatene av denne studien fastslo at alle replikater var gyldige og positive for CMV-målet, noe som gav en systemfeilfrekvens på 0 % (95 % konfidensintervall 0 %-3,6 %). Krysskontaminering Krysskontamineringsfrekvensen for cobas CMV ble bestemt ved å teste 240 replikater av en normal CMV-negativ human EDTA-plasmaprøve og 225 replikater av en høytitret CMV-prøve på 1,00 E+06 IU/ml. Det ble til sammen utført fem analyseserier med positive og negative prøver i en sjakkbrettkonfigurasjon. Alle de 240 replikatene av den negative prøven var negative, noe som gav en krysskontamineringsfrekvens på 0 % (95 % konfidensintervall 0 %-1,5 %). Doc Rev

27 Tilleggsinformasjon Viktigste analysefunksjoner Prøvetype Minimum prøvemengde som kreves 500 µl Prøvebehandlingsvolum 350 µl Analytisk sensitivitet Lineært område EDTA-plasma 34,5 IU/ml Spesifisitet 100 % 34,5 IU/ml til 1E+07 IU/ml Genotyper detektert CMV-glykoprotein B-genotype 1-4 Legemiddelresistente CMV-prøver detektert CMV-prøver resistente mot ganciklovir, valganciklovir, cidofovir og foscarnet Doc Rev

28 Følgende symboler brukes ved merking for Roche PCR-diagnostiske produkter. Tabell 17 Symboler brukt ved merking av Roche PCR-diagnostiske produkter Tilleggsprogramvare In-Vitro-diagnostisk medisinsk utstyr Autorisert representant i EF Nedre grense for akseptområdet Strekkodedataark Produsent Lotnummer Oppbevares på et mørkt sted Biologisk risiko Inneholder tilstrekkelig til <n> tester Katalognummer Temperaturbegrensning Vennligst se brukerveiledningen Testdefinisjonsfil Innhold i kitet Øvre grense for akseptområdet Distribuert av Utløpsdato Kun for evaluering av IVD-ytelse Globalt handelsnummer Dette produktet innfrir kravene til Europaparlamentets Rådsdirektiv 98/79/ EF om in vitro-diagnostisk medisinsk utstyr. Teknisk support for kunder i USA Doc Rev

29 Produsent og distributører Tabell 18 Produsent og distributører Produsert i USA Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Straße Mannheim, Germany Roche Diagnostics (Schweiz) AG Roche Diagnostics Industriestrasse 7 201, boulevard Armand-Frappier 6343 Rotkreuz, Switzerland H7V 4A2 Laval, Québec, Canada (For Technical Assistance call: Roche Diagnostics GmbH Pour toute assistance technique, Sandhofer Straße 116 appeler le: ) Mannheim, Germany Roche Diagnostics Roche Diagnostics, SL 2, Avenue du Vercors Avda. Generalitat, Meylan, France E Sant Cugat del Vallès Barcelona, Spain Distributore in Italia: Roche Diagnostics S.p.A. Roche Diagnostica Brasil Ltda. Viale G. B. Stucchi 110 Av. Engenheiro Billings, Monza, Milano, Italy Jaguaré, Building São Paulo, SP Brazil Distribuidor em Portugal: Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Roche Diagnostics Estrada Nacional, Hague Road Amadora, Portugal Indianapolis, IN USA (For Technical Assistance call the Roche Response Center toll-free: ) Varemerker og patenter Se Copyright 2014 Roche Molecular Systems, Inc. Doc Rev

30 Referanser 1. Griffiths PD. Cytomegalovirus. In: Zuckerman AJ, Banatvala JE, Pattson JR, editors. Principles and Practice of Clinical Virology. 4th ed. London; John Wiley and Sons, 2000: pp Pass RR. Cytomegalovirus. In: In: Knipe D, Howley P, et al., editors. Fields Virology, vol. 1. 4th ed. Philadelphia; Lippincott, Williams & Wilkins, 2001: pp Reeves M, Sinclair J. Aspects of Human Cytomegalovirus Latency and Reactivation. In: Shenk TE, Stinski MF, editors. Human Cytomegalovirus. Current Topics in Microbiology and Immunology. Berlin Heidelberg; Springer-Verlag: 2008, pp Jordan MC. Latent infection and the elusive cytomegalovirus. Rev Infect Dis. 1983;5: Drew WL. Other virus infections in AIDS. I. Cytomegalovirus. Immunol Ser. 1989;44: Drew WL. Nonpulmonary manifestations of cytomegalovirus infection in immunocompromised patients. Clin Microbiol Rev. 1992;5: Moscarski ES, Courcelle CT. Cytomegaloviruses and their replication. In: Knipe D, Howley P, et al., editors. Fields Virology, vol. 1. 4th ed. Philadelphia; Lippincott, Williams & Wilkins, 2001: pp Asberg A, Humar A, Rollag H, et al.; A VICTOR Study Group. Oral valganciclovir is noninferior to intravenous ganciclovir for the treatment of cytomegalovirus disease in solid organ transplant recipients. Am J Transplant. 2007;7: Humar A, Kumar D, Boivin G, Caliendo AM. Cytomegalovirus (CMV) virus load kinetics to predict recurrent disease in solid-organ transplant patients with CMV disease. J Infect Dis. 2002;186: Humar A, Gregson D, Caliendo AM, et al. Clinical utility of quantitative cytomegalovirus viral load determination for predicting cytomegalovirus disease in liver transplant recipients. Transplantation. 1999;68: Kotton CN, Kumar D, Caliendo AM, Asberg A, Chou S, Snydman DR, et al. International consensus guidelines on the management of cytomegalovirus in solid organ transplantation. Transplantation 2010;89(7): Kotton CN, Kumar D, Caliendo AM, et al.; Transplantation Society International CMV Consensus Group. Updated International Consensus Guidelines on the Management of Cytomegalovirus in Solid-Organ TransplantationTransplantation. 2013;96: Cope AV, Sabin C, Burroughs A, Rolles K, Griffiths PD, Emery VC. Interrelationships among quantity of human cytomegalovirus (HCMV) DNA in blood, donor-recipient serostatus, and administration of methylprednisolone as risk factors for HCMV disease following liver transplantation. J Infect Dis. 1997;176: Razonable RR, Emery VC; 11 th Annual Meeting of the IHMF (International Herpes Management Forum). Management of CMV infection and disease in transplant patients February Herpes. 2004;11: Baldanti F, Lilleri D, Gerna G. Monitoring human cytomegalovirus infection in transplant recipients. J Clin Virol. 2008;41: Salmon-Céron D, Mazeron MC, Chaput S, et al. Plasma cytomegalovirus DNA, pp65 antigenaemia and a low CD4 cell count remain risk factors for cytomegalovirus disease in patients receiving highly active antiretroviral therapy. AIDS. 2000;14: Doc Rev

31 17. Emery VC, Sabin C, Feinberg JE, Grywacz M, Knight S, Griffiths PD. Quantitative effects of valacyclovir on the replication of cytomegalovirus (CMV) in persons with advanced human immunodeficiency virus disease: baseline CMV load dictates time to disease and survival. The AIDS Clinical Trials Group 204/Glaxo Wellcome International CMV Prophylaxis Study Group. J Infect Dis. 1999;180: Bowen EF, Sabin CA, Wilson P, et al. Cytomegalovirus (CMV) viraemia detected by polymerase chain reaction identifies a group of HIV-positive patients at high risk of CMV disease. AIDS. 1997;11: Jabs DA, Gilpin AM, Min YI, et al. Studies of Ocular Complications of AIDS Research Group. HIV and cytomegalovirus viral load and clinical outcomes in AIDS and cytomegalovirus retinitis patients: Monoclonal Antibody Cytomegalovirus Retinitis Trial. AIDS. 2002;16: Pang XL, Fox JD, Fenton JM, et al.; American Society of Transplantation Infectious Diseases Community of Practice; Canadian Society of Transplantation. Interlaboratory comparison of cytomegalovirus viral load assays. Am J Transpl. 2009;9: Yan SS, Fedorko DP. Recent advances in laboratory diagnosis of human cytomegalovirus infection. Clinical and Applied Immunology Reviews. 2002;2: Preiksaitis JK, Brennan DC, Fishman J, Allen U. Canadian society of transplantation consensus workshop on cytomegalovirus management in solid organ transplantation final report. Am J Transplant. 2005;5: Longo MC, Berninger MS, Hartley JL. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions. Gene. 1990;93: Savva R, McAuley-Hecht K, Brown T, Pearl L. The structural basis of specific base-excision repair by uracil-dna glycosylase. Nature. 1995;373: Mol CD, Arvai AS, Slupphau G, et al. Crystal structure and mutational analysis of human uracil-dna glycosylase: structural basis for specificity and catalysis. Cell. 1995;80: Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Biotechnology (NY). 1992;10: Heid CA, Stevens J, Livak JK, Williams PM. Real time quantitative PCR. Genome Res. 1996;6: Center for Disease Control and Prevention. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5th ed. U.S. Department of Health and Human Services, Public Health Service, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health HHS Publication No. (CDC) , revised December Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections. Approved Guideline-Fourth Edition. CLSI Document M29-A4:Wayne, PA;CLSI, Doc Rev