Legionellaseminar Kristiansund 30.5.2012 Prøvetaking, analysemetoder og svartid v/ Anne Kristin Gussiås, fagansvarlig analytiker mikrobiologi
Akkrediteringsprosess Kystlab akkreditert etter ISO 11731-2, Water quality- Detection and enumeration of Legionella - Direct membrane filtration method for waters with low bacterial counts Parallellkjøring med annet akkreditert laboratorium Analyse av referansemateriale Deltagelse i SLP, sammenlignende laboratorieprøvinger Søknad til NA, Norsk Akkreditering Bedømming, gjennomgang av metoden av teknisk bedømmer Godkjenning og analysen akkreditert
Hvilke prøvepunkt velger man? Man bør foreta en risikovurdering og finne de punktene der det er størst sannsynlighet for oppvekst av Legionella F.eks i nærheten av blindrør, tappepunkt som ikke eller sjelden er i bruk Dusjer som sjelden er i bruk kan være - i lærergarderobe, gjestelugar, ødelagte dusjer, nøddusjer Tappepunkt lengst unna varmtvannsbereder Osv
Prøvetaking vannprøver Utstyr: steril vannprøveflaske m/natriumtiosulfat, helst 1000 ml Dusj/servantbatteri: Still termostat på det varmeste Fyll opp flasken uten å la vannet renne først Ikke berør kork eller flaske innvendig
Varmtvannsbereder/-beholder: Ta prøve gjennom tappe- eller sikkerhetsventil Prøv å få med slamholdig vann fra bunnen av beholderen Kjøletårn: Tas fortrinnsvis fra toppen av kjøletårnet Hvis ikke i drift, tas vannet fra bassenget i bunnen OBS! bruk maske med filter, beskyttelsesklasse P3
Prøvetaking biofilm Utstyr: Steril svaberpinne Skru av dusjhodet og ta prøve av synlig grums/belegg vha svaberpinnen Dersom synlig grums/belegg ikke finnes, føres svaberpinnen med roterende bevegelser over de indre flatene av f. eks dusjhodet/-slangen Etter prøvetaking stikkes svaberpinnen ned i et rør med transportmedium
Transport/levering av prøven: Prøven(e) leveres raskes mulig til laboratoriet Tid fra uttak til analysestart: snarest mulig, helst innen 1 døgn Oppbevaring/transport: Kjølig, 5 C ± 3 C, unngå sollys Varmtvannsprøver kjøles ned etter uttak
Analysemetoder Dyrkningsmetoden ISO 11731 og ISO 11731-2 Vannprøver filtreres, 10-1000 ml, vanligvis 500 ml Syrebehandle filteret for å hemme uønsket vekst Overføre filteret til en agarskål Agarskålen inkuberes ved 36 + 2 C i inntil 10 døgn Avlesning første gang etter 3-4 døgn Sekundær dyrkning, verifisering
Fordeler - Dyrkningsmetode Påviser levende bakterier Kan identifisere spesifikk legionellaart/serogruppe Bedre referansegrunnlag mht tolking av analyseresultat Ulemper - Dyrkningsmetode Bekreftet svar tar lang tid (Men; vekst etter 3-4 dager på positive prøver) Tap av bakterier ved filtrering Andre bakterier undertrykker legionellavekst
Svartid - Dyrkningsmetode 5 10 dager, kan ta inntil 12 dager ved negativt svar
Analysemetoder PCR (Polymerase Chain Reaction) Vannprøven konsentreres (Filtrering eller sentrifugering) Alt arvestoff (DNA) i vannprøven isoleres Evt Legionella DNA påvises med PCR-teknologi
Fordeler - PCR Hurtig Følsom, kan påvise lave konsentrasjoner av legionellabakterier Ulemper - PCR Påviser også døde bakterier Kan ikke gi informasjon om hvilken serogruppe legionellabakterien tilhører Enkelte prøver kan inneholde stoffer som inhiberer PCR-reaksjonen Manglende erfaring med å tolke analyseresultat
Svartid PCR Analysetid 1-2 dager, avhenger av når på dagen prøven kommer inn til laboratoriet
Kimtall 36 C (totalantall bakterier og sopp) Omtalt i FHIs veileder Forebygging av legionallasmitte En veiledning Metode: NS-EN ISO 6222 Innstøpningsteknikk Analysetid: 2 døgn Gir ingen informasjon om det er legionellabakterier i systemet Kan anses som en generell hygieneparameter
Analyserapporten Kystlab opplever at mange kunder synes det er vanskelig å tolke resultatene Analyserapporten gir ingen opplysninger om grenseverdier eller anbefalte verdier Det finnes ingen nasjonale grenseverdier Se på hvor mange prøver det er påvist Legionella i Kunden skal danne seg et bilde over tid for hva som er normalverdier for sitt anlegg (kimtall) Ved stabile resultater over tid kan man vurdere å gå ned på antall prøver pr. år
Hva kjennetegner dusjanlegg med problemer Gjentagende påvisninger (fra 1 100 cfu/500 ml) Ingen klar sammenheng mellom påvisning av Legionella og høye verdier av totalantall bakterier. Gjerne langt rørstrekk etter innblanding av kaldt vatn. Ikke mulig å stille temperatur på dusjene (ca 38 C ut).
Erfaring fra Kystlab 2011: Funn av Legionella i 38 av 198 prøver, dvs. 19 % Fordelingen av de påviste prøvene pr. 500 ml: 0 cfu <resultat < 10 cfu: 53% 10 cfu < resultat < 100 cfu: 29% 100 cfu < resultat < 1000 cfu: 16% 1000 cfu < resultat: 3% 2012 (tom 20.5) Funn av Legionella i 16 av 69 prøver, dvs. 23 %
Erfaring fra Kystlab Diagram Legionella / Kimtall 36 C (jan 2011- mai 2012) Dusjvann
Erfaring fra Kystlab Bedre opplæring av prøvetakere - Metode for prøvetaking - Fokus på å utføre prøvetaking for å verifisere effekten av tiltak Kunnskap om legionellabakterien - Hvordan den smitter - Hvor den kan etablere seg Kunnskap om tiltak når det påvises legionellabakterier i prøven