Nyfødtscreening for SCID og alvorlig T cellesvikt

Transkript

1 Nyfødtscreening for SCID og alvorlig T cellesvikt Asbjørg Stray-Pedersen overlege dr.med, forsker spesialist medisinsk genetikk, Nyfødtscreeningen, arne- og ungdomsklinikken, Oslo Universitetssykehus

2 Norwegian National Unit for Newborn Screening. Nationwide service newborns/year Located at Oslo University Hospital Newborn Screening (NS) Mandate to genetic screen for severe and treatable congenital disorders

3 Norwegian National Unit for Newborn Screening. All newborns tested Dry blood spots on filter cards Samples collected 48h after birth Sent by ordinary mail Five blood spots pr. card One punch is 3 mm and equals 3 ul whole blood ~ 30 ng DNA per punch One 3.2 mm punch used for genomic DNA extraction Normally 5 punches for all assessments Plus one for SCID Extra punches for repeated assessments/confirmatory tests Panthera Puncher LC-MS/MS Methods: Immunoassay Enzymatic Mass spectometry LC-MS/MS Genomic DNA testing > moving to NGS technologies Samples stored for 6 years at -25 C

4 Norwegian National Unit for Newborn Screening testing 23 diseases as of 2017: Aminoacidopathies PKU, MSUD, TYR I, HCY Organic acidurias PROP, MMA, IVA, HCS/MCD, βkt, GA1, IOT eta-oxidation & carnitine cycle defects MCAD, LCHAD, VLCAD, TFP, CUD, CPTI, CPTII, CACT, GA2 Endocrinopathies CH, CAH Cystic fibrosis SCID pilot Newborn Screening (NS)

5 SCID-screening prosjekt Startet 22. sept 2015, holdt på i 2 år nå sept sykehus ble med: AHUS, Haukeland, Kalnes, OUS (bare RH, ikke Ullevål), Sykehuset Sørlandet (Arendal og Kristiansand) screenet til nå, dvs. 1/9 av alle nyfødte. 3 nyfødte med alvorlig immunsvikt oppdaget 2 tilsynelatende helt friske ved fødsel 1 alvorlig tarmmisdannelse og skjellettavvik

6 Tobias ble frisk takket være et stikk i hælen A-magasinet 01.jun.2017 Tobias ble reddet fra alvorlig, medfødt immunsvikt fordi han var med i et prøveprosjekt. Aftenposten 22.aug.2017 Etter press fra pårørende og fagfolk setter nå helsemyndighetene fortgang i å innføre screening for a nyfødte.

7 Gutt O., 4 mndr gammel Trøske, oral candidasis og cheilit fra fødsel Ingen alvorlige infeksjoner (foreløpig) Mor engstelig/bekymret Lab: lave antistoffer Henvist til sykehus Påvist få T- celler Konklusjon: Alvorlig medfødt kombinert immunsvikt

8 Immunsystemet: Makrofag Nøytrofil granulocytt Plasmacelle Antistoffer Drepercelle T4 T8 Stamcelle -lymfocytt Hjelpercelle T NK T Moden T-lymfocytt T-lymfocytt

9 Immunsystemet: Makrofag Nøytrofil granulocytt Plasmacelle Antistoffer Drepercelle T4 T8 -lymfocytt Hjelpercelle T Moden T-lymfocytt T-lymfocytt Stamcelle NK

10 Immunsystemet: Makrofag Nøytrofil granulocytt Plasmacelle -lymfocytt Stamcelle NK

11 Alvorlig medfødt immunsvikt SCID = severe combined immunodeficiency Mangler T-celler, får alvorlig immunsvikt, må ha nye blodstamceller for å overleve

12 "David, the bubble boy" Født med SCID i 1971 Levde til han var 12 år uten hudkontakt Søsteren var ikke forlikelig, men benmargstx forsøkt likevel da han var 12 år gammel Han døde 14 dager senere av urkitts lymfom

13 SCID = Alvorlig, kombinert immunsvikt Alvorlig immunsvikt pga lavt nivå eller ingen T-celler Forekomst : Regner med 2-3 pr år i Norge Dødelig sykdom hvis ikke behandling iverksettes tidlig > 90 % overlevelse ved tidlig benmargstransplantasjon Tester ved å måle DNA produkt som utskilles ved utvikling av T-celler (T-cell Receptor Excision Circles) arn med SCID må ikke få levende vaksiner (CG, Rotavirus)

14 Immunsystemet: Makrofag Nøytrofil granulocytt Plasmacelle Antistoffer Drepercelle T4 T8 Stamcelle -lymfocytt Hjelpercelle T NK T Moden T-lymfocytt T-lymfocytt

15 Immunsystemet: Makrofag Nøytrofil granulocytt Plasmacelle Antistoffer Drepercelle T4 T8 Stamcelle -lymfocytt Hjelpercelle T NK T Moden T-lymfocytt T-lymfocytt

16 Immunsystemet: Makrofag Nøytrofil granulocytt Plasmacelle Antistoffer Drepercelle T4 T8 Stamcelle -lymfocytt Hjelpercelle T NK T Moden T-lymfocytt T-lymfocytt

17 Immunsystemet: Makrofag Nøytrofil granulocytt Plasmacelle Antistoffer Drepercelle T4 T8 Stamcelle -lymfocytt TRECs Hjelpercelle T NK T Moden T-lymfocytt T-lymfocytt

18 Somech & Etzoni RMMJ 2014 TREC:

19 Somech & Etzoni RMMJ 2014

20 TREC/µl > 25 DNA from filtercard TREC assay RT-PCR TREC/µl < 25 The SCID screening algorithm of the Norwegian Newborn screening year 2017 TREC/µl GA > 35: > 20 GA < 35: > 15 Re-punch of initial blood spot. Duplicate analysis of both DNA extractions, Including β-actin. Normal β-actin/µl < 5000 Inconclusive. Repeat specimen immediately TREC/µl GA > 35: GA < 35: β-actin/µl > 5000 NGS SCID gene panel - TREC/µl < 10 & β-actin/µl > NGS results < 3 days NGS SCID gene panel - + Screening positive T-cell Receptor Excision Circles (TRECs)

21 TREC/µl > 25 DNA from filtercard TREC assay RT-PCR TREC/µl < 25 The SCID screening algorithm of the Norwegian Newborn screening year 2017 TREC/µl GA > 35: > 20 GA < 35: > 15 Re-punch of initial blood spot. Duplicate analysis of both DNA extractions, Including β-actin. Normal β-actin/µl < 5000 Inconclusive. Repeat specimen immediately TREC/µl GA > 35: GA < 35: β-actin/µl > 5000 NGS SCID gene panel - TREC/µl < 10 & β-actin/µl > NGS results < 3 days NGS SCID gene panel - + Screening positive T-cell Receptor Excision Circles (TRECs)

22 O All other newborns

23 Results from the Prospective SCID pilot study 3 SCIDs IL2RG defect RAG2 defect RMRP-cartilage hair hypoplasia and total Hirschprung Molecular diagnosis confirmed within 2-3 days by NGS on filtercard DNA ng DNA total Read depths > 100 Low input - high output!

24 SCID screening prosjekt : asert på skriftlig samtykke Informasjonsbrosjyre på flere språk (engelsk, polsk, spansk, urdu, somali, arabisk). Signerte samtykker sendes til Nyfødtscreeningen pr. post separat fra screeningprøvene. Søknad om nasjonal SCID screening sendt Nov 2016 Godkjenning NyeMetoder Sept 2017 Forskriftsendring trengs også.

25 Tjenesten er regulert av forskrift 1. Formål Formålet med forskriften er å legge til rette for en faglig forsvarlig gjennomføring av genetisk masseundersøkelse av nyfødte for alvorlig arvelige sykdommer. Formålet er også å legge til rette for overvåking og kvalitetssikring av helsehjelpen som gis for disse sykdommene. 2. Genetisk masseundersøkelse av nyfødte Nyfødte kan undersøkes for følgende sykdommer uten hensyn til bioteknologilovens krav om skriftlig samtykke, jf. 5-4, genetisk veiledning før, under og etter undersøkelsen, jf. 5-5 og godkjenning av virksomheten, jf. 7-1: a)fenylketonuri (PKU) b)medfødt hypotyreose (CH) c)propionsyreemi (PA) d)metylmalonsyreemi (MMA) e)isovaleriansyreemi (IVA) f)holokarboksylase syntasedefekt (HCS/MCD) g)iotinidasedefekt (IOT) h)etaketothiolasedefekt (KT) i)glutarsyreuri type 1 (GA1) j)mellomkjedet acyl-coa-dehydrogenasedefekt (MCAD) k)langkjedet 3-hydroksyacyl-CoA-dehydrogenasedefekt (LCHAD) l)trifunksjonelt proteindefekt (TFP) m)meget langkjedet acyl-coa-dehydrogenasedefekt (VLCAD) n)karnitin-transporterdefekt (CTD) o)karnitin-palmitoyltransferase I- defekt (CPT IA) p)karnitin-palmitoyltransferase II-defekt (CPT II) q)karnitin acylkarnitin-translokasedefekt (CACT) r)glutarsyreuri type 2 (GA2) s)maple Syrup Urine Defekt (MSUD) t)homocystinuri/hypermetioninemi (HCU/MET) u)tyrosinemi type 1 (TYR I) v)medfødt binyrebarkhyperplasi (CAH) w)cystisk fibrose (CF).

26 Aftenposten 15.sep.2017 Skal det lages en biobank med DNA fra nesten alle nordmenn? Nyfødtscreening kan gi en livreddende diagnose i tide. Men Regjeringens forslag om å kunne lagre dataene uten tidsbegrensning, er kontroversiell. Nasjonal biobank krever mer debatt enn Regjeringen legger opp til. Kristin Halvorsen, leder, og Ole Johan orge, direktør, ioteknologirådet

27 evare tillit