1 Beskrivelse Foreliggende oppfinnelse omhandler feltet organisk kjemi, spesielt forbindelser nyttige som mellomprodukter i fremgangsmåter for fremstillingen av aktive ingredienser i medisin. Oppfinnelsens felt Denne oppfinnelsen omhandler en fremgangsmåte for fremstilling av en krystallinsk form av (4S)-11- (dimetoksymetyl)-4-etyl-4-hydroksy-1h-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]kinolin-3,14(4h,12h)-dion (CAS n 84017-99-2), også kalt 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin. Med forordningen av et spesielt krystalliseringstrinn, på passende måte, blir det oppnådd en ny krystallinsk form av forbindelsen over. Bakgrunn for oppfinnelsen 1 Kamptotecin er et alkaloid, som viste et bredt spektrum av antitumoraktivitet, spesielt mot tykktarmstumorer, andre faste tumorer og leukemier, og de første kliniske forsøkene ble utført tidlig på 70-tallet. Siden kamptotecin (CPT) har lav vannløselighet og er ganske giftig, ble det foreslått en rekke derivater innen faget for å gjøre bedre legemidler tilgjengelig, spesielt med lavere toksisitet og høyere vannløselighet. Mange kamptotecinderivater ble fremstilt og gjort tilgjengelig innen faget gjennom ved syntetiske ruter. Kvaliteten av sluttproduktet, så som dets renhetsnivå eller hvor enkelt det kan isoleres kan også avhenge av den syntetiske ruten og typen intermediære produkter 2 I patent EP 44977 og i Dallavalle S. et al., J. Med. Chem. 01, 44, 3264-3274, blir det beskrevet kamptotecinderivater som bærer et alkyloksim O-substituert ved posisjon 7 og utstyrt med antitumoraktivitet høyere enn referanseforbindelsen topotekan. Disse kamptotecinderivatene som bærer en imino gruppe på posisjon 7, viser dessuten også en forbedret terapeutisk indeks. Ett av de foretrukne molekyler er 7-tbutoksyiminometylkamptotecin (CPT 184) og kjent under INN navnet Gimatekan. 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin er vist i EP 0 06 692 og i Sawada, S., et al., Chemical & Pharmaceutical Bulletin (1991), 39(), 274-80. Denne forbindelsen blir anvendt i forskjellige patenter som mellomprodukt i syntesen av kamptotecinderivater. 3 7-(dimetoksy-metyl)-kamptotecin kan bli fremstilt ved vanlig acetalisering av kamptotecin 7-aldehyd, for eksempel ved å varme opp kamptotecin 7-aldehyd i varm metanol i nærvær av en syre. Alternativt kan denne forbindelsen bli fremstilt i et enkelt trinn ved å behandle 7-hydroksymetylkamptotecin med en syre i nærvær av metanol, se EP 006692 nevnt over.
2 Acetalisering er en likevektsreaksjon og utgangsaldehydet kan foreligge i en viss mengde. Acetaler kan dessuten bli omformet til utgangsaldehydet i nærvær av syrer. Det er velkjent at aldehyder ikke er utstyrt med høy stabilitet og de har tendens til å polymerisere og gi biprodukter som er vanskelige å eliminere fra reaksjonsblandinger og påvirker renheten av sluttproduktet. Fraværet av aldehydet tillater krystallisering og eliminering av andre uønskede urenheter, som kan foreligge både i utgangsmaterialet og avledes fra reaksjonen. For eksempel er 9, og 11 hydroksy- og metoksykamptoteciner (se under, generell formel 1), mappicine (se under, generell formel 2), og deres derivater biderivater fremstilt i dannelsesreaksjonen for 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin. 1 WO06/067092 viser en stereoselektiv fremgangsmåte for fremstillingen av krystallinske former av gimatekan. Denne fremgangsmåten tillater den stereoselektive fremstilling av gimatekan. Med tilleggelsen av ytterligere oppløsnings- og utfellingstrinn utført i passende forskjellige løsemiddelblandinger, kan det også oppnås fire nye krystallinske former av gimatekan ved anvendelse av den samme stereoselektive fremgangsmåten. 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin er bare nevnt som utgangsmateriale, uten karakterisering. 2 WO03/199 viser kamptoteciner med en modifisert laktonring og 7-(dimetoksymetyl)kamptotecin blir anvendt som mellomprodukt i syntesen av sluttproduktene. 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin-preparat blir tilveiebrakt som renset fra kolonnekromatografi og som et gult faststoff med smp. 1 C (dec.). Produktutbytte er %. I Chemical & Pharmaceutical Bulletin (1991), 39(), 274-80 og i EP 0 06 692 nevnt over, blir 7-(dimetoksymetyl)kamptotecinet vist som renset fra kolonne, smp. 222-224 C (dec.) og nålekrystall. Farmasøytisk lovgivning blir strengere og strengere når det gjelder sikkerhetsspørsmål som angår legemiddeltilvirkning. Ett aspekt er "Good Manufacturing Practice" (GMP, se for eksempel EMEA og FDA
3 retningslinjer) og et følsomt tema er representert ved standardisering av intermediære forbindelser og urenhetsnivåer. Det er fremdeles behov for en form av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin med høyere renhet og som kan bli anvendt for påfølgende fremstilling av kamptotecinderivater som skal bli anvendt som legemidler, som enklere møter de strenge regulatoriske kravene. Fra et regulatorisk synspunkt, betyr et mellomprodukt med høy renhet et sluttprodukt med høyere renhet, med strengere spesifikasjoner, derfor mindre kvalitetsvariabilitet. Dette sistnevnte aspektet er etterspurt og verdsatt ved regulatoriske myndigheter. Krystallisering av et intermediært produkt representerer dessuten et valgfritt rensetrinn, som tillater en bedre kontroll av sluttkvalitet, og derved enklere møter GMP krav og forenkler hele produksjonsmetoden. I denne sammenhengen viser WO/03199 ikke noen krystallisering. 1 Et annet ytterligere behov i syntese av legemidler er stabiliteten av intermediære forbindelser. Stabilitet er en ønsket og nødvendig egenskap for de intermediære forbindelsene, siden de er i stand til å motstå kjemiske reaksjonsbetingelser, spesielt temperaturer, uten å undergå nedbrytning eller dekomponering. Mer spesielt, er det anbefalt et høyt smeltepunkt, spesielt for de forbindelsene som smelter med dekomponering, for å unngå nærværet av nedbrytnings-biprodukter i reaksjonsblandingen, som gjør rensing av sluttproduktet (legemidlet) mye vanskeligere, til og med umulig. Oppsummering av oppfinnelsen 2 Vi har nå overraskende funnet en ny form av (4S)-11-(dimetoksymetyl)-4-etyl-4-hydroksy-1Hpyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]kinolin-3,14(4H,12H)-dion, eller ellers i denne beskrivelsen og kravene navngitt som 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin (også navngitt form II eller med vår kode ST2337) som tilveiebringer en forbedring i teknikkens stand for kamptotecinderivat-fremstilling. Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer spesielt en polymorf av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin som er utstyrt med høyere renhet, spesielt med hensyn til biprodukter av aldehydtype og derivater derav. Et formål ved foreliggende oppfinnelse er derfor den krystallinske formen av 7-(dimetoksymetyl)kamptotecin form II. 3 Et annet formål ved foreliggende oppfinnelse er en fremgangsmåte for fremstillingen av den krystallinske formen over.
4 Et ytterligere formål ved foreliggende oppfinnelse er anvendelsen av den krystallinske formen av 7- (dimetoksymetyl)kamptotecin som mellomprodukt i en fremgangsmåte for fremstillingen av kamptotecinderivater. Disse og andre formål vil bli illustrert i detalj i den foregående beskrivelsen, også ved hjelp av figurer og eksempler. Kort beskrivelse av tegningene 1 2 I de vedlagte tegningene: Figur 1 representerer røntgen-pulverdiffraktogrammet av den polymorfe form II ifølge foreliggende oppfinnelse, ved anvendelse av en datamaskinstyrt XRD pulverdiffraksjonsapparatur og gransket under inert atmosfære. Diffraktometribetingelser var 40 KV x 40 ma CuKα. Figur 2 representerer det diffuse reflektans FT-IR spektrum av forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse, den polymorfe form II, i KBr med et Thermo Nicolet spektrometer modell Avatar 370 DTGS. Figur 3 representerer termisk opptreden for forbindelsen ifølge oppfinnelsen målt ved et smelteområdeapparat. Figur 4 representerer differensiell skanning-kalorimetri (DSC) analyse av den polymorfe form II. Figur representerer differensiell skanning-kalorimetri (DSC) analyse av den polymorfe form II med en forskjellig skanninghastighet. Figur 6 viser FT-IR spektrum av 7-(dimetoksymetyl)kamptotecin polymorf ifølge tidligere teknikk (form I). Figurene 7-9 viser sammenlignede FT-IR spektra av 7-(dimetoksymetyl)kamptotecin polymorf i henhold til foreliggende oppfinnelse (form II) og ifølge tidligere teknikk (form I). Figur viser røntgen pulverdiffraktogram av den polymorfe form I ifølge tidligere teknikk. Figur 11 viser sammenligningen mellom XRPD spektra av form II, 7-(dimetoksymetyl)kamptotecin polymorfen i henhold til foreliggende oppfinnelse og polymorf form I ifølge teknikkens stand. Figur 12 viser termisk opptreden for 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin form I. Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen 3 Den polymorfe form II av 7-(dimetoksy-metyl)-kamptotecin ifølge foreliggende oppfinnelse er kjennetegnet ved de fysisk-kjemiske parametere tilveiebrakt i denne beskrivelsen. En spesiell fordel ved den polymorfe form II i henhold til foreliggende oppfinnelse er å være hovedsakelig uten aldehydurenheter og derivater derav.
Ved begrepet "hovedsakelig uten" er det tenkt at forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse ikke inneholder noen aldehydurenheter og derivater derav eller i det minste ingen detekterbare mengder, eller i det minste mengder under de tillatte grenser angitt ved nasjonale eller europeiske farmakopéer. Ved begrepet "aldehydurenheter og derivater derav' er det tenkt et 7-formyl-kamptotecin, nevnte kamptotecin er eventuelt substituert og/eller har et modifisert lakton, et aldehydpolymerprodukt, eller et hvilket som helst derivat av aldehyd. Den polymorfe form II av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin blir fremstilt ved transformering av kamptotecin, gjennom dets 7-formyl-derivat: Fremgangsmåten i henhold til foreliggende oppfinnelse omfatter de følgende trinnene: 1 a. oksidere posisjon 7 av kamptotecin eller et derivat derav for å oppnå det tilsvarende 7-formylkamptotecin eller 7-formyl-kamptotecinderivat; b. behandle 7-formyl-kamptotecin eller 7-formyl-kamptotecinderivat oppnådd i trinn a) med metanol, i nærvær av en syre for å oppnå en første, sur metanol-reaksjonsblanding; c. nøytralisere nevnte første, sure metanol-reaksjonsblanding fra trinn b) for å gi en andre, hovedsakelig nøytral metanol-reaksjonsblanding; d. tilsette vann til nevnte andre, hovedsakelig nøytrale metanol-reaksjonsblanding, for å oppnå et bunnfall; e. separere nevnte bunnfall fra trinn d) for å oppnå et isolert bunnfall; f. krystallisere nevnte isolerte bunnfall fra trinn e) fra metanol for å gi nevnte polymorf. 2 Det oksiderende trinn i trinn a) kan bli utført i henhold til velkjente fremgangsmåter, se for eksempel US 6,194,79. I en foretrukken utførelsesform av foreliggende oppfinnelse, blir oksiderende trinn utført med et første oksiderende system og et andre oksiderende system. I en videre foretrukken utførelsesform, er nevnte første oksiderende system % H 2 O 2 /Fe(II) salt og nevnte andre oksiderende system er valgt fra gruppen bestående av eddiksyre, CrO 3 og MnO 2. I den mest foretrukne utførelsesformen, er nevnte første oksiderende system % H 2 O 2 /jernsulfat og nevnte andre oksiderende system er mangandioksid (se WO03/199). Trinn b) er også en velkjent prosedyre for å oppnå acetaler av aldehydforbindelser. I en foretrukken 3 utførelsesform, er nevnte første, sure metanol-reaksjonsblanding valgt fra gruppen bestående av destillert metanol og en metanol blanding med lite vann, for eksempel % vann/70 % metanol-løsning.
6 Syren anvendt i trinn b) kan være en hvilken som helst organisk eller uorganisk syre som ikke forstyrrer reaksjonsforløpet eller stabiliteten av utgangsmaterialet eller av sluttproduktet. Nevnte syre blir typisk valgt fra gruppen bestående av H 2 SO 4, CH 3 COOH, H 3 PO 4, HCl, SOCl 2, COCl 2, CH 3 SO 2 OH, CH 3 PhSO 2 OH, CF 3 COOH, CF 3 SO 3 H. Den foretrukne syren er 98 % H 2 SO 4 i en konsentrasjon på % v/v. Trinn c), d) og e) blir også utført i henhold til vanlig praksis og fagpersonen vil ikke ha noen vansker med å velge de riktige betingelser, utstyr og et hvilket som helst annet element for å utføre disse trinnene. Trinn f), som er grunnleggende for å oppnå sluttproduktet, er også et vanlig krystalliseringstrinn som kan bli utført ved den vanlige kjemipraktiker, enten på labskala eller i industriell skala, ved bare å velge de riktige betingelsene, så som volumer, temperaturer, tid. 1 Isolering av den polymorfe form II av 7-(dimetoksy-metyl)-kamptotecin blir utført i henhold til vanlig praksis og dette trinnet trenger ingen videre forklaring. Foretrukket blir sluttproduktet tørket for å eliminere løsemiddelspor. Et videre formål ved foreliggende oppfinnelse er solvater av den polymorfe form II over av 7-(dimetoksymetyl)-kamptotecin. Kamptotecin er et kommersielt produkt eller kan bli fremstilt i henhold til litteraturmetoder, se for eksempel US patenter,03,12, 4,894,46,,40,963 og 6,982,333, 2 Utgangs-kamptotecin blir suspendert i metanol (0, til %; fortrinnsvis 1, % løsning w/v). Løsningen eller suspensjonen blir holdt ved en temperatur som spenner fra - til 80 C (fortrinnsvis 0 til 0 C) og tilsatt med en mineral- eller organisk syre, fortrinnsvis 90 til 98 % H 2 SO 4 (fortrinnsvis 96 %)(1% til %, fortrinnsvis % v/v), og ved nærvær av et egnet første oksiderende system (for eksempel % H 2 O 2 /Fe(II)salter), så et andre oksiderende middel (for eksempel eddiksyre, CrO 3, MnO 2 ) for å oppnå det ønskede produktet. Et foretrukket første oksiderende system er jernsulfat/hydrogenperoksid. Et foretrukket andre oksiderende system er mangandioksid. 3 Det tørkede faststoffet blir så suspendert i nylig destillert metanol eller metanol med lavt vanninnhold (% løsning) og en mineral- eller organisk syre som spenner mellom katalytiske til støkiometriske mengder blir tilsatt. Syren kan være valgt fra den foretrukne gruppen bestående av H 2 SO 4, CH 3 COOH, H 3 PO 4, HCl, SOCl 2, COCl 2, CH 3 SO 2 OH (MsOH), CH 3 PhSO 2 OH (TsOH), CF 3 COOH, CF 3 SO 3 H. Andre syrer kan bli anvendt med lignende resultater. Foretrukken syre og dens konsentrasjon er % v/v av 98 % H 2 SO 4
7 Etter en passende tid, så som 2-6 h, blir løsningen nøytralisert inntil omkring ph 6 med en egnet base, så som vandig NaOH, KOH eller Na 2 CO 3. Vannet blir så tilsatt for å oppnå et gult bunnfall som blir isolert, fortrinnsvis ved filtrering og krystallisert igjen fra MeOH. Det oppnådde faststoffet blir til slutt tørket, for eksempel under vakuum ved 40 C over natten. Den polymorfe form II er egnet som mellomprodukt for fremstillingen av kamptotecinderivater, så som de vist i EP 006692, spesielt, og fortrinnsvis de vist i WO03/199 og et hvilket som helst annet kamptotecinderivat for anvendelse som i behandlingen av sykdommer som responderer til inhibering av topoisomerase I, så som for eksempel tumorer, HIV infeksjoner og parasittiske infeksjoner. 1 I en eksempelvis utførelsesform av oppfinnelsen, ble den polymorfe form II av 7-(dimetoksymetyl)-kamptotecin anvendt som intermediært produkt for fremstillingen av forbindelsene vist i WO03/199. De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen videre. 2 Eksempel 1 Til en suspensjon av 1,3 g (4,4 mmol) kamptotecin i 92 ml metanol, avkjølt med et isbad under omrøring, ble det langsomt tilsatt 9,2 ml 96 % H 2 SO 4, mens en holder temperaturen i blandingen under 0 C. Suspensjonen oppnådd slik ble varmet til reflukstemperatur; etter å ha nådd 0 C, ble 46 mg FeSO 4 7 H 2 O tilsatt og så 3 ml % H 2 O 2 dråpevis, mens en holder reaksjonen ved reflukstemperatur. Reaksjonen ble omrørt i 2 timer, mens en sjekker for forsvinning av utgangsproduktet ved TLC. Ved fullførelse av reaksjonen, ble suspensjonen avkjølt til 2 C og 2,8 g MnO 2 ble tilsatt; blandingen ble omrørt i 2 timer, mens en sjekker for forsvinning av det intermediære produktet ved TLC. Suspensjonen ble så filtrert gjennom et lag av Celite plassert på et Goochfilter. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under redusert trykk og det oppnådde faststoffet ble suspendert i nylig destillert metanol eller metanol med lavt vanninnhold og H 2 SO 4 (98 %) (4,4 ekvivalent). Suspensjonen ble omrørt i 6 h og ble så nøytralisert inntil omkring ph 6 med 1 N NaOH løsning. 3 Så ble vann tilsatt for å oppnå et gult bunnfall som ble isolert ved filtrering. Faststoffet ble krystallisert fra MeOH og tørket under vakuum ved 40 C over natten.
8 Faststoffkarakterisering av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin (form II) Røntgen pulverdiffraktrometri Røntgen pulverdiffraktogrammet på omkring 1 mg malt pulver ble oppnådd ved anvendelse av et datamaskinstyrt XRD pulverdiffraksjonsapparat og gransket under inert atmosfære. Rørbetingelsene var 40 KV x 40 ma CuKα, de anvendte vinduene var blender 0,3 og lukning 0,1. Tiden for hvert trinns skan var 7 s, 2-θ området var - 3. Etter ervervelsen, ble en nøyaktig analyse av spektrumet utført ved å ta i bruk en prosedyre for topp- evalueringen som tar hensyn til både den minimale topp-bredden og en estimert mengde av uordnet del. Det blir konkludert at prøven er krystallinsk. 1 De karakteristiske hoved-diffraksjonstoppene er gitt i den følgende tabell 1. Tabell 1 Grader 2-Theta ± 0,2 Relativ intensitet (%) 6,3 8,7 21,6 0 12,9 8 13,6 23 16,3 18 16,7 18,6 6 19, 13 21,2 21 23,9 6 2,3 22 26,2 9 27,3 17 28, 4 28,9 4
9 Grader 2-Theta ± 0,2 Relativ intensitet (%) 29, 4, 4 31,4 9 32,7 2 Figur 1 viser røntgen pulverdiffraktogram av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin (form II). De mest representative toppene er gitt i tabell 2 under. Tabell 2 Grader 2-Theta Relativ intensitet (%) 6,3 8,7 21,6 0 13,6 23 16,3 18 16,7 19, 13 21,2 21 2,3 22 27,4 17 IR spektrum Diffus reflektans FT-IR spektrumet av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin form II ble samlet på en 2 % prøve i KBr med et Thermo Nicolet spektrometer modell Avatar 370 DTGS. 1 I den følgende tabell 3 er det rapportert hovedsignaler (cm -1 ) karakteristiske for denne krystallinske formen.
Tabell 3 Frekvens (cm -1 ) Intensitet (%T) 318 3 2989 6 2936 6 1744 21 1660 21 1463 0 11 31 60 23 769 37 Figur 2 viser IR Spektrum (i KBr) av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin (form II) Termisk opptreden 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin undergår nedbrytning som starter fra temperaturen på omkring 160 C, målt ved et passende smelteområdeapparat (Mettler TG 0, temperaturstigning fra 2 C til 600 C ved C/min., se figur 3) og bekreftet ved differensiell skanning-kalorimetri analysen (DSC mod. Mettler DSC, temperaturstigning fra 2 C til 160 C ved C/min., se figur 4) som indikerer at ingen smeltefenomener forekom før 160 C. Det samme eksperimentet ble gjentatt ved forskjellig varmestigning ( C/min) som gir en verdi for dekomponeringstemperatur ved 173,6 C (se figur ). 1 HPLC-MS analyse En HPLC-MS analyse ble utført for å studere urenhetsprofilen av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin. I de følgende beskrevne eksperimentelle betingelser har det ikke blitt funnet noen topp med en molekylvekt kompatibel med aldehyd. 2 Eksperimentelle betingelser: Utstyr: - Surveyor LC, mikropumpe, autosampler - termo; - LCQ DecaXP Plus ionefelle massespektrometer med ESI (+) grensesnitt, termo; Kolonne: - Inertsil ODS-3 ( µm, 4,6 mm ID) - GL Sciences Inc.; Mobil fase: - A: H 2 O + HCOOH 0,1 %; - B: H 2 O/CH 3 CN /90 v/v + HCOOH 0,1 %; Gradienteluering: - A/B 70/ til 0 % B i minutter; Strømningsrate: - 1,0 ml/min;
11 Deteksjon: - ESI (+) grensesnitt: kapillærtemp. 0 C; - skjermingsgasstrøm (N 2 ): 70; - Hjelpegasstrøm (N 2 ): ; - Kapillærspenning: 3 V; Kilde spenning: - kv; Kildestrøm: - 80 µa; Rør linse forskyvning: - V; Ervervelsesområde: - 0-600 amu. 1 Eksempel 2 - Sammenligningseksempel Dette eksemplet ble gjennomført for å fastlegge forskjellene mellom krystallformen av 7-(dimetoksymetyl)kamptotecinet oppnådd ved kloroform/n-heksan krystallisering, som beskrevet ved den ovennevnte Sawada et al., 1994, og heri navngitt form 1) og 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecinet oppnådd i henhold til foreliggende oppfinnelse, navngitt form II. Resultatene (FT-IR, pulverrøntgen og TGA) viste eksistensen av forskjeller mellom de to formene og at formen II er mer stabil (den dekomponerer ved høyere temperatur) sammenlignet med den andre formen I. Målet ved dette eksemplet er å verifisere at formen beskrevet i den anførte artikkelen, krystallisert ved kloroform og n-heksan (navngitt form I), er forskjellig fra form II ifølge foreliggende oppfinnelse. Utstyr 2 FT-IR Spektrofotometer THERMO (Nicolet 700) koplet til en PC via OMNIC analyse programvaren; Tørkeovn; Omrøringsplate; TGA termovekt PerkinElmer (Analytisk avd. Lab. MASC); NMR Varian (Analytisk avd. Lab. MASC); Pulverrøntgen (ISMAC). Prøve og løsemiddel 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin: i henhold til eksemplet over. n-heksan: MERCK (Batch K3703267 72) (kokepunkt 69 C). 3 Kloroform: Sigma Aldrich (Batch 0163EC-344) (kokepunkt 61 C). Forbindelsen 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin ble fremstilt i henhold til trinnene a)-e) beskrevet over og i eksempel 1.
12 Krystalliseringsteknikk Omkring 1 mg 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin ble solubilisert i omkring 1 ml kloroform, i en brun rundbunnskoble, under magnetisk omrøring. Etter fullstendig solubilisering av det faste stoffet, ble løsningen filtrert på Nalgene 0,2 µm filter, og så tilsatt med omkring ml n-heksan inntil for å oppnå fullstendig utfelling. Den oppnådde høsten ble separert ved filtrering og tørket med vakuumpumpe. Karakterisering av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin form I Det oppnådde faststoffet ble identifisert ved NMR spektroskopi, ved anvendelse av et NMR 00 spektrometer (faststoff solubilisert i DMSO) og karakterisert ved FT-IR (figurene 6, 7, 8 og 9), XRPD (figur ) og TGA (figur 12). 1 NMR-en er i samsvar med strukturen av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin. Sammenligningen mellom infrarøde spektra av form II og form I viste en signifikant forskjell mellom regionen 3600-2700 cm -1, rundt 1700 cm -1 og mellom 1600-800 cm -1 (viser figurer 7, 8 og 9). FT-IR samsvaret mellom disse to formene er 3,0 %. Tabell 4 2θ verdier av røntgen pulverdiffraktogram for 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin form I Grader 2-Theta Relativ intensitet (%),7 33,6 7,2,19 8,7 0 13,4 36,3 14,2 43,26 14,9,19 1,2 2 1,6 3,7 1,8 36,3 17 9,19
13 2θ verdier av røntgen pulverdiffraktogram for 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin form I Grader 2-Theta Relativ intensitet (%) 17,3 66,34 17,7 43,26 18,2 62,,4 36,3 22,0 2,88 22,7 3,7 23, 0 26,4 29,80 28,9 26,92 Sammenligningen mellom XRPD spektra av form II og form I viste en signifikant forskjell (se figur 11). Faktisk er de mest karakteristiske diffraksjonstoppene av form II ved 6,3,,6, 19, og 2,3 grader (mens de relative for form I er ved,7, 18,2, og 23, grad). Termisk opptreden 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin form I undergår nedbrytning som starter fra temperaturen på 123,38 C (trinnet rundt 0 C er på grunn av en variasjon av oppvarmingsstigning), målt ved et egnet smelteområdeapparat (Mettler TG 0, temperaturstigning fra 2 C til 600 C ved C/min., se figur 12) og bekreftet ved differensiell skanning-kalorimetri analysen (DSC mod. Mettler DSC, temperaturstigning fra 2 C til 160 C ved C/min.) som indikerer at ingen smeltefenomener forekom. KONKLUSJON 1 Studien av krystallform av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecinet oppnådd ved kloroform/n-heksan (form I) og form II, viste signifikante forskjeller mellom dem. DSC-TGA analysen viste at denne form I er mindre stabil sammenlignet med form II, faktisk er dekomponeringstemperaturen for form II 173,6 C mens den for formen I er 123,38 C. Begge faste former av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin har omtrent den samme termiske opptreden når smeltepunktene ble utført ved et svært lignende instrument anvendt ved Sawada i 1991. Ved anvendelse av et BUCHI 3 smeltepunkt er vi faktisk ikke i stand til å erkjenne dekomponeringen og smeltefenomenene kan bli
14 forvekslet med dekomponering. Med Buchi system registrerte vi et smeltepunkt nær 222-224 C for form I og 224-226 C for form II.
1 P a t e n t k r a v 1. Polymorf form II av 7-(dimetoksy-metyl)kamptotecin som har en nedbrytningstemperatur på 173,6 C når målt med en temperaturstigning på C/min. 2. Den polymorfe form II ifølge krav 1, som viser et røntgen pulverdiffraksjonsmønster som har de følgende karakteristiske topper uttrykt i grader 2θ ± 0,2 Grader 2-Theta Relativ intensitet (%) 6,3 8,7 21,6 0 13,6 23 16,3 18 16,7 19, 13 21,2 21 2,3 22 27,4 17 3. Den polymorfe form II ifølge et hvilket som helst av kravene 1-2, som viser et IR spektrum (KBr) med de følgende hovedtopper: Frekvens (cm -1 ) Intensitet ( %T) 318 3 2989 6 2936 6 1744 21 1660 21 1463 0 11 31 60 23 769 37
16 4. Den polymorfe form II ifølge et hvilket som helst av kravene 1-3, som er hovedsakelig uten aldehydurenhet. 1. Et solvat av den polymorfe form II ifølge et hvilket som helst av kravene 1-4. 6. En fremgangsmåte for fremstillingen av den polymorfe form II ifølge krav 1-4, som omfatter de følgende trinn: a. oksidere posisjon 7 av kamptotecin eller et derivat derav for å oppnå det tilsvarende 7-formylkamptotecin eller 7-formyl-kamptotecinderivat; b. behandle 7-formyl-kamptotecin eller 7-formyl-kamptotecinderivat oppnådd i trinn a) med metanol, i nærvær av en syre for å oppnå en første, sur metanol-reaksjonsblanding; c. nøytralisere nevnte første, sure metanol-reaksjonsblanding fra trinn b) for å gi en andre, hovedsakelig nøytral metanol-reaksjonsblanding; d. tilsette vann til nevnte andre, hovedsakelig nøytrale metanol-reaksjonsblanding, for å oppnå et bunnfall; e. separere nevnte bunnfall fra trinn d) for å oppnå et isolert bunnfall; f. krystallisere nevnte isolerte bunnfall fra trinn e) fra metanol for å gi nevnte polymorf. 7. Fremgangsmåte ifølge krav 6, hvori det oksiderende trinn i trinn a) blir utført med et første oksiderende system og et andre oksiderende system. 8. Fremgangsmåte ifølge krav 7, hvori nevnte første oksiderende system er % H 2 O 2 /Fe(II) salt og nevnte andre oksiderende system er valgt fra gruppen bestående av eddiksyre, CrO 3 og MnO 2. 2 9. Fremgangsmåte ifølge krav 8, hvori nevnte første oksiderende system er % H 2 O 2 /jernsulfat og nevnte andre oksiderende system er mangandioksid.. Fremgangsmåte ifølge et hvilket som helst av kravene 6-9, hvori nevnte første, sure metanolreaksjonsblanding i trinn b) er valgt fra gruppen bestående av destillert metanol og % vann/70 % metanolløsning. 11. Fremgangsmåte ifølge et hvilket som helst av kravene 6-, hvori nevnte syre i trinn b) er valgt fra gruppen bestående av H 2 SO 4, CH 3 COOH, H 3 PO 4, HCl, SOCl 2, COCl 2, CH 3 SO 2 OH, CH 3 PhSO 2 OH, CF 3 COOH, CF 3 SO 3 H. 3 12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, hvori nevnte syre i trinn b) er 98 % H 2 SO 4. 13. Fremgangsmåte ifølge krav 11 eller 12, hvori nevnte syre er i en konsentrasjon på % v/v.
17 14. Fremgangsmåte ifølge et hvilket som helst av kravene 6-13, hvori, etter trinn f) nevnte krystalliserte polymorfe form II blir tørket under vakuum ved 40 C over natten. 1. Fremgangsmåte for fremstilling av et kamptotecinderivat hvori den polymorfe form II ifølge kravene 1-4 blir anvendt.