Agenda Betalaktamresistens hos Haemophilus influenzae AFA-kurset 2017 Dagfinn kaare Betalaktamantibiotika Mekanismer for betalaktamresistens esistensbestemmelse Epidemiologi Demonstrasjon Betalaktamantibiotika Penicilliner, cefalosporiner og karbapenemer Betalaktamring Binder seg til penicillin-bindende proteiner (PBP) og hemmer syntese av peptidoglykan Peptidoglykan Livsviktig nettformet struktur i celleveggen yntetiseres av penicillinbindende proteiner (PBP) PBP2 og PBP3: Transpeptidaser Katalyserer kryssbinding av peptidkjeder Angrepspunkt for betalaktamantibiotika Kryssbinding PBP Betalaktamantibiotika Effekt H. influenzae Etterligner naturlig substrat for PBP Binder seg til PBP og hemmer transpeptidaseaktiviteten Hemming av PBP gir forutsigbare morfologiske endringer PBP2 (stavform): færiske celler PBP3 (celledeling): Filamenter med utposninger Bakteriolyse celledød Meropenem Ampicillin 1
Betalaktamresistens H. influenzae Betalaktamase Betalaktamaser (TEM, OB) Overførbare gener (mobile genetiske elementer) Kun resistens mot penicilliner (penicillinaser) Hemmes av betalaktamasehemmere Endret penicillinbindende protein 3 (rpbp3) pontane punktmutasjoner og rekombinasjon i ftsi Variabel grad av resistens mot penicilliner, cefalosporiner og karbapenemer Hemmes ikke av betalaktamasehemmere Betalaktamringen åpnes her (hydrolyse) Betalaktamasehemmere hemmer betalaktamaser (klavulansyre, tazobactam) Inaktivt molekyl Endret PBP3 (rpbp3) Mutasjoner i ftsi Endret form på bindingsstedet edusert affinitet for betalaktamer vakere hemming av transpeptidasen Økt toleranse for betalaktamantibiotika rpbp3: Trinnvis utvikling Trinn 2-3: Høygradig Trinn 1: Lavgradig rpbp3: Trinnvis utvikling esistensbestemmelse Brytningspunkttabell one- og MIC-brytningspunkter Algoritme betalaktamresistens Metodedokumenter Haemophilus influenzae og betalaktamresistens Påvisning av betalaktamase hos taphylococcus spp., Enterococcus faecalis, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Neisseria gonorrhoeae og Neisseria meningitidis kaare et al. Eurosurveillance 2014 2
Betalaktamasepåvisning Betalaktamase positive isolater rapporteres for penicilliner uten betalaktamasehemmer (uansett sonestørrelse/mic) creening betalaktamresistens asjonale To resistensmekanismer Tre tester Penicillin lapp esistensmekanisme Betalaktamase Cefalosporin lapp Betalaktamase + Endret PBP3 - Begge + 3
pos neg pos neg AMP2 lapp vs BMD MIC pos neg 77% (46/60) av resistente isolater følsomme med AMP2 lapp BMD kaare et al. JCM 2015 Ampicillin Etest vs BMD MIC PG1 < 6 mm Betalaktamasetest + 88% (53/60) av resistente isolater følsomme med Etest kaare et al. JCM 2015 4
CEC30 < 6 mm = rpbp3 Foto:Lene Haakensen, FHI esistensepidemiologi NOM 2014 luftveier esistensepidemiologi 17.3% 13.4% (I/) 9.1% () x?? 18.5% Cefotaxime MIC >0,125 (): 0.6% Demonstrasjon Læringsmål Få kjennskap til NordicATs testalgoritme for resistensbestemmelse av betalaktamantibiotika med lappediffusjon Demonstrasjon 1. Utled resistensmekanismer - creeninglapper (PG1, CEC30) - Betalaktamasetest (resultat på skål) Materiale og metoder kåler med resistensoppsett Villtypestamme Tre stammer med ukjent(e) resistensmekanisme(r) Algoritme og sonebrytningspunkter 5
Demonstrasjon 2. Utfør følsomhetskategorisering (/) - Ampicillin - Amoksicillin-klavulansyre - Cefotaksim PG1 12 mm = Betalaktamase: Negativ CEC30 23 mm = ATCC 49766 Negativ screening ingen resistensmekanismer Alle betalaktamer = AMP2: 16 mm = AMC3: 15 mm = CTX5: 27 mm = PG1: <12 mm = Betalaktamase: Negativ CEC30: <23 mm = ATCC 49247 PG1: <12 mm = Betalaktamase: Positiv CEC30: 23 mm = AF-M 284 Mekanisme: Endret PBP Mekanisme: Bla Cefuroxim: Ampicillin (meningitt): Øvrige: Lapp eller MIC AMP2: <16 mm = AMC3: <15 mm = CTX5: 27 mm = Bla-følsomme penicilliner: Øvrige betalaktamer: AMP2: <16 mm = AMC3: 15 mm = CTX5: 27 mm = PG1: <12 mm = Betalaktamase: Positiv CEC30: <23 mm = iv-a23 Endret PBP og Bla Bla-følsomme penicilliner: Cefuroxim: Øvrige: Lapp/MIC AMP2: <16 mm = AMC3: <15 mm = CTX5: <27 mm = 6