Maxwell CSC Blood DNA Kit

Transkript

1 TEKNISK HÅNDBOK Maxwell CSC Blood DNA Kit Bruksanvisning for produktet AS1321 Forsiktig: Håndter kassetter med forsiktighet, forseglingskantene kan være skarpe. BRUKANVISNING FOR PRODUKTET AS Woods Hollow Rd. Madison, WI USA MDSS GmbH Schiffgraben Hannover, Germany Revidert 5/18 TM374

2 Maxwell CSC Blood DNA Kit Alle teknisk litteratur er tilgjengelig på: Gå til nettstedet for å kontrollere at du bruker den mest oppdaterte versjonen av denne tekniske håndboken. Send e-post til Promega Technical Services dersom du har spørsmål vedrørende bruk av dette systemet: 1. Beskrivelse Produktkomponenter, oppbevaringsbetingelser og symbolforklaring Tiltenkt bruk av produktet Bruksbegrensninger for produktet Før du starter A. Klargjøring av fullblodprøver B. Klargjøring av Maxwell CSC-kassett Instrumentkjøring Etter rensing Feilsøking Referanse Oppsummering av endringer Maxwell CSC Blood DNA Kit er bare tilgjengelig i visse land. Dette produktet overholder de vesentlige kravene i EU-direktiv 98/79/EF vedrørende in vitro-diagnostiske medisinske enheter. 1. Beskrivelse Maxwell CSC Blood DNA Kit (a) brukes sammen med Maxwell CSC-instrumentet for å oppnå en enkel metode for effektiv og automatisert rensing av genomisk DNA (gdna) fra humane blodprøver. Maxwell CSC-instrumentet leveres med forhåndsprogrammerte rensemetoder og er utformet for bruk med de forhåndsdispenserte reagenskassettene samt ytterligere reagenser som følger med i settet, noe som maksimerer enkelthet og brukervennlighet. Instrumentet kan behandle opptil 16 prøver på 40 minutter, og det rensede DNA-et kan brukes direkte i en rekke nedstrøms bruksområder, som PCR. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

3 1. Beskrivelse (fortsettelse) Maxwell CSC Blood DNA Kit renser nukleinsyre ved hjelp av en ny paramagnetisk partikkel, som gir en mobil solid fase som optimaliserer prøveinnhenting, vask og rensing av gdna. Denne partikkelen benytter cellulosebasert binding av nukleinsyrer og gir en høyere bindekapasitet samt renere eluat enn tradisjonell silikabasert DNA-rensing. Maxwell CSC-instrumentet er et instrument til håndtering av magnetiske partikler, som muliggjør effektiv binding av gdna til den paramagnetiske partikkelen i første brønn av en forhåndsfylt kassett. Instrumentet beveger prøven gjennom brønnene i kassetten og blander dem under behandlingen. Denne tilnærmingen til magnetisk registrering unngår vanlige problemer som tette tupper eller delvise reagensoverføringer som resulterer i suboptimal rensebehandling, som oppstår i andre ofte brukte automatiserte systemer. 2. Produktkomponenter, oppbevaringsbetingelser og symbolforklaring PRODUKT STØRRELSE KAT.NR. Maxwell CSC Blood DNA Kit 48 preps AS1321 For in vitro-diagnostisk bruk. Kun til profesjonell bruk. Tilstrekkelig til 48 automatiserte isoleringer fra 300μl av fullblodsprøver. Maxwell CSC-kassetter er kun beregnet på engangsbruk. 15 C 30 C 6010TB 48 Inneholder: 2 1 ml Proteinase K (PK) Solution 20 ml Lysis Buffer 48 Maxwell CSC Blood Cartridges 50 CSC/RSC Plungers 50 Elution Tubes (0.5ml) 20 ml Elution Buffer Oppbevaringsbetingelser: Maxwell CSC Blood DNA Kit skal oppbevares ved C. Sikkerhetsinformasjon: Reagenskassettene inneholder etanol og isopropanol. Disse stoffene anses som brannfarlige, skadelige og irriterende. Maxwell CSC-kassettene er utformet for bruk med potensielt smittefarlig materiale. Bruk riktig personlig verneutstyr (f.eks. hansker og beskyttelsesbriller) ved håndtering av smittefarlig materiale. Følg institusjonens retningslinjer for håndtering og kassering av smittefarlig materiale brukt med dette systemet. Forsiktig: Håndter kassetter med forsiktighet, forseglingskantene kan være skarpe. Tilleggsinformasjon: Maxwell CSC Blood DNA Kit-komponentene er kvalifisert og kvalitetssikringstestet for å fungere sammen. Det anbefales ikke å blande settkomponenter mellom forskjellige settloter. Bruk bare komponentene som følger med i settet. 2 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

4 Symbolforklaring Symbol Forklaring Symbol Forklaring Medisinsk utstyr in vitro-diagnostikk Autorisert representant 15 C 30 C Oppbevares ved C Woods Hollow Rd. Madison, WI USA Produsent Viktig Irriterende Kreftfremkallende Innholdet rekker til n tester Conformité Européenne Advarsel. Biologisk fare. Advarsel. Klemfare. Bestillingsnummer Lotnummer Skal ikke gjenbrukes Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

5 3. Tiltenkt bruk av produktet Maxwell CSC Blood DNA Kit er beregnet på bruk sammen med Maxwell CSC-instrumentet og Maxwell CSC Blood DNA-rensemetoden, som en in vitro-diagnostisk (IVD) medisinsk enhet for å utføre automatisert isolering av genomisk DNA fra humane fullblodprøver. Det rensede DNA-et er egnet for bruk i amplifikasjonsbaserte in vitro-diagnostiske analyser. Maxwell CSC Blood DNA Kit skal brukes ved en temperatur på C. Bruk utenfor dette temperaturområdet kan medføre suboptimale resultater. Fullblodprøver innhentet i blodinnsamlingsrør som inneholder antikoagulantene EDTA, heparin eller natriumsitrat, kan brukes med Maxwell CSC Blood DNA Kit. Tabell 1 viser den akseptable tidsperioden for lagring av prøver under forskjellige forhold før bruk i Maxwell CSC Blood DNA Kit. Maxwell CSC Blood DNA Kit er ikke beregnet på bruk med prøver som ble samlet inn i andre typer blodinnsamlingsrør eller oppbevart utenfor forholdene som er oppgitt i tabell 1. Oppbevaringstemperatur for prøver Oppbevaringstid før rensing C Opptil 72 timer 2 10 C Opptil 7 dager -80 C eller lavere Uendelig Maxwell CSC Blood DNA Kit skal ikke brukes som en del av en spesifikk diagnostisk test. Maxwell CSC Blood DNA Kit er bare beregnet på profesjonell bruk. Diagnostiske resultater som oppnås med det genomiske DNA-et som renses med dette systemet, må tolkes i sammenheng med andre kliniske funn eller laboratoriedata. 4 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

6 4. Bruksbegrensninger for produktet Maxwell CSC Blood DNA Kit er ikke beregnet på bruk med vevsprøver eller andre prøver fra kroppsvæsker enn humant fullblod eller med koagulerte humane fullblodsprøver. Maxwell CSC Blood DNA Kit er ikke beregnet på bruk med ikke-humane prøver, inkludert bakterielle og virale prøver, eller til rensing av RNA. Ytelsen til Maxwell CSC Blood DNA Kit ble evaluert ved å isolere DNA fra µl fullblodprøver med antallet av hvite blodlegemer (wbc) i området til wbc/ml og eluere DNA-et i µl. Produktet skal ikke brukes med prøver utenfor dette området. Ytelsen til Maxwell CSC Blood DNA Kit har blitt evaluert for kompatibilitet med følgende potensielt hemmende faktorer for genomisk DNA-amplifikasjon: hem, alkohol, IgG og guanidin. Andre forbindelser har ikke blitt evaluert. Brukeren er ansvarlig for å kontrollere hvilke ytelseskarakteristikker som kreves til nedstrøms diagnostiske formål. Egnede kontroller må inkluderes for alle nedstrøms diagnostiske bruksområder der det benyttes genomisk DNA renset med Maxwell CSC Blood DNA Kit. 5. Før du starter Materialer som må anskaffes av bruker roterende rørblander for flytende blodprøver (ekstrautstyr) virvelblander for benketopp pipettorer og pipettespisser for å overføre prøven til forhåndsfylte reagenskassetter 1,5 2,0 ml rør for inkubasjon av prøver (f.eks. mikrorør, 1,5 ml [kat.nr. V1231]) varmeblokk stilt til 56 C (Merk: Varmeblokken må stilles til 56 C. Faktisk varmblokktemperatur må måles til 56 C innenfor kalibreringsspesifikasjonene for termometeret som brukes for målingen.) Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

7 5.A. Klargjøring av fullblodprøver Behandlingskapasitet for fullblodprøver Samlet genomisk DNA-utbytte fra fullblodprøver avhenger av prøvevolumet og konsentrasjonen av hvite blodlegemer (antall per ml). Hver kassett som leveres i Maxwell CSC Blood DNA Kit, er utformet for rensing av genomisk DNA fra µl fullblod, med antallet hvite blodlegemer i området til wbc/ml fullblod (verdier for en normal, sunn voksen person, 1). Vi anbefaler at du utfører en telling av hvite blodlegemer på hver prøve før rensing av DNA for å sikre at prøven faller innenfor dette området. Prøver utenfor dette området vil kanskje ikke gi optimale resultater. Merk: Dette settet har blitt testet med humane fullblodprøver innhentet i EDTA-, natriumsitrat- eller heparinrør. Ytelsen til de kjemiske komponentene kan ikke garanteres med andre typer blodinnsamlingsrør. Blodprøver kan være ferske (oppbevares ved C i opptil 72 timer), oppbevares kjøleskap (ved 2 10 C i opptil sju dager) eller fryses (oppbevares ved -80 C eller lavere) før DNA-rensing. Prøver som har vært fryst, må tines før behandling. Alle blodprøver bør blandes grundig før bruk. 1. Bland alle blodprøver i minst 5 minutter ved C. 2. Klargjør og merk inkubasjonsrør som passer i varmeblokken, som skal være satt til 56 C. 3. Tilsett 30 μl proteinase K-løsning (PK) i hvert inkubasjonsrør. 4. Tilsett flytende blod (mellom 50 µl og 300 μl) i hvert inkubasjonsrør. Sørg for å unngå eventuelt koagulert materiale når du overfører blod til inkubasjonsrøret. Systemet er ikke beregnet på bruk med koagulerte blodprøver. Skift ut tupper mellom hver blodprøveoverføring for å forhindre krysskontaminering. 5. Tilsett 300 μl lyseringsbuffer i hvert inkubasjonsrør. Skift ut tupper mellom hver overføring av lyseringsbuffer for å forhindre krysskontaminering. 6. Bland hvert rør i en virvelblander ved maksimal hastighet i 10 sekunder. 7. Inkuber hvert rør i varmeblokken (satt til 56 C) i 20 minutter. Under denne inkubasjonen klargjør du kassetter som beskrevet i del 5.B. 8. Inspiser hvert lysat etter inkubasjon. Etter proteinase K-behandling endrer prøven farge fra rødt til grønnlig brun. Hvis prøvene ikke endrer farge etter proteinase K-behandling, indikerer dette at behandlingen var ineffektiv, og DNA-utbytte samt renhet etter rensing påvirkes. Ikke behandle prøver ytterligere hvis ingen endringer observeres på slutten av proteinase K-inkubasjonstiden. 9. Overfør hver blodlysatprøve fra inkubasjonsrøret til brønn nr. 1 i en egen kassett. (Brønn nr. 1 er den største brønnen i kassetten). Skift ut tupper mellom hver prøveoverføring for å forhindre krysskontaminering av prøver. Merk: Maxwell CSC-kassetter skal inneholde en synlig svart pellet med mikropartikkelresin i kassettens andre brønn. Hvis resinet er ikke synlig, rister du ned partiklene i kassetten for å forflytte eventuell resin som kanskje sitter fast i kassettforseglingen, før du fjerner forseglingen. 6 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

8 5.B. Klargjøring av Maxwell CSC-kassett 1. Bytt hansker før du håndterer Maxwell CSC-kassetter, CSC/RSC-stempler og elueringsrør. Kassetter settes opp på Maxwell CSC-dekkbrettet utenfor instrumentet, og dekkbrettet som inneholder kassettene og prøvene, overføres deretter til instrumentet for rensing. Plasser kassettene som skal brukes, i Maxwell CSC-dekkbrettet (figur 2). Plasser hver kassett i dekkbrettet med brønn nr. 1 (den største brønnen i kassetten) lengst borte fra elueringsrørene. Trykk ned kassetten slik at den sitter helt på plass. Kontroller at begge kassettendene er helt festet dekkbrettet. Dra forsiktig vekk forseglingen slik at hele forseglingen fjernes fra toppen av kassetten. Kontroller at all forseglingsteip og klebende materiale har blitt fjernet før kassettene plasseres i dekkbrettet. Forsiktig: Håndter kassetter med forsiktighet. Forseglingskantene kan være skarpe. 2. Plasser ett stempel i brønn nr. 8 i hver kassett. 3. Plasser et tomt elueringsrør i elueringsrørposisjonen for hver kassett i Maxwell CSC-dekkbrettet. Merk: Bruk bare elueringsrørene som følger med i Maxwell CSC Blood DNA Kit. Andre elueringsrør vil kanskje ikke være kompatible med Maxwell CSC-instrumentet og kan påvirke DNA-renseytelsen. 4. Tilsett μl elueringsbuffer i bunnen av hvert elueringsrør. Merk: Bruk bare elueringsbufferen som følger med i Maxwell CSC Blood DNA Kit. Bruk av andre elueringsbuffere kan påvirke DNA-renseytelsen. Merknader for klargjøring av Maxwell CSC-kassett 1. Dersom du behandler færre enn 16 prøver, skal kassettene midtstilles på dekkbrettet. 2. Fjern prøve- eller reagenssøl på alle deler av Maxwell CSC-dekkbrettet som angitt i Maxwell CSC Instrument Manual. Ikke bruk blekemiddel på noen av instrumentdelene. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

9 10784TA Bindeloøning Binding Buffer 2. Paramagnetiske Paramagnetic Cellulose cellulosepartikler Particles Merk: Note: If Hvis particles partiklene are not ikke visible er synlige in i brønn 2, Well rister 2, shake du kassetten down the for cartridge å løsne partikler som kan to dislodge ha festet particles seg til forseglingsmaterialet that may have før du adhered fjerner to forseglingen. the seal material before removing the seal. 3. Vaskemiddel Vaskemiddel Wash Buffer Vask Wash Buffer Vask Wash Tomt Wash Tomt Empty 8. Empty Brønninnhold Well Content User som Adds: brukeren tilsetter: Lysert Lysed fullblodprøve whole blood sample CSC/RSC-stempel Plunger Figur 1. Maxwell CSC-kassett. Denne figuren viser innholdet i en kassett. Lysert fullblodprøve tilsettes i brønn 1, og et stempel settes i brønn 8. Figur 2. Oppsett og konfigurering av Maxwell CSC-dekkbrettet. Elueringsbuffer tilsettes i elueringsrørene som angitt. 8 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

10 6. Instrumentkjøring Se Maxwell CSC Instrument Operating Manual for mer detaljert informasjon. 1. Slå på Maxwell CSC-instrumentet og nettbrettet. Instrumentets brukergrensesnitt starter automatisk, og instrumentet fortsetter med en selvtest og setter alle bevegelige deler i utgangsposisjon. 2. Velg Start på startskjermbildet. 3. Skann eller legg inn metodestrekkoden på Maxwell CSC Blood DNA Kit-etiketten for automatisk å velge metoden som skal kjøres (figur 3). Merk: Maxwell CSC Blood DNA Kit-metodestrekkoden er påkrevd for rensing av DNA på Maxwell CSCinstrumentet. Settetiketten inneholder to strekkoder. Metodestrekkoden er angitt på figur TA Figur 3. Settetiketten som indikerer metodestrekkoden som skal skannes. I den røde boksen vises metodestrekkoden på settetiketten som skal skannes for å starte en rensekjøring. 4. Velg kassettposisjoner som skal kjøres (se Maxwell CSC Instrument Operating Manual), og skann eller legg manuelt inn den påkrevde prøvesporingsinformasjonen. 5. Kontroller at prøvene ble tilsatt i brønn nr. 1 i kassettene, at kassettene er lastet på instrumentet, at elueringsrørene som inneholder μl av elueringsbufferen, er til stede, og at stemplene er plassert i brønn nr. 8. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

11 6. Instrumentkjøring (fortsettelse) 6. Overfør Maxwell CSC-dekkbrettet som inneholder de klargjorte kassettene, til Maxwell CSCinstrumentdekket. Kontroller at dekkbrettet er plassert i Maxwell CSC-instrumentet med elueringsrørene nærmest døren. Dekkbrettet får bare plass i instrumentet dersom det vender i denne retningen. Dersom dekkbrettet ikke passer på plattformen, kontrollerer du at det er satt inn riktig vei. Kontroller at dekkbrettet sitter plant på instrumentdekket. Merk: Hold Maxwell CSC-dekkbrettet etter sidene for å unngå å forflytte kassettene fra stativet. 7. Bekreft at all angitt forbehandling har blitt utført, og trykk på Start for å lukke instrumentdøren og starte behandlingen. Advarsel: Klemfare. 8. Maxwell CSC-instrument starter rensingen umiddelbart. Skjermen viser trinnene som utføres og omtrentlig tid som er igjen i kjøringen. Merk: Dersom kjøringen avbrytes før fullføring, vil instrumentet vaske partiklene av stemplene og slippe stemplene i brønn nr. 8 i kassetten. Prøvene vil da gå tapt. Ikke forsøk å rense på nytt prøver som har vært i en instrumentkjøring som ble avbrutt. 9. Når den automatiske rensekjøringen er fullført, viser nettbrettskjermen en melding om at metoden er avsluttet. Kjøring avsluttet 10. Følg instruksjonene på skjermen etter at metoden har blitt fullført, for å åpne døren. Kontroller at stemplene befinner seg i brønn nr. 8 i kassetten etter fullført kjøring. Fjern dekkbrettet fra instrumentet og fjern eluerte prøver fra dekkbrettet. Hvis alle stempler ikke har blitt fjernet fra stempelstangen: Følg meldingene på skjermen for å utføre rengjøringsmetoden for en avbrutt kjøring, eller velg rengjøringsmetoden fra innstillingsskjermbildet for en fullført kjøring for å fjerne de gjenværende stemplene. 11. Fjern Maxwell CSC-dekkbrettet fra instrumentet umiddelbart etter kjøringen for å forhindre fordampning av eluatene. Fjern elueringsrør som inneholder DNA, og lukk rørene. Merk: Etter den automatiserte renseprosedyren kan Maxwell CSC-dekkbrettet være varmt. Hvis du vil fjerne stativet fra instrumentplattformen, holder du stativet etter sidene. Sørg for at prøvene er fjernet fra instrumentet før kjøring av UV-sterilisering, for å unngå skader på den rensede nukleinsyren. 12. Fjern kassetter og stempler fra Maxwell CSC-dekkbrettet. Kasser som farlig avfall i henhold til institusjonens prosedyrer. Maxwell CSC-kassetter, CSC/RSC-stempler og elueringsrør må ikke brukes på nytt. 10 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

12 7. Etter rensing Fastslå om utbyttet og renheten til det rensede DNA-et oppfyller de angitte kravene for den aktuelle nedstrøms diagnostiske analysen før bruk i denne analysen. 8. Feilsøking For spørsmål som ikke besvares her, bes du kontakte ditt lokale Promega-kontor eller den lokale forhandleren. Kontaktinformasjon er tilgjengelig på: E-post: techserv@promega.com Symptomer Konsentrasjon som er lavere enn forventet En fullblodprøve på 300 µl som inneholder til hvite blodlegemer/ml, skal gi et utbytte på >80 ng/µl genomisk DNA i et elueringsvolum på 50 µl (som målt ved absorbans på 260 nm). Lavere renhetsnivå enn forventet En fullblodprøve på 300 µl som inneholder til hvite blodlegemer/ml eluert i et volum på 50 µl, skal produsere gdna med et A 260 / A 280 -forhold (renhet målt ved absorbans på 260 nm delt på absorbans på 280 nm) på 1,7 eller høyere, og et A 260 /A 230 -forhold (renhet målt ved absorbans på 260 nm delt på absorbans på 230 nm) på 1,5 eller høyere. Årsaker og kommentarer Blod som har gjennomgått flere frysing/tining-sykluser, kan ha forringet DNA. Bruk prøver som ble samlet inn og oppbevart under forholdene som oppgis i del 3. Fullblodprøve inneholdt et lavt antall av hvite blodlegemer. Mengden genomisk DNA fra blodprøver avhenger av antallet hvite blodlegemer som er til stede i prøven. Proteinase K-løsning ble ikke tilsatt, et ufullstendig volum av proteinase K-løsning ble tilsatt, eller proteinase K-løsningen var ikke effektivt blandet med blodprøven før tilsetting av lyseringsbuffer. Lysering og utbytte avhenger av komplett ekstraksjon med proteinase K. Hvis proteinase K ikke ble tilsatt i del 3.A, trinn 3, vil den resulterende blodprøven være rød. Proteinase K-behandlede prøver blir grønnlig brune, noe som kan brukes som en visuell indikator på at proteinase K ble tilsatt i prøven. Fullblodprøve ble ikke blandet før behandling. Husk å blande fullblodprøver før behandling for å sikre at hvite blodlegemer er suspendert. Proteinase K-løsning ble ikke tilsatt, et ufullstendig volum av proteinase K-løsning ble tilsatt, eller proteinase K-løsningen var ikke effektivt blandet med blodprøven før tilsetting av lyseringsbuffer. Lysering og renhet avhenger av komplett ekstraksjon med proteinase K. Hvis proteinase K ikke ble tilsatt i del 3.A, trinn 3, vil den resulterende blodprøven være rød. Proteinase K-behandlede prøver blir grønnlig brune, noe som kan brukes som en visuell indikasjonssjekk på at proteinase K ble tilsatt. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18

13 9. Referanse 1. Henry, J.B. (2001) Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 20th ed.,w.b. Saunders Company, Oppsummering av endringer Følgende endringer ble foretatt i 5/18-revisjonen av dette dokumentet: 1. Oppdatert med tilføying av kravene i EU IVD-direktivet (98/79/EF). (a) Amerikansk pat. nr. 6,855,499, europeisk pat. nr , japansk pat. nr og andre patenter. 2012, 2014, 2015, 2018 Promega Corporation. Med enerett. Maxwell er et registrert varemerke tilhørende Promega Corporation. Produkter kan være omfattet av anmeldte eller utstedte patentbeskyttelser, eller kan ha visse begrensninger. Det henvises til vårt nettsted for ytterligere informasjon. Alle priser og spesifikasjoner oppgis med forbehold om endringer. Produktutsagn oppgis med forhold om endringer. Kontakt Promega Technical Services eller se Promegas online-katalog for oppdatert informasjon vedrørende Promega-produkter. 12 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Grønn linje i USA: Faks: TM374 Revidert 5/18