Høyoppløselig LC MS NITO kurs i kromatografi og massespektrometri Trondheim Åse Marit Leere Øiestad

Transkript

1 Høyoppløselig LC MS NITO kurs i kromatografi og massespektrometri Trondheim Åse Marit Leere Øiestad 2 Oversikt Bakgrunn og definisjoner Prinsipper for ulike høyoppløsningsinstrumenter Eksempler fra rettstoksikologiske prøver Oppsummering 1

2 Bakgrunn 3 Måling av nøyaktig masse når man har tilstrekkelig god oppløsning gjør det mulig å begrense det store antallet av mulige molekylformler som kan gi opphav til en spesifikk molekylmasse. If the mass of an ion from a chemical compound is determined with sufficient accuracy, the elemental composition of that compound could be deduced Beynon JH. Qualitative analysis of organic compounds by mass spectrometry. Nature 174 (1954) Bakgrunn 4 Høyoppløsnings massespektrometri: Oppløsning > m/z for hvert ion måles med en nøyaktighet på flere desimaler (oftest 4). Kan skille mellom stoffer som har samme nominell masse. Til sammenlikning har kvadrupolinstrumenter typisk massenøyaktighet på 0 1 desimal. 2

3 5 Bruksområder Vanlige bruksområder for høyoppløsningsinstrumenter: Proteomikk/metabolomikk Non targeted screening av matvarer eller miljøprøver Analyse av urenheter innen f.eks. farmasøytisk produksjon Metabolittidentifisering Strukturoppklaringer Utvikling av nye legemidler Etterhvert også bruk innen kliniske/toksikologiske miljøer Høyoppløsningsmassespektrometre 6 Ulike typer instrumenter som kan gi høy oppløsning: Magnetsektorinstrumenter FT ICR MS (Fouriertransformasjon ionesyklotronresonans MS) TOF MS (time of flight MS) Orbitrap Magnetsektorinstrumenter var den første typen som ble brukt til å bestemme nøyaktig masse, men har ikke like god massenøyaktighet og oppløsning som de andre instrumentene. FT ICR MS krever superledende magnet og er kostbar i innkjøp og drift. TOF og Orbitrap mest brukt. Begge typer instrumenter har mulighet for å ha en konfigurasjon slik at man får MS/MS data. 3

4 Fordeler med høyoppløsningsmassespektrometri: 7 Sikrere identifisering av forbindelser vha. nøyaktig masse, isotopmønster og evt. fragmentering/spektra. Kan måle mange flere stoffer i samme kjøring enn med trippelkvadrupoler. «All of the ions, all of the time», men i praksis er det noen begrensninger. Kan legge til nye stoffer i metoden uten at det går utover kvaliteten og med liten grad av metodeutvikling (viktig å bestemme cut off). Retrospektiv analyse kan se etter nye stoffer uten å måtte analysere prøven på nytt. Mulig å få en tentativ bestemmelse av stoffer man ikke har referanser for. Ulemper med høyoppløsningsmassespektrometri: 8 Genererer store datafiler for hvert run. Krever mye datakraft. Kan ikke skille strukturisomerer hvis de ikke separeres kromatografisk. Dårligere følsomhet enn de beste trippelkvadrupolene. Krever en god del opplæring 4

5 Definisjoner I Isotoper er atomer som inneholder samme antall protoner, men ulikt antall nøytroner. Antallet protoner (atomnummeret) er det samme for hver isotop, f.eks. karbon 12, karbon 13 og karbon 14 har alle 6 protoner, men antallet nøytroner i hver isotop er forskjellig. Nominell masse = summen av massetallene til de hyppigst forekommende isotopene til elementene i molekylet Molekylmasse = summen av gjennomsnittsmassene til elementene i molekylet Monoisotopisk masse = summen av de eksakte massene til isotopene til elementene i molekylet Forbindelse C 11 H 12 Cl 2 N 2 O 5 Kloramfenikol (øyedråper) Nominell masse Molekylmasse Monoisotopisk masse Eksakt masse C 111 H Cl 14 2 N 16 2 O C carbon C C 1 H Cl 14 2 N 16 2 O 5 Massespektrometeret måler eksakte og diskrete verdier! Definisjoner I forts. Isotoper er atomer som inneholder samme antall protoner, men ulikt antall nøytroner. Antallet protoner (atomnummeret) er det samme for hver isotop, f.eks. karbon 12, karbon 13 og karbon 14 har alle 6 protoner, men antallet nøytroner i hver isotop er forskjellig. Nominell masse = summen av massetallene til de hyppigst forekommende isotopene til elementene i molekylet Molekylmasse = summen av gjennomsnittsmassene til elementene i molekylet Monoisotopisk masse = summen av de eksakte massene til isotopene til elementene i molekylet Forbindelse Nominell masse Molekylmasse Monoisotopisk masse Eksakt masse C 11 H 12 Cl 2 N 2 O 5 Kloramfenikol (øyedråper) C carbon H 1 hydrogen Cl chlorine N nitrogen O 8 oxygen 5

6 Isotoper element isotope abundance(%) exact mass average mass C 12 C 98.9% C 1.1% H 1 H >99.98% N 14 N 99.63% N 0.37% O 16 O 99.76% O 0.2% Cl 35 Cl 75.77% Cl 24.23% Definisjoner I forts. 12 Beregnet eksakt masse (monoisotopisk): Beregnet basert på massene til de individuelle isotopene for et gitt ion. Vanligvis isotopene med lavest masse. Metadon eksakt masse = 309,20926 Men vi måler som regel MH + ioner, dvs. eksakt masse = 310,21654 Nøyaktig masse (egentlig «målt eksakt masse»): Det vi måler med instrumentene (MH + ) 6

7 Massenøyaktighet 13 Massenøyaktigheten er forskjellen ΔM mellom eksakt masse og målt eksakt masse. Oppgis enten som mda eller som ppm (ΔM/M x 10 6 ). God massenøyaktighet er < 5 ppm eller < 3 mda Morfin (M=285,34), 5 ppm 1,4 mda Amfetamin (M=135,21), 5 ppm 0,68 mda Oppløsning 14 Masseoppløsningsevne: defineres som evnen til å separere ioner med nærliggende m/z Masseoppløsningen: er målet på separasjonen av de to toppene i massespekteret Oppgis gjerne som R=10 000, , etc. Høy oppløsning muliggjør måling av nøyaktig masse. gir sikrere identifisering. øker kvantitativ nøyaktighet («siler» bort andre forbindelser som ellers kunne forstyrret). 7

8 Masseoppløsning Masseoppløsning: R = m/ m Stor verdi for R: God masseseparasjon 50% m 10% m + m m Masseoppløsning vs. massenøyaktighet Lav oppløsning Lav nøyaktighet Høy oppløsning (R>20 000) Høy nøyaktighet (E<3 ppm) 8

9 Definisjoner II 17 Isobar: Atomære eller molekylære spesies med samme nominelle masse, men forskjellig eksakt masse. Isomer: Forbindelser som har samme molkylformel, men hvor atomene er fordelt ulikt Strukturisomere: atomene og de funksjonelle gruppene er satt sammen på ulike måter. Stereoisomere: bindingsstrukturen er den samme, men den geometriske posisjonen av atomer og funksjonelle grupper i rommet er ulik. Differensiering mellom isobariske forbindelser på grunnlag av nøyaktig masse 18 Metamfetamin MH + C 10 H 16 N = Eksakt masse Katinon MH + C 9 H 12 NO = Eksakt masse ΔM = 36.4 mda or 242 ppm 9

10 19 Bruk av retensjonstid for å skille isomere DMA=dimetoksyamfetamin E. Tyrkkö, A. Pelander, I. Ojanperä, Prediction of liquid chromatographic retention for differentiation of structural isomers, Analytica Chimica Acta, 720 (2012) 142. Mulige formler for små molekyler med elementene C, H, N, O, P, S og Cl 20 Grange and Sovocool, Liquid chromatography Time-of-Flight Mass Spectometry: Principles, Tools, and Applications for Accurate Mass Analysis. Edited by I. Ferrer, E.M. Thurman, Wiley

11 Bruk av isotopmønstre 21 A mass spectrometer capable of 3 ppm mass accuracy and 2% error for isotopic abundance patterns outperforms mass spectrometers that have less than 1 ppm mass accuracy as well as hypothetical mass spectrometers with 0.1 ppm mass accuracy that do not include isotope information in the calculation of molecular formulae. T. Kind, O. Fiehn. Metabolomic database annotations via query of elemental compositions: mass accuracy is insufficient even at less than 1 ppm. BMC Bioinformatics 7 (2006)

12 Time of flight TOF 23 time of flight = flyvetid Feltfri masseseparator kombinerer pulsing av ioner med et langt feltfritt flyverør Enkelt konsept for en gitt kinetisk energi vil lette ioner ha større fart og bruke kortere tid på å bevege seg til detektoren enn tunge ioner 24 P=760 torr Måler tid E = ½ M v P= 1 x 10-5 torr Detektor m i = mass of analyte ion z i = charge on analyte ion E = extraction field t i = time-of-flight of ion l s = length of the source l d = length of the field-free drift region e = electronic charge (1.6022x10-19 C) 12

13 Historikk TOF 25 Ideen ble introdusert av Stephens i 1946 Første instrument bygget av Cameron og Eggers i 1948 og benyttet til å studere kvikk sølvioner Forbedringer i oppløsning pga. romlig fokusering av ionene Wiley og McLaren, 1955 Første kommersielle instrument tilgjengelig i Historikk TOF Refokusering av spredning av ioneenergi vha. reflektron (ionespeil) Mamyrin årene kombinasjon av matriks assistert laser desorpsjon (MALDI) og TOF Kobling til kontinuerlige ionkilder Dawson og Guilhaus i 1989, Dodonov i 1991 Orthogonal axis time of flight (oa TOF) 13

14 oa TOF 27 J.C. Fjelsted, Liquid chromatography Time-of-Flight Mass Spectometry: Principles, Tools, and Applications for Accurate Mass Analysis. Edited by I. Ferrer, E.M. Thurman, Wiley Høytoppløsende TOF instrumenter Tilgjengelig i mange år Primært brukt til strukturoppklaring og identifikasjon av metabolitter Tidligere lite egnet til kvantitative bioanalytiske applikasjoner: Ikke optimale scanhastigheter Begrenset dynamisk område Dårlig følsomhet 14

15 29 Spesifikasjoner for dagens HR TOF Masseoppløsningsevne Massenøyaktighet ~ 1 5 ppm Masseområde > m/z Scanhastigheter Hz (muliggjør kobling til UPLC/UHPLC) Gode isotopfordelingsmønstre Følsomhet som nærmer seg trippelkvadrupoler Dynamisk område på inntil 5 dekader Mulig å bruke kvantitativt Vanlig å ha koblet til en kvadrupol, slik at man kan få MS/MS data Orbitrap 30 Orbitrap analyzer = en elektrostatisk felle Ionene fanges i et elektrostatisk felt En sentral elektrode holdes på en høy spenning En ytre elektrode er splittet opp og kan detektere en strøm (image current) fra ionepakker som beveger seg inne i fellen. 15

16 Orbitrap koblet til kvadrupol Tverrsnitt av C trap en og Orbitrap analysatoren. Ionene kommer inn i analysatoren litt skjevt (off axis) Feltet inne i fellen får ionepakkene til å oscillere Det dannes ringer som gir opphav til en strøm på de ytre elektrodene. Frekvensen til de harmoniske oscillasjonene er proporsjonal med ionene m/z. ω / Bruker fouriertransformasjon for å omdanne frekvenssignalet til et spektrum Thermo Fisher Scientific (Bremen) Artwork by Thermo Fisher Scientific 16

17 Historikk Orbitrap 33 Ideen om orbital innfanging (orbital trapping) ble fremsatt av Kingdon i Det ble gjort forsøk med å fange partikler i elektro statiske felt i tiårene som fulgte, men oppsettene var ikke gode nok til at dette kunne brukes til å separere masser. På midten av 90 tallet begynte Dr. Alexander Makarov å jobbe med høyoppløsning MS, og etter hvert koblet han sammen teknikker fra orbital trapping, image current deteksjon fra FT ICR MS og injeksjonsmetoder fra TOF MS, hvilket endte opp i det første Orbitrap instrumentet Historikk Orbitrap 34 Begrepet «Orbitrap analyzer» ble første gang presentert på ASMS (det amerikanske MS møtet) i Første kommersielle instrument lansert på ASMS i Det var da 20 år siden sist gang en fundamentalt ny masseanalysator ble lansert. I 2011 ble Q Exactive lansert, som koblet tandem massespektrometri med orbitrap, og dermed ga mulighet for å ta opp MS/MS spektra. 17

18 Spesifikasjoner for Orbitrap 35 Masseoppløsningsevne fra (avhengig av instrumenttype og scanhastighet omvendt proporsjonal med opptakshastigheten) Massenøyaktighet ~ 1 ppm 3 ppm Masseområde 4000/6000 m/z Scanhastigheter opptil 18 Hz (muliggjør kobling til UPLC/UHPLC) Følsomhet som nærmer seg trippelkvadrupoler Dynamisk område på inntil 5 dekader Mulig å bruke kvantitativt Modeller med tilknyttet kvadrupol tilgjengelig Masseoppløsning vs. opptakshastighet Orbitrap Q Exactive TOF Effect of MS Scan Speed on UPLC Peak Separation and Metabolite Identification: Time of Flight HRMS vs. Orbitrap Yun W. Alelyunas, Mark D. Wrona, Kevin Cook, Stephen McDonald, Paul D. Rainville Waters Corporation, Milford, MA, USA 18

19 Bruk av fragmentering Nøyaktig masse, isotopmønster, retensjonstid og evt. metabolittmønster gir en foreløpig identifikasjon, men ikke nødvendigvis sikker bekreftelse 37 Økt sikkerhet ved bruk av fragmentering (kan evt. skille isomere) Collision induced dissociation (CID) Q TOF MS In source CID singel TOF MS. Øker spenningen for kapillæret og skimmer i ionekilden. Higher energy collisional dissociation (HCD) spesifikk for Orbitrap. Gir informasjon som kan brukes til strukturbestemmelse. Det finnes i dag mange bibliotek med massespektra som kan brukes rutinemessig, men kan være forskjeller mellom instrumenttyper. 38 Prøveopparbeidelse/kromatografi Prøveopparbeidelse er fortsatt viktig ser ikke stoffer som ikke lar seg ekstrahere eller ionisere! Bruk av retensjonstid i databasesøk gir signifikant økt spesifisitet i forhold til nøyaktig masse alene. Dette gjør det lettere å skille isobariske forbindelser. => krever standardisert kromatografi med høy oppløsningsevne og reproduserbarhet 19

20 MSMS Library Search for High Confidence Compound ID Isomers are identified MSMS spectra contain structural information 39 Measured Comparison Library - Benzoylecgonine! - Roletamide? - Norcocaine? - Dexamisole? - Tetramisole? Tetramisole! - Cocaine? Cocaine! - Fenoterol? - Hydromorphinol? - Scopolamine? x x x Cpd 360: 8.567: +ESI Product Ion (8.567 min) Frag=150.0V CID@22.3 ( [z=1] -> **) L353_10_basDCM_5µl.d Cpd 360: 8.567: +ESI Product Ion (8.567 min) Frag=150.0V CID@22.3 ( [z=1] -> **) L353_10_basDCM_5µl.d Cocaine C17H21NO4 + Product Ion Frag=150.0V CID@20.0 ForensicsLib_Stand0912_plus_ cdb Measured Comparison Library Counts vs. Mass-to-Charge (m/z) Gjengitt med tillatelse fra Johnny Tran, Matriks 40 Kalibrering God kalibrering er alfa og omega for nøyaktig massebestemmelse Ekstern kalibrering av instrumentet Kontrolleres daglig, men kan ofte gjøres med noen dagers mellomrom/ukentlig Intern kalibrering vha. lock spray e.l. Korrigering av massene mot kjente masser for hvert eneste spektrum 20

21 41 Databaser/bibliotek Moderat størrelse database vs. oversized databaser Moderat: masser Oversized > masser De største databasene gir opphav til mange falske positive funn Nøyaktig teoretisk masse legges inn i enkle regneark/lister Kan også ha informasjon om retensjonstid, fragmenter og spektra 42 Qualitative and Quantitative Analysis Unknown Screening what s in the sample? Target Screening are specific compounds present & how much? Quantitation how much compound(s) is in the sample? Non-Selective Selective Gjengitt med tillatelse fra Johnny Tran, Matriks 21

22 43 Toksikologisk screening Strategi 1 STA Systematic toxicological analysis GUS (general unknown screening) Leter etter alt, bruk av lister, bibliotek etc Strategi 2 Multi target screening Spesifikke komponenter Bruksområder for Q TOF ved avdeling for rettsmedisinske fag, OUS Rutinescreening av obduksjonsprøver Identifikasjon av ulike beslag Spesialanalyser (uvanlige stoffer eller matrikser, se etter «alt mulig») Metabolismestudier av nye psykoaktive stoffer (2018) 22

23 Screening av obduksjonsprøver Ca saker i året Alle prøver screenes (targeted) for et utvalg stoffer 4 alkoholer inkludert etanol GC FID 31 misbruksstoffer slik som opiater, amfetaminer, kokain, benzodiazepiner, z hypnotica, metadon, buprenorfin, LSD, GHB etc. UHPLC MS/MS 11 nye psykoaktive stoffer (NPS), bl.a. flere designer benzodiazepiner UHPLC MS/MS 56 legemidler Q TOF Repertoar obduksjonsscreening Q TOF Positiv mode 56 komponenter Antiepileptika Antipsykotika Antidepressiva Antihistaminer Anxiolytika Analgetika Betablokkere Kalsiumantagonister Negativ mode 6 komponenter Salisylsyre Ibuprofen Pentobarbital Fenobarbital Tiopental Fenytoin 23

24 Screening av obduksjonsprøver I tillegg utføres det et søk på Q TOF data mot en database med ca. 600 stoffer med retensjonstid (legemidler og narkotiske stoffer som ikke forekommer så ofte eller er nye) % av sakene er positive for ett eller flere stoffer. Screening av obduksjonsprøver 100μL fullblod opparbeides på Hybrid SPE PPT kolonner og 3μL injiseres 19min lang gradient i positive mode, 3,5 min i negativ mode Instrumentparametre: Positive ioner AutoMSMS med «Preferred list», negative ioner TOF 2GHz extended dynamic range masseområde: m/z high sensitivity mode Algoritme Find by Formula 24

25 Screening av nye psykoaktive stoffer (ikke cannabinoider) eller stoffer i lave konsentrasjoner 500μL fullblod væske væske Basisk væske væske ekstraksjon med etylacetat/heptan 4 µl injiseringsvolum Som regel positiv mode Ellers likt med forrige metode Database og bibliotek(pcdl) Forensic/ Tox, Broecker, Herre & Pragst Database (MS) ~ 9000 forbindelser Molekylmasser Molekylformler Strukturformler Bibliotek (MS/MS) ~3000 forbindelser Retensjonstider CID spektrum Kollisjonsenergier: 10, 20 og 40 ev Nye komponenter kan legges til RT kan legges inn for ekstra identifikasjon Kan lage flere mindre PCDL for spesifikke søk 25

26 Bruk av Q TOF til spesialanalyser I noen saker ønsker vi å se etter et større repertoar av stoffer enn de vi vanligvis analyserer i rutinen, for eksempel insektsmidler, veterinærmedisiner, giftstoffer, stoffer vi ikke har renstoffer til eller beslag. Analyse på Q TOF ene og sammenlikning med en stor database/bibliotek kan da hjelpe oss å løse noen saker, andre ganger finner vi ikke noe svar. «CSI light» Har vi tilgang på molekylformelen kan vi screene etter stoffer vi ikke har renstoffer til og som heller ikke finnes i biblioteket, for eksempel designerdrugs eller metabolitter eller mer uvanlige legemidler

27 Spesialanalyser «Kjente ukjente» Har bibliotekspekter/eksakt masse i databasen Mangler renstoff mangler retensjonstid «Ukjente» Stoffer som ikke finnes i biblioteket/databasen Mulighet for generering av molekylformel MSMS spektertolkning Beslag piller, pulver, væsker, plantemateriale etc. Saker med spørsmål om bekreftelse av identitet (som regel fra Kripos) Analyseres nesten alltid med Q TOF Har vanligvis spekter og/eller RT Ved behov for kvantitative svar benytter vi LC MS/MS. Må da ha renstoff. Ukjente prøver som ikke er biologiske Analyseres alltid med Q TOF først 27

28 Eksempel 1: hvitt/rosa pulver Funnet ved en behandlingsinstitusjon. Pulveret ble identifisert som diklazepam et benzodiazepin designerdrug. Første gang vi fant dette stoffet. Det er nå en del av rutinerepertoaret vårt, med hyppige funn. Eksempel 2: tabletter og kapsler Yrkeslivssak med spørsmål om identifisering av diverse kapsler og tabletter Påvist ulike legemidler og koffein Ingen narkotiske stoffer funnet 28

29 Biologiske prøver Saker med spørsmål om gitte stoffer som ikke inngår i vårt vanlige repertoar Eks. spesielle legemidler, kontrastmidler, giftstoffer, legemidler i bruk i utlandet m.m. Urinprøver med positive utslag på immunologi hvor vi ikke finner noe med våre vanlige metoder Eks. designerbenzodiazepiner Saker hvor vi skal se etter «alt mulig» Eksempel 3: urinprøve med utslag på benzodiazepiner på immunologisk screening Positiv urinprøve på immunologisk screening Negativ på bekreftelsesmetode for benzodiazepiner i urin Analysert på Q TOF Metabolitt spekter i PCDL (7 aminonorflunitrazepam) «Moderstoff» også funnet. Masse til Fonazepam (Ndesmetylflunitrazepam) lagt inn i databasen ikke lenge før på bakgrunn av opplysninger fra det europeiske «early warning» systemet. 29

30 Eksempel 3: urinprøve med utslag på benzodiazepiner på immunologisk screening 30

31 Eksempel 4: kontrastmidler i bukvæske Spørsmål om å se etter virkestoff fra to ulike kontrastmidler Iohexol (Omnipaque) Amidotrizoinsyre (Gastrografin) Høye molekylvekter pga. 3 jodatomer Iohexol m/z=822,8803 Amidotrizoinsyre m/z=613,7696 Hadde spekter for begge stoffene. Eksempel 5: designerfentanyl En person ble funnet død etter å ha inntatt en væske som var merket Xanax (=alprazolam, benzodiazepin). Vi fant ikke alprazolam ved analyse. Andre funn i saken var lite sannsynlige som dødsårsak. Videre analyser med Q TOF ga treff for furanylfentanyl. Prøven ble deretter kvantifisert med UHPLC MS/MS. Furanylfentanyl 31

32 Oslo University Hospital, Clinic of laboratory medicine, Forensic sciences Eksempel 6: dødsfall pga. NPS Mottatt blodprøve fra en ung mann som døde uventet. Opplysninger om at han hadde brukt stoffer kjøpt på internett. Funn av to poser med hvitt pulver, merket hhv. 4 FMA og 3 MMC, men dette materialet var ikke sendt med. 32

33 Eksempel 6: dødsfall pga. NPS Standardrepertoaret viste at prøven var positiv på paracetamol og kodein Prøven ble også analysert for nye psykoaktive stoffer (NPS) med UPLC MS/MS. Vi hadde da renstoff for 4 MMC (= mefedron), men ikke 3 MMC eller 4 FMA. Stor topp for bromodragonfly med sur mobilfase, men ikke riktig retensjonstid med basisk mobilfase. Eksempel 6: dødsfall pga. NPS Analyse med Q TOF viste en stor topp ved ca. samme RT som bromodragonfly, men med annen molekylformel. Ingen treff i databasen. Intens søking på internett ga forslag om AH 7921, en opioid reseptor agonist med ganske like egenskaper som morfin. Renstoff ble bestilt og identitet bekreftet. 33

34 Erfaringer med bruk av LC QTOF MS Prøveopparbeidelse/kromatografi Massenøyaktigheten er dårligere for stoffer med enten veldig lav intensitet eller veldig høy intensitet. Prøveopparbeidelse er fortsatt viktig. Vi ser ikke stoffer som ikke lar seg ekstrahere eller ionisere. Bruk av retensjonstid i databasesøk gir signifikant økt spesifisitet i forhold til nøyaktig masse alene. Dette gjør det lettere å skille isobare forbindelser. 34

35 Bruk av fragmentering Økt sikkerhet ved bruk av fragmentering. Kan få strukturinformasjon fra MS/MS spektrene. Kan skille mellom isomere hvis de har ulike fragmenter. Veldig fornøyde med å ha Q TOF, ikke bare TOF. Fordeler med QTOF MS Kortere tid til metodeutvikling da det ikke er nødvendig å optimalisere MRM overganger Mulig å reprosessere lagrede data for å se etter andre forbindelser All of the ions, all of the time Kan se på mange flere stoffer samtidig enn med trippelkvadrupoler 70 35

36 Fordeler med QTOF MS Ved tilgang på databaser eller bibliotek kan man få forslag til identifikasjon av stoffer som man i liten grad ville hatt mulighet til å finne ut av ellers. Men vi kjøper inn renstoff og bekrefter mot dette i etterkant. LC QTOF MS er et utrolig nyttig verktøy innen rettstoksikologisk analyse som vi bruker til nesten alt som er utenfor det vanlige rutinerepertoaret. Det tar tid å bli god i å søke på kryss og tvers i store databaser og å benytte seg av alle de ulike måtene å søke på. 36

37 Takk til Unni Johansen, Kristin Opsal Svendsen, An Magritt Haneborg, Inger Ann Hansen, Siv Jarvis Munkeby og Elisabeth Leere Øiestad, RMF, OUS Johnny Tran, Matriks Léon Reubsaet, Farmasøytisk institutt, UiO 37