VHSV Storfjord 2007-2008 Are Nylund Institutt for biologi Universitetet I Bergen 2008
VHS virus utbredelse
Group I: European inland waters and northern marine coastal areas Group II: Marine isolates from the baltic sea Group III: Isolates from the North sea Group IV: North America and Japan Einer-Jensen et al 2004
VHS virus Naturlige verter: Flere arter marin fisk (sild, brisling, torsk, øyepål etc,) og laksefisk. Spredning: Horisontal (Vertikal?) Forekomst: Vanlig hos marin fisk (forekomst i oppdrett er lite kjent). Naturlig spredning: Horisontalt i sjø (predasjon, gyting) Oppdrett: Horisontal spredning (kanskje vertikal?)
Prevalens av VHS virus Opshaugvik - 28.0.07 VHS virus 2/30 = 6,7 % + Aeromonas sp., Chlamydia spp., IPNV +++ - 13.12.07 VHS virus 11/22 = 50 % - 14.02.08 VHS virus 1/35 = 2,8 % + IPN virus, + M.viscosa, V. wodanis, ++ Overåneset vest 27.02.08 VHS virus 2/10 Overåneset sør 27.02.08 VHS virus 4/10 + IPN virus
? Vintersår
Chlamydia, Ny art
NB: Flere mulige årsaker til dødelighet i disse anleggene.
Gener N Nucleocapsid protein P Phosphoprotein M Matrix protein G- Glycoprotein NV- Non- virion protein L Large protein (polymerase)
L protein gene 71 CAB44726 NP 049550 AAF04486 71 AAF04480 CAB59222 CAB59217 VHSV, G I 99 CAA08837 CAB40833 BAD72126 VHSV, G IV VHSV G III, Storfjord Novirhabdovirus AAD56771 NP 050585 Snakehead rhabdovirus CAA61500 NP 919035 IHNV Hirame rhabdovirus BAA24082 Rabies YP97 Bat Lyssavirus 98 YP 142354 Mokola virus YP 238534Tupaia rhabdovirus YP 802942 SC rhabdovirus 99 NP 065409 Bovine ephemeral fever virus ABF06664 ABW24037 ABD67436 AAK60424 86 NP 116748 CAC51337 Spring viremia os carp virus AAA48441 CAM84182 CAH17548 Isfahan virus Vesicular stomatitis virus 0.1
Gen organisering
N protein gene G protein gene 82 Hvitting, Norsjøen, 1997 Torsk, Nordsjøen,, 1993 Piggvar, Irland, 1997 Øyepål, Nordsjøen, 1998 81 Hyse, Nordsjøen 1995 VHSV III Sild, Skagerrak 1997 93 Regnbueørret, Storfjorden 2007 96 Ål, Frankrike 1987 98 Piggvar, Skottland 1994 VHU28798 AF345859 Utgruppe AY546621 0.01
98 82 AY546630 AY546632 AY546629 95 AY546620 Sild Skagerrak VHSV III, 1997 VHSV Regnbueørret 2008 Hvitting Nordsjøen VHSV III, 1997 Ål Frankrike VHSV III, 1987 97 Piggvar Skottland, VHSV III VHU28798 99 91 84 VHSV Ib Regnbueørret Kattegatt, 2000 VHSV Sild MR 2008 VHSV torsk MR, 2008 VHSV Ib Sild Kattegatt, 2000 AY546621 AY546617 VHU28800 AY546592 AY546596 0.1 AF345859
Einer-Jensen et al 2004 Substitusjonsrate til VHS virus i sjø basert på 1524 nt fra G protein genet: 7,06 ± 10-4 (4,51 ± 10-5 ) per kodon/år Støtte for molekylær klokke Denne raten tilsvarer 0,36 nt/år i dette genet
G protein genet Frankrike (isolat: FR-07-71) 1971 Frankrike (isolat: 23.88) 1988 17 år kun 3 nt i forskjell (1074 nt), (forventet: 4,4 nt) Finland 2000 2004, G + NV protein genene 2000 (Ac.no: AM086354) 2002 (Ac.no: AM086366, AM086370, AM086376) NB: Ingen forskjeller i sekvens. Opshaugvik - Overåneset N P protein gener (1050 nt) (NB: ikke samme gen) 3 nukleotider i forskjell Disse kan ha skilt lag 12 år tidligere (hvis molekylær klokke)
Regnbueørret Naturlig populasjon VHSV III
Regnbueørret Naturlig populasjon VHSV III
Regnbueørret Naturlig populasjon VHSV III
VHS virus type III, smitteforsøk Henrik Duesund 2008 V = ip smittet regnbueørret (10 9 v/ml) KV = ko-habitant smitte (kontroll) BV = badsmitte (2,0 x 10 6 v/ml) BK = Bad kontroll (cellekulturmedium) H = Bad med homogenat Ikke dyrkbar mengde VHS virus
% Dødelighet 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 V = 48,4 % BV = 44,1 % H = 41,0 % KV = 30,0 % K = 2,9 %
% Dødelighet justert Kun VHS virus positive 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 BV = 44,1 % V = 41,9 % H = 36,1 % KV = 23,3 % K = 0,0 %
Dødelighet justert: Ct verdi < 30 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 H = 21,3 % KV = 13,3 %
VHS virus ved terminering Dag 53 etter smitte V (N = 11) Alle negative KV (N =16) Alle negative H (N = 37) 3 svakt positive (Ct > 37) BV (N = 33) 2 svakt positive ELF = 15, VHSV = 30 BK (N = 28) ELF = 18, VHSV = 38 Alle negative
Kontroll fisk Ventrikkel
Nyre Kontroll fisk
Badsmittet, BV16 Ct: ELF = 16, VHSV = 19
Badsmittet Ct: ELF = 15,2 VHSV = 15,3
Badsmittet, BV28, Ct: Elf =20, VHSV = 37, IPNV = 28
Badsmittet Lever
Homogenat, Badsmitte, H9 Ct: ELF = 16 VHSV = 31 IPNV = 30
Ko-habitant smittet, KV2 Ct: ELF = 14 VHSV = Neg IPNV = 32
Bakterier Vibrio splendidus Aliivibrio wodanis Moritella viscosa Aliivibrio spp.
Konklusjon Flere mulige årsaker til dødelighet i både anlegg og i smitteforsøk VHS virus er en av årsakene Hudskader (bakterier), gjellebetennelse, IPN virus, parasitter, +++ er andre faktorer som er av betydning. Prosentvis fordeling (betydning) er ikke klar.
VHS virus kontroll Utslakting av VHS fisk Overvåking av VHSV smittet fisk i sjøanlegg Kontroll med stressfaktorer i produksjon Separate generasjoner Minimum avstand mellom sjøanlegg (x meter) Seleksjon av VHSV fri stamfisk Kontroll av smolt før sjøsetting/flytting Vaksine nødvendig naturlige reservoar i sjø
Marint reservoar Sjøanlegg B Marint reservoar? Sjøanlegg A