PREANALYTISKE UTFORDRINGER VED HORMONANALYSER Astrid Torvestad, fagbioingeniør for automatiserte analyser og kvalitetsmedarbeider ved Hormonlaboratoriet, medlem av preanalytisk fagsenter Hormoner Læren om hormoner kalles endokrinologi. Samlebetegnelse på ulike kjemiske substanser/signalstoff kroppen produserer for å sette i gang prosesser i bestemte deler av kroppen. Hormoner produseres i endokrine kjertler eller sekretoriske nerveceller og transporteres til mottakerceller via blodbanen. Samspill mellom hormoner er komplekst, og det finnes både negativ og positiv feedbackmekanismer mellom ulike hormoner. Lave konsentrasjoner i blodet måles ofte i pmol/l eller nmol/l. Sammenlignet med f.eks karbamid(mmol/l). 1
Preanalytiske utfordringer ved Hormonanalyser Vil gjennomgå: Prøvemateriale, pasientforberedelse og kliniske opplysninger Døgnvariasjon (ACTH, kortisol) Syklusvariasjon (kjønnshormon som LH, FSH, ØST, Progesteron) Sensitive analytter (Fryseprøver) Holdbarhetsforsøk Prøvemateriale, pasientforberedelse og kliniske opplysninger Prøvemateriale: Serum, plasma, urin, spytt, aspirat Pasientforberedelser er viktig for å få riktig prøveresultat Kliniske opplysninger er vesentlige for god resultatvurdering av legene ved Hormonlaboratoriet 2
Døgnvariasjon Morgen og Kveld Noen analytter har døgnvariasjon, og derfor vil referanseområdet variere med hvilken tid på døgnet det er. Viktig å notere tidspunkt prøven er tatt. Dersom det er registrert både morgen og kveldskode på samme rekvisisjon, skal disse registreres på ulike labnumre med tilhørende klokkeslett. Problem med at analysen registreres på forhånd, men tas i poliklinikk på andre tidspunkt, uten at analysekoden endres. Morgen og Kveld Eksempel ACTH(plasma) Ref.område: ACTM kl. 07 10 2 11,6 pmol/l ACTK kl. 18 22 < 4,6 pmol/l ACT resten av døgnet < 11,6 pmol/l Kortisol(spytt) Ref.område: SKKORTM kl. 07 09 < 22,0 nmol/l SKKORTK kl. 22 24 < 2,8 nmol/l SKKORT resten av døgnet < 22,0 nmol/l 3
Syklusvariasjon Viktig med rekvirentopplysninger i forhold til hjelp med tolkning av analysesvar. FSH, LH, Østradiol og Progesteron varierer mye ila. Menstruasjonssyklus. Sensitive analytter fryseprøver HL analysering mange sensitive analytter, som vi betegner som fryseprøver. Mange har ulik prøvehåndtering, og det kan være vanskelig å ha oversikten. Prøver tas i hele Helse Vest, ofte en utfordring å komme gjennom med riktig informasjon om prøvetaking. Hvordan prøvene skal tas og holdbarhet er oppdatert på analyseoversikten.no. 4
Fryseprøver Eksempel Vanlig feil: Mottatt 1 rør m/frosset plasma uten analyse påskrevet. Rekvirent ønsker både Renin og ACTH. Renin og ACTH har veldig forskjellig preanalytisk behandling, men er begge plasma. HL kommenterer bort mange prøver i slike tilfeller. Renin er veldig sensitiv for kjøl, mens ACTH er sensitiv for romtemperatur. Renin tas på romtempererte rør og sentrifugeres vanlig, mens ACTH tas på kjølte rør og kjølesentrifugeres. Dersom Renin tas på kjølte rør, eller oppbevares kjølig før innfrysning, vil det bli kryoaktivering av prorenin til renin, og dermed gi høyere konsentrasjon. Prorenin er 10x høyere i blod enn renin. Holdbarhet av prøvemateriale Mye motsigende i litteraturen ang. holdbarhet av hormoner. Lite litteratur på holdbarhet av de sjeldneste analyttene. Anbefalt prøvemateriale kan variere fra metode til metode, også oppgitt holdbarhet. For selvlagde metoder utføres egne holdbarhetsforsøk. For de analysene som har oppgitt holdbarhet i pakningsvedlegg, prøver vi å verifisere holdbarheten som er oppgitt. Hvor holdbarheten er hentet fra er i noen tilfeller usikkert. 5
Holdbarhetsforsøk PTH eksempel Laboratorium Metode Matriks Oppgitt holdbarhet Referanse Hormonlab HUS Immulite 1000 EDTA plasma og serum Pakningsvedlegg Hormonlab HUS Immulite 2000xpi Serum (eller plasma) Pakningsvedlegg Hormonlab Aker Serum Fryseprøve Furst EDTA plasma Ikke fryseprøve St. Olavs Roche Modular E. Serum Fryseprøve. Prøven taes på serumrør uten gel. Etter sentrifugering avpipetteres serum og sendes frosset til laboratoriet. UNN Tromsø Plasma EDTA plasma med eller uten gel Holdbar 7 dager ved 2 8 ºC. Prøvematerialet kastes etter 7 dager Arup Ikke oppgitt Lavender (EDTA) or pink 2 døgns holdbarhet før frysing. (K2EDTA). Also acceptable: Green (sodium or lithium heparin) plain red or serum separator tube. Ambient: 8 hours; Refrigerated: 48 hours; Frozen: 6 months Mayo Ikke oppgitt Preferred: Serum gel Acceptable: Red top Fryseprøve. Quest Ikke oppgitt Serum Fryseprøve. Spin to separate serum and transfer to plastic transport tube. Freeze immediately and submit to laboratory frozen. Room temperature: Unacceptable. Refrigerated: Unacceptable. Frozen: 6 months Karolinska Ikke oppgitt EDTA plasma Ikke fryseprøve Statens Serum Institutt (København) Ikke oppgitt Plasma. PST rør, Li heparin med gel Heparin plasma «Kan prøven ikke sendes samme dag skal den opbevares på køl (2 8 C) og sendes hurtigst muligt.» Videre planer Hormon Ønske om å utføre flere holdbarhetsforsøk, og spesielt for de sensitive analyttene vi har. Bacheloroppgave innen holdbarhet på fryseprøver neste år? 6