COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test, version 2.0

COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test, version 2.0 FOR BRUK TIL IN VITRO-DIAGNOSTIKK. COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HI2CAP 48 Tests P/N: 05212294 190 HIV-1 Test, v2.0 COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan PG WR 5.1 Liters P/N: 03587797 190 Wash Reagent TILTENKT BRUK COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, versjon 2.0 (v2.0) er en in vitro nukleinsyreamplifikasjonstest for kvantitering av HIV-1 (Human Immunodeficiency Virus Type 1)-RNA i humant plasma ved bruk av COBAS AmpliPrep-instrumentet til automatisk prøveanalysering og COBAS TaqMan -analysator eller COBAS TaqMan 48-analysator til automatisk amplifikasjon og deteksjon. Testen kan kvantitere HIV-1-RNA i området 20 10 000 000 kopier/ml. Én kopi av HIV-1-RNA tilsvarer 1,7 ± 0,1 internasjonale enheter (IU) basert på WHO 1. internasjonale standard for HIV-1-RNA for NAT (nukleinsyrebaserte teknikker) (NIBSC 97/656) 36. Testen skal brukes sammen med kliniske funn og andre laboratoriemarkører for sykdomsprogresjon i forbindelse med klinisk oppfølging av pasienter som er smittet med HIV-1 gruppe M og HIV-1 gruppe O. Testen kan brukes til å vurdere pasientens prognose ved å måle baseline-hiv-1-rna-nivået eller til å overvåke effekten av antiretroviral behandling ved å måle endringer i HIV-1-RNA-nivåer i EDTA-plasma i løpet av den antiretrovirale behandlingen. COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 skal ikke brukes som screeningtest av blod eller blodprodukter for tilstedeværelse av HIV-1 eller som en diagnostisk test for å bekrefte tilstedeværelse av HIV-1-infeksjon. OPPSUMMERING OG FORKLARING AV TESTEN HIV (Human Immunodeficiency Virus) er det etiologiske agenset som forårsaker AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) 1-3. HIV-infeksjon kan overføres ved seksuell kontakt, via infisert blod eller infiserte blodprodukter eller fra en infisert mor til fosteret 4. Tre til seks uker etter HIV-eksponering utvikler den smittede personen vanligvis et kortvarig akutt syndrom som kjennetegnes av influensalignende symptomer og høye nivåer av viremi i perifert blod 5-8. For de fleste smittede personer blir dette etterfulgt av en HIV-spesifikk immunreaksjon og en reduksjon i plasmaviremi, vanligvis innen fire til seks uker fra symptomstart 9,10. Etter serokonvertering kommer smittede personer til å gå inn i en typisk klinisk fase som er stabil og symptomfri. Denne fasen kan vare i flere år 11-13. Den asymptomatiske perioden kjennetegnes av persisterende, lavt virusnivå i plasma 14 og en gradvis reduksjon av CD4 + T-lymfocytter, noe som fører til en alvorlig immundefekt, multiple opportunistiske infeksjoner, maligniteter og død 15. Selv om virusnivået i perifert blod er relativt lavt under den asymptomatiske fasen av infeksjonen, ser virusreplikering og clearance ut til å være dynamiske prosesser der en høy aktivitet av virusproduksjon og infeksjon av CD4 + -celler balanseres av virusclearance, celledød blant infiserte celler og nyproduksjon av CD4 + -celler i like stor grad, noe som fører til relativt stabile nivåer av både virus i plasma og CD4 + -celler 16-18. Avsnittet for informasjon om dokumentrevisjon er plassert ved slutten av dette dokumentet. 05447992001-04NO 1 Doc Rev. 5.0

Kvantitative målinger av HIV-virus i det perifere blodet har vist at høyere virusnivåer kan korrelere med økt risiko for klinisk progresjon av HIV, og at reduksjon av virusnivå i plasma kan assosieres med nedsatt risiko for klinisk progresjon 19-21. Virusnivået i perifert blod kan kvantiteres ved måling av HIV p24-antigenet i serum, ved kvantitativ dyrking av HIV fra plasma, eller ved direkte måling av virus-rna i plasma ved hjelp av nukleinsyreamplifikasjons- eller signalamplifikasjonsteknologier 22-26. p24-antigenet er det primære kjerneproteinet i HIV og finnes enten fritt eller bundet til anti-p24-antistoff i serum. Fritt p24-antigen kan måles med kommersielt tilgjengelige enzymimmunanalyser (EIA-tester), selv om nytteverdien av p24-antigenet som markør for virusmengde er begrenset, da antigenet kun kan påvises hos 20 % av de symptomfrie pasientene og hos 40 50 % av pasientene med symptomer. Prosedyrer for å spalte antigen-antistoff-komplekser forbedrer sensitiviteten til p24-antigentestene, men virusproteinet kan fortsatt ikke påvises hos de fleste symptomfrie pasientene 22. Infeksiøst HIV i plasma kan dyrkes ved inokulasjon i aktiverte mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) fra normale donorer. Kvantitering oppnås ved inokulering av PBMC med serielle fortynninger av plasmaprøven. Kvantitativ dyrkning har begrenset nytteverdi for overvåking av virusnivåer hos smittede personer, da kun en brøkdel av viruspartikler er infeksiøse in vitro. Infeksiøse virus kan ofte ikke påvises hos symptomfrie individer 22. HIV RNA i plasma kan kvantifiseres ved hjelp av nukleinsyreamplifikasjon, som f.eks. polymerasekjedereaksjon (PCR) 27-29. COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 bruker PCR-teknologi for å oppnå maksimal sensitivitet og dynamisk område for kvantitativ påvisning av HIV-1-RNA i plasma antikoagulert med EDTA. TESTPRINSIPPER COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 er en nukleinsyreamplifikasjonstest for kvantitering av HIV-1 (Human Immunodeficiency Virus Type 1)-RNA i humant plasma. COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 er basert på tre hovedprosesser: (1) prøvepreparering for å isolere HIV-1-RNA, (2) revers transkripsjon av mål-rna for å generere komplementær DNA (cdna) og (3) samtidig PCR-amplifikasjon av mål-cdna og deteksjon av splittede dobbelmerkede og målspesifikke oligonukleotiddeteksjonsprober. COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 muliggjør automatisert prøvepreparering etterfulgt av automatisert revers transkripsjon, PCR-amplifikasjon og deteksjon av mål-hiv-1-rna og HIV-1-kvantiteringsstandard (QS) armored ("pansret") RNA. Master Mix-reagenset inneholder primere og prober som er spesifikke for både HIV-1-RNA og HIV-1-QS-RNA. Master Mix-reagenset er utviklet for å sikre en likeverdig kvantitering av gruppe M-subtyper av HIV-1 og av HIV-1 gruppe O. Deteksjonen av amplifisert DNA utføres ved å benytte målspesifikke og QS-spesifikke dobbelmerkete oligonukleotidprober som gir uavhengig identifisering av HIV-1-amplicon og HIV-1-QS-amplicon. Kvantiteringen av HIV-1-RNA-virus utføres ved hjelp av HIV-1-QS. Kvantiteringsstandarden kompenserer for hemmingseffekter og kontrollerer prepareringen og amplifikasjonsprosessene slik at kvantiteringen av HIV-1-RNA blir korrekt i hver prøve. HIV-1-QS er en ikke-infeksiøs armored ("pansret") RNA-konstruksjon som inneholder HIV-sekvenser med identiske primerbindingsregioner som mål-hiv-1-rna og en unik probebindingsregion som gjør det mulig å skille HIV-1-QS-standardamplicon fra mål-hiv-1-amplicon. Et kjent kopiantall av HIV-1-QS tilsettes i hver prøve og medføres gjennom trinnene med prøvepreparering, revers transkripsjon, samtidig PCR-amplifikasjon og deteksjon av splittede dobbelmerkede oligonukleotiddeteksjonsprober. COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren beregner HIV-1-RNA-nivåene i testprøvene ved å sammenligne HIV-1-signalene med HIV-1-QS-signalene for hver prøve og kontroll. 05447992001-04NO 2 Doc Rev. 5.0

Valg av mål Valget av mål-rna-sekvensen for HIV-1 avhenger av identifikasjon av regioner i HIV-1-genomet som viser maksimal sekvenskonservering mellom de ulike gruppe-m-subtypene av HIV-1 og HIV-1 gruppe-oprøvene. For å adressere den høye genetiske variabiliteten av virus blir to regioner av HIV-genom samtidig mål for amplifikasjon og deteksjon av COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0. To målspesifikke og en QS-spesifikk dobbeltmerket oligonukleotidprobe gir uavhengig identifisering av HIV-1-amplicon og HIV-1-QS-amplicon. Derfor er riktig valg av primere og dobbelmerket oligonukleotidprobe avgjørende for testens evne til å amplifisere og detektere HIV-1 gruppe-m-subtyper og HIV-1-gruppe-O. COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 bruker revers transkripsjonsog PCR-amplifikasjonsprimere som definerer en sekvens innen de høykonserverte regionene i HIV-1 gag-genet 32 og i HIV-1 LTR-regionen. Prøvepreparering COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 benytter automatisert prøvepreparering i COBAS AmpliPrep-instrumentet ved hjelp av en generisk silisiumbasert bindingsteknikk. I prosedyren blir 850 μl plasma bearbeidet. HIV-1-viruspartiklene lyseres gjennom inkubasjon ved forhøyet temperatur med en protease og kaotropisk lyserings-/bindingsbuffer som frigjør nukleinsyrer og beskytter det frigjorte HIV-1-RNA fra RNaser i plasma. Protease og et kjent antall HIV-1-QS armored ("pansrede") RNA-molekyler tilsettes i hver prøve sammen med lyseringsreagens og magnetiske glasspartikler. Deretter blir blandingen inkubert, og HIV-1-RNA og HIV-1-QS-RNA bindes til overflaten av de magnetiske glasspartiklene. Ubundne substanser, slik som salter, proteiner og andre cellulære forurensninger, fjernes ved å vaske de magnetiske glasspartiklene. Etter separasjon av de magnetiske glasspartiklene og fullføring av vasketrinnene, elueres de adsorberte nukleinsyrene ved forhøyet temperatur i en vandig løsning. Den preparerte prøven, som inneholder magnetiske glasspartikler i tillegg til det frigjorte HIV-1-RNA og HIV-1-QS-RNA, tilsettes i amplifikasjonsblandingen og overføres til COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren. Mål-HIV-1-RNA og HIV-1-QS-RNA blir deretter reverstranskribert, amplifisert og samtidig detektert gjennom oppsplitting av to målspesifikke og en QS-spesifikk dobbelmerket oligonukleotidprobe. Revers transkripsjon og PCR-amplifikasjon Revers transkripsjon og PCR-amplifikasjon utføres med det termostabile rekombinante enzymet Thermus specie Z05 DNA polymerase (Z05). I nærvær av mangan (Mn 2+ ) og under passende bufferforhold har Z05 både revers transkriptase- og DNA-polymeraseaktivitet 30,31. Dermed kan både revers transkripsjon og PCR-amplifikasjon finne sted sammen med sanntidsdeteksjon av ampliconet. Bearbeidede prøver tilsettes amplifikasjonsblandingen i amplifikasjonsrør (K-rør) der både revers transkripsjon og PCR-amplifikasjon skjer. Reaksjonsblandingen varmes opp for å gjøre det mulig for nedstrømsprimerne å hybridisere spesifikt til mål-hiv-1-rna og til HIV-1-QS-RNA. I nærvær av Mn 2+ og deoksynukleotidtrifosfater (dntp) i overskudd, inkludert deoksyadenosin-, deoksyguanosin-, deoksycytidin-, deoksyuridin- og deoksytymidintrifosfater, forlenger Z05-polymerasen den hybridiserte primeren og danner DNA-tråder som er komplementær til mål-rna. Målamplifikasjon Preparerte prøver tilsettes amplifikasjonsblandingen i amplifikasjonsrør (K-rør) der PCR-amplifikasjon skjer. Etter revers transkripsjon av HIV-1-mål-RNA og HIV-1-QS-RNA varmes reaksjonsblandingen opp i termoblokken i COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren for å denaturere RNA:cDNA-hybridene og eksponere de spesifikke primermålsekvensene. Når blandingen kjøles ned, hybridiseres primerne til mål-dna. Ved tilstedeværelse av Mn 2+ og overskytende deoksynukleotidtrifosfater (dntp), inkludert deoksyadenosin-, deoksyguanosin-, deoksycytidin-, deoksyuridin- og deoksytymidintrifosfater, forlenger Z05 de hybridiserte primerne langs måltemplatene og danner dobbelttrådede DNA-molekyler som kalles amplicon. COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren gjentar denne prosessen automatisk i et bestemt antall sykluser, der hver syklus skal doble mengden amplicon-dna. Ønsket antall sykluser er forhåndsprogrammert i COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren. Amplifikasjonen skjer kun i HIV-1- genomets to regioner mellom primerne. Hele HIV-1-genomet amplifiseres ikke. 05447992001-04NO 3 Doc Rev. 5.0

Selektiv amplifikasjon Selektiv amplifikasjon av målnukleinsyre fra prøven oppnås i COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 ved hjelp av AmpErase (uracil-n-glykosylase)-enzym og deoksyuridintrifosfat (dutp). AmpErase LD-enzymet gjenkjenner og katalyserer destruksjon av DNA-tråder som inneholder deoksyuridin 33, men ikke DNA som inneholder deoksytymidin. Deoksyuridin finnes ikke i naturlig forekommende DNA, men finnes alltid i amplicon på grunn av bruken av deoksyuridintrifosfat som en av dntp-ene i Master Mix-reagenset. Det er derfor kun amplicon som inneholder deoksyuridin. Deoksyuridin gjør kontaminerende amplicon mottakelig for destruksjon av AmpErase-enzymet forut for amplifikasjon av mål-dna. I tillegg vil uspesifikke produkter som oppstår etter innledende aktivering av Master Mix med mangan, ødelegges av AmpErase-enzymet. AmpErase-enzymet, som inngår i Master Mix-reagenset, katalyserer nedbrytningen av DNA som inneholder deoksyuridin, ved å bryte deoksyuridingruppens deoksyribosekjede ved C1-posisjonen. Ved temperaturøkning i det første varmetrinnet brytes amplicon- DNA-kjeden der deoksyuridinet finnes, noe som igjen fører til at DNA ikke lenger er amplifiserbart. AmpErase-enzymet forblir inaktivt i lengre tid når det utsettes for temperaturer over 55 ºC, dvs. gjennom alle termosykliske trinn, og derfor blir ikke målamplicon som dannes under amplifikasjonen ødelagt. Deteksjon av PCR-produkter i en COBAS TaqMan -test Resultater for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 bruker sanntids 34,35 PCR-teknologi. Bruken av dobbel-fluoroscensmerkede prober sørger for sanntidsdeteksjon av akkumulert PCR-produkt ved å måle emisjonsintensiteten av rapporteringsfluorescensen som frigjøres under amplifikasjonsprosessen. Probene består av HIV-1- og HIV-1-QS-spesifikke oligonukleotider med et rapporteringsfluorofor og en slukkerfluorofor. I COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-testen, v2.0 er HIV-1- og HIV-1-QS-probene merket med ulike rapporteringsfluoroforer. Når disse probene er intakte, undertrykkes rapporteringsfluoroforenes fluorescens på grunn av nærheten til slukkerfluoroforen gjennom energioverføringer av Förster-type. Under PCR hybridiserer proben til en målsekvens og splittes av 5' 3' nukleaseaktivitet hos den termostabile Z05 DNA-polymerasen. Så snart rapporterings- og slukkerfluoroforene er frigjort og separert, forekommer det ikke lenger slukking, og rapporteringsfluoroforenes fluorescerensaktivitet øker. Amplifikasjonen av HIV-1-RNA og HIV-1-QS-RNA måles uavhengig av hverandre og ved ulike bølgelengder. Denne prosessen gjentas et visst antall sykluser, der hver syklus effektivt øker emisjonsintensiteten hos de individuelle rapporteringsfluoroforene og gir en uavhengig identifikasjon av HIV-1-RNA og HIV-1-QS-RNA. Den PCR-syklusen hvor starten på en eksponentiell vekstkurve inntreffer, er relatert til mengden kildemateriale ved starten av PCR-reaksjonen. Grunnleggende informasjon om kvantitering med COBAS TaqMan -testen COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 gir et nøyaktig kvantitativt resultat i et stort dynamisk område ettersom måling av amplicon utføres under amplifikasjonens eksponentielle fase. Jo høyere HIV-1-titer i prøven, jo tidligere øker fluorescenssignalet fra HIV-1-probens rapporteringsfluorofor over fluorescensnivåets baseline (se figur 1). Ettersom mengden av HIV-1-QS-RNA er konstant i alle prøver, skal HIV-1-QS-probenes rapporteringsfluorescens bli påvisbar i samme syklus for alle prøver (se figur 2). I tilfeller der QS-fluorescensen påvirkes, justeres konsentrasjonen tilsvarende. Påvisningen av de spesifikke fluorescenssignalene rapporteres som en kritisk terskelverdi (Ct). Ct defineres som det relative syklusnummeret der rapporteringsfluorescensen overskrider en forhåndsbestemt terskelverdi (det tillagte fluorescens-terskelnivået) og starter signalets eksponentielle vekstfase (se figur 3). En høyere Ct-verdi indikerer et lavere titer av det opprinnelige mål-hiv-1-materialet. En 2-folds økning i titer korrelerer med en reduksjon på 1 Ct for mål-hiv-1-rna, mens en 10-folds økning i titer korrelerer med en reduksjon på 3,3 Ct. 05447992001-04NO 4 Doc Rev. 5.0

Figur 1 viser målvekstkurvene for en fortynningsserie som spenner over et område på 5-log 10. Når viruskonsentrasjonen øker, forskyves vekstkurvene mot tidligere sykluser. Derfor tilsvarer vekstkurven lengst til venstre det høyeste virustiternivået, mens vekstkurven helt til høyre tilsvarer det laveste virustiternivået. Figur 1 Målvekstkurvene for en fortynningsserie som spenner over et område på 5-Log 10 Normalisert fluorescens 10 5 Høyeste titer Laveste titer 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Syklusnummer Figur 2 viser vekstkurvene for kvantiteringsstandarden for prøver fra en fortynningsserie av virus som spenner over et område på 5-log 10. Mengden kvantiteringsstandard som tilsettes hver prøve er konstant for hver reaksjon. Kvantiteringsstandardens Ct-verdi er lik uavhengig av virustiter. 50 Figur 2 Vekstkurvene for kvantiteringsstandarden for en fortynning av virus som spenner over et område på 5-Log 10 Normalisert fluorescens 40 30 20 10 Laveste titer Høyeste titer 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Syklusnummer 05447992001-04NO 5 Doc Rev. 5.0

Figur 3 viser et eksempel på hvordan fluorescensverdiene i hver syklus normaliseres for hver vekstkurve. Det relative syklusnummeret (Ct) beregnes når fluorescenssignalet krysser det tillagte fluorescensterskelnivået. 1,0 Figur 3 Fluorescensverdier i hver syklus normaliseres for hver vekstkurve 0,8 Normalisert fluorescens 0,6 0,4 0,2 Tilordnet fluorescens-terskelnivå Ct-verdi = 28,2 0,0 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31-0,2 Syklusnummer HIV-1-RNA-kvantitering COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 kvantiterer HIV-1-viralt RNA ved å benytte en annen målsekvens (HIV-1-kvantiteringsstandard) som tilsettes hver prøve i kjent konsentrasjon. HIV-1-QS er en ikke-infeksiøs armored ("pansret") RNA-konstruksjon som inneholder fragmenter av HIV-1- sekvenser med primerbindingsregioner som er identiske med dem i HIV-1-gag-målsekvensen. HIV-1-QS inneholder HIV-1-primerbindingsregioner og produserer et amplifikasjonsprodukt av samme lengde- og basesammensetning som gag-mål-hiv-1-rna. Deteksjonsprobebindingsregionen for HIV-1-QS er modifisert for å differensiere HIV-1-QS fra gag-mål-hiv-1-amplicon. Under PCR-hybridiseringsfasen i COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48- analysatoren, blir prøvene belyst og eksitert med filtrert lys, og filtrert emisjonsfluorescensdata registreres for hver prøve. Avlesningene fra hver prøve korrigeres deretter for instrumentvariasjoner. Instrumentet sender disse fluorescensavlesningene til AMPLILINK-programvaren, og de blir lagret i en database. Forhåndsdefinerte kontrollkriterier brukes for å avgjøre om resultatsettene for HIV-1-RNA og HIV-1-QS- RNA kan aksepteres som valide resultater. Dersom resultatsettene ligger utenfor de forhåndsbestemte akseptkriteriene, vil de bli flagget. Etter at alle forhåndskontroller er fullført og godkjent, behandles fluorescensresultatene for å generere Ct-verdier for HIV-1-RNA og HIV-1-QS-RNA. De lotspesifikke kalibreringsverdiene som leveres sammen med COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 brukes til å beregne titerverdier for prøver og kontroller basert på HIV-1-RNAs og HIV-1-QS-RNAs Ct-verdier. COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 er standardisert i henhold til WHO 1 st International Standard for HIV-1 RNA for Nucleic Acid-Based Techniques (NAT) (NIBSC 97/656) 36. Titerresultatene rapporteres i kopier/ml (kopier/ml). Omregningsfaktoren mellom rapporterte HIV-1-RNAkopier/ml og HIV-1-internasjonale enheter/ml er bestemt av Roche Molecular Systems, Inc. til å være 0,6 kopier/iu (1,7 IU/kopier). 05447992001-04NO 6 Doc Rev. 5.0

REAGENSER COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test, v2.0 (P/N: 05212294 190) HIV-1 v2.0 CS1 (HIV-1-reagenskassett med magnetiske glasspartikler) Magnetiske glasspartikler 93 % isopropanol Xi 93 % (vekt per vekt) isopropanol HI2CAP 48 tester 1 x 48 tester Irriterende F 93 % (vekt per vekt) isopropanol Meget brannfarlig HIV-1 v2.0 CS2 (HIV-1 lyseringsreagenskassett) Natriumsitratdihydrat 42,5 % guanidintiocyanat < 14 % polydocanol 0,9 % ditiotreitol Xn 42,5 % (vekt per vekt) guanidintiocyanat 1 x 48 tester Helseskadelig N < 14 % polydokanol (vekt per vekt) Fare for miljøet HIV-1 v2.0 CS3 HIV-1 multireagenskassett inneholder: Pase (proteinaseløsning) Tris-buffer < 0,05 % EDTA Kalsiumklorid Kalsiumacetat 7,8 % proteinase Glyserol Xn 7,8 % (vekt per vekt) proteinase 1 x 48 tester 1 x 3,8 ml Helseskadelig EB (elueringsbuffer) Tris-base-buffer 0,2 % metylparaben 1 x 7,0 ml 05447992001-04NO 7 Doc Rev. 5.0

HIV-1 v2.0 CS4 HIV-1 testspesifikk reagenskassett inneholder: HIV-1 QS (HIV-1-kvantiteringsstandard) Tris-HCl-buffer EDTA < 0,005 % poly ra RNA (syntetisk) < 0,001 % armored ("pansret") HIV-1-RNA-konstruksjon som inneholder HIV-1-sekvenser og en unik probebindende region (ikke-infeksiøs RNA i MS2 bakteriofag) 0,05 % Sodium azide HIV-1 MMX (HIV-1 Master Mix) Trisinbuffer Kaliumacetat Kaliumhydroksid 20 % dimetylsulfoksid Glyserol < 0,04 % datp, dctp, dgtp, dutp, dttp < 0,003 % oppstrøms- og nedstrømsprimere for gag og LTR-regionen av HIV-1 < 0,003 % oligonukleotidaptamer < 0,003 % fluorescentmerket oligonukleotidprober spesifikke for HIV-1 og HIV-1 kvantiteringsstandard < 0,05 % Z05 DNA-polymerase (mikrobiell) < 0,1 % AmpErase (uracil-n-glykosylase) enzym (mikrobiell) 0,09 % natriumazid CAP/CTM Mn 2+ (CAP/CTM manganløsning) < 0,5 % manganeseacetat Isedikk 0,09 % natriumazid HIV-1 H(+)C, v2.0 (HIV-1 Høy positiv kontroll, v2.0) < 0,001 % armored ("pansret") HIV-1-RNA-konstruksjon som inneholder HIV-1-sekvenser (ikke-infeksiøs RNA i MS2 bakteriofag) Negativt humant plasma, ikke-reaktivt med tester for antistoff mot HCV, antistoff mot HIV-1/2, HIV p24-antigen og HBsAg; HIV-1-RNA, HCV-RNA og HBV-DNA ikke detekterbart med PCR-metoder 0,1 % ProClin 300 konserveringsvæske Xi (3:1) blanding av 5-kloro-2-metyl-2H-isotiasol-3-en og 2-metyl-2H-isotiasol-3-en 1 x 48 tester 1 x 3,6 ml 1 x 2,5 ml 1 x 19,8 ml 4 x 1,0 ml Irriterende R36/38: Irriterer øynene og huden. R43: Kan gi allergi ved hudkontakt. 05447992001-04NO 8 Doc Rev. 5.0

HIV-1 L(+)C, v2.0 (HIV-1 Lav positiv kontroll, v2.0) < 0,001 % armored ("pansret") HIV-1-RNA-konstruksjon som inneholder HIV-1-sekvenser (ikke-infeksiøs RNA i MS2 bakteriofag) Negativt humant plasma, ikke-reaktivt med tester for antistoff mot HCV, antistoff mot HIV-1/2, HIV p24-antigen og HBsAg; HIV-1-RNA, HCV-RNA og HBV-DNA ikke detekterbart med PCR-metoder 0,1 % ProClin 300 konserveringsvæske Xi (3:1) blanding av 5-kloro-2-metyl-2H-isotiasol-3-en og 2-metyl-2H-isotiasol-3-en 4 x 1,0 ml Irriterende R36/38: Irriterer øynene og huden. R43: Kan gi allergi ved hudkontakt. CTM ( ) C [COBAS TaqMan negativ kontroll (humant plasma)] Negativt humant plasma, ikke-reaktivt med tester for antistoff mot HCV, antistoff mot HIV-1/2, HIV p24-antigen og HBsAg; HIV-1-RNA, HCV-RNA og HBV-DNA ikke detekterbart med PCR-metoder 0,1 % ProClin 300 konserveringsvæske Xi (3:1) blanding av 5-kloro-2-metyl-2H-isotiasol-3-en og 2-metyl-2H-isotiasol-3-en 4 x 1,0 ml Irriterende R36/38: Irriterer øynene og huden. R43: Kan gi allergi ved hudkontakt. HIV-1 H(+)C, v2.0 Clip (Strekkodeklips for HIV-1 høy positiv kontroll, v2.0) HIV-1 L(+)C, v2.0 Clip (Strekkodeklips for HIV-1 lav positiv kontroll, v2.0) HIV-1 ( ) C Clip (Strekkodeklips for HIV-1 negativ kontroll, v2.0) COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan Wash Reagent COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan vaskereagens (P/N: 03587797 190) PG WR (COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan vaskereagens) Natriumsitratdihydrat < 0,1 % N-metylisotiazolon-HCl PG WR 1 x 4 klips 1 x 4 klips 1 x 4 klips 1 x 5,1 l ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER A. FOR BRUK TIL IN VITRO-DIAGNOSTIKK. B. Denne testen skal kun brukes for humant plasma med EDTA som antikoagulant. C. Ikke pipetter med munnen. 05447992001-04NO 9 Doc Rev. 5.0

D. Ikke spis, drikk eller røyk i laboratoriets arbeidsområder. Bruk beskyttende engangshansker, laboratoriefrakk og vernebriller når du håndterer prøver og reagenser. Vask hendene nøye etter håndtering av prøver og reagenser. E. Unngå mikrobiell kontaminering og ribonukleasekontaminering av reagensene når du pipetterer ut porsjoner fra kontrollflasker. F. Bruk av sterile engangspipetter og RNase-frie pipettespisser anbefales. G. Kontroller fra ulike lot eller ulike flasker fra samme lot må ikke blandes sammen. H. Reagenskassetter eller kontroller fra ulike kit må ikke blandes. I. COBAS AmpliPrep-kassetter må ikke åpnes, flasker må ikke byttes om, blandes, fjernes eller settes til. J. Kast ubrukte reagenser, avfall og prøver i henhold til nasjonalt, regionalt og lokalt regelverk. K. Kit som er utgått på dato, må ikke brukes. L. Dataark om materialsikkerhet (MSDS) kan på forespørsel sendes fra ditt lokale Roche-kontor. M. Prøver og kontroller må håndteres som infeksiøse, og sikre laboratorierutiner må følges. Disse er beskrevet i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 37 og CLSI-dokumentet M29-A3 38. Rengjør og desinfiser alle arbeidsoverflater nøye med en nylaget løsning av 0,5 % natriumhypokloritt i deionisert eller destillert vann. Merk: Kommersielt tilgjengelig blekemiddel til husholdningsbruk inneholder normalt natriumhypokloritt med en konsentrasjon på 5,25 %. En fortynning i forholdet 1:10 med et slikt blekemiddel gir en 0,5 % natriumhypoklorittløsning. N. ADVARSEL: CTM ( ) C, HIV-1 L(+)C, v2.0 og HIV-1 H(+)C, v2.0 inneholder humant plasma utskilt fra humant blod. Kildematerialet er testet og har vist seg å være ikke-reaktivt for hepatitt B overflateantigen (HBsAg), antistoffer mot HIV-1/2 og HCV og HIV p24-antigen. Testing av Negativt Human Plasma med PCR-metoder viste ikke detekterbart HIV-1-RNA, HCV-RNA eller HBV-DNA. Ingen kjente testmetoder kan fullstendig garantere at produkter fra humant blod ikke vil kunne overføre infeksiøse agens. Derfor må alt humant materiale betraktes som potensielt infeksiøst. CTM ( ) C, HIV-1 L(+)C, v2.0 og HIV-1 H(+)C, v2.0 må håndteres som infeksiøst materiale, og sikre laboratorierutiner må følges. Disse er beskrevet i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 37 og i CLSI-dokumentet M29-A3 38. Rengjør og desinfiser alle arbeidsoverflater nøye med en nylaget løsning av 0,5 % natriumhypokloritt i deionisert eller destillert vann. O. HIV-1-QS, CAP/CTM Mn 2+ og HIV-1 MMX inneholder natriumazid. Natriumazid kan reagere med bly- og kobberrør og danne svært eksplosive metallazider. Hvis løsninger som inneholder natriumazid helles i avløp i laboratoriet, må de skylles ned med store mengder vann for å unngå azidoppbygging. P. Bruk vernebriller, laboratoriefrakk og engangshansker ved håndtering av reagenser. Unngå kontakt med hud, øyne eller slimhinner. Skyll umiddelbart med mye vann hvis slik kontakt oppstår. Hvis kontaktstedet ikke blir behandlet, kan det oppstå brannskade. Fortynn med vann før du tørker opp eventuelt søl fra reagensene. Q. Ikke la HIV-1 v2.0 CS2 og flytende avfall fra COBAS AmpliPrep-instrumentet, som inneholder guanidintiocyanat, komme i kontakt med natriumhypoklorittløsning (blekemiddel). Disse blandingene kan produsere en svært giftig gass. R. Ved avhending av brukte COBAS AmpliPrep SPU-er (Specimen Processing Units) som inneholder guanidintiocyanat, må du unngå enhver kontakt med natriumhypoklorittløsning (blekemiddel). Disse blandingene kan produsere en svært giftig gass. 05447992001-04NO 10 Doc Rev. 5.0

OPPBEVARING OG HÅNDTERING A. Ikke frys reagenser eller kontroller. B. Oppbevar HIV-1 v2.0 CS1, HIV-1 v2.0 CS2, HIV-1 v2.0 CS3 og HIV-1 v2.0 CS4 ved 2 8 ºC. Når disse reagensene er uåpnet, er de stabile til utløpsdato. Når de er åpnet, er disse reagensene stabile i 28 dager ved 2 8 C eller til utløpsdato, avhengig av hva som kommer først. HIV-1 v2.0 CS1, HIV-1 v2.0 CS2, HIV-1 v2.0 CS3 og HIV-1 v2.0 CS4 kan brukes i maks 4 instrumentsykluser, i maks. 64 timer totalt i COBAS AmpliPrep-instrumentet. Reagenser må oppbevares ved 2 8 C mellom instrumentsykluser. C. Oppbevar HIV-1 H(+)C, v2.0, HIV-1 L(+)C, v2.0 og CTM ( ) C ved 2-8 ºC. Disse kontrollene er stabile til angitt utløpsdato. Etter åpning må alle ubrukte rester kastes. D. Oppbevar strekkodeklipsene [HIV-1 H(+)C v2.0 Clip, HIV-1 L(+)C v2.0 Clip og HIV-1 ( ) C Clip] ved 2 30 ºC. E. Oppbevar PG WR ved 2 30 C. PG WR er stabilt til angitt utløpsdato. Etter åpning er dette reagenset stabilt i 28 dager ved 2 30 C eller til utløpsdato, avhengig av hva som kommer først. MATERIELL SOM MEDFØLGER A. COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test, v2.0 (P/N: 05212294 190) HI2CAP HIV-1 v2.0 CS1 (HIV-1-reagenskassett med magnetiske glasspartikler) HIV-1 v2.0 CS2 (HIV-1-kassett med lyseringsreagens) HIV-1 v2.0 CS3 (HIV-1-kassett med multireagens) HIV-1 v2.0 CS4 (HIV-1-kassett med testspesifikt reagens) HIV-1 H(+)C, v2.0 (HIV-1 høy positiv kontroll, v2.0) HIV-1 L(+)C, v2.0 (HIV-1 lav positiv kontroll, v2.0) CTM ( ) C [COBAS TaqMan negativ kontroll (humant plasma)] HIV-1 H(+)C, v2.0 Clip (HIV-1 høy positiv kontroll, v2.0 strekkodeklips) HIV-1 L(+)C, v2.0 Clip (HIV-1 lav positiv kontroll, v2.0 strekkodeklips) HIV-1 ( ) C Clip (HIV-1 negativ kontroll strekkodeklips) 05447992001-04NO 11 Doc Rev. 5.0

B. COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan Wash Reagent COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan vaskereagens (P/N: 03587797 190) PG WR PG WR (COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan vaskereagens) MATERIELL SOM KREVES, MEN SOM IKKE MEDFØLGER Instrumentering og programvare Engangsartikler COBAS AmpliPrep-instrument COBAS TaqMan -analysator eller COBAS TaqMan 48-analysator Valgfritt: cobas p 630-instrument Valgfritt: Dokkingstasjon AMPLILINK-programvare, Version 3.2 Series eller 3.3 Series Datastasjon for AMPLILINK-programvare, med skriver Manualer for AMPLILINK Software v3.2 eller v3.3 Series: Instrumentmanual for COBAS AmpliPrep-instrument for bruk sammen med COBAS TaqMan -analysator, COBAS TaqMan 48-analysator, COBAS AMPLICOR -analysator eller cobas p 630-instrument og AMPLILINK Software, version 3.2 + 3.3 Series Instrumentmanual for COBAS TaqMan -analysator (pluss ev. dokkingstasjon) for bruk sammen med applikasjonsmanualen for AMPLILINK software, version 3.2 + 3.3 Series Instrumentmanual for COBAS TaqMan 48-analysator for bruk sammen med applikasjonsmanualen for AMPLILINK software, version 3.2 + 3.3 Series Applikasjonsmanual for AMPLILINK software version 3.2 Series for bruk sammen med COBAS AmpliPrep-instrument, COBAS TaqMan -analysator, COBAS TaqMan 48-analysator og COBAS AMPLICOR -analysator Eller Applikasjonsmanual for AMPLILINK software version 3.3 Series for bruk sammen med COBAS AmpliPrep-instrument, COBAS TaqMan -analysator, COBAS TaqMan 48-analysator, COBAS AMPLICOR -analysator og cobas p 630- instrument Valgfritt: Operatørmanual til cobas p 630-instrument, programvareversjon 2.0 Prøveprepareringsenheter: SPU-er Rør for innmating av prøver (S-rør) med strekkodeetiketter K-spiss rack K-rør, eske med 12 x 96 05447992001-04NO 12 Doc Rev. 5.0

ANNET MATERIELL SOM KREVES, MEN SOM IKKE MEDFØLGER Prøvestativ (SK24-stativ) Reagensstativ SPU-rack K-rør åpner/lukker, motorisert K-rør åpner/lukker K-carrier K-carrier, løfteverktøy K-carrier, rack Pipetter med aerosolbarriere- eller "positive displacement" RNase-frie spisser (kapasitet 1000 μl)* Engangshansker, uten pudder Vortexmikser * Pipettene må ha 3 % nøyaktighet for angitt volum. Aerosolbarriere- eller "positive displacement" RNasefrie spisser må brukes der dette er angitt for å hindre krysskontaminering mellom prøver og amplicon. TAKING, TRANSPORT OG OPPBEVARING AV PRØVER Merk: Merk: Alle prøver og kontroller må behandles som om de er potensielt infeksiøse. Denne testen er kun validert for bruk sammen med humant plasma med EDTA som antikoagulant. Testing av andre prøvematerialer kan føre til feil resultat. A. Taking av prøver COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 skal kun brukes for plasmaprøver. Blodprøver må tas i sterile rør med EDTA (lys lilla topp) som antikoagulant og blandet tilstrekkelig ifølge veiledningene fra glassprodusenten. Oppbevar fullblod ved 2 25 C i maks. 24 timer. Separer plasma fra fullblod innen 24 timer etter prøvetaking ved å sentrifugere ved 800 1600 x g i 20 minutter ved romtemperatur. Overfør plasma til et sterilt polypropylenrør. Figur 4 viser holdbarhetsdata for prøver fra undersøkelser om prøveholdbarhet utført på COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test (P/N: 03543005 190). 05447992001-04NO 13 Doc Rev. 5.0

Figur 4 HIV-1-stabilitet i fullblod; (tatt på rør for EDTA-plasma) Gjennomsnittlig (n=4) HIV-1-RNA-resultat log 10 HIV-1 RNA cp/ml 5.0 5,0 4.0 4,0 3.0 3,0 2.0 2,0 1.0 1,0 0.0 0,0 Donor P1 Donor P2 Donor P3 < 1 time (T0) 24 timer, 25 30 C 24 timer, 2 8 C Prøve-ID B. Transport av prøver Transport av fullblod eller plasma må skje i henhold til nasjonalt, regionalt og lokalt regelverk for transport av biologisk materiale 39. Fullblod må transporteres ved 2 25 C og sentrifugeres innen 24 timer etter prøvetaking. Plasma kan transporteres ved 2 8 C eller nedfrosset ved 20 C til 80 C. C. Oppbevaring av prøver Plasmaprøver kan oppbevares i romtemperatur (25 30 C) i opptil 1 dag eller ved 2 8 C i opptil 6 dager. Plasmaprøver viste seg å være holdbare i seks uker frosset ved 20 C til 80 C. Det anbefales at prøver oppbevares i 1100-1200 μl deler i sterile, 2,0 ml polypropylrør med skrukorker (slik som Sarstedt 72.694.006). Figur 5 viser holdbarhetsdataene for prøver fra en undersøkelse om prøveoppbevaring utført på COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test (P/N: 03543005 190). Figur 5 HIV-1 holdbarhet i EDTA-plasma Gjennomsnittlig (n=4) HIV-1-RNA-resultat log 10 HIV-1 RNA cp/ml 5.0 5,0 4.0 4,0 3.0 3,0 2.0 2,0 1.0 1,0 0.0 0,0 T=0 24 t, 28 C 6d, 2 8 C 6w, -20 C 6w, -80 C Donor P4 Donor P5 Donor P6 Prøve-ID Plasmaprøver kan fryses ned og tines opptil fem ganger uten signifikant tap av HIV-1-RNA. Figur 6 viser data fra fryse/tine-studier utført på COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test (P/N: 03543005 190). 05447992001-04NO 14 Doc Rev. 5.0

Figur 6 HIV-1-resultater etter opptil fem fryse-tine (F-T)-sykluser (EDTA-plasma) Gjennomsnittlig (n=4) HIV-1-RNA-resultat log 10 HIV-1 RNA cp/ml 5.0 5,0 4.0 4,0 3.0 3,0 2.0 2,0 1.0 1,0 0.0 0,0 BRUKSANVISNING Donor P10 Donor P11 Donor P12 Prøve-ID Kontroll 3 F T 5 F T Merk: For mer detaljert informasjon, en detaljert beskrivelse av de mulige konfigurasjonene, utskrift av resultat og tolkning av flagg, kommentarer og feilmeldinger, se (1) instrumentmanualen for COBAS AmpliPrep-instrument for bruk sammen med COBAS TaqMan -analysatoren, COBAS TaqMan 48-analysatoren, COBAS AMPLICOR - analysatoren eller cobas p 630-instrumentet og AMPLILINK software, version 3.2 + 3.3 Series; (2) instrumentmanualen for COBAS TaqMan -analysatoren (pluss ev. dokkingstasjon) for bruk sammen med applikasjonsmanualen for AMPLILINK software, version 3.2 + 3.3 Series; (3) instrumentmanualen for COBAS TaqMan 48- analysatoren for bruk sammen med applikasjonsmanualen for AMPLILINK software, version 3.2 + 3.3 Series; (4) applikasjonsmanualen for AMPLILINK Software Version 3.2 Series for bruk sammen med COBAS AmpliPrep-instrument, COBAS TaqMan - analysator, COBAS TaqMan 48-analysator og COBAS AMPLICOR -analysator eller applikasjonsmanual for AMPLILINK software version 3.3 Series for bruk sammen med COBAS AmpliPrep-instrument, COBAS TaqMan -analysator, COBAS TaqMan 48- analysator, COBAS AMPLICOR -analysator og cobas p 630-instrument; (5) Tilleggsutstyr: Operatørmanual til cobas p 630-instrument, programvareversjon 2.0 Størrelse på analyseserie Hvert kit inneholder reagenser som er tilstrekkelig for 48 tester, og disse kan utføres i analyseserier på 12 til 24 tester. Minst én av hver kontroll [CTM ( ) C, HIV-1 L(+)C, v2.0 og HIV-1 H(+)C, v2.0] må tas med i hver analyseserie (se "Kvalitetskontroll"). Arbeidsflyt Analyseringen med COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren må startes innen 120 minutter etter at preparering av prøver og kontroller er fullført. Merk: Preparerte prøver og kontroller må ikke fryses ned eller oppbevares ved 2 8 C. Prøve- og kontrollpreparering Merk: Ved bruk av frosne prøver må prøvene stå i romtemperatur til de er helt tinte og deretter vortexes i 3 5 sekunder før bruk. Kontrollene skal tas ut fra 2 8 C lagringssted og må oppnå romtemperatur før bruk. 05447992001-04NO 15 Doc Rev. 5.0

Innstilling av COBAS AmpliPrep-instrumentet Del A. Vedlikehold og gjennomskylling A1. COBAS AmpliPrep-instrumentet er klart for drift i stand-by-modus. A2. Slå datastasjonen for AMPLILINK-software på ON. Klargjør datastasjonen på følgende måte: a. Logg på operativsystemet Windows XP. b. Dobbeltklikk på ikonet for AMPLILINK-software. c. Logg deg på AMPLILINK-software ved å taste inn tildelt bruker-id og passord. A3. Kontroller beholdningen av PG WR ved hjelp av skjermbildet Status. Skift ut om nødvendig. A4. Utfør alle vedlikeholdsprosedyrer som er angitt på Due-fliken. COBAS AmpliPrep-instrumentet vil automatisk skylle igjennom ("prime") systemet. Del B. Merk: Lasting av reagenskassetter Alle reagenskassetter skal tas ut fra 2 8 C lagringssted, umiddelbart lastes inn i COBAS AmpliPrep-instrumentet og skal stå i romtemperatur i instrumentet i minst 30 minutter før den første prøven skal analyseres. Ikke la reagenskassettene oppnå romtemperatur utenfor instrumentet, da det kan forårsake kondens på strekkodeetikettene. Ikke tørk av kondens fra strekkodeetikettene hvis dette skulle forekomme. B1. Plasser HIV-1 v2.0 CS1 i et reagensstativ. Plasser HIV-1 v2.0 CS2, HIV-1 v2.0 CS3 og HIV-1 v2.0 CS4 i et eget reagensstativ. B2. Sett inn reagensstativet som inneholder HIV-1 v2.0 CS1 i posisjon A i COBAS AmpliPrepinstrumentet. B3. Sett inn reagensstativet som inneholder HIV-1 v2.0 CS2, HIV-1 v2.0 CS3 og HIV-1 v2.0 CS4 i posisjon B, C, D eller E i COBAS AmpliPrep-instrumentet. (Se tabell 1 for ytterligere informasjon.) Del C. Merk: Lasting av engangsartikler Bestem antall COBAS AmpliPrep-reagenskassetter, prøveprepareringsenheter (SPU-er), Input S-rør, K-spisser og K-rør som skal brukes. Én SPU, ett Input S-rør, én K-spiss og ett K-rør er nødvendig for hver prøve eller kontroll. Det finnes flere mulige arbeidsflyter for bruk av COBAS AmpliPrep-instrumentet med COBAS TaqMan - analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren. Se tabell 1 under for referanse. Avhengig av den valgte arbeidsflyt settes det inn passende antall reagenskassettstativer, prøvestativer med Input S-rør, SPU-stativer, K-spiss racks, K-rør racks og K-carriers på K-carrier racks i de respektive stativposisjonene i COBAS AmpliPrep-instrumentet (se tabell 1 for ytterligere informasjon). C1. Plasser SPU-ene i SPU-stativene, og sett stativene i posisjon J, K eller L i COBAS AmpliPrepinstrumentet. C2. Avhengig av den valgte arbeidsflyt settes fylte K-rør rack(s) i posisjon M, N, O eller P i COBAS AmpliPrep-instrumentet. C3. Plasser fylte K-spiss rack(s) i posisjon M, N, O eller P i COBAS AmpliPrep-instrumentet. C4. Til arbeidsflyt 3, ved bruk av COBAS TaqMan 48-analysatoren, settes K-carriers på K-carrier rack(s) i posisjon M & N eller O & P i COBAS AmpliPrep-instrumentet. 05447992001-04NO 16 Doc Rev. 5.0

Tabell 1 Mulige arbeidsflyter for bruk av COBAS AmpliPrep-instrumentet med COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren 1 2 3 Arbeidsflyt COBAS AmpliPrepinstrumentet pluss dokkingstasjon pluss COBAS TaqMan - analysatoren COBAS AmpliPrepinstrument pluss COBAS TaqMan - analysator COBAS AmpliPrepinstrument pluss COBAS TaqMan 48-analysator(er) Overføringsmodus for COBAS TaqMan - analysatoren eller COBAS TaqMan 48- analysatoren Automatisert overføring av K-carrier Manuell overføring av K-rør via prøverack på COBAS TaqMan - analysatoren Manuell overføring av K-carrier via K-carrier rack til COBAS TaqMan 48- analysator Stativer og engangsartikler K-rør i fulle K-rør rack K-spisser i fulle K-spiss rack Input S-rør med prøver og kontroller i prøvestativ SPU-er i SPU-stativ CS1 i kassettstativ CS2, CS3, CS4 i kassettstativ K-rør i fulle K-rør rack K-spisser i fulle K-spiss rack Input S-rør med prøver og kontroller i prøvestativ SPU-er i SPU-stativ CS1 i kassettstativ CS2, CS3, CS4 i kassettstativ Etter fullført prøvepreparering: K-rør i prøvestativ (klar for manuell overføring) K-rør i prøvestativ K-spisser i fulle K-spiss rack Input S-rør med prøver og kontroller i prøvestativ SPU-er i SPU-stativ CS1 i kassettstativ CS2, CS3, CS4 i kassettstativ Tom, strekkodemerket K- carrier i K-carrier rack Etter fullført prøvepreparering: K-rør i K-carrier i K-carrier rack Posisjon på COBAS AmpliPrepinstrumentet M P M P F H J L A B E M P M P F H J L A B E Samme som over (F H) F H M P F H J L A B E M P Samme som over (M P) Del D. Bestilling og innlasting av prøver D1. Klargjør prøvestativene på følgende måte: Fest en strekkodeklips til hver prøvestativposisjon der en prøve (S-rør) vil bli plassert. Fest en av de spesifikke strekkodeklipsene for kontrollene [CTM ( ) C, HIV-1 L(+)C, v2.0 og HIV-1 H(+)C, v2.0] i hver prøvestativposisjon der kontrollene (S-rør) skal plasseres. Kontrollenes strekkodeklips skal ha samme kontrollotnummer som lotnummeret på kontrollflaskene i kitet. Sørg for å sette riktig kontroll i posisjonen med tilsvarende strekkodeklips. Plasser ett Input S-rør i hver posisjon som har en strekkodeklips. D2. Bruk AMPLILINK-programvaren til å opprette prøvebestillinger for hver prøve og kontroll i vinduet Orders i mappen Sample. Velg den korrekte testfil, og avslutt med å lagre. D3. Tildel prøve- og kontrollbestillinger til prøvestativposisjoner i vinduet Orders i mappen Sample Rack. Prøvestativnummeret må stemme overens med det stativet som ble klargjort i trinn D1. D4. Skriv ut rapporten Sample Rack Order og bruk den som arbeidsark. D5. Klargjør prøve- og kontrollstativ i det reserverte området for tilsetting av prøver og kontroller på følgende måte: Vortex hver prøve og kontroll [CTM ( ) C, HIV-1 L(+)C, v2.0 og HIV-1 H(+)C, v2.0] i 3 til 5 sekunder. Vær forsiktig, slik at hanskene ikke kontamineres når prøver og kontroller behandles. 05447992001-04NO 17 Doc Rev. 5.0

D6. Overfør 1000 til 1050 μl av hver prøve og kontroll [CTM ( ) C, HIV-1 L(+)C, v2.0 og HIV-1 H(+)C, v2.0] til det korresponderende strekkodemerkede Input S-røret ved hjelp av en mikropipette med aerosolbarriere- eller "positive displacement" RNase-fri spiss. Unngå å overføre partikler og/eller fibrinklumper fra originalprøven til input S-røret. Prøver og kontroller må overføres til de rørposisjonene som er tildelt og registrert på arbeidsarket i trinn D4. Kontrollenes strekkodeklips skal ha samme kontrollotnummer som lotnummeret på kontrollflaskene i kitet. Sørg for å sette riktig kontroll i posisjonen med tilsvarende kontrollstrekkodeklips. Vær forsiktig, slik at den øvre delen av S-rørene ikke kontamineres av prøver eller kontroller. Se i operatørmanualen til cobas p 630-instrumentet ved bruk av cobas p 630-instrumentet til klargjøring av prøver. D7. Til arbeidsflyt 1 og 2 settes prøvestativ med Input S-rør i posisjon F, G eller H i COBAS AmpliPrepinstrumentet. D8. Til arbeidsflyt 3 ved bruk av COBAS TaqMan 48-analysatoren, settes prøvestativ med Input S-rør og K-rør (ett til hvert Input S-rør, innsatt i riktig posisjon ved siden av Input S-rør), i posisjon F, G eller H i COBAS AmpliPrep-instrumentet. Del E. Start av analysering på COBAS AmpliPrep-instrument E1. Start COBAS AmpliPrep-instrumentet med AMPLILINK-software. Del F. Avslutning av analyseringen på COBAS AmpliPrep-instrumentet og overføring til COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren (kun for arbeidsflyt 2 og 3) F1. Sjekk om det kommer opp flagg eller feilmeldinger. F2. Ta ut de preparerte prøvene og kontrollene fra COBAS AmpliPrep-instrumentet på enten prøvestativ (for COBAS TaqMan -analysatoren uten dokkingstasjon) eller K-carrier racks (for COBAS TaqMan 48-analysatoren), avhengig av valgt arbeidsflyt (se del G for ytterligere informasjon). F3. Fjern avfall fra COBAS AmpliPrep-instrumentet. Merk: Preparerte prøver og kontroller må ikke utsettes for lys etter at prøve- og kontrollprepareringen er fullført. Amplifikasjon og deteksjon Innstillinger for COBAS TaqMan -analysator eller COBAS TaqMan 48-analysator Analyseringen med COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren må startes innen 120 minutter etter at preparering av prøver og kontroller er fullført. Merk: Del G. Preparerte prøver og kontroller må ikke fryses ned eller oppbevares ved 2 8 C. Innlasting av preparerte prøver G1. Avhengig av den valgte arbeidsflyt utføres de nødvendige trinn for å overføre K-rør til COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren: Arbeidsflyt 1: Automatisk overføring av K-carrier via dokkingstasjon til COBAS TaqMan - analysatoren. Dette krever ikke manuelle inngrep fra brukeren. Arbeidsflyt 2: Manuell overføring av K-rør i prøverack til COBAS TaqMan -analysatoren 05447992001-04NO 18 Doc Rev. 5.0

Arbeidsflyt 3: Manuell overføring av K-carrier på K-carrier rack til COBAS TaqMan 48- analysatoren. Manuell overføring av K-carriers til COBAS TaqMan 48- analysatoren ved hjelp av løfteverktøyet for K-carrier. Del H. Start av analysering på COBAS TaqMan -analysator eller COBAS TaqMan 48- analysator H1. Start COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren ved å foreta et av valgene nedenfor avhengig av hvilken instrumentarbeidsflyt som er brukt: Arbeidsflyt 1: Krever ingen inngrep fra brukeren. Arbeidsflyt 2: Automatisk start av COBAS TaqMan -analysatoren etter innsetting av prøverack. Arbeidsflyt 3: Fyll K-carrier med tomme K-rør hvis det er færre enn 6 K-rør i K-carrieren. AMPLILINK-programvaren veileder i fyllingen. Åpne termoblokkdekselet, sett inn K-carrier i termoblokken og steng lokket. Start analyseringen på COBAS TaqMan 48-analysatoren. Del I. Avslutning av analysering på COBAS TaqMan -analysator eller COBAS TaqMan 48-analysator I1. Skriv ut resultatrapporten når analyseserien i COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren er fullført. Sjekk om det finnes flagg eller feilmeldinger i resultatrapporten. Prøver med flagg og kommentarer tolkes slik som beskrevet under Resultater. Lagre dataene i arkivet når de er godkjent. I2. Fjern brukte K-rør fra COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren. RESULTATER COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren beregner automatisk HIV-1-RNA-konsentrasjonen for prøvene og kontrollene. HIV-1-RNA-konsentrasjonen uttrykkes i kopier/ml. Omregningsfaktoren mellom HIV-1-RNA-kopier/ml og HIV-1-internasjonale enheter (IU)/ml er 0,6 kopier/iu, basert på WHO 1. internasjonale standard for HIV-1-RNA for NAT (nukleinsyrebaserte teknikker) (NIBSC 97/656) 36. Denne omregningsfaktoren ble bestemt ved bruk av COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR-test, v1.5, COBAS AmpliPrep/COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR-test, v1.5 og COBAS TaqMan HIV-1-test for bruk med High Pure System. AMPLILINK-programvaren: Bestemmer syklusterskelverdi (Cycle Threshold, Ct) for HIV-1-RNA samt HIV-1-QS-RNA. Bestemmer HIV-1-RNA-konsentrasjon basert på Ct-verdiene for HIV-1-RNA og HIV-1-QS- RNA samt de lotspesifikke kalibreringskoeffisientene angitt på kassettenes strekkoder. Kontrollerer at det beregnede kopier/ml for HIV-1 L(+)C, v2.0 og HIV-1 H(+)C, v2.0 faller innenfor de tillagte akseptgrensene. Validering av analyseserie AMPLILINK version 3.2 Series For å sikre at analyseserien er gyldig, sjekk i AMPLILINK-resultatvinduet eller på utskriften om det finnes flagg og kommentarer. For kontroller blir det foretatt en sjekk for å bestemme om kopier/ml-verdien for kontrollen er innenfor det angitte akseptområdet. Hvis kopier/ml-verdien for kontrollen ligger utenfor akseptområdet, blir det opprettet et flagg for å angi at kontrollen ikke lyktes. Analyseserien er gyldig hvis det ikke fremkommer flagg for kontrollene [HIV-1 L(+)C, v2.0; HIV-1 H(+)C, v2.0 og CTM ( ) C]. 05447992001-04NO 19 Doc Rev. 5.0

Analyseserien er ikke gyldig hvis noen av de følgende flaggene vises for HIV-1-kontrollene. Negativ kontroll Flagg Resultat Tolkning _N_NC_INVALID Invalid Et ugyldig resultat eller et "gyldig" resultat som ikke var negativt for mål-hiv-1 HIV-1 Lav positiv kontroll, v2.0 Flagg Resultat Tolkning _L_LPCINVALID < 2.00E+01 cp/ml Kontroll under akseptområdet _L_LPCINVALID Target Not Detected Kontroll under akseptområdet _L_LPCINVALID Et numerisk titer X.XXE+XX cp/ml Kontroll utenfor akseptområdet _L_LPCINVALID > 1.00E+07 cp/ml Kontroll over akseptområdet _L_LPCINVALID Invalid Et ugyldig resultat HIV-1 Høy positiv kontroll, v2.0 Flagg Resultat Tolkning _H_HPCINVALID < 2.00E+01 cp/ml Kontroll under akseptområdet _H_HPCINVALID Target Not Detected Kontroll under akseptområdet _H_HPCINVALID Et numerisk titer X.XXE+XX cp/ml Kontroll utenfor akseptområdet _H_HPCINVALID > 1.00E+07 cp/ml Kontroll over akseptområdet _H_HPCINVALID Invalid Et ugyldig resultat Hvis analyseserien er ugyldig, må hele oppsettet gjentas, inkludert preparering av prøver og kontroller, amplifikasjon og deteksjon. Validering av analyseserie AMPLILINK version 3.3 Series Sikre at analyseserien er gyldig ved å se i AMPLILINK-resultatvinduet eller på utskriften om det finnes flagg og kommentarer. For kontroller blir det foretatt en sjekk for å bestemme om kopier/ml-verdien for kontrollen er innenfor det angitte akseptområdet. Hvis kopier/ml-verdien for kontrollen ligger utenfor akseptområdet, blir det opprettet et flagg for å angi at kontrollen ikke lyktes. Analyseserien er gyldig hvis det ikke fremkommer flagg for kontrollene [HIV-1 L(+)C, v2.0; HIV-1 H(+)C, v2.0 og CTM ( ) C]. Analyseserien er ikke gyldig hvis noen av de følgende flaggene vises for HIV-1-kontrollene. Negativ kontroll Flagg Resultat Tolkning NC_INVALID Invalid Et ugyldig resultat eller et "gyldig" resultat som ikke var negativt for mål-hiv-1 05447992001-04NO 20 Doc Rev. 5.0

HIV-1 Lav positiv kontroll, v2.0 Flagg Resultat Tolkning LPCINVALID Invalid Et ugyldig resultat eller kontroll utenfor akseptområdet HIV-1 Høy positiv kontroll, v2.0 Flagg Resultat Tolkning HPCINVALID Invalid Et ugyldig resultat eller kontroll utenfor akseptområdet Hvis analyseserien er ugyldig, må hele oppsettet gjentas, inkludert preparering av prøver og kontroller, amplifikasjon og deteksjon. Tolking av resultater For å validere analyseserien må hvert prøvesvar kontrolleres for å se om det finnes noen flagg eller kommentarer på resultatutskriften. Tolk resultatene på følgende måte: En gyldig analyserunde kan omfatte både gyldige og ugyldige prøveresultater, avhengig av om varslingsflaggene og/eller kommentarene er innhentet fra de ulike prøvene. Prøveresultater tolkes på følgende måte: Titerresultat Target Not Detected Tolkning Ct-verdi for HIV-1 er høyere enn analysens måleområde, eller ingen Ct-verdi for HIV-1 er påvist. Rapporter resultatene som "HIV-1-RNA ikke detektert". < 2.00E+01 cp/ml Beregnet kopier/ml er lavere enn analysens deteksjonsgrense. Rapporter resultater som "HIV-1-RNA detektert, mindre enn 20 HIV-1-RNA kopier/ml". 2.00E+01 cp/ml og 1.00E+07 cp/ml Beregnede resultater er større enn eller lik 20 kopier/ml og mindre enn eller lik 1,00E+07 kopier/ml, og ligger innenfor analysens lineære område. > 1.00E+07 cp/ml Beregnet kopier/ml ligger over analysens måleområde. Rapporter resultater som "større enn 1,00E+07 HIV-1-RNA kopier/ml". Hvis det er ønskelig med et kvantitativt resultat, kan den opprinnelige prøven fortynnes i forholdet 1:100 med HIV-1-negativt humant EDTA-plasma og analyseres på nytt. Multipliser det rapporterte resultatet med fortynningsfaktoren. Merk: Merk: Merk: Prøver som ligger høyere enn analysens måleområde som gir et ugyldig resultat med flagget "QS_INVALID", må ikke rapporteres som > 1,00E+07 kopier/ml. Den opprinnelige prøven bør fortynnes i forholdet 1:100 med HIV-1-negativt humant EDTAplasma og analyseres på nytt. Multipliser det rapporterte resultatet med fortynningsfaktoren. Titerresultatet "Failed". Tolkning: Prøven er ikke behandlet på korrekt måte under klargjøring på COBAS AmpliPrep-instrumentet. Titerresultatet "Invalid". Tolkning: Et ugyldig resultat. 05447992001-04NO 21 Doc Rev. 5.0

KVALITETSKONTROLL Én COBAS TaqMan negativ kontroll, én HIV-1 lav positiv kontroll, v2.0, og én HIV-1 høy positiv kontroll, v2.0, må tas med i hver analyseserie. Analyseserien er gyldig hvis det ikke fremkommer flagg for kontrollene [HIV-1 L(+)C, v2.0, HIV-1 H(+)C, v2.0 og CTM ( ) C]. Kontroller om det finnes flagg og kommentarer i analyseutskriften for å sikre at analyseserien er gyldig. Negativ kontroll CTM ( ) C skal vise resultatet "Target Not Detected". Hvis CTM ( ) C flagges som ugyldig, er hele analyseserien ugyldig. Gjenta hele prosessen (prøve- og kontrollpreparering, amplifikasjon og deteksjon). Kontakt det lokale Roche-kontoret for teknisk hjelp hvis CTM ( ) C er ugyldig i flere gjentatte analyseserier. Positive kontroller Akseptområdet for HIV-1 L(+)C, v2.0 og HIV-1 H(+)C, v2.0 er spesifikt for hver reagenslot og angitt på strekkodene på COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-testens v2.0 reagenskassett. HIV-1-RNA kopier/ml for HIV-1 L(+)C, v2.0 og HIV-1 H(+)C, v2.0 må ligge innenfor det tillagte akseptområdet. Hvis en av eller begge de positive kontrollene flagges som ugyldige, er hele analyseserien ugyldig. Gjenta hele prosessen (prøve- og kontrollpreparering, amplifikasjon og deteksjon). Kontakt det lokale Roche-kontoret for teknisk hjelp hvis HIV-1-RNA-titer for en av eller begge de positive kontrollene konsekvent er utenfor akseptområde i flere analyseserier. FORSIKTIGHETSREGLER Som for andre laboratorieprosedyrer, er god laboratorieteknikk essensielt for å sikre optimal ytelse for denne analysen. TESTENS BEGRENSNINGER 1. Denne testen er kun validert for bruk sammen med humant plasma med EDTA som antikoagulant. Testing av andre prøvematerialer kan føre til feil resultat. 2. Ytelsen for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 er ikke evaluert med prøver som inneholder HIV-1-gruppe N og heller ikke med prøver som inneholder HIV-2. 3. Pålitelige resultater er avhengig av adekvat prøvetaking, transport, oppbevaring og håndtering. 4. Tilstedeværelsen av AmpErase-enzymet i COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 Master Mix reduserer risikoen for kontaminasjon fra amplicon. Kontaminering av HIV-1-positive kontroller og kliniske prøver kan kun unngås gjennom gode laboratorierutiner og ved å følge anvisningene i dette pakningsvedlegget nøye. 5. Dette produktet må kun brukes av personell som er opplært i PCR-teknikk. 6. Dette produktet kan kun brukes sammen med COBAS AmpliPrep-instrumentet og COBAS TaqMan -analysatoren eller COBAS TaqMan 48-analysatoren. 7. Selv om det er sjelden, kan mutasjoner innenfor den høyt konserverte regionene av virusgenomer som er dekket av COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 primere og/eller prober, føre til manglende evne til å påvise viruset. 8. Deteksjon av HIV-1 RNA er avhengig av antall viruspartikler som er til stede i prøven, og kan påvirkes av metoden for prøvetaking og pasientfaktorer (dvs. alder, tilstedeværelse av symptomer og/eller infeksjonsstadium. 9. På grunn av de naturlige forskjellene mellom teknologier, anbefales det at brukerne utfører metodekorrelasjonsstudier i laboratoriet for å kvantifisere de teknologiske forskjellene før en ny teknologi tas i bruk. 05447992001-04NO 22 Doc Rev. 5.0

INTERFERERENDE SUBSTANSER Økte nivåer for triglyserider (opp til 3500 mg/dl), bilirubin (opp til 28 mg/dl), albumin (opp til 8900 mg/dl), hemoglobin (opp til 900 mg/dl) og humant DNA (opp til 0,4 mg/dl) i prøver samt nærvær av autoimmune sykdommer eller respektive markører slik som systemisk lupus erythematoe (SLE), reumatoid artritt (RA) og Antinukleært antistoff (ANA) har vist seg å ikke interferere med kvantiteringen av HIV-1 RNA eller påvirke spesifisiteten for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0. Evalueringen ble utført i henhold til CLSI-retningslinje EP7-A2 ved bruk av en lot av COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 reagenser. Det er vist at følgende legemiddelkomponenter, som er testet ved 3 ganger høyeste plasmanivå (Cmax) ikke interfererer med kvantiteringen av HIV-1 RNA eller påvirker spesifisiteten for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0: HIV-medikamenter: Proteasehemmere Atazanavir Darunavir Fosamprenavir Lopinavir/ritonavir Nelfinavirmesylat Ritonavir Saquinavir Tipranavir Integrasehemmer Raltegravir Oppstartshemmer Maraviroc Nukleosidanaloge reverstranskriptasehemmere Abakavirsulfat Didanosin, ddl Emtricitabin Lamivudin, 3TC Stavudin, 4dT Tenofovir DF Zidovudin Ikke-nukleoside reverstranskriptasehemmere Efavirenz Nevirapin Fusjonshemmer Enfuvirtid HBV- og / eller HCV-medikamenter: Nukleotidanalog Adefovir dipivoxil Nukleosidanaloge Entecavir Telbivudin Immunitetsmodulatorer Peginterferon alfa-2a Peginterferon alfa-2b Ribavirin Preparater for behandling av herpesvirus: Nukleotidanalog Acyclovir Nukleotidderivater Ganciklovir Valganciklovir HCl 05447992001-04NO 23 Doc Rev. 5.0

VURDERING AV ANALYTISK YTELSE A. Deteksjonsgrense Deteksjonsgrensen for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ble bestemt ved å teste 2. internasjonale HIV-1 RNA WHO-standard, NIBSC-kode 97/650 41, HIV-1 subtype B, fortynnet i HIV-1- negativt humant EDTA-plasma. Deteksjonsgrensen ble bestemt for tre reagenslot. Tre fortynningsserier ble analysert for hver reagenslot. Totalt ble ca. 126 paralleller per konsentrasjonsnivå testet. Evalueringen ble utført i henhold til CLSI-retningslinje EP17-A. Konsentrasjonen av HIV-1 RNA som kan detekteres med en positivitetsrate på mer enn 95 % som bestemt ved PROBIT-analyse er 20 kopier/ml eller 33 IU/ml. Resultatene for de individuelle lot var 17,7 kopier/ml (95 % konfidensintervall: 13,7-26,9 kopier/ml) for lot 1, 17,0 kopier/ml (95 % konfidensintervall: 14,0-22,6 kopier/ml) for lot 2 og 14,2 kopier/ml (95 % konfidensintervall: 11,2 22,1 kopier/ml) for lot 3. De kombinerte resultatene for alle tre reagenslotene er vist i tabell 2. Omregningsfaktoren mellom IU/ml og kopier/ml ble bestemt ved bruk av COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR-test, v1.5, COBAS AmpliPrep/COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR-test, v1.5 og COBAS TaqMan HIV-1-test for bruk med High Pure System. Nominell input (HIV-1 RNA IU/ml) Tabell 2 Deteksjonsgrense for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ved bruk av WHO international standard og PROBIT-analyse Nominell input (HIV-1 RNA kopier/ml) Antall paralleller Antall positive Positivitetsrate 100 60 126 126 100 % 67 40 186 185 99 % 50 30 126 125 99 % 33 20 126 124 98 % 25 15 59 53 90 % 17 10 126 108 86 % 8 5 125 66 53 % 0 0 126 0 0 % 27,5 IU/ml (95 % konfidensintervall: 23,8-33,0 IU/ml) PROBIT 95 % treffrate 16,5 kopier/ml (95 % konfidensintervall: 14,3-19,8 kopier/ml) I tillegg ble fortynninger av cellekultursupernatanter som representerer HIV-1 gruppe-m subtyper A-H i HIV-1-negativt humant EDTA-plasma analysert med to reagenslot. For hvert HIV-1 undertypisolat ble fire konsentrasjonsnivåer på ca. 10, 30, 50 og 75 kopier/ml testet i 24 paralleller per reagenslot. Tildelingen av nominelle konsentrasjoner til stamløsning fra cellekulturer ble utført ved å beregne gjennomsnittet av titer for COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR-test, v1.5, VERSANT HIV-1 RNA 3,0-analyse (bdna)-titer og Abbott RealTime HIV-1-analyse. Analysering av hitrate viser en positiv rate på mer enn 95 % for alle subtyper ved 32 kopier/ml. De kombinerte resultatene for de to reagenslot vises i tabell 3. 05447992001-04NO 24 Doc Rev. 5.0

Tabell 3 Deteksjonsverifiseringsgrense for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ved bruk av HIV-1 gruppe M subtyper A-H og 95 % treffrateanalyser Subtype Isolatangivelse Laveste konsentrasjonsnivå 95 % treffrate (kopier/ml) A 92UG029 10 A 4237A/98 29 B 92TH026 32 B 8E5/LAV 30 C 92BR025 30 C 3777A/97 11 D 92UG021 30 D 92UG035 11 E 92TH022 12 E 92TH009 14 F 93BR020 32 G ARP173/RU570 13 H HIV V1557 16 B. Presisjon Presisjonen for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ble bestemt ved analysering av serielle fortynninger av en HIV-1 cellekultursupernatantprøve (HIV-1 subtype B) i HIV-1-negativt humant EDTA-plasma. Tildelingen av titer for cellekultursupernatanten (stamkonsentrasjon) ble utført med en metode som sikrer sporbarheten til 1. internasjonale HIV-1 RNA WHO-standard, NIBSC-kode 97/656 36. Tre reagenslot ble analysert og det ble utført 15 analyseringer per reagenslot og hver besto av 6 fortynningsnivåer og 3 paralleller på hvert nivå. Hver prøve ble tatt gjennom hele COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0-prosedyre, inkludert prøvebehandling, amplifikasjon og deteksjon. Derfor representerer presisjonen som er vist her, alle aspekter av testprosedyren. Resultatene for hver reagenslot og for de tre reagenslot i kombinasjon blir vist i tabell 4. Titerresultat (kopier/ml) Tabell 4 Presisjon for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 Lot 1 Lot 2 Lot 3 Alle tre lot i kombinasjon Total Total SD Total SD Total SD Total SD i log lognormal i log i log i log CV (%) 1,0E+02 0,19 0,16 0,17 0,17 41 1,0E+03 0,07 0,09 0,07 0,08 20 1,0E+04 0,07 0,07 0,06 0,07 16 1,0E+05 0,04 0,05 0,07 0,06 15 1,0E+06 0,10 0,09 0,10 0,10 25 1,0E+07 0,11 0,12 0,14 0,13 33 05447992001-04NO 25 Doc Rev. 5.0

C. Lineært område COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ga en lineær respons fra 20 (Log 10 = 1,30) HIV-1 RNA kopier/ml til 1,0E+07 (Log 10 = 7,00) HIV-1 RNA kopier/ml. Evalueringen ble utført i henhold til CLSIretningslinje EP6-A ved bruk av to lot COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 reagenser og serielle fortynninger for høytiter HIV-1 RNA (+) cellekultur supernatantprøver. To reagenslot ble analysert og det ble utført 15 analyseringer per reagenslot og hvert inneholdt 12 fortynningsnivåer og 3 paralleller på hvert nivå. Resultatene for en reagenslot er vist i figur 7. Figur 7 Lineæritet for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 Resultater for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 HIV-1-test, v2.0 Log 10 HIV-1 RNA [cp/ml] 8 7 6 5 4 3 2 1 0 y = 1,003x -0,043 R 2 = 0,989 1 2 3 4 5 6 7 8 Nominell konsentrasjon Log 10 HIV-1 RNA [cp/ml] 05447992001-04NO 26 Doc Rev. 5.0

D. Inklusivitet av HIV-1 gruppe M Åtte subtypekategorier er blitt foreslått for HIV-1 gruppe M basert på nukleotiddivergens. Disse subtypene er angitt med store bokstaver fra A til H 40. Ytelsen for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 på HIV-1-subtyper ble evaluert ved å analysere stamløsninger av cellekulturer som representerte hver av HIV-1 gruppe-m-subtypene A til H. Fastsettelsen av de nominelle konsentrasjonene i cellekulturstamløsningene ble utført ved å beregne gjennomsnitt av titre for COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR-test, v1,5, VERSANT HIV-1 RNA 3,0-analyse (bdna) titer og Abbott RealTime HIV-1-analyse. Stammaterialet fra hver cellekultur ble fortynnet til nominelle konsentrasjoner på ca. 2,00E+02, 2,00E+04 og 2,00E+06 kopier/ml i EDTA-plasma. Konsentrasjonene ble så testet i 10 paralleller av COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ved bruk av en reagenslot. Gjennomsnittelig log 10 titre for alle konsentrasjoner og subtyper ble sammenlignet med respektive log 10 nominelle titre. Evalueringen av 8 HIV-1 subtype isolater av COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 viser like resultater for alle testede representater for HIV-1 gruppe M subtyper (se figur 8). Gjennomsnittelig log 10 konsentrasjon for alle subtyper ble innen ± 0,3 log 10 av tildelt gned input-konsentrasjon. Figur 8 COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 test av inklusivitet cellekultursupernatanter nominell konsentrasjon COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 Gjennomsnittlig log 10 konsentrasjon HIV-1 gruppe M-subtype 05447992001-04NO 27 Doc Rev. 5.0

E. Deteksjon av HIV-1 gruppe O Fortynninger av en HIV-1 gruppe O cellekultursupernatant (isolat MVP5180) i humant EDTA-plasma ble analysert med to reagenslot. Fire konsentrasjonsnivåer på ca. 10, 30, 50 og 75 kopier/ml ble testet i 24 paralleller per reagenslot. Tildeling av den nominelle konsentrasjonen til cellekultur-stammaterialet ble utført av Abbott RealTime HIV-1-analysen. Analysering av hitrate viser en positiv rate på mer enn 95 % ved 30 kopier/ml. HIV-1 gruppe O cellekultur-stammaterialet ble fortynnet til nominelle konsentrasjoner på ca. 2,00E+02, 2,00E+03 og 2,00E+05 kopier/ml i EDTA-plasma. Konsentrasjonene ble så testet i 10 paralleller av COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ved bruk av en reagenslot. Gjennomsnittelig log 10 - titre for alle konsentrasjoner var lineær og innen ± 0,3 log 10 av respektive log 10 nominell titer (se figur 9). Figur 9 COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 test av inklusivitet HIV-1 Group O Linearitet subtype O (MVP5180) Gjennomsnittlig observert log 10 titer 7,0 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 y = 1,0098x - 0,3307 R 2 = 0,9999 0,0 0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 log 10 nominell titer I tillegg ble 10 cellekulturmaterialer og en fortynnet pasientprøve (11613) fra HIV-1 gruppe O testet parallelt i COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 og i Abbott RealTime HIV-1-analyse. Alle 11 prøver ble funnet positive med COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 (se tabell 5). Begge testene ga en gjennomsnittelig log 10 -titer for de 11 prøvene innen 0,1 log 10. 05447992001-04NO 28 Doc Rev. 5.0

Isolatangivelse Tabell 5 Gjenkjenning av HIV-1 gruppe O isolater av COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 Log 10 -titer COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 Log 10 -titer Abbott RealTime HIV-1-analyse BBI PRD 301, BV-5050 3,09 2,42 BBI PRD 301, BV-5051 2,86 3,35 BBI PRD 301, BV-5003 3,00 2,71 BBI PRD 301, BV-5024 2,87 2,69 MVP5180 2,78 3,25 HIV-1 CA-9 3,31 3,08 BCF01 5,71 5,61 BCF02 5,16 5,39 BCF07 4,27 4,81 BCF011 5,57 5,26 11613 2,97 2,05 Gjennomsnittlig log 10 titer 3,78 3,69 F. Spesifisitet Spesifisiteten til COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ble bestemt med to reagenslot ved å analysere HIV-1-negative EDTA-plasmaprøver fra blodgivere. Totalt 660 individuelle EDTA-plasmaprøver viste gyldige resultater og alle var negative for HIV-1 RNA i COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0. Basert på disse resultatene er spesifisiteten for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 100 % (ensidig nedre 95 % konfidensgrense: 99,6 %). G. Analytisk spesifisitet Den analytiske spesifisiteten for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ble evaluert ved å tilsette dyrkede organismer (virus, bakterier, gjærsopp) eller DNA (HTLV-2) ved 5E+04 partikler/ml input-konsentrasjon i HIV-1-negativt humant EDTA-plasma og i HIV-1-positivt humant EDTA-plasma ved 1,5E+02 kopier/ml HIV-1 (se tabell 6). Ingen testede organismer viste kryssreaktivitet med COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0. HIV-1- positive prøver ga titerresultater som var innen ± 0,5 log 10 fra en HIV-1-positiv kontroll. 05447992001-04NO 29 Doc Rev. 5.0

Tabell 6 Analytiske spesifisitetsprøver Virus Adenovirus type 5 Cytomegalovirus Epstein-Barr-virus Humant herpesvirus, type 6 Herpes simplex virus, type 1 Herpes simplex virus, type 2 Humant T-celle lymfotropt virus, type 1 Humant T-celle lymfotropt virus, type 2 Influensa A Hepatitt A-virus Hepatitt B-virus Hepatitt C-virus Bakterier Staphylococcus aureus Propionibacterium acnes Gjærsopp Candida albicans H. Metodekorrelasjon Ytelsen for COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ble sammenlignet med COBAS AmpliPrep/COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR-test, v1,5, med COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test og med Abbott RealTime HIV-1-analysen ved analysering av 92, ufortynnede HIV-1-positive kliniske prøver og ved analysering av 34 fortynnede cellekultursupernatanter. Prøvene omfattet HIV-1 gruppe-m subtyper A til H samt sirkulerende rekombinante former for viruset og ble analysert på to eksterne steder. Totalt 126 prøver fordelt over det dynamiske området av COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 ble testet med de fire testene. Kun gyldige titerpar innen de lineære områder for begge sammenlignede analyser ble antatt for Deming regresjonsanalyser (se figurene 10 til 12). 05447992001-04NO 30 Doc Rev. 5.0

Figur 10 Korrelasjon mellom COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 og COBAS AmpliPrep/COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR-test, v1.5 7 log 10 (COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 kons.) 6 5 4 3 2 1 y = 0,874x + 0,609 R 2 = 0,875 0 0 1 2 3 4 5 6 7 log 10 (COBAS AmpliPrep/COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR-test, v1.5 kons.) Figur 11 Korrelasjon mellom COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 og COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test log 10 (COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 kons.) 7 y = 1,008x + 0,213 6 R 2 = 0,936 5 4 3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 log 10 (COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test kons.) 05447992001-04NO 31 Doc Rev. 5.0

Figur 12 Korrelasjon mellom COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test v2.0 og Abbott RealTime HIV-1-analysen 7 log 10 (COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0 kons.) 6 5 4 3 2 1 0 y = 0,963x + 0,271 R 2 = 0,902 0 1 2 3 4 5 6 7 Log 10 (Abbott RealTime HIV-1 analysekons.) 05447992001-04NO 32 Doc Rev. 5.0

REFERANSER 1. Barre-Sinoussi, F., Chermann, J.C., Rey, F., Nugeyre, M.T., Chamaret, S., Gruest, J., Dauguet, C., Axler-Blin, C., Vezinet-Brun, F., Rouzioux, C., Rozenbaum, W., Montagnier, L. 1983. Isolation of a T- lymphotropic retrovirus from a patient at risk for acquired immune deficiency syndrome (AIDS). Science 220:868-871. 2. Popovic, M., Sarngadharan, M.G., Read, E., Gallo, R.C. 1984. Detection, isolation, and continuous production of cytopathic retroviruses (HTLV-III) from patients with AIDS and pre-aids. Science 224:497-500. 3. Gallo, R.C., Salahuddin, S.Z., Popovic, M., Shearer, G.M., Kaplan, M., Haynes, B.F., Palker, T.J., Redfield, R., Oleske, J., Safai, B., White, G., Foster, P., Markham, P.D. 1984. Frequent detection and isolation of cytopathic retroviruses (HTLV-III) from patients with AIDS and at risk for AIDS. Science 224:500-503. 4. Curran, J.W., Jaffe, H.W., Hardy, A.M., Morgan, W.M., Selik, R.M., Dondero, T.J. 1988. Epidemiology of HIV Infection and AIDS in the United States. Science 239:610-616. 5. Gaines, H., von Sydow, M.A., von Stedingk, L.V. 1990. Immunological changes in primary HIV-1 infection. AIDS 4:995-999. 6. Tindall, B., and Cooper, D.A. 1991. Primary HIV-1 infection: host responses and intervention strategies. AIDS 5:1-14. 7. Daar, E.S., Moudgil, T, Meyer. R.D., Ho, D.D. 1991. Transient high levels of viremia in patients with primary human immunodeficiency virus type 1 infection. New England Journal of Medicine 324:961-964. 8. Clark, S.J., Saag, M.S., Decker, W.D. 1991. High titers of cytopathic virus in plasma of patients with symptomatic primary HIV-1 infection. New England Journal of Medicine 324:954-960. 9. Albert J., Abrahamsson B., Nagy K., Aurelius E., Gaines H., Nystrom G., Fenyo E.M. 1990. Rapid development of isolate-specific neutralizing antibodies after primary HIV-1 infection and consequent emergence of virus variants which resist neutralization by autologous sera. AIDS 4:107-112. 10. Horsburgh, C.R. Jr., Ou, C.Y., Jason, J., Holmberg, S.D., Longini, I.M. Jr., Schable, C., Mayer, K.H., Lifson, A.R., Schochetman, G., Ward, J.W, et al. 1989. Duration of human immunodeficiency virus infection before detection of antibody. Lancet 16:637-640. 11. Schnittman, S.M., Psallidopoulos, M.C., Lane, H.C., Thompson, L., Baseler, M., Massari, F., Fox, C.H., Salzman, N.P., Fauci, A.S. 1989. The reservoir for HIV-1 in human peripheral blood is a T cell that maintains expression of CD4. Science 245:305-308. Erratum in: Science 1989 245, preceding 694. 12. Schnittman, S.M., Greenhouse, J.J., Psallidopoulos, M.C., Baseler, M., Salzman, N.P., Fauci, A.S., Lane, H.C. 1990. Increasing viral burden in CD4 + T cells from patients with human immunodeficiency virus (HIV) infection reflects rapidly progressive immunosuppression and clinical disease. Annals of Internal Medicine 113:438-443. 13. Pantaleo, G., Graziosi, C., Fauci, A.S. 1993. New concepts in the immunopathogenesis of human immunodeficiency virus (HIV) infection. New England Journal of Medicine 328:327-335. 14. Piatak, M. Jr., Saag, M.S., Yang, L.C., Clark, S.J., Kappes, J.C., Luk, K.C., Hahn, B.H., Shaw, G.M., Lifson, J.D. 1993. High levels of HIV-1 in plasma during all stages of infection determined by competitive PCR. Science 259:1749-1754. 15. Fauci, A.S., Schnittman, S.M., Poli, G., Koenig, S., Pantaleo, G. 1991. NIH conference: immunopathogenic mechanisms in human immunodeficiency virus (HIV) infection. Annals of Internal Medicine 114:678-693. 16. Coffin, J.M. 1995. HIV-1 population dynamics in vivo: Implications for genetic variation, pathogenesis, and therapy. Science 267:483-489. 05447992001-04NO 33 Doc Rev. 5.0

17. Ho, D.D., Neumann, A.U., Perelson, A.S., Chen, W., Leonard, J.M., Markowitz, M. 1995. Rapid turnover of plasma virions and CD4 lymphocytes in HIV-1 infection. Nature 373:123-126. 18. Wei, X., Ghosh, S.K., Taylor, M.E., Johnson, V.A., Emini, E.A., Deutsch, P., Lifson, J.D., Bonhoeffer, S., Nowak, M.A., Hahn, B.H., et al. 1995. Viral dynamics in human immunodeficiency virus type 1 infection. Nature 373:117-122. 19. O'Brien, W.A., Hartigan, P.M., Martin, D., Esinhart, J., Hill, A., Benoit, S., Rubin, M., Simberkoff, M.S., Hamilton, J.D. 1996. Changes in plasma HIV-1 RNA and CD4 lymphocyte counts and the risk of progression to AIDS. Veterans Affairs Cooperative Study Group on AIDS. New England Journal of Medicine 334:426-431. 20. Welles, S.L., Jackson, J.B., Yen-Lieberman, B., Demeter, L., Japour, A.J., Smeaton, L.M., Johnson, V.A., Kuritzkes, D.R., D'Aquila, R.T., Reichelderfer, P.A., Richman, D.D., Reichman, R., Fischl, M., Dolin, R., Coombs, R.W., Kahn, J.O., McLaren, C., Todd, J., Kwok, S., Crumpacker, C.S. 1996. Prognostic value of plasma Human Immunodeficiency Virus Type I (HIV-1) RNA levels in patients with advanced HIV-1 disease and with little or no zidovudine therapy. AIDS Clinical Trials Group Protocol 116A/116B/117 Team. Journal of Infectious Diseases 174:696-703. 21. Coombs, R.W., Welles, S.L., Hooper, C., Reichelderfer, P.S., D'Aquila, R.T., Japour, A.J., Johnson, V.A., Kuritzkes, D.R., Richman, D.D., Kwok, S., Todd, J., Jackson, J.B., DeGruttola, V., Crumpacker, C.S., Kahn, J. 1996. Association of plasma Human Immunodeficiency Virus Type I RNA level with risk of clinical progression in patients with advanced infection. AIDS Clinical Trials Group (ACTG) 116B/117 Study Team. ACTG Virology Committee Resistance and HIV-1 RNA Working Groups. Journal of Infectious Diseases 174:704-712. 22. Hammer, S., Crumpacker, C., D'Aquila, R., Jackson, B., Lathey, J., Livnat, D., Reichelderfer, P. 1993. Use of virologic assays for detection of human immunodeficiency virus in clinical trials: Recommendations of the AIDS Clinical Trials Group Virology Committee. Journal of Clinical Microbiology 31:2557-2564. 23. Schochetman, G., George, J.R., ed. AIDS testing: a comprehensive guide to technical, medical, social, legal and management issues. 2nd ed. New York: Springer-Verlag, 1994. 24. Mulder, J., McKinney, N., Christopherson, C., Sninsky, J., Greenfield, L., Kwok, S. 1994. Rapid and simple PCR assay for quantitation of human immunodeficiency virus type 1 RNA in plasma: Application to acute retroviral infection. Journal of Clinical Microbiology 32:292-300. 25. Dewar, R.L., Highbarger, H.C., Sarmiento, M.D., Todd, J.A., Vasudevachari, M.B., Davey, R.T. Jr., Kovacs, J.A., Salzman, N.P., Lane, H.C., Urdea, M.S. 1994. Application of branched DNA signal amplification to monitor human immunodeficiency virus type 1 burden in human plasma. Journal of Infectious Diseases 170:1172-1179. 26. van Gemen, B., Kievits, T., Schukkink, R., van Strijp, D., Malek, L.T., Sooknanan, R., Huisman, H.G., Lens, P. 1993. Quantification of HIV-1 RNA in plasma using NASBA during HIV-1 primary infection. Journal of Virological Methods 43:177-187. 27. Saiki, R.K., Scharf, S., Faloona, F., Mullis, K.B., Horn, G.T., Erlich, H.A., Arnheim, N. 1985. Enzymatic amplification of b-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of Sickle Cell Anemia. Science 230:1350-1354. 28. Saiki, R.K., Gelfand, D.H., Stoffel, S., Scharf, S.J., Higuchi, R., Horn, G.T., Mullis, K.B., Erlich, H.A. 1988. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase. Science 239:487-491. 29. Mullis, K.B., Faloona, F.A. 1987. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction. Methods in Enzymology 155:335-350. 30. Q. Meng, C. Wong, A. Rangachari, S. Tamatsukuri, M. Sasaki, E. Fiss, L. Cheng, T. Ramankutty, D. Clarke, H. Yawata, Y. Sakakura, T. Hirose, and C. Impraim. 2001. Automated Multiplex Assay System for Simultaneous Detection of Hepatitis B Virus DNA, Hepatitis C Virus RNA, and Human Immunodeficiency Virus Type 1 RNA. Journal of Clinical Microbiology 39 (8):2937-2945. 05447992001-04NO 34 Doc Rev. 5.0

31. Smith, E.S., Li, A.K., Wang, A.M., Gelfand, D.H., Myers, T.M. 2003. Amplification of RNA: High- Temperature Reverse Transcription and DNA Amplification with a Magnesium-Activated Thermostable DNA Polymerase. In PCR Primer: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Dieffenbach C.W. and Dveksler G.S., Eds. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, pp. 211-219. 32. Kwok, S., Sninsky, J.J. 1993. PCR detection of human immunodeficiency virus type 1 proviral DNA sequences. In: Diagnostic Molecular Biology: Principles and Applications. eds. Persing, D.H., Smith, T.F., Smith, F.C., et al. ASM, Washington, D.C. 33. Longo, M.C., Berninger, M.S., Hartley, J.L. 1990. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions. Gene 93:125-128. 34. Higuchi, R., Dollinger, G., Walsh, P.S., Griffith, R. 1992. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Biotechnology (N Y). 10:413-417. 35. Heid, C.A., Stevens, J., Livak, J.K., Williams, P.M. 1996. Real time quantitative PCR. Genome Research 6:986-994. 36. Holmes, H., Davis, C., Heath, A., Hewlett, I. and Lelie, N. 2001. An international collaborative study to establish the 1st international standard for HIV-1 RNA for use in nucleic acid-based techniques. Journal of Virological Methods 92:141-150. 37. Richmond, J.Y. and McKinney, R.W. eds. 1999. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication Number (CDC) 93-8395. 38. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections. Approved Guideline-Third Edition. CLSI Document M29-A3 Wayne, PA:CLSI, 2005. 39. International Air Transport Association. Dangerous Goods Regulations, 41st Edition. 2000. 704 pp. 40. Robertson DL, Anderson JP, Bradac JA, Carr JK, Foley B, Funkhouser RK, Gao F, Hahn BH, Kalish ML, Kuiken C, Learn GH, Leitner T, McCutchan F, Osmanov S, Peeters M, Pieniazek D, Salminen M, Sharp PM, Wolinsky S, and Korber B: HIV-1 Nomenclature proposal: A reference guide to HIV-1 classification. In: Human Retroviruses and AIDS 1999: A Compilation and Analysis of Nucleic Acid and Amino Acid Sequences (Kuiken C, Foley B, Hahn B, Korber B, McCutchan F, Marx PA, Mellors JW, Mullins JI, Sodroski J, and Wolinsky S, eds.). Theoretical Biology and Biophysics Group, Los Alamos National Laboratory, Los Alamos, New Mexico, 1999, pp. 492-505. 41. Davis, C., Berry, N., Heath, A. and Holmes, H. 2008. An international collaborative study to establish a replacement World Health Organization International Standard for human immunodeficiency virus 1 RNA nucleic acid assays. Vox Sanguinis 95: 218-225. 05447992001-04NO 35 Doc Rev. 5.0

Informasjon om dokumentrevisjon Doc Rev. 5.0 7/2010 Doc Rev. 4.0 3/2010 Avsnittet INTERFERERENDE SUBSTANSER: Tabellen med medikamenter som er testet for interferens, er oppdatert. Avsnittet VURDERING AV ANALYTISK YTELSE: Figur 8 (COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1-test, v2.0; test av inklusivitet - cellekultursupernatanter) er oppdatert. Avsnittene BRUKSANVISNING og KVALITETSKONTROLL: Avklaring av italiensk oversettelse ved å fjerne ordet "replikat". Kontakt din lokale Roche-representant om du har noen spørsmål. Avsnitt REAGENSER: En fullstendig advarsel angående 0,1 % ProClin 300 konserveringsmiddel er innsatt. Kontakt din lokale Roche-representant om du har noen spørsmål. Roche Molecular Systems, Inc., Branchburg, NJ 08876 USA Medlem av Roche-gruppen Roche Diagnostics (Schweiz) AG Roche Diagnostics Industriestrasse 7 201, boulevard Armand-Frappier 6343 Rotkreuz, Switzerland H7V 4A2 Laval, Québec, Canada (For Technical Assistance call: Roche Diagnostics GmbH Pour toute assistance technique, Sandhofer Straße 116 appeler le: 1-877 273 3433) 68305 Mannheim, Germany Roche Diagnostics Roche Diagnostics SL 2, Avenue du Vercors Avda Generalitat, 171-173 38240 Meylan, France E-08174 Sant Cugat del Vallès Barcelona, Spain Distributore in Italia: Roche Diagnostics S.p.A. Roche Diagnostica Brasil Ltda. Viale G. B. Stucchi 110 Av. Engenheiro Billings, 1729 20052 Monza, Milano, Italy Jaguaré, Building 10 05321-010 São Paulo, SP Brazil Distribuidor em Portugal: Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Estrada Nacional, 249-1 2720-413 Amadora, Portugal 05447992001-04NO 36 Doc Rev. 5.0

ROCHE, AMPERASE, AMPLICOR, AMPLILINK, COBAS, COBAS P, AMPLIPREP, HIGH PURE og TAQMAN er varemerker for Roche. ARMORED RNA er en patentert teknologi som er utviklet i fellesskap av Ambion, Inc. og Cenetron Diagnostics, LLC. U.S. patent #5,677,124, #5,919,625, #5,939,262, #6,214,982, #6,399,307, og patentsøknader under behandling. ARMORED RNA er et varemerke for Ambion og Cenetron. MICROSOFT og WINDOWS er varemerker for Microsoft. PROCLIN er et varemerke for Rohm and Haas Company. VERSANT er et varemerke for Bayer Corporation. Cyaninfargestoffene i dette produktet er underlagt pasientrettighetene for GE Healthcare Bio-Sciences Corp. and Carnegie Mellon University og er lisensiert til Roche eksklusivt for innlemmelse i komponenter i kit for forskning in vitro-diagnostikk. Enhver bruk av slike kit til annet formål enn forskning eller in vitrodiagnostikk krever underlisenser fra GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, New Jersey, USA og Carnegie Mellon University, Pittsburgh, Pennsylvania, USA. Enkelte komponenter av dette produktet er dekker av en eller flere US-patenter og deres tilsvarende utenlandske utstedt til Chiron Corporation og lisensiert til Roche Molecular Systems, Inc. og F. Hoffman-La Roche Ltd. Enkelte komponenter av dette produktet er dekker av en eller flere US-patenter og deres tilsvarende utenlandske utstedt til Isis Pharmaceuticals og lisensiert til Roche Molecular Systems, Inc. Lisensiert under US Patent No. 5,407,796 og andre patentsøknader under behandling. 2010 Roche Molecular Systems, Inc. Med enerett. 7/2010 (05328268001-05ENGL) 05447992001-04 Doc Rev. 5.0 05447992001-04NO 37 Doc Rev. 5.0