Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay

Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay 72460-20 72460 EN KVALITATIV ANALYSE FOR BEKREFTELSE OG DIFFERENSIERING AV INDIVIDUELLE ANTISTOFFER MOT HIV-1 OG HIV-2 I FULLBLOD-, SERUM- ELLER PLASMAPRØVER 0 883601-2013/01

Innhold 1. BEREGNET BRUK:... 1 2. OPPSUMMERING OG FORKLARING AV TESTEN... 1 3. PROSEDYREPRINSIPP... 1 4. REAGENSER... 2 5. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER... 3 6. PRØVER... 4 7. PROSEDYRE... 5 8. TESTBEGRENSNING... 11 9. YTELSESEGENSKAPER... 12 10. REFERANSER.... 17

1. BEREGNET BRUK: Bio-Rad Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay er en immunokromatografisk hurtigtest for bekreftelse og differensiering av individuelle antistoffer mot humant immunsviktvirus Type 1 og 2 (HIV-1 og HIV-2) i fingerstikk fullblod-, venøse fullblod-, serum- eller plasmaprøver. Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay er beregnet til bruk som en ekstra test for å bekrefte tilstedeværelse av antistoffer mot HIV-1 og HIV-2 for prøver funnet å være gjentatt reaktive i screeningprosedyrer. 2. OPPSUMMERING OG FORKLARING AV TESTEN Humant immunsviktvirus (HIV) ble oppdaget i 1983 og er et retrovirus identifisert som etiologisk agent for ervervet immunsviktsyndrom (AIDS). AIDS er karakterisert av endringer i populasjonen av T- cellelymfocytter, som spiller en sentral rolle i immunforsvaret. I det infiserte individet forårsaker viruset en uttømming av en subpopulasjon av T-celler, som kalles T-hjelpeceller, noe som etterlater disse pasientene mottakelige for opportunistiske infeksjoner og visse maligniteter. Hovedrutene for overføring er seksuell kontakt, forurensning av blod eller blodprodukter og overføring mellom mor og nyfødte barn. Ved utgangen av 2010 var det om lag 34 millioner mennesker som lever med HIV/AIDS globalt, en økning på 17 % fra 2001. Det var 2,7 millioner [2,4-2,9] nye HIV-infeksjoner i 2010, inkludert et estimat på 390 000 [340 000-440 000] blant barn. Dette var 15 % færre enn i 2001 og 21 % under antallet nye infeksjoner på toppen av epidemien i 1997. Selv om HIV-viruset består av et genomisk RNA-molekyl beskyttet av en kapsid og en konvolutt, er HIV-konvolutten det viktigste målet for humoral antistoffrespons. Tilstedeværelsen av viruset i pasienter forårsaker at immunsystemet fremkaller produksjon av antistoffer mot HIV. Detekteringen av disse antistoffene kan brukes som et diagnostisk verktøy. Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay er en hurtig immunokromatografisk test, som er enkel og lett å bruke. Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay benytter immobiliserte antigener for påvisning av antistoffer mot HIV-1 og HIV-2 i serum-, plasma- eller fullblodprøver. 3. PROSEDYREPRINSIPP Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay benytter antistoffbindende protein A, som blir konjugert til kolloidale gullfargestoffpartikler som konjugat og HIV-1 (P31, gp160, p24, gp41) og HIV-2-antigener (gp36, gp140), som er bundet til membranens faste fase. Prøven påføres godt på PRØVE + BUFFERbrønn. Etter at prøven og bufferen har migrert på teststrimmelen, tilsettes ekstra buffer i BUFFERbrønnen. Bufferen letter den laterale flowen av av de frigitte produktene og fremmer bindingen av antistoffer til antigenene. I en reaktiv prøve, fanges anti-hiv-antistoffene opp av antigenene som er immobilisert i TESTområdet (båndene 1-6): det kolloidale gullproteinet A binder seg til de fangede antistoffene og produsere rosa/lilla linjer. I fravær av HIV-antistoffer er det ingen rosa/lilla linjer i TEST-området. I begge tilfeller fortsetter prøven å migrere langs membranen og produserer en rosa/lilla linje i CONTROL (C) hvor protein A blir immobilisert. Immunoglobulin G fra prøven bundet til protein A som immobiliseres i (C)-sonen i membranens fastfase og produsere en rosa/lilla linje. Denne kontrollinjen brukes til å vise at prøve og reagenser har blitt riktig påført og har migrert gjennom enheten. 1

Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay-kassetten inneholder et kontrollbånd (C) og seks (6) testlinjene som er nummererte på kassetten i samsvar med følgende: Bånd 1: gp36 (HIV-2, konvolutt peptid) HIV-2 ENV Bånd 2: gp140 (HIV-2, konvolutt peptider) HIV-2 ENV Bånd 3: p31 (HIV-1, polymerase peptid) HIV-1 POL Bånd 4: gp160 (HIV-1, konvolutt rekombinant protein) HIV-1 ENV Bånd 5: p24 (HIV-1, kjerne rekombinant protein) HIV-1 GAG Bånd 6: gp41 (Gruppe M og O) (HIV-1, konvolutt peptider) HIV-1 ENV CTRL-bånd: Protein A 4. REAGENSER 4.1 Beskrivelse Identifikasjon på etikett Beskrivelse Presentasjon Device Nitrocellulosemembran inneholder HIV-1-og HIV-2-20 x 1 antigener i TEST-området, protein A i CONTROL-området Klar til bruk og kolloidalt gullprotein A i BUFFER-brønnområde Buffer Buffer-dråpeteller med konserveringsmiddel (natriumazid <0,1 %, gentamycinsulfat 0,125 %, streptomycinsulfat 0,125 %) Microtubes 15 µl 15 µl mikrorør kapillaritetsplastpipetter (ingen antikoagulant, for fingerstikkprotokoll) 1 x 5 ml Klar til bruk 1 x 20 Klar til bruk 4.2 Krav til lagring og håndtering Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay (enhet og buffer) skal oppbevares ved 2 C til 30 C til utløpsdatoen på kit. Må ikke fryses. Ikke åpne posen før du skal utføre en test. Bufferen er stabil frem til utløpsdatoen etter førstegangsbruk i rutinen. 2

5. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Til in vitro-diagnostisk bruk. Må kun brukes av helsepersonell. 5.1 Helse og sikkerhetsforholdsregler Dette testsettet må kun håndteres av tilstrekkelig opplært personell. Bruk egnet verneutstyr, hansker og vernebriller/ansiktsskjerm og håndter riktig med nødvendige god laboratoriepraksis. Testkit inneholder humane blodkomponenter. Ingen kjent testmetode kan gi fullstendig forsikring om at smittsomme stoffer er fraværende. Derfor må alle humane blodderivater, reagenser og humane prøver håndteres som om de kan overføre smittsomme sykdommer, og man må følge anbefalte forholdsregler slik de er definert av lokale, regionale og nasjonale forskrifter. Biologisk søl: Søl fra humant kildemateriale skal behandles som potensielt smittefarlig. Søl som ikke inneholder syre skal umiddelbart dekontamineres, inkludert området for sølet, materialer og eventuelle forurensede overflater eller utstyr, med et egnet kjemisk desinfeksjonsmiddel som er effektivt mot den potensielle biologiske faren i forhold til de involverte prøvene (vanligvis en 1:10 fortynning av husholdningsblekemiddel, 70-80 % etanol eller isopropanol, en jodofor [for eksempel 0,5 % Wescodyne Plus osv.), og tørkes opp. MERKNAD: Ikke plasser løsninger som inneholder blekemidler i autoklaven Kast alle prøver og materiell som brukes til å utføre testen, som om de inneholder smittestoffer. Laboratorieavfall, kjemisk eller biologisk avfall må håndteres og kastes i henhold til lokale, regionale og nasjonale forskrifter. For anbefalinger om farer og forholdsregler knyttet til kjemiske komponenter i dette testsettet, henvises det til piktogrammet (-ene) som er nevnt på etikettene og informasjonen som følger på slutten av brukerveiledningen. Sikkerhetsdatablad er tilgjengelig på www.bio-rad.com. 5.2 Forholdsregler tilknyttet prosedyren 5.2.1 Klargjøring Les pakningsvedlegget fullstendig før du bruker denne analysen. Følg instruksjonene grundig, for unnlatelse av å gjøre dette kan føre til unøyaktige testresultater. Bruk av dette testkit med andre prøvetyper enn de som spesifikt er godkjent for bruk med denne enheten, kan føre til unøyaktige testresultater. Denne testen skal utføres ved 18 C til 30 C. Hvis den oppbevares i kjøleskap, må du vente i minst 30 min. for at reagensene kan stabiliseres ved romtemperatur. IKKE BRUK testenheten hvis det ikke finnes noen tørkemiddelpose i enhetens pose. Kast testenheten og bruk en ny enhet fra en pose som inneholder et tørkemiddel. IKKE BRUK testenheten hvis tørkemiddelpose er skadet. Hver testenheten er kun til engangsbruk. Ikke bruk testenheten eller reagensen i kit etter utløpsdatoene. Sjekk alltid utløpsdatoene før testing. Ikke bland reagenser fra forskjellige lotnumre i kitene. Tilstrekkelig belysning er nødvendig for å avlese testresultatene. 3

Dersom testkit lagres ved temperaturer utenfor lagringstemperaturen på 2 C til 30 C, eller brukes utenfor driftstemperaturen på 18 C til 30 C, må du bruke Geenius HIV 1/2 Confirmatory Controls, ref: 72329, for å sikre riktig utførelse av testen. 5.2.2 Behandling Etter at den lukkede posen er åpnet, må enheten brukes innen 60 min. Du må ikke endre analyseprosedyren. 6. PRØVER Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay kan utføres på prøver fra venøsteller fingerstikksfullblod, serum eller plasma. 6.1 Prøvetyper Venøst fullblod Ta ut blod ved å følge laboratorieprosedyren for å skaffe veneblod. Samle prøven i et rør som inneholder citrat, heparin eller EDTA. Sørg for at røret med blod er godt blandet før prøvetaking. Bruk en laboratoriepipette til å trekke ut 15 µl av blodet. Test umiddelbart etter testprosedyreinstruksjonene. Fingerstikk fullblod Rengjør fingeren på personen som skal testes med et antiseptisk tørk. La fingeren tørke grundig eller tørk av med en steril kompress. Bruk en steril lansett og punkter huden like ved sentrum av finger og tørk bort den første dråpen med en steril kompress og unngå å klemme fingertuppen for å akselerere blødningen, da dette kan fortynne blodet med overflødig vevsvæske. Samle 15 µl av prøven fra den andre dråpen ved å berøre bloddråpen med engangsmikrorørpipetten som medfølger til pipetten er full, ved å følge fremgangsmåten under. Test umiddelbart etter testprosedyreinstruksjonene. Serum eller plasma Ta ut blod ved å følge laboratorieprosedyren for å skaffe serum eller plasma. Samle serumprøvene i rør som inneholder et koaguleringsmiddel som ikke inneholder noen antikoagulant (serum). Samle plasmaprøvene i et rør som inneholder citrat, heparin eller EDTA-antikoagulanter. Samle prøven i en ren beholder etter standard laboratorieprosedyrer. Sørg for at røret med serum eller plasma blir godt blandet før prøvetaking. Bruk en laboratoriepipette til å trekke ut 5 µl av prøven. Test umiddelbart etter testprosedyreinstruksjonene. 6.2 Prøvehåndtering Fingerstikk fullblod bør testes umiddelbart etter innsamlingen. Venøstfullblod, prøvene kan testes umiddelbart eller lagres ved 2 C til 8 C i inntil 3 dager etter innsamling før testing. IKKE FRYS FULLBLOD. Serum- og plasmaprøver kan testes umiddelbart eller lagres ved 2 C til 8 C i inntil 7 dager etter innsamling før testing. For langtidslagring må serum- og plasmaprøver fryses (ved -20 C eller kaldere). Prøvene må ikke brukes hvis de har blitt utsatt for mer enn 5 fryse-tine-sykluser. Bland prøvene grundig og forsiktig etter tining og bring dem til romtemperatur. Ingen interferens har oppstått i prøver som inneholdt inntil 200 mg/l med bilirubin, eller i lipemiske prøver som inneholder inntil 33 g/l med triolein, eller i hemolyserte prøver som inneholder inntil 2 g/l med hemoglobin. Unormalt høy verdi på albuminemia eller proteinemia (120 g/l) viser heller ingen interferens. 4

6.3 Forsendelse av prøver Hvis prøvene skal sendes, bør de pakkes i samsvar med regelverket for transport av etiologiske midler. Prøver av venøstfullblod må sendes nedkjølt med kalde omslag eller våt is. Serum- og plasmaprøver må sendes frosset i tørris. 7. PROSEDYRE 7.1 Påkrevde materialer Materiale som medfølger Enhet (20 enheter), bufferdråpeteller (1 x 5 ml) og 15 µl mikrorør (1 x 20) per sett. Se punkt 4.1 Beskrivelse. Materiell som kreves anskaffet separat Geenius HIV 1/2 Confirmatory Controls, ref: 72329. Materialer som kreves, men ikke medfølger Klokke, ur eller annen tidtakerenhet. Pipetteenhet som kan levere 5 µl (serum/plasma) og 15 µl (veneblod) av prøven. Engangshansker. Biofarebeholdere til avfallsbehandling. 7.2 Klargjøring av reagenser Alle komponenter til Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay er klare til bruk slik de medfølger. 7.3 Analyseprosedyre Fullblod-PROSEDYRE 1. Fjern Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay-enheten fra posen og legg den på et flatt underlag (det er ikke nødvendig å fjerne tørkemiddelet fra posen). MERKNAD: Hvis tørkemiddelposen mangler, må settet IKKE BRUKES. Kast testenheten og bruk en ny testenhet. Merk testenheten med pasient-id eller IDnummer (se figur 1 nedenfor). Vær oppmerksom på at Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay-enheten har seks (6) blåfargede linjer i TEST-området (ingen blå linjer i CONTROL-området), hvis noen av de 6 fargede linjene ikke finnes, må enheten ikke brukes. Kast testenheten og bruk en ny testenhet. Figur 1 5

Venøst fullblod Se klargjøring av prøven i punkt 6.1 Prøvetyper. Fingerstikk fullblod Se klargjøring av prøven i punkt 6.1 Prøvetyper. Trinn 1: Hold det 15 µl mikrorøret horisontalt og berør bloddråpen med spissen. Kapillærvirkningen vil automatisk trekke prøven opp til påfyllingsstreken og stoppe. Trinn 2: For å skyve ut prøven still spissen av røret på høyde med prøvemålet og klem på blæren. Hvis prøven ikke vil skyves ut, hold røret vertikalt og skyv fingeren over luftehullet. Still deretter spissen mot prøvemålet og klem på blæren. 2. Slipp ut 15 µl fullblod til midten av SAMPLE + BUFFER brønn 1 på enheten (se figur 2 nedenfor). For venøstblod brukes en laboratoriepipette. For fingerstikk fullblod følger man protokollen med hjelp av mikrorør 15 µl i settet (se trinn 1 og 2 ovenfor). 3 Umiddelbart etter tilsetning av prøven bruker man bufferdråpetelleren til å tilsette 2 dråper buffer i SAMPLE +BUFFER brønn 1 (se figur 3 nedenfor). Figur 3 Figur 2 6

Figur 4 4. Vent 5-7 minutter, de 6 blåfargede TEST-linjene skal ha forsvunnet fra det rektangulære TESTområdet. Hvis ikke, må du kaste testenheten og gjenta prosedyren med en ny testenhet. MERKNAD: En svak blå-grønn farge kan være igjen på membranen, men ingen av de faktiske fargede linjer bør sees på dette punktet. Bruk bufferdråpetelleren til å tilsette 5 dråper buffer (hvit hette) til BUFFER brønn 2 (se figur 4 nedenfor). 5. Avles testresultatene mellom 20 til 30 minutter etter tilsetningen av buffer i BUFFER brønn 2 Ikke avles resultatene etter 30 minutter Avles resultatene på et godt opplyst område. MERKNAD: Kast de brukte pipettespissene, testenheten og eventuelt annet testmateriell i en biofarebeholder. Serum- eller plasma-prosedyre Se klargjøring av prøven i punkt 6.1 Prøvetyper. 1. Fjern Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay-enheten fra posen og legg den på et flatt underlag (det er ikke nødvendig å fjerne tørkemiddelet fra posen). MERKNAD: Hvis tørkemiddelposen mangler, må enheten IKKE BRUKES. Kast testenheten og bruk en ny testenhet. Merk testenheten med pasient-id eller ID-nummer (se figur 1 nedenfor). Vær oppmerksom på at Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay-enheten har seks (6) blåfargede linjer i TEST-området (ingen blå linjer i CONTROL-området), hvis noen av de 6 fargede linjene ikke finnes, må enheten ikke brukes. Kast testenheten og bruk en ny testenhet. Figur 1 7

2. Slipp ut 5 µl serum/plasma til midten av SAMPLE + BUFFER brønn 1 på enheten med en laboratoriepipette (se figur 2 nedenfor). Figur 2 3 Umiddelbart etter tilsetning av prøven bruker man oppløsningsvæskedråpetelleren til å tilsette 2 dråper fra bufferdråpetelleren i SAMPLE +BUFFER brønn 1 (se figur 3 nedenfor). Figur 3 4. Vent i 5-7 minutter. Alle de 6 blåfargede TESTlinjene skal ha forsvunnet fra det rektangulære TEST-området. Hvis ikke, må du kaste testenheten og gjenta prosedyren med en ny testenhet. MERKNAD: En svak blå-grønn farge kan være igjen på membranen, men ingen av de faktiske fargede linjer bør sees på dette punktet. Bruk oppløsningsvæskedråpetelleren til å tilsette 5 dråper (150 µl) til BUFFER brønn 2 (se figur 4). Figur 4 Avles testresultatene mellom 20 til 30 minutter etter tilsetningen av buffer i BUFFER brønn 2 5. Ikke avles resultatene etter 30 minutter Avles resultatene på et godt opplyst område. MERKNAD: Kast de brukte pipettespissene, testenhetene og eventuelt annet testmateriell i en biofarebeholder. 7.4 Kvalitetskontroll 7.4.1 Innebygd kontrollfunksjon Kontrollinjen fungerer som en innebygd internkontroll og gir bekreftelse av prøvetilsetning og riktig testytelse. En rosa/lilla linje vil vises i CONTROL-området (C) hvis testen er riktig utført og enheten fungerer som den skal (se: Tolkning av testresultater). 7.4.2 Ekstern kvalitetskontroll Geenius HIV 1/2 Confirmatory Controls, ref: 72329 kan leveres separat for bruk med Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay. Det anbefales å utføre Geenius HIV 1/2 Confirmatory kontroll under følgende forhold: Når du åpner et nytt lot med testsett. Når du mottar en ny forsendelse med testkit. 8

Hvis temperaturen på lagringsområdet faller utenfor 2 C til 30 C. Hvis temperaturen på testområdet faller utenfor 18 C til 30 C. I periodiske intervaller som angitt av brukeranlegget. 7.5 Testvalideringskriterier BAND-reaktivitet Alle synlige bånd, selv et svakt bånd må anses som reaktivt. Valideringskriterier GYLDIG: En test er bare gyldig dersom en rosa/lilla linje vises i CONTROL-området (C), enten en linje vises i TEST-linjeområdet eller ikke. (CONTROL-båndet må være sterkt: et svakt bånd er ikke akseptabelt for CONTROL-båndet) UGYLDIG: Hvis det ikke finnes noen tydelig rosa/lilla linje synlig (inkludert et svakt bånd) i CONTROL-området (C), er testen ugyldig. En UGYLDIG test kan ikke tolkes. Det er nødvendig å gjenta prøvetestingen med en ny enhet. 7.6 Tolkning av resultatene Følgende definisjoner beskriver kriterier som benyttes av Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay til å fastslå tilstedeværelse eller fravær av antistoffer mot HIV-1 og/eller HIV-2. Brukeren analyserer deretter de kombinerte typespesifikke båndprofilene for hver analyse i henhold til kriteriene angitt i tabellen for tolkning av resultatene nedenfor. 7.6.1 Tolkningskriterier HIV-1 tolkningskriterier Tolkning POSITIV NEGATIV UBESTEMMELIG Bio-Rad-kriterier Alle 2 bånd på de 4 HIV-1-testlinjene med minst 1 ENV gp160 (bånd 4) eller gp41 (bånd 6) Ingen bånd 1ENV (bånd 4 eller 6) 1GAG (bånd 5) 1POL (bånd 3) 1GAG og 1POL (båndene 5 og 3) HIV-2 tolkningskriterier Tolkning POSITIV NEGATIV UBESTEMMELIG Bio-Rad-kriterier 2 HIV-2 bånd må være til stede: gp36 og gp140 (båndene 1 og 2) Ingen bånd 1 ENV: gp36 (bånd 1) eller gp140 (bånd 2) gp36 (bånd 1) alene gp140 (bånd 2) alene 9

GLOBALE HIV-1/HIV-2 tolkningskriterier Følgende tabell over tolkning av resultater beskriver kriteriene som benyttes i Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay for å tolke de kombinerte typespesifikke båndmønstrene som observeres for hver analyse. HIV-2 RESULTAT HIV-1 RESULTAT GLOBAL ANALYSETOLKNING Negativ Negativ HIV NEGATIV Ubestemmelig Negativ HIV-2 UBESTEMMELIG Negativ Ubestemmelig HIV-1 UBESTEMMELIG Ubestemmelig Ubestemmelig HIV UBESTEMMELIG Negativ Positiv HIV-1 POSITIV Ubestemmelig Positiv HIV-1 POSITIV Positiv Negativ HIV-2 POSITIV Positiv Ubestemmelig HIV-2 POSITIV Positiv Positiv tilfelle 1 = 1 ENV HIV-1 (gp 160 eller gp41) + GAG eller POL tilfelle 2 = 2 ENV HIV-1 (gp 160 og gp41) +/- GAG og/eller +/-POL HIV-2 POSITIV (med HIV-1 kryssreaktivitet) HIV POSITIV UTYPISERBAR 10

8. TESTBEGRENSNING 8.1 Generelle begrensninger 1. Visuell avlesning kan innføre noen variasjon i den endelige konklusjonen mellom to forskjellige teknikere eller to forskjellige tester: denne forskjellen kan knyttes til subjektivitet i den visuelle tolkningen. 2. For et reaktivt resultat vil intensiteten i testlinjene ikke nødvendigvis korrelere med titerverdien på antistoffet i prøven. 3. En person som er bekreftet HIV-1 Positiv eller HIV-2 Positiv antas å være smittet med viruset, bortsett fra at en person som har deltatt i en HIV-vaksinestudie kan ha utviklet antistoffer mot vaksinen og kan eller kan ikke være infisert med HIV. 4. Personer smittet med HIV-1 og/eller HIV-2 som får høyaktiv antiretroviral terapi (HAART) kan gi falske negative resultater. 5. Variasjonen av viruser i HIV-1 (gruppe M og gruppe O) og HIV-2 utelukker ikke muligheten for falske negative reaksjoner. Ingen kjent testmetode kan gi fullstendig forsikring om at HIVviruset er fraværende. 6. Et ikke-reaktivt resultat utelukker ikke muligheten for eksponering for HIV eller infeksjon med HIV. En antistoffreaksjon på en fersk eksponering kan ta flere måneder for å nå påvisbare nivåer. En positiv screeningtest assosiert med en negativ bekreftende test kan oppstå under den første fasen av infeksjonen, derfor indikerer et negativt resultat at testprøven ikke inneholder anti-hiv-antistoffer som er påvisbare med Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay. Et slikt resultat vil imidlertid ikke utelukke muligheten for en nylig HIV-1/HIV-2-infeksjon. En ny prøve bør testes senere. 7. Et ubestemmelig resultat utelukker ikke muligheten for eksponering for HIV eller infeksjon med HIV. En antistoffreaksjon på en fersk eksponering kan ta flere måneder for å nå påvisbare nivåer. En positiv screeningtest assosiert med en ubestemmelig bekreftende test kan oppstå under den første fasen av infeksjonen, derfor indikerer et ubestemmelig resultat at testprøven ikke inneholder anti-hiv-antistoffer som er påvisbare med Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay. Et slikt resultat vil imidlertid ikke utelukke muligheten for en nylig HIV-1/HIV-2- infeksjon. En ny prøve bør testes senere. 8. Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay er ment som et hjelpemiddel i diagnostikk av infeksjon med HIV-1 og eller HIV-2. HIV- og AIDS-relaterte forhold er kliniske syndromer og deres diagnose kan bare etableres klinisk. 9. Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay må KUN brukes med kapillærblod, venøst fullblod, serum eller plasma. Bruk av andre typer prøver eller testing av venepunktur fullblodprøver samlet inn med hjelp av et rør som inneholder en annen antikoagulant enn citrat, heparin eller EDTA, vil ikke gi nøyaktige resultater. 10. Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay må brukes i samsvar med instruksjonene i dette produktvedlegget for å få nøyaktige resultater. 11. Avlesing av testresultater før 20 minutter eller senere enn 30 minutter siden tilsetning av buffer i BUFFER brønn 2 kan gi feil resultater. 8.2 Analysetolkningsbegrensninger En "ubestemmelig" profil utelukker ikke en av følgende situasjoner: serokonversjon, eller en kryssreaksjon med andre retroviruser. Homologien mellom HIV-1- og HIV-2-virus kan føre til kryssreaksjon mellom både anti-hiv-1- og anti-hiv-2-antistoffer mot HIV-2- og HIV-1-virus. Prøver som oppfyller HIV-1-positive kriterier viser i noen sjeldne tilfeller noe kryssreaktivitet på en av HIV-2-envelopbåndene. I de fleste tilfellene, vil en profil som bekrefter en enkelt HIV-1- infeksjon ikke utelukke i svært sjeldne tilfeller muligheten for en sekundær HIV-2- serokonversjon (superinfeksjon). Prøver som oppfyller HIV-2-positive kriterier kan vise kryssreaktivitet på ett eller flere HIV-1- bånd. I de fleste tilfellene bekrefter en HIV-1-ubestemmelige profil knyttet til en HIV-2-positiv 11

profilen en enkelt HIV-2-infeksjon. Men det utelukker ikke muligheten for en sekundær HIV-1- serokonversjon (superinfeksjon). Prøver som oppfyller både HIV-1- og HIV-2-positive kriterier er vanligvis HIV-2-positive prøver som viser HIV-1-kryssreaktivitet når de bare har ett oppdaget konvoluttbånd (gp160 eller gp41). Slike profiler utelukker ikke den sjeldne muligheten for en felles HIV-1- / HIV-2-infeksjon. HIV-utypiserbare prøver med alle 4 konvoluttbåndene oppdaget (alle HIV-1- og HIV-2-konv.) er i de fleste tilfellene HIV-2-positive prøver med HIV-2-reaktivitet som ikke kan skjelnes visuelt fra HIV-1-reaktivitet. Slike profiler utelukker ikke muligheten for en felles HIV-1- / HIV-2-infeksjon. Prøver som oppfyller både HIV-1- og HIV-2-positive kriterier er i meget sjeldne tilfeller HIV-1- positive prøver som viser HIV-2-kryssreaktivitet. 9. YTELSESEGENSKAPER 9.1 Presisjonsstudie Et presisjonspanel (N=6) bestående av tre serum- og 3 fullblodprøver med forskjellig HIVstatus (HIV-negativ, HIV-1-positiv, HIV-2-positive) ble testet. For hver presisjonsstudie og paneldeltaker ble en samsvarsprosentandel bestemt som antall reaksjoner riktig identifiserte i forhold til prøvestatus. 9.1.1 Repeterbarhet Presisjonspanelet ble testet i 10 replikater i samme kjøring. Repeterbarhetsmålingen ble funnet med samsvar på 100 % for HIV-negative, HIV-1-positive og HIV-2-positive. Paneldeltaker Repeterbarhetsresultater for serum Repeterbarhetsresultater for fullblod N NEG IND POS samsvar N NEG IND POS samsvar HIV NEG 10 10 0 0 100 % 10 10 0 0 100 % HIV-1 POS 10 0 0 10 100 % 10 0 0 10 100 % HIV-2 POS 10 0 0 10 100 % 10 0 0 10 100 % 9.1.2 Mellomliggende presisjon Presisjon per kjøring og dag Serumpresisjonspanelet ble testet i duplikat per kjøring, med 2 kjøringer per dag i 10 dager og fullblodpresisjonspanelet i tre eksemplarer per kjøring, med 2 kjøringer per dag i 3 dager. En kjøring-tilkjøring og dag-til-dag presisjon ble funnet med samsvar på 100 % for HIV-negative, HIV-1-positive og HIV-2-positive prøver. Paneldeltaker Presisjonsresultater per kjøring og dag for Presisjonsresultater per kjøring og dag for fullblod serum N NEG IND POS samsvar N NEG IND POS samsvar HIV NEG 40 40 0 0 100 % 18 18 0 0 100 % HIV-1 POS 40 0 0 40 100 % 18 0 0 18 100 % HIV-2 POS 40 0 0 40 100 % 18 0 0 18 100 % Parti- og operatørpresisjon Presisjonspanelet ble testet i duplikat på 2 partier med reagens og 3 operatører med 1 kjøring per dag i 3 dager. En inter-kjøring- og inter-operatør-presisjon ble funnet med samsvar på 100 % for HIVnegative, HIV-1-positive og HIV-2-positive prøver. 12

Paneldeltaker Presisjonsresultater for parti og operatør for Presisjonsresultater for parti og operatør for fullblod serum N NEG IND POS Samsvar N NEG IND POS Samsvar HIV NEG 36 36 0 0 100 % 36 36 0 0 100 % HIV-1 POS 36 0 0 36 100 % 36 0 0 36 100 % HIV-2 POS 36 0 0 36* 100 % 36 0 0 36 100 % * 2 replikater ga HIV-1-kryssreaksjon 9.2 Klinisk ytelse 9.2.1 Diagnostisk spesifisitet Blodgivere Totalt 400 prøver (serum, plasma og veneblod), trukket fra 300 ikke-utvalgte kjente og førstegangs blodgivere, ble testet med Geenius TM HIV 1/2 Confirmatory Assay i en blodbank. 398 prøver ble testet negative og 2 testet ubestemmelige. Da ingen prøver testet positivt, var samlet spesifisitet på 400 prøver % (400/400) med et konfidensintervall på 95 % av [99,1 til ] og 0,5 % (2/400) ubestemmelige resultater. Spesifisitet på blodgivere Serum (SSTII Gel sep) Plasma (*) (EDTA-K2) Venefullblod (EDTA-K2) TOTALT 300 blodgivere Totalt antall prøver Negativ Ubestemmelig Positiv 100 98 2 0 100 100 0 0 200 100 0 0 400 398 2 0 (*) Prøver av plasma paret med fullblodprøver trukket fra de samme 100 blodgiverne Spesifisitet (100/100) (100/100) (200/200) (400/400) 95 CI [96,4 - ] [96,4 - ] [98,2 - ] [99,1 - ] Innlagte pasienter og gravide kvinner Totalt 508 prøver fra 326 innlagte pasienter ble testet på Geenius TM HIV 1/2 Confirmatory Assay på 2 forskjellige steder. Blant disse pasientene hadde 99 kun serumprøvetaking, 100 hadde kun fullblodprøvetaking, 72 hadde både serum- og fullblodprøvetaking, 30 pasienter hadde både serum-, plasma- og fullblodprøvetaking og 25 hadde serum-, plasma- og kapillærblodprøvetaking. 30 serum fra gravide kvinner fra 2 steder ble også testet. Prøver av venøst fullblod og plasma ble samlet inn i EDTA-K2-rør og serum i SSTII med gelseparatorrør. Ingen antikoagulanter ble brukt til kapillær blodprøvetaking. 529 prøver testet negativt og 9 testet ubestemmelig. Da ingen prøver testet positivt, var samlet spesifisitet på 538 prøver % (538/538) med et konfidensintervall på 95 % av [99,3 til -0] og 1,7 % (9/538) ubestemmelige resultater. Da de samme resultatene ble oppnådd fra pasienter som hadde 2 eller 3 typer bloduttak, var spesifisiteten på pasientene 356/356 med 7 ubestemmelige resultater. 13

Sted Pasienter serum (SSTII Gel ) plasma (EDTA-K2) veneblod (EDTA-K2) kapillærblod Totalt antall prøver Sted 1 99 99 / / / 99 Sted 2 227 / / 100 / 100 72 / 72 / 144 30 30 30 / 90 25 25 / 25 75 Totalt 326 226 55 202 25 508 Negativ 221 54 201 25 Ubestemmelig 5(*) 1(*) 1(*) 0 Positiv 0 0 0 0 0 Spesifisitet 95 CI (226/226) (55/55) (202/202) (25/25) (508/508) [98,6 - ] [93,5 - ] [98,2 -] I/R(**) [99,4 - ] Gravide kvinner Frossent serum Totalt 30 30 Negativ 28 Ubestemmelig 2 Positiv 0 Spesifisitet (30/30) 95 CI I/R(**) (*) 1 pasient hadde 1 ubestemmelig resultat for både serum, veneblod og plasma (**) Ikke relevant med N<30 befolkning. Blodgivere gir falske positive resultater ved screening Totalt 275 serumprøver trukket fra blodgivere som ga falske positive resultater med HIV ELISAscreeninganalyser, ble testet med Geenius TM HIV 1/2 Confirmatory Assay på to kliniske steder. 258 prøver testet negativt og 17 testet ubestemmelig. Da ingen prøver testet positivt, var samlet spesifisitet på 275 prøver % (275/275) med et konfidensintervall på 95 % av [98,7 til ] og 6,2 % (17/275) ubestemmelige resultater. Spesifisitet på blodgivere TOTALT 275 blodgivere Totalt antall prøver Negativ Ubestemmeli g Positiv 275 258 17 0 Spesifisitet (275/275) 95 CI [98,7 - ] 9.2.2 Diagnostisk sensitivitet HIV-1-smittede pasienter Totalt 599 prøver fra 263 pasienter bekreftet som HIV-1-infiserte fra 2 steder (155 pasienter på sted 1 og 108 pasienter på sted 2) ble testet med Geenius TM HIV 1/2 Confirmatory Assay På 1 sted, ble 108 prøver med ferskt serum og paret plasma, 5 ferskt serum og 50 genotypede HIV-1- belastninger (2 CRF01, 5 CRF02, 1 CRF05, 1 CRF06, 2 CRF09, 1 CRF11, 1 CRF12, 1 CRF13, 1 CRF14, 1 CRF15, 1 CRF18, 1 CRF19, 1 CRF22, 1 CRF27, 1 CRF30, 1 CRF36, 1 CRF42, 4 undertype A, 5 undertype B, 2 undertype C, 2 undertype D, 2 undertype F, 2 undertype G, 2 undertype H, 2 undertype J, 1 undertype K, 5 gruppe O) testet. På det andre stedet, hadde blant de 108 pasientene, 82 fullblod-, serum- og plasmaprøvetaking, 20 både fullblod-, kapillærfullblod-, serum- og plasma-prøvetaking og 6 hadde kapillærfullblod-, serum- og plasmaprøvetaking. Prøver av venøst fullblod og plasma ble samlet inn i EDTA-K2-rør og serumprøver i SSTII med gelseparatorrør. Alle de 599 prøvene testet HIV-1-positive, noe som fører til en samlet sensitivitet på % (599/599) med et konfidensintervall på 95 % av [99,4 til ]. HIV-1-sensitivitet på pasientene var 100 % (263/263). 14

Av de totalt 599 prøvene ble 3 prøver funnet HIV-ubestemmelige istedenfor HIV-1-positive, derfor var HIV-1-differensieringskapasiteten på Geenius TM HIV 1/2 Confirmatory Assay 99,5 % (596/599) med et konfidensintervall på 95 % av [98,5 til 99,9]. Sted Pasienter serum (SSTII Gel ) Genotypet serum plasma (EDTA-K2) veneblod (EDTA-K2) kapillærblod Totalt antall prøver Sted 1 100 / / 100 100 / 200 N= 155 5 5 / / / / 5 50 / 50 / / / 50 Sted 2 82 82 / 82 82 / 246 N= 108 20 20 / 20 20 20 80 6 6 / 6 / 6 18 Totalt 263 113 50 208 202 26 599 HIV-1-positiv 113 49 207 201 26 HIVubestemmelig 0 1 1(*) 1(*) 0 Sensitivitet (113/113) (50/50) (208/208) (202/202) (26/26) 95 CI (*) Prøver av plasma paret med veneblodprøver trukket fra den samme HIV-1-smittede pasienten (**) Ikke relevant med N<30 befolkning. (599/599) [97,8 - ] [98,2 - ] [98,2 -] I/R(**) [99,4 - ] HIV-2-smittede pasienter Totalt 283 prøver fra 172 pasienter, bekreftet som HIV-2-infiserte (serum-, plasma-, veneblod og kapillærblod med noen parede prøver trukket fra de samme pasientene ble testet på Geenius TM HIV 1/2 Confirmatory Assay på tre kliniske steder. 66 serumprøver ble innhentet fra to kliniske steder med prøveinnsamlinger. Alle andre prøvene ble hentet ferske fra pasienter. Prøver av veneblod og plasma ble samlet inn i EDTA-K2-rør eller EDTA-K3-rør og serumprøver i SSTII med gelseparatorrør eller tørre rør. 281 prøver testet HIV-1-positive og 2 testet HIV-2-ubestemmelige, noe som fører til en samlet sensitivitet på 99,3 % (281/283) med et konfidensintervall på 95 % av [97,5 til 99,9]. De to HIV-2- ubestemmelige resultatene (gp140 ikke påvist) ble oppnådd med serum og fullblod trukket fra samme pasient og funnet gp105-negative med en CE-merket HIV I/II confirmation assay. 172 prøver over 283 ble riktig funnet HIV-2-positive (med eller uten HIV-1-kryssreaktivitet) eller HIV-2- og 111 HIV-utypiserbare, derfor var HIV-2-differensieringskapasiteten på Geenius TM HIV 1/2Confirmatory Assay 60,8 % (172/283) med et konfidensintervall på 95 % av [54,8 til 66,5]. Steder Pasienter serum (SSTII Gel) Frossent serum plasma (EDTA-K2) veneblod (EDTA-K2 eller K3) kapillærblod Totalt antall prøver Sted 1 5 5 / 5 2 3 15 16 / 16 / / / 16 Sted 2 50 / 50 / / / 50 Sted 3 101 101 / / 101 / 202 Totalt 172 106 66 5 103 3 283 HIV-2-positiv 33 15 3 28 3 HIV-2- positiv med HIV-1-33 19 1 35 0 reaktivitet HIVubestemmelig 39 32 1 39 0 Ubestemmelig 1* 0 0 1* 0 Sensitivitet 99,4 (171/172) (5/5) 99,0 (102/103) (3/3) 99,3 (281/283) 95 CI [96,8 - ] I/R** [94,7 - ] I/R** [97,5-99,9] (*) Prøver av plasma paret med veneblodprøver trukket fra den samme HIV-2-smittede pasienten (**) Ikke relevant med N<30 befolkning. 15

HIV-1 / HIV-2-fellesinfiserte pasienter Totalt 22 prøver fra 15 pasienter, bekreftet som HIV-1HIV-2-fellesinfiserte (13 serum-, 2 plasma- og 7 paret venøst fullblod trukket fra de samme 7 pasientene ble testet på Geenius TM HIV 1/2 Confirmatory Assay på to kliniske steder. 6 serum- og 2 plasmaprøver ble innhentet fra ett klinisk prøveinnsamlingssted og de syv parede serum- / venøse fullblodprøvene ble ferskt hentet fra pasienter på et annet klinisk sted. Samlet sensitivitet var 100 % (22/22) (serum og venøst fullblod) uten ubestemmelige resultater. Ved første forsøk ble alle prøver korrekt funnet HIV-utypiserbare (HIV-1-positive med deteksjon med to konvolutter og HIV-2-positive), bortsett fra én fullblod- og én serumprøve. Fullblod ble feilaktig funnet HIV-2-positiv på grunn av en nylig superinfeksjon. Etter ny prøve noen uker senere, ble denne pasienten korrekt funnet HIV-utypiserbar. Serum ble feilaktig funnet HIV-2-positiv med HIV-1- reaktivitet istedenfor HIV-utypiserbar, men ble også feilaktig funnet HIV-2-positiv (uten HIV-1- reaktivitet) med flere CE-merkede HIV-differensieringsanalyser. 21 av 22 eksemplarer ble korrekt funnet HIV-utypiserbare etter ny prøve på én pasient. Derfor var HIV-1+2-differensieringskapasiteten på Geenius TM HIV 1/2 Confirmatory Assay 95,5 % (21/22). HIV-1-serokonversjonsprøver Sensitiviteten på Geenius TM HIV 1/2 1/2 Confirmatory Assay har blitt estimert med 32 serokonverterpaneler (154 prøver). 41,6 % (64/154) var positive med Geenius TM HIV 1/2 1/2 Confirmatory Assay mens 12,3 % (19/154) ble positive med en CE-merket Western Blot-analyse. Detekteringen av det første positive blødningspunktet var i gjennomsnitt tidligere enn 1,4 (44/32) tidspunkter per panel med Geenius TM HIV 1/2 1/2 Confirmatory Assay. Ved testing av 83 tidlig serokonversjonsprøver (negative eller ubestemmelige med Western Blot), var 10,8 % (9/83) positive med Geenius HIV 1/2 1/2 Confirmatory Assay. Basert på 10 serokonversjonsprøvene testet på et klinisk sted og sammenlignet med samme referanse Western blot-analyse, var Geenius HIV 1/2 1/2 Confirmatory Assay mer følsom for påvisning av antistoffer mot gp41 og hadde en lignende sensitivitet for påvisning av antistoffer mot gp160. Geenius HIV 1/2 1/2 Confirmatory Assay er i samsvar med den tekniske utviklingen når det gjelder sensitivitet estimert med HIV-serokonversjonspaneler. 9.3 Analytisk spesifisitet 9.3.1 Kryssreaktivitet 251 potensielt kryssreagerende prøver som representerte 29 ulike sykdommer/tilstander som testet positivt for følgende markører, ble testet med Geenius TM HIV 1/2 1/2 Confirmatory Assay på ulike kliniske steder. HTLV I/ II (20), Hepatitt C (10 HCV), Hepatitt B (10 anti-hbs) og Hepatitt A (10 HAV IgG); Cytomegalovirus (10 CMV IgG), Epstein-Barr (10 EBV IgG), Herpes Simplex (10 HSV), Rubella IgG (10), Toksoplasmose IgG (5), Syfilis IgG (10), Candida (10), Malaria (26), Dengue (2), Leishmaniose (2), Vaksine (10),, Influensavaksine (5 influensa), Dialyse (10), HAMA (10), Reumatoid faktor (10), Multi-transfusjon (10), Myeloma (5) Hemofili (10), Autoimmun som systemisk lupus erytematose (12 SLE), Skleroderma (2), Sjøgrens (2), Balndet konnektivt vev (2 MCTD), anti-nukleært antistoff (3 ANA), Kreft (5), Cirrose (5) and Multipareøse kvinner (5). Av de totalt 251 vanskelige prøvene testet 245 prøver negative og 6 prøver testet ubestemmelige (de var ubestemmelige med HIV-1 Western-Blot og positive for malaria). Disse resultatene som representerer 2,4 % (6/251) av totalen er ikke blitt vurdert som falske positive. Spesifisiteten (sann neg/ sann neg + falsk positiv) var % (245/245) med et konfidensintervall på 95 % av [98,5 til 0] og 2,4 % (6/251) ubestemmelige resultater. 9.4 Hook effekt Mulig hook effekt ble studert ved å teste 2 HIV-1 og 2 HIV-2 høy-titer-prøver, rene og utvannet. Verken negative resultater eller resultater med lavere intensitet ble observert med ren høy-titer HIV-1- og HIV- 16

2-positive prøver, sammenlignet med sine mer fortynnede former (1:10 til 1:100000). Ekvivalensen av resultatene mellom ufortynnede og fortynnede prøver viser fravær av krokeffekt. 10. Referanser. 1. Barre-Sinoussi, F., Chermann, J.C., Rey, F., et al.: Isolation of T-lymphotropic retroviruses from a patient at risk for acquired immune deficiency syndrome (AIDS). Science 1983, 220:868-871. 2. Gallo, R.C., Salahuddin, S.Z., Popovic, M., et al.: Frequent detection and isolation of cytophatic retrovirus (HTLV-III) from patients with AIDS and at risk for AIDS. Science 1984, 224:500-503. 3. Clavel, F., Guetard, D., Brun-Vézinet, F.: Isolation of a new human retrovirus from West African patients with AIDS. Science 1986, 233:343-346. 4. Rey, F., Salaun, D., Lesbordes, J.L. et al.: Evidence for HIV-1 and HIV-2 double infection in Central African Republic. Lancet, II, 1986, 1391-1392. 5. Gnann, J., McCormick, J.B., Mitchell, S., Nelson, J., Oldstone, M.: Synthetic peptide Immunoassay distinguishes HIV Type 1 and HIV Type 2 Infections. Science 1987, 237:1346-1349. 6. De Cock, K.M., Brun-Vézinet, F., Soro, B: HIV-1 and HIV-2 infections and AIDS in West Africa. AIDS 1991, 5(Suppl 1):S21-28. 7. Simon, F., Souquiere, S., Damond, F., Kfutwah, A., Makuwa, M., et al.: Synthetic peptide strategy for the detection of and discrimination among highly divergent primate lentiviruses. AIDS Res Hum Retroviruses 2001, 17:937-952. 8. Rouet, F., Ekouevi, D.K., Inwoley, A., Chaix, M.L., Burgard, M., et al.: Field evaluation of a rapid human immunodeficiency virus (HIV) serail serologic testing algorithm for diagnosis and differentiation of HIV type 1 (HIV-1), HIV-2, and dual HIV-1-HIV-2 infections in West African pregnant women. J Clin Microbiol 2004, 42:4147-4153. 9. HIV-2 Infection surveillance-united States, 1987-2009 MMWR 2011, 60(29):985-988. 10. Ciccaglione, A.R., Miceli, M., Pisani, G., et al.:i mproving HIV-2 detection by a combination of serological and nucleic acid amplification tests assays. J Clin Microbiol 2010, 48(8):2902-2908. 11. Association of Public Health Laboratories, HIV testing algorithms: A status report. http://www.aphl.org/hiv/statusreport. Accessed 4 August 2010 12. Update on HIV Diagnostic Testing Algorithms. J Clin Virol 2011, 52(1). 17

EUH 208: Inneholder gentamycin. Kan gi en allergisk reaksjon. Bio-Rad 3, Boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette Frankrike Tlf.: +33 (0) 1 47 95 60 00 Faks: +33 (0) 1 47 41 91 33 2013/01 www.bio-rad.com 883601 18