ABX Pentra HbA1c WB. Applikasjonsversjon. Tilsiktet bruk. Klinisk interesse (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7) Metode (8) Klinisk kjemi

Transkript

1 2014/01/30 A93A01326BNO A11A01702 Fullblod Pentra C400 1 x 110 ml 2 x 21 ml Diagnostisk reagens for kvantitativ in vitro-bestemmelse av prosenten av hemoglobin A1c (%HbA1c) ved hjelp av kolorimetri og turbidimetri. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.8 Applikasjonsversjon For HbA1c-assayet: A1c-WB 1.xx For totalhemoglobinassayet: THb-WB 1.xx Tilsiktet bruk Reagensen er tilsiktet in vitrodiagnostisk bestemmelse av hemoglobin A1c-prosenten (%HbA1c) i humant fullblod basert på et kolorimetrisk og turbidimetrisk assay. Målinger av HbA1c-prosenten brukes i klinisk håndtering av diabetes for å vurdere den langsiktige effektiviteten ved diabetisk kontroll. Klinisk interesse (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7) HbA1c er et produkt av ikke-enzymatisk fiksering av den N-terminale delen av β-kjeden i hemoglobin A0. HbA1cnivåene, som er proporsjonale med blodglukosenivåene, reflekterer den gjennomsnittlige daglige glukosekonsentrasjonen i løpet av de to forutgående månedene før blodprøven ble tatt. Nye studier har vist at vanlig HbA1c-måling kan føre til endringer i behandlingen av diabetes og til forbedret metabolisk kontroll, som opptrer som en redusering av HbA1c-verdiene. Den nåværende metoden for in vitro-diagnostikk brukes derfor til kvantitativ bestemmelse av hemoglobin A1c (HbA1c), som er en markør for diabetes, i humant blod. Målinger utført med denne metoden kan brukes til langsiktig kontroll av diabetikere. Metode (8) HbA1c uttrykkes som en prosentandel av det totale hemoglobininnholdet. For å bestemme THbkonsentrasjonene ved hjelp av spektrofotometri, må de forskjellige typene hemoglobin omdannes til én enkel type med et ensartet absorberingsspektrum. Verdiene for HbA1c og totalhemoglobin (THb), målt i µmol, som fremkommer ved utføring av analysen, benyttes til å beregne forholdet mellom HbA1c og THb og må ikke brukes individuelt for diagnosen. Prinsipp (8): Konsentrasjonene av HbA1c og totalhemoglobin måles, og forholdet gis som en prosentandel av HbA1c. Fem reagenser benyttes for å uttrykke HbA1c som en prosentandel: Antibody Reagent (R1) fortynnet med Diluent I (R5), Agglutinator Reagent (R2), Hemolysis Reagent (R3) og Total Hemoglobin Reagent (R4). Fullblodsprøven blandes med Hemolysis Reagent (R3) av analyseapparatet: De røde blodlegemene og hemoglobinkjeden hydrolyseres ved hjelp av en protease som finnes i reagensen. Total Hemoglobin Reagent (R4) brukes for å beregne konsentrasjonen av totalhemoglobin. Metoden er basert på det faktum at alle typer hemoglobin omdannes til alkalisk hematin i en alkalisk løsning av ikke-ionisk rensemiddel, som beskrevet i den originale prosedyren av Wolf et al. Reaksjonen settes i gang ved å tilsette en blodprøve som er forhåndsbehandlet med Total Hemoglobin Reagent (R4), noe som gir løsningen en grønn farge. Å omdanne forskjellige typer hemoglobin til alkalisk hematin med et definert absorberingsspekter gjør at man kan beregne konsentrasjonen av totalhemoglobin. Hemoglobin måles ved hjelp av en endepunktsmetode på 550 nm. Hemoglobinnivåene er direkte proporsjonale med en økning i observert OD. Lateksagglutinasjonstesten benyttes for å måle spesifikk HbA1c. Et agglutinin (syntetisk polymer som inneholder 1 / 7

2 flere kopier av den immunoreaktive delen av HbA1c) forårsaker agglutinasjon av de latekspartiklene som er dekt med monoklonale museantistoffer, spesifikke for HbA1c. Dersom det ikke finnes HbA1c i prøven, vil agglutininet i Agglutinator Reagent (R2) og mikropartiklene som er dekt med Antibody Reagent (R1) agglutinere. Agglutinasjonen fører til en økning i absorbansen til løsningen. Dersom det finnes HbA1c i prøven vil agglutinasjonshastigheten reduseres, siden HbA1c konkurrerer med Agglutinator Reagent (R2) om mikropartiklenes antigener. Jo mer HbA1c som finnes i en prøve, jo lavere vil agglutinasjonshastigheten være. Reaksjonen måles ved hjelp av absorbans ved 550 nm, og agglutinasjonshastigheten benyttes til å beregne konsentrasjonen ved hjelp av en kalibreringskurve. Prosentandelen av HbA1c beregnes deretter ved hjelp av HbA1c og totalhemoglobinverdiene i µmol. Reagenser er et multi-reagenskit. Kittet inneholder: Reagens 1: Antibody Reagent Reagens 2: Agglutinator Reagent Reagens 3: Hemolysis Reagent Reagens 4: Total Hemoglobin Reagent Reagens 5: Diluent I 1 x 110 ml 2 x 21 ml Antibody Reagent (R1) inneholder: partikler koplet til HbA1c-antistoffer (mus), bovint serumalbumin, buffer, overflateaktive stoffer, konserveringsmidler. Agglutinator Reagent (R2) inneholder: Kovalent polymer-bindende hapten, bovint serumalbumin, buffer, konserveringsmiddel, overflateaktivt stoff. Hemolysis Reagent (R3) inneholder: Svinepepsin, buffer, konserveringsmiddel. Dette reagenset selges også separat med referansenummer A11A Total Hemoglobin Reagent (R4) inneholder: Natriumhydroksid, overflateaktivt stoff. Diluent I (R5) inneholder: Konserveringsmiddel, NaCl. må brukes i henhold til dette reagenspakningsvedlegget. Produsenten kan ikke garantere for produktets ytelse hvis det brukes på annen måte. Håndtering i rack 1. Bland 1 volum av Antibody Reagent (R1) med 1 volum av Diluent I (R5) i et MBU-glass på 100 ml, ref.a11a01759 og hell det over i reagensflasker på 15, 10 eller 4 ml. 2. Bland Agglutinator Reagent (R2) forsiktig ved vending, og hell det over i en reagensflaske på 10 eller 4 ml. 3. Bland Hemolysis Reagent (R3) forsiktig ved vending, og hell det over i en reagensflaske på 15, 10 eller 4 ml. 4. Bland Total Hemoglobin Reagent (R4) forsiktig ved vending, og hell det over i en reagensflaske på 15, 10 eller 4 ml. 5. Plasser glassene i et av de tilgjengelige områdene. Vennligst bruk en av følgende kombinasjoner: en reagensflaske på 15 ml en reagensflaske på 10 ml + et spesifikt adapter en reagensflaske på 4 ml + et spesifikt adapter R 3 R 4 6. Fjern eventuelt skum ved hjelp av en plastpipette. 7. Plasser reagensracket i den nedkjølte reagenskarusellen på Pentra C La reagensene stabilisere seg i en time i den nedkjølte delen av reagenskarusellen før bruk. Merk: Bruk kun nødvendig mengde, og sett reagenset til kjøling igjen i en lukket reagensflaske umiddelbart etter bruk. Fullblodprøvene, kalibratoren og kontrollen behøver ikke forhåndsbehandling. Prøvene må være godt homogeniserte før prøvetaking. R 2 R 1 2 / 7

3 Vi anbefaler at du bruker en positive displacement pipette for innsamling av fullblod. Det er mulig å teste opptil 4 prøver samtidig. Dersom mer enn 4 prøver skal testes, må man vente til instrumentets status skifter til "Analysing" før man setter inn de neste prøvene etter homogenisering. Assayer må kun forespørres ved hjelp av forholdet, man må aldri be om separate HbA1c- og THb-assayer. Forholdsformelen må opprettes ved hjelp av NGSPforholdet (se brukermanualen til Pentra C400). Håndtering i kassett 1. Forbered HbA1c-kassetten på følgende måte: a. Bland 1 volum Antibody Reagent (R1) med 1 volum Diluent I (R5) i en MBU-reagenskopp på 100 ml, ref. A11A b. Identifiser en kassett ved hjelp av de spesielle reagensetiketten med strekkode (612). c. Overfør arbeidsreagenset (R1+R5) til 30 mlbeholderen på 30/10-kassetten. d. Bland Agglutinator Reagent (R2) forsiktig ved vending, og hell det over i 10 ml-beholderen på samme 30/10-kassett. e. Fjern eventuelt skum ved hjelp av en plastpipette. 2. Forbered HBT-kassetten på følgende måte: a. Identifiser en annen kassett ved hjelp av de spesielle reagensetiketten med strekkode (613). b. Bland Total Hemoglobin Reagent (R4) forsiktig ved vending, og hell det over i 30 ml-beholderen på 30/10-kassetten. 10 ml-beholderen på denne kassetten vil ikke brukes. c. Fjern eventuelt skum ved hjelp av en plastpipette. R2 Arbeidsreagens (R1 + R5) 612 HbA1c 3. Forbered Hemolysis Reagent (R3) kassetten på følgende måte: a. Identifiser en annen kassett ved hjelp av de spesielle reagensetiketten med strekkode (063). b. Bland Hemolysis Reagent (R3) forsiktig ved vending, og hell det over i 30 ml-beholderen på 30/10-kassetten. 10 ml-beholderen på denne kassetten vil ikke brukes. c. Fjern eventuelt skum ved hjelp av en plastpipette. 4. Plasser kassettene i den egne reagenskarusellen på Pentra C400. La reagensene stabilisere seg i en time i den nedkjølte delen av Pentra C400 reagenskarusellen før bruk. Vi anbefaler at du bruker en positive displacement pipette for innsamling av fullblod. Merk: Assayer må kun bestilles ved hjelp av ratio, man må aldri bestille separate HbA1c- og THb-assayer. Ratioformelen må opprettes ved hjelp av NGSP-ratioen (se brukermanualen til Pentra C400). Kalibrator For kalibrering, bruk: Cal, ref. A11A01703 (medfølger ikke) 1 x 8 ml + 5 x 2 ml Totalhemoglobin kalibreres med Cal (CAL 1), ved hjelp av en fasitverdi for totalhemoglobin. Kalibratorene og reagensene er ikke parti-avhengige og er underlagt en intern kvalitetskontroll hos HORIBA Medical. Kalibrering av HbA1c-metoden utføres ved hjelp av ABX Pentra Cal, som inneholder seks kalibratornivåer for HbA1c. Disse kalibreringsprosedyrene er i overensstemmelse med NGSP/DCCT-sertifiseringen. Kalibratorenes posisjon på prøveracket: HBT Ikke i bruk R4 Posisjon 1: CAL 1 (200 µl) for THb Posisjon 2: CAL 1 (200 µl) for HbA1c Posisjon 3: CAL 2 (150 µl) Posisjon 4: CAL 3 (150 µl) Posisjon 5: CAL 4 (150 µl) Posisjon 6: CAL 5 (150 µl) 3 / 7

4 Posisjon 7: CAL 6 (150 µl) Merk: CAL 1 i posisjon 1 brukes som et eksempel, men CAL 1 kan også plasseres i posisjon 8, 9 eller 10. Kontroll For intern kvalitetskontroll, bruk: Control, ref. A11A01704 (medfølger ikke) Normal kontroll: 2 x 0,25 ml (lyofilisat) Patologisk kontroll: 2 x 0,25 ml (lyofilisat) Hver kontroll skal testes daglig og/eller etter kalibrering. Hyppigheten av kontrollene og konfidensintervallene må stemme overens med laboratoriets retningslinjer og det aktuelle landets direktiver. Du må følge føderale, statlige og lokale retningslinjer for testing av kvalitetskontrollmaterialer. Resultatene må befinne seg innenfor området for de definerte konfidensgrensene. Hvert laboratorium bør etablere en prosedyre som skal følges dersom resultatene overstiger disse konfidensgrensene. Nødvendige men ikke medfølgende materialer Automatisert klinisk kjemianalyseapparat: Pentra C400 Kalibrator: Cal, ref. A11A01703 Kontroll: Control, ref. A11A01704 Hemolysis Reagent, ref. A11A01730, 1 x 110 ml MBU i en reagensflaske på 100 ml, ref.a11a01759 Standard laboratorieutstyr. Prøvemateriale (9) Fullblod i EDTA. Andre antikoagulanter enn de som er oppført her har ikke blitt testet av HORIBA Medical og anbefales derfor ikke for bruk sammen med dette assayet. Stabilitet (10): Ved C: 3 dager Ved 2-8 C: 8 dager Ved -20 C: 60 dager Frosne prøver må tines ved romtemperatur og deretter blandes forsiktig før bruk. Bland blodprøvene forsiktig like før testen utføres for å sikre nøyaktige resultater for totalhemoglobin (THb). Referanseområde (4, 11, 12, 13, 14, 15) Hvert laboratorium bør etablere egne referansespektre. Verdiene som oppgis her er kun veiledende. Hvert laboratorium må kontrollere at dets standardverdier er i overensstemmelse med referanseverdiene fra NGSP. Denne metoden har blitt NGSP-sertifisert med 4 til 6% HbA1c som standardverdi for ikke-diabetikere, med et terapeutisk mål om å oppnå verdier på < 7%, som anbefalt av ADA (American Diabetes Association). Alle pasientresultater må tolkes i lys av de totale kliniske undersøkelsene av pasienten. Metodens begrensninger (11): De fleste pasienter har et hemoglobinnivå på mellom 4,4 mmol/l og 14,4 mmol/l. Tidsskrifter for spesialister har imidlertid vist at hemoglobinnivået hos pasienter med ekstrem anemi kan være mindre enn 4,4 mmol/l, og at hemoglobinnivået hos pasienter med polycytemi kan overstige 14,4 mmol/l. Pasienter med slike symptomer må testes ved hjelp av andre metoder dersom hemoglobinnivåene deres ligger utenfor målespekteret. Enhver tilstand som påvirker livssyklusen til røde blodlegemer (så som hemolytisk anemi eller andre hemolytiske sykdommer, graviditet eller betydelig blodtap...) fører til en reduksjon i disse blodlegemenes eksponering overfor glukose, og gjør at prosentandelen av glysert hemoglobin (Ghb) faller. Resultatene for prosentandelen av glysert hemoglobin er ikke pålitelig for pasienter som lider av kronisk blodtap og dermed har røde blodlegemer med variable livssykluser. Prøver som inneholder hemoglobin C og S kan medføre en stigning i den forventede HbA1c-verdien. I tillegg kan prøver som inneholder høye nivåer av hemoglobin F (> 15%) gi lavere HbA1c-resultater enn man ville forvente. Det er ingen interferens med karbamylert og acetylert hemoglobin. Denne testen er ikke pålitelig for diagnostisering av diabetes mellitus (16, 14). Denne testen er ikke egnet for evaluering av daglig glukosekontroll, og må ikke brukes til å erstatte daglig hjemmetesting av blodglukose (14). Oppbevaring og stabilitet Reagenser i åpnede eller uåpnede glass er stabile frem til utløpsdatoen på merkelappen dersom de har blitt 4 / 7

5 oppbevart i originalemballasjen ved 2-8 C med hetten godt på, og ikke har blitt kontaminert. Arbeidsreagensets stabilitet: Reagensstabilitet etter rekonstituering er 60 dager ved oppbevaring i et lukket MBU-glass mellom 2 og 8 C. Skadet emballasje Dersom den beskyttende emballasjen skades, må reagenset ikke brukes hvis skaden kan påvirke produktets ytelse. Avfallshåndtering Vennligst overhold lokale lover og regler. Generelle forholdsregler Dette reagenset må kun brukes til profesjonell in vitrodiagnostikk. Antibody Reagent (R1): Xi: lokalirriterende. Advarsel: Humant kildemateriale. Må behandles som potensielt smittebærende. Hver plasmadonorenhet som har blitt benyttet under produksjonen av dette produktet har blitt testet med en FDA-godkjent metode og har reagert negativt på HBsAg, HCV og antistoffer mot HIV 1/2. Siden ingen kjent testmetode kan garantere totalt fravær av hepatitt B-virus, HIV eller andre smittsomme stoffer, må disse reagensene behandles som potensielt smittsomme pasientprøver og behandles med forsiktighet i samsvar med god laboratorieskikk (17, 18). S24: unngå hudkontakt. S37: bruk egnede vernehansker. R43: kan gi allergi ved hudkontakt. Agglutinator Reagent (R2): Xi: lokalirriterende. S24: unngå hudkontakt. S37: bruk egnede vernehansker. R43: kan gi allergi ved hudkontakt. Antibody Reagent (R1), Agglutinator Reagent (R2), Hemolysis Reagent (R3), Total Hemoglobin Reagent (R4): Unngå kontakt med øyne, hud og klær. Vask hendene grundig med vann etter håndtering av produktet. Må ikke inntas. Diluent I (R5): Xi: lokalirriterende. R36/38: irriterer øynene og huden. R43: kan gi allergi ved hudkontakt. Reagensflaskene er for engangsbruk og må kastes i samsvar med lokale forordninger. Vennligst les produktdatabladet som gjelder for reagenset. Ikke bruk produktet i tilfeller hvor det finnes synlig bevis på biologisk, kjemisk eller fysisk nedbryting. Ytelse på Pentra C400 Ytelsesdataene nedenfor er representative for ytelsen på HORIBA Medical Systems. Antall tester: cirka 381 tester Prøvevolum (etter behandling): Hb: 25 µl/test HbA1c: 3,0 µl/test Deteksjonsgrense (THb): Deteksjonsgrensen er fastsatt i henhold til CLSI (NCCLS), protokoll EP17-A (19) og tilsvarer 1,60 µmol/l (0,42 g/dl). Minimum tolkingsgrense: Minimum tolkingsgrense (MIL) for HbA1c evalueres ved hjelp av flere bestemmelser av prøver med lave konsentrasjoner og tilsvarer 0,17 µmol/l (0,05 g/dl). Nøyaktighet og presisjon: Repeterbarhet (innen serie-presisjon) 3 prøveeksemplarer med lav, middels og høy konsentrasjon og 2 kontrolleksemplarer testes 20 ganger i henhold til anbefalingene i Valtec-protokollen (20). Middelverdi %HbA1c CV % Kontrollprøve 1 5,09 0,63 Kontrollprøve 2 10,44 1,12 Prøveeksemplar 1 5,25 0,68 Prøveeksemplar 2 6,80 1,57 Prøveeksemplar 3 10,94 1,24 Reproduserbarhet (total presisjon) 3 prøveeksemplarer med lave, medium og høye nivåer, samt 2 kontroller, blir testet i duplikat i 20 dager (2 serier 5 / 7

6 per dag) i henhold til anbefalingene i CLSI (NCCLS), EP5- A2-protokollen (21). Middelverdi %HbA1c CV % Kontrollprøve 1 4,94 1,67 Kontrollprøve 2 10,21 2,16 Prøveeksemplar 1 4,90 2,13 Prøveeksemplar 2 6,66 2,20 Prøveeksemplar 3 9,53 2,17 Måleområde for totalhemoglobin og HbA1c-metoden: Reagenslineariteten er fastsatt i henhold til anbefalingene fra CLSI (NCCLS), i EP6-A-protokollen (22). Lav linearitet: for totalhemoglobin: for HbA1c: Høy linearitet: for totalhemoglobin: for HbA1c: 1,60 µmol/l (0,42 g/dl) 0,17 µmol/l (0,05 g/dl) 85,00 µmol/l (22,41 g/dl) 10,80 µmol/l (2,85 g/dl) Området hvor %HbA1c er nøyaktig ved bruk av totalhemoglobinmetoden befinner seg mellom 17,5 til 85,0 µmol/l (4,61 til 22,41 g/dl). Assayet bekreftet et målingsspekter på 4,46 til 16,04 %HbA1c. Prøver må ikke fortynnes dersom de har en HbA1ckonsentrasjon som overstiger det høyeste kalibreringspunktet på 10,80 µmol/l (2,85 g/dl). Dersom HbA1c-konsentrasjonen overstiger det høyeste kalibreringspunktet, må prøvene ikke fortynnes. Det er imidlertid mulig å beregne den laveste %HbA1c-verdien for en prøve ved hjelp av den oppnådde THbkonsentrasjonen, og oppgi resultatet som: Høyere enn...xxx. Eksempel a : Hvis THb-konsentrasjonen er 44,0 µmol/l (11,6 g/dl), vil den laveste %HbA1c-verdien for metoden være: - I µmol/l: (10,80)/44,00 x 100 = 24,6 %HbA1c (bruk NGSP-korrigeringsfaktoren på dette resultatet = 13,6%). - I g/dl: (2,85)/11,6 x 100 = 24,6 %HbA1c (bruk NGSPkorrigeringsfaktoren på dette resultatet = 13,6%). Resultatet for %HbA1c for denne prøven er: Høyere enn 13,6%. Korrelasjon: 118 pasientprøver (fullblod) blir korrelert med en kommersiell reagens som referanse i henhold til anbefalingene fra CLSI (NCCLS), i EP9-A2-protokollen (23). Verdiene rangerte fra 4,53 til 13,01% av HbA1c. Ligningen for den allometriske linjen ved hjelp av regresjonsprosedyren Passing-Bablock (24) er: Y = 1,03 X - 0,19 (%HbA1c) med korrelasjonskoeffisient r 2 = 0,9904. Interferenser: Triglycerider: Ingen betydelig interferens observert opp til på 7 mmol/l (612,5 mg/dl). Totalbilirubin: Ingen betydelig interferens observert opptil 561 µmol/l (32,8 mg/dl). Direkte bilirubin: Ingen betydelig interferens observert opptil 587 µmol/l (34,3 mg/dl). Askorbinsyre: Ingen betydelig interferens observert opptil 3,40 mmol/l (59,8 mg/dl). Labilt Ingen interferens med labilt hemoglobin: hemoglobin. Andre begrensninger er gitt av Young som en liste over medikamenter og preanalytiske variabler som er kjent for å påvirke denne metodologien (25, 26). Kalibreringsstabilitet: Reagenset kalibreres på dag 0. Kalibreringsstabiliteten kontrolleres ved å teste 2 kvalitetskontroller. Kalibreringsstabiliteten er på 30 dager. Merk: En rekalibrering anbefales når reagenslotnumre endres, og når resultatene fra kvalitetskontrollen faller utenfor det fastsatte området. NGSP Ratio b : Denne formelen må introduseres i analyseapparatet ved hjelp av forholdsarket. Mer informasjon om dette finner du i analyseapparatets brukermanual. HbA1c (%) = (4700*(A/B) + 202)/100 Merk: A = A1c-WB B = THb-WB NGSP-forholdet som er inkludert i dette dokumentet er oppdatert i henhold til opprettelsesdatoen for denne versjonen. Seneste utgave av dette dokumentet er tilgjengelig på internett på Resultatene i %HbA1c kan spores til DCCTs (Diabetes Control and Complications Trial) referansemetode ved hjelp av følgende ligning for den automatiske hemolysemetoden: Y = 0,47*(HbA1c/HbT)% + 2,02 Applikasjonsversjon: for HbA1c-assayet (A1c-WB): 1.xx for totalhemoglobinassayet (THb-WB): 1.xx a Modifisering: eksempelet er endret. b Modifisering: endring av ratio i etterkant av den nye NGSP-sertifiseringen. 6 / 7

7 Advarsel Det er brukerens ansvar å forsikre seg om at dette dokumentet gjelder for det reagenset som benyttes. Referanser 1. Mayer TK, Freedman ZR. Protein glycosylation in diabetes mellitus: A review of laboratory measurements and of their clinical utility. Clin. Chim. Acta (1983) 127: Baynes JW, Bunn HF, Goldstein D, Harris M, Martin DB, Peterson C, Winterhalter K. National Diabetes Group; Report of the expert committee on glycosylated hemoglobin. Diabetes Care (1984) 7: Koenig RJ, Peterson CM, Kilo C, Cerami A, Williamson JR. Hemoglobin A1c as an indicator of the degree of glucose intolerance in diabetes. Diabetes (1976) 25: Nathan DM, Singer DE, Hurxthal K, and Goodson JD. The clinical information value of the glycosylated hemoglobin assay. NE J. Med. (1984) 310: McCarren M. DCCT; and it works: Intensive therapy reduces the risk of diabetic eye, kidney, and nerve disease. Diabetes Forecast (1993): Larsen ML, Horder M, and Mogensen EF. Effect of long-term monitoring of glycosylated hemoglobin levels in insulindependent diabetes mellitus. NE. J. Med. (1990) 323: Nathan DM. Hemoglobin A 1c. Infatuation or the real thing? NE. J. Med. (1990) 323: Wolf HU, Lang W, and Zander R. Alkaline haematin D-575, a new tool for the determination of haemoglobin as an alternative to the cyanhaemoglobin method. Clin. Chim. Acta. (1984) 136: Guder WG, Zawta B. The quality of diagnostics samples. Samples: from the patient to the laboratory. 1 st ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B, (WHILEY- VCH, Darmstadt, Germany), (2001): HORIBA Medical Internal studies. 11. Knowles BJ, Haigh WB, and Michaud GC. A monoclonal antibodybased immunoassay for hemoglobin A 1c. Diabetes (1986) 35 (Supplement: 94A). 12. Sacks DB, Carbohydrates, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 th Ed., Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE (Elseviers Saunders eds., St Louis, USA), (2006): Goldstein DE, Little RR, Wiedmeyer HM, England JD, McKenzie EM. Glycated hemoglobin: Methodologies and clinical applications Clin. Chem. (1986) 32 (10 Suppl): Burtis CA and Ashwood ER, eds: Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2 nd edition, WB Saunders Company, Philadelphia, PA. (1994): Diabetes Care (2002) 25 (suppl. 1): Ellis G, Diamandis EP, Giesbrecht EE, Daneman D, Allen LC. An automated «high pressure» liquid chromatographic assay for hemoglobin A1c. Clin. Chem. (1984) 30: Occupational Safety and Health Standards: bloodborne pathogens. (29 CFR ). Federal Register July 1, 1998; 6: Council Directive (2000/54/EC). Official Journal of the European Communities. No. L262 from October 17, 2000: Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A (2004) 24 (34). 20. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Method. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A2 (2004) 24 (25). 22. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 23. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 24. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: / 7

8