Tema for kurset var kloning, regulering (hormonell kontroll, proteiner) og formering av planter.

Transkript

1 Referat fra kurs som Julie Bjerkem og Elin Harboe Albertsen deltok på april 2005 på Plantebiosenteret, Dragvoll. Kursansvarlig: Ragnhild Lyngved (HiST) Tema for kurset var kloning, regulering (hormonell kontroll, proteiner) og formering av planter. Siden jeg underviser i DNA-oppgaven og vi skal utvide aktiviteten på dette området ved å kjøpe en Real Time PCR maskin, er slike kurs veldig inspirerende og lærerrike. Det interaktive læringsprogrammet Et mysterium fra kloningens verden som Ragnhild Lyngved har laget danner basis for kurset og finnes på Det anbefales å gå inn å ta en titt! Kurset var delt inn i bolker som besto av innføring av VITEN og kloningsprogrammet der vi hadde individuelt arbeid på datasalen. Viten.no er et imponerende nettsted der veldig mye animasjoner, teori, illustrasjoner, spørsmål om ulike emner som er lagt ut. Mye her kan brukes som supplement til undervisning i ulike fag for eksempel biokjemi. Det arbeides med å få mulighet for å koble dette til It`s learning Vi fikk høre om skolelaboratoriet på realfagsbygget og muligheter for å låne utstyrskofferter for grupper i f. eks fysikkfaget. Selv om mye er laget for lavere trinn kan man kanskje hente ideer fra Referat fra kurs på Plantebiosenteret april Skrevet 29/4-05 av Elin H.Albertsen 1

2 Vårt kurs skulle gi kompetanse i moderne molekylærbiologiske metoder. Prof. Arne Sunde, St.Olavs Hospital holdt en veldig interessant forelesning om stamceller. Denne har vi på PDF-format så hvis det er av interesse kan jeg oversende forelesningen på mail. Han har i tillegg en artikkel om Embryonale stamceller og terapeutisk kloning som også kan mailes over til interesserte. F.am. Bjørn Myskja, Filosofisk inst. hadde en tankevekkende forelesning om kloning og etikk. Notater fra denne finnes i papirformet hos Julie Bjerkem og meg. Prof. Geir Slupphaug, MTFS hadde en meget interessant og inspirerende forelesning om proteinanalyser, Proteomics dvs. det fullstendige proteininnholdet i en celle. Han jobber på Inst. for kreftforskning og Molekylærmedisin. Svært mange sykdommer har sitt opphav i unormal funksjon eller produksjon i bestemte proteiner i kroppen. Dette kan kartlegges ved f.eks 2D-elektroforese og finner da hvilke proteiner som mangler eller er overuttrykt. Proteiner av interesse kan da isoleres fra og behandles med f.eks trypsin for å kløyve proteinet, utfra dette og bruk av MALDI-TOF MS (Samme instrument som Jørgen Lerfall snakket om på lunsjforedraget den 28/4) kan peptidmassene identifisere potensielle sykdomsproteiner. Mer detaljer om dette og hele foredraget har Julie Bjerkem og jeg papirkopi av. Gjennom praktisk laboratoriearbeid skulle kurset gi deltakerne kunnskap om bl.a. kloning av planter, vekstregulering med plantehormoner, proteinrensing, proteinmåling og proteinelektroforese (SDS-PAGE, IEF & 2D). Her har jeg tidligere hatt samarbeid med Plantebiosenteret og fått innkjøpt utstyr som vi nå lånte ut for å kunne kjøre elektroforese endimensjonalt etter isoelektrisk-fokusering (IEF) og deretter to-dimensjonalt (2D). Neste side viser oversikt over alle lab og videre kursmateriell i forbindelse med kurset. I vedlegg 1 står hele programmet. Vi holdt på langt utover planlagt tid, men alle var overbegeistret for det flotte kurset med all den innformasjonen vi fikk. Det står stor respekt av Ragnhild Lyngved som har laget programmet på Viten.no og arrangert dette kurset som vi var så heldige å få delta på! Referat fra kurs på Plantebiosenteret april Skrevet 29/4-05 av Elin H.Albertsen 2

3 Laboratoriearbeid Stasjon Aktivitet Oppmøtested 1 Vevskulturer, næringsmedium og plantehormoner Vevskulturrommet 2 Proteinrensing og proteinmåling Undervisningslab. 3 1-D Elektroforese Forskningslab. 4 2-D Elektroforese Instrumentrommet Stasjon Aktivitet dag 1 Aktivitet dag 2 1 Vevskulturer, næringsmedium og plantehormoner Demonstrasjon av ulike vevskulturer (kallus, suspensjon, meristem og embryo), vevskulturrom Lærerne lager og autoklaverer/sterilfiltrerer dyrkingsmedium, mediekjøkken Demonstrasjon av plantehormon-effekter, vevskulturrom og veksthus Vevskulturer og sterilteknikk Lærerne får en innføring i sterilteknikk og lager sine egne kulturer som de kan ta med seg tilbake til skolen (ulike plantearter), sterilrom 2 Proteinrensing Felling av proteiner ved hjelp av aceton, etanol, ammoniumsulfat Rensing av proteiner ved hjelp av kolonner og dialyse 3 1-D Elektroforese Introduksjon av SDS-PAGE og elektroforeseapparat Hver gruppe støper 2 geler (separasjonsgel) Demonstrasjon av konsentrasjonsgel 4 2-D Elektroforese Introduksjon til metoden og utstyret (1.dim IEF og 2.dim SDS-PAGE) Starte 1.dim. med ferdig rehydrert strips og prøve Prøvepreparering m/drill og flytende nitrogen, acetonfelling Proteinmåling Introduksjon i bruk av spektrofotometer Lærerne utfører et proteinassay 1-D Elektroforese Preparering av prøver til 1-D Elektroforese Applisering av prøver og standard Starte elektroforese av egne geler Demonstrasjon av gelfarging (Coomassie) 2-D Elektroforese Kjøre 2.dim. med ferdig ekvilibrerte strips Demonstrasjon av sølvfarging, tørking av gel og geldokumentasjonsutstyr Referat fra kurs på Plantebiosenteret april Skrevet 29/4-05 av Elin H.Albertsen 3

4 Kursmateriell 1. Hansen, J. & Kristiansen, K In vitro formering af planter. Grøn Viden. Havebrug. Nr Caponetti, J.D., Gray, D.J. & Trigiano, R.N History of plant tissue and cell culture. In: Trigiano, R.N. & Gray, D.J Plant Tissue Culture Concepts and Laboratory Exercises. Second Edition. CRC Press, Boca Raton. Chapter Beyl, C.A Getting started with tissue culture media preparation, sterile technique, and laboratory equipment. In: Trigiano, R.N. & Gray, D.J Plant Tissue Culture Concepts and Laboratory Exercises. Second Edition. CRC Press, Boca Raton. Chapter Gray, D.J Nonzygotic embryogenesis. In: Trigiano, R.N. & Gray, D.J Plant Tissue Culture Concepts and Laboratory Exercises. Second Edition. CRC Press, Boca Raton. Chapter Westermeier, R Electrophoresis in Practice. A guide to Methods and Applications of DNA and Protein Separations. Third Edition. Wiley-VCH, Weinheim. Chapter 1 Electrophoresis. 6. Westermeier, R Electrophoresis in Practice. A guide to Methods and Applications of DNA and Protein Separations. Third Edition. Wiley-VCH, Weinheim. Chapter 6 Proteome Analysis. 7. Bioteknologinemnda og Teknologirådet Temahefte: Stamceller & kloning. ISBN Forelesningsstensiler, kopier fra Powerpoint. 9. Materiell fra foredragsholdere 10. Protokoller fra laboratorieøvelser og demonstrasjoner, inkl. utstyrslister Referat fra kurs på Plantebiosenteret april Skrevet 29/4-05 av Elin H.Albertsen 4

5 Vedlegg 1 Dato Tid Aktivitet Ansvarlig Dag Velkommen og informasjon m/kaffe Prof. Tor-Henning Iversen, PBS Introduksjon av VITEN og kloningsprogram Dr.scient-stud. Ragnhild Lyngved, PBS Datasal individuelt arbeid Dr.scient-stud. Ragnhild Lyngved, PBS Kaffepause Forelesning stamceller Prof. Arne Sunde, St.Olavs Hospital Forelesning kloning og etikk F.am. Bjørn Myskja, Filosofisk inst Lunsj Laboratoriearbeid Assistenter Laboratoriearbeid Assistenter Kaffepause Laboratoriearbeid Assistenter Laboratoriearbeid Assistenter Omvisning ifm i rommet Prof. Tor-Henning Iversen, PBS Dag Forelesning vevskulturer Dr.scient-stud. Ragnhild Lyngved, PBS Forelesning proteinanalyser, Proteomics Prof. Geir Slupphaug, MTFS Kaffepause Laboratoriearbeid Assistenter Laboratoriearbeid Assistenter Lunsj Laboratoriearbeid Assistenter Laboratoriearbeid Assistenter Kaffepause Vurdering av VITEN-program og kurs - Individuelt Dr.scient-stud. Ragnhild Lyngved, PBS Vurdering av VITEN-program - Gruppearbeid Dr.scient-stud. Ragnhild Lyngved, PBS Presentasjon av gruppearbeid + diskusjon Dr.scient-stud. Ragnhild Lyngved, PBS Avslutning oppsummering Prof. Tor-Henning Iversen, PBS Egget: Nøkkelen til livet: Ex ovum omina DNA-fra mor (kan byttes ut) Metabolsk niste Mitokondrier (kraftverk) m-rna (informasjonsbærere) Transkripsjonsfaktorer (regulatorer) Referat fra kurs på Plantebiosenteret april Skrevet 29/4-05 av Elin H.Albertsen 5