BESTEMMELSE AV C-VITAMININNHOLD Risiko fare Lltak Sikkerhetsrisiko:lav fare for øyeskade, knut glass, etsing HMS rulner, innsamling av kjemkalie avfall. Figur 1 risikovurdering Innledning I denne oppgaven skal dere bestemme C- vitamininnholdet (askorbinsyre) i fruktjuicer ved hjelp av en volumetri. Volumetri betyr å måle volum. I denne metoden måler man hvor stort volum det er nødvendig av en forbindelse til å reagere med en annen forbindelse. Reaksjonen som finner sted må være fullstendig. Utfra formelen Figur 2: en byrette konsentrasjon = mengde volum kan man beregne mengde forbindelse når konsentrasjonen er kjent. I dagens reaksjon er det vanskelig å se når reaksjonen har gått fullstendig. For å få det til bruker vi en fargereaksjon. Nylaget stivelse og KI vil i reaksjon med NBS gi permanent blåfarge og benyttes som indikator for titreringen.
Reaksjonslikningene for titreringen ser slik ut: (1.1) CHO 6 8 6+ CHONBr 4 4 2 CHO 6 6 6+ CHON 4 5 2 + HBr C vitamtin + NBS produkt NBS 2I I (1.2) (fargeløs) 2 (blå) der reaksjon 1.1 dominerer over 1.2. Det vil si at så lenge reaksjon 1.1 går, vil blandingen vår ikke være blå. Når vi får en blå farge, så er det ikke mer C- vitamin igjen og reaksjon 1.1 har gått fullstendig. Vi kan da lese av tilsatt volum NBS som var nødvendig for å få frem blåfargen og utfra konsentrasjon og volum til NBS regne ut mengde C- vitamin. Det punktet der løsningen skifter farge heter for endepunktet eller ekvivalenspunktet. Utstyr og reagenser nylaget 0,001 M C4H4O2NBr (NBS) byretter 4 % KI appelsinjuice, askorbinsyre (C- vitamin) 10 % CH3COOH (skrives også HAc = eddiksyre) eventuelle andre juicetyper Figur 3 målekolbe nylaget stivelse sitrusfrukter oksalsyre fruktpresse
Praktisk utførelse Press saften ut av frukten til dere har ca. 40 ml juice, eller bruk 40 ml ferdigjuice. Bland pakken først. Tilsett ca. 0,3 g oksalsyre pr 5 ml juice. Bland det hele godt slik at syren løses opp. Dersom du har brukt frukt eller juice med fruktkjøtt: Fordel juicen på 4 sentrifugerør, med 10 ml i hvert. Sentrifuger i 15 min ved 2500 rpm for å få bort fruktkjøttet som gjør avlesningen og pipetteringen vanskelig. Ved bruk av tabletter: løs opp tabletten i en målekolbe slik at etter fortynning, er konsentrasjonen det samme som står skrevet på juicepakker (ca 30 mg/100ml). Tilsett deretter askorbinsyre som beskrevet over. NB! Hvis juicen lages i fellesskap kan oksalsyre tilsettes før juicen fordeles
Prosedyre for titrering: 1. Pipetter 5 ml prøve 1 (dersom ikke annet er oppgitt) i en passende erlenmeyer-kolbe 2. Med passende menes en kolbe som er minst dobbelt så stor som volum av løsning den inneholder. 2. Tilsett indikatorblanding: 5 ml 4 % KI, 2 ml 10 % HAc og 5 dråper stivelse. 3. Titrer med NBS-løsningen fra byrette. Endepunktet bestemmes med permanent blåfarge. Det kreves to gode paralleller (mindre enn 0,1 ml forskjell i volum) Figur 4 Elernmeyerkolbe NB! - Ved bruk av ferdigjuice må pakken blandes godt før uttak. Husk å tilsette oksalsyre også her. Sentrifugering er bare nødvendig hvis juicen inneholder "faste" partikler. Utfør titreringen så rask som mulig for å unngå bi- reaksjoner. Det finnes nemlig reduksjonsmidler i appelsinjuice som kan forstyrre forsøket. Gjenta forsøket til dere har to gode paralleller (forskjell i titrervolumene bør være mindre enn 0,1 ml). Beregn C-vitamininnholdet i mg/100ml for juice og i mg/tablett for tabletter. 1 Prøve: den løsningen du analyserer. I dette tilfelle: juice, tablettløsning eller askorbinsyreløsning. 2 Hva som er passende kommer av erfaring. Her starter du med 7 ml løsning og skal tilsette og røre underveis. En kolbe på minst 50 ml vil da være et godt valg.
Standardisering: Ved behov skal NBS standardiseres. Dette gjøres i forkant av utførelsen etter følgende prosedyre: (utføres av lærer) Nøyaktig ca. 50 mg askorbinsyre og ca. 2g oksalsyre veies inn og løses til 250 ml i en målekolbe. Bland godt! Askorbinsyre oksideres lett. Denne løsningen må derfor være nylaget. Oksalsyre forsinker oksidasjonen og fungerer dermed som antioksidant. Titrer med 25 ml av askorbinsyreløsningen.