(12) Translation of european patent specification (11) NO/EP 2480677 B1 (19) NO NORWAY (1) Int Cl. C12N /866 (06.01) C12N 7/02 (06.01) C12N /867 (06.01) Norwegian Industrial Property Office (21) Translation Published.07. (80) Date of The European Patent Office Publication of the Granted Patent.03.18 (86) European Application Nr. 11749849.3 (86) European Filing Date 11.09.01 (87) The European Application s Publication Date 12.08.01 () Priority.09.02, EP, 17088 (84) Designated Contracting States: Designated Extension States: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR BA ME (73) Proprietor Molmed SpA, Via Olgettina 8, 132 Milan, IT-Italia (72) Inventor BOVOLENTA, Chiara, MolMed SpAVia Olgettina 8, I-132 Milan, IT-Italia STORNAIUOLO, Anna, MolMed SpAVia Olgettina 8, I-132 Milan, IT-Italia RIZZARDI, Paolo, MolMed SpAVia Olgettina 8, I-132 Milan, IT-Italia MAVILIO, Fulvio, Istituto Scientifico H. San RaffaeleVia Olgettina, I-132 Milan, IT-Italia (74) Agent or Attorney Jesper Levin A/S, Strandvejen 66, DK-29 KLAMPENBORG, Danmark (4) Title SEMI-STABLE PRODUCTION OF LENTIVIRAL VECTORS (6) References Cited: SENA-ESTEVES MIGUEL ET AL: "Generation of stable retrovirus packaging cell lines after transduction with herpes simplex virus hybrid amplicon vectors.", THE JOURNAL OF GENE MEDICINE 02 MAY-JUN LNKD- PUBMED:12112640, vol. 4, no. 3, May 02 (02-0), pages 229-239, XP002664827, ISSN: 99-498X NI YAJIN ET AL: "Generation of a packaging cell line for prolonged large-scale production of high-titer HIV-1-based lentiviral vector.", THE JOURNAL OF GENE MEDICINE JUN 0 LNKD- PUBMED:69, vol. 7, no. 6, June 0 (0-06), pages 818-834, XP002664828, ISSN: 99-498X KLAGES N ET AL: "A stable system for the high-titer production of multiply attenuated lentiviral vectors", MOLECULAR THERAPY, ACADEMIC PRESS, SAN DIEGO, CA, US, vol. 2, no. 2, 1 August 00 (00-08-01), pages 170-176, XP002216761, ISSN: -0016, DOI:.06/MTHE.00.03 IKEDA Y ET AL: "Continuous high-titer HIV-1 vector production", NATURE BIOTECHNOLOGY 001 PRESSE DIENSTLEISTUNGSGESELLSCHAFT MBH UND CO. KG US, vol. 21, no., 1 May 03 (03-0-01), pages 69-72, XP002664829, DOI: DOI:.38/NBT8 cited in the application F. DI NUNZIO ET AL: "Transduction of Human Hematopoietic Stem Cells by Lentiviral Vectors Pseudotyped with the RD114-TR Chimeric Envelope Glycoprotein", HUMAN GENE THERAPY, vol. 18, no. 9, 1 September 07 (07-09-01), pages 811-8, XP0013461, ISSN: 43-0342, DOI:.89/hum.06.138 cited in the application ANSORGE SVEN ET AL: "Recent progress in lentiviral vector mass production", BIOCHEMICAL ENGINEERING JOURNAL, vol. 48, no. 3, February (-02), pages 362-377, XP0026648,
Enclosed is a translation of the patent claims in Norwegian. Please note that as per the Norwegian Patents Acts, section 66i the patent will receive protection in Norway only as far as there is agreement between the translation and the language of the application/patent granted at the EPO. In matters concerning the validity of the patent, language of the application/patent granted at the EPO will be used as the basis for the decision. The patent documents published by the EPO are available through Espacenet (http://worldwide.espacenet.com) or via the search engine on our website here: https://search.patentstyret.no/
1 P a t e n t k r a v 1. System for stabil ekspresjon av lentivirale strukturelle og regulatoriske proteiner som består av: i. en hybridvektor som omfatter bakuloviral ryggrad som inneholder en integreringskassett flankert av AAV ITRer som inkluderer to ekspresjonskassetter, hvori den første ekspresjonskassetten koder for lentivirale gag og pol gener og den andre for lentiviral rev og en seleksjonsmarkør og ii. et ekspresjonsplasmid som inneholder AAV Rep åpen leseramme (ORF) under kontroll av en promoter. 2. System ifølge krav 1 hvori de to ekspresjonskassettene av hybridvektoren er orientert hale mot hale og hver er drevet av en konstitutiv promoter og bærer en poly A. 3. System ifølge krav 1 eller 2 hvori promoteren er valgt fra CMV, CMV IE, PGK, SV40, ef1α, SFFV og RSV. 4. System ifølge ett av kravene 1 til 3 hvori promoteren er en CMV IE promoter.. System ifølge ett av de foregående kravene hvori seleksjonsmarkøren er valgt fra hygromycin, kanamycin, neomycin, zeomycinresistensgen. 6. System ifølge krav hvori seleksjonsmarkøren er hygromycinresistensgen.
2 7. System ifølge ett av de foregående kravene hvori seleksjonsmarkøren blir klonet nedstrøms et internt ribosom inngangssted (IRES). 8. System ifølge ett av de foregående kravene hvori rep-proteinet er rep78. 9. Semi-stabil lentiviral pakkecellelinje som består av celler som stabilt uttrykker lentiviral gag, pol og rev karakterisert ved at slike celler inneholder stabilt integrert til dens genom minst én kopi av en integreringskassett flankert av AAV ITR inkludert to ekspresjonskassetter, hvori den første ekspresjonskassetten koder for lentivirale gag og pol gener og den andre for lentiviral rev og en seleksjonsmarkør.. Semi-stabil lentiviral pakke cellelinje ifølge krav 9 hvori cellen er en human cellelinje valgt fra HEK293, HEK293-T, HEK293-SF, TE671, HT80 eller HeLa. 11. Semi-stabil lentiviral pakkecellelinje ifølge ett av krav 9 eller hvori de to ekspresjonskassettene er orientert hale mot hale og hver ene er drevet av en konstitutiv promoter og bærer en poly A. 12. Semi-stabil pakke cellelinje ifølge ett av kravene 9 eller 11 hvori promoteren er valgt fra CMV, CMV IE, PGK, SV40, ef1α, SFFV og RSV. 13. Semi-stabil pakkecellelinje ifølge krav 12 hvori promoteren er en CMV IE promoter.
3 14. Semi-stabil pakkecellelinje ifølge ett av krav 9 til 13 hvori seleksjonsmarkøren er valgt fra hygromycin, kanamycin, neomycin, zeomycinresistensgen.. Semi-stabil pakkecellelinje ifølge krav 14 hvori seleksjonsmarkøren er hygromycin- resistensgen. 16. Semi-stabil pakkecellelinje ifølge ett av krav 9 til hvori seleksjonsmarkør er klonet nedstrøms for et internt ribosom inngangssted (IRES). 17. Fremgangsmåte for fremstilling av lentivirale vektorer som omfatter å: i. dyrke en semi-stabil pakke cellelinje ifølge ett av kravene 9 til 16, ii. sette inn i den semi-stabile pakke cellelinjen et env gen ved anvendelse av en ekspresjonsvektor, iii. sette inn i den semi-stabile pakke cellelinjen en transfervektor. 18. Fremgangsmåte ifølge krav 17 hvori env genet er valgt fra VSV-G env, MLV 4070 env, RD114 env, kimært kappeprotein RD114-TR, kimært kappeprotein RD114-pro, bakulovirus GP64 env, eller GALV env, eller derivater derav. 19. Fremgangsmåte ifølge krav 17 eller 18 hvori env gen er genet som koder for det kimære kappeproteinet RD114-TR.