PROSEDYREPRINSIPPER BD

8089899(04) Onclarity HPV Assay 2014-10 442946 Norsk BRUKSOMRÅDE BD Onclarity HPV Assay (HPV-analyse) er en amplifisert DNA-test for kvalitativ påvisning av høyrisikotyper av humant papillomavirus (HPV). Analysen påviser alle HPV-høyrisikotyper (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68) og gir mulighet for genotyping av seks høyrisikotyper (HPV 16, 18, 31, 45, 51 og 52). Livmorhalsprøver som testes med BD Onclarity HPV Assay (HPV-analyse) omfatter BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (HVP-prøvetakingssett med livmorhalspensel), BD SurePath Preservative Fluid (konserveringsvæske) og PreservCyt Solution (oppløsning) (ved bruk av en alikvot som blir fjernet før eller etter behandling med Pap-testen BD SurePath eller ThinPrep. BD Onclarity HPV Assay utføres med BD Viper LT System. SAMMENDRAG OG FORKLARING Humant papillomavirus (HPV) er det vanligste seksuelt overførte viruset i verden, og 50 % av seksuelt aktive personer har genital HPV én eller annen gang i livet. Personer vet ofte ikke at de er smittet og treffer ikke tiltak for å hindre spredning av viruset til andre. Det er flere enn 40 typer av HPV som kan infisere kjønnsorganene. 1 I mange tilfeller er HPV-infeksjoner forbigående, og kroppen kvitter seg med viruset på egen hånd. I noen tilfeller er imidlertid viruset persistent og får normale celler til å bli unormale og forårsake kreft. Disse onkogene HPV-typene klassifiseres som høyrisikotyper og omfatter HPV 16 og 18. Andre typer anses som lavrisikotyper, siden det ikke virker som de forårsaker kreft. I henhold til Verdens helseorganisasjon (WHO) er HPV den nest største årsaken til dødelighet hos kvinner på grunn av kreft på verdensbasis med ca. 250 000 dødsfall per år. Bare i Europa tar sykdommen ca. 15 000 liv i året. 2 Det anslås at nesten 70 % av tilfellene av livmorhalskreft forårsakes av HPV-typene 16 og 18. 3 I dag kan Pap-tester gi en kliniker informasjon om eventuelle endringer i cellene i livmorhalsen. Hvis disse cellene er unormale, kan det utføres en HPV-test for å fastslå om disse endringene i livmorhalsen skyldes en HPV-stamme som kan føre til livmorhalskreft. Ikke alle molekylære analyser kan skille mellom de ulike typene av HPV. BD Onclarity HPV Assay, som testes med BD Viper LT System, er en amplifisert DNA-analyse for kvalitativ påvisning av høyrisikotyper av humant papillomavirus (HPV). Analysen påviser HPV-typene 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 og muliggjør samtidig identifikasjon av høyrisikotypene 16, 18, 31, 45, 51, 52 og andre rapporterte høyrisikogenotyper etter genotypegruppe (P1: 33/58; P2: 56/59/66; P3: 35/39/68). Livmorhalsprøver som kan testes med BD Onclarity HPV Assay, omfatter BD SurePath Preservative Fluid (med bruk av en alikvot som er fjernet før eller etter behandling for Pap-testen BD SurePath), PreservCyt Solution (med bruk av en alikvot som er fjernet før eller etter behandling for Pap-testen PreservCyt) samt BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit. PROSEDYREPRINSIPPER BD Onclarity Human Papillomavirus (HPV) Assay er utformet for bruk sammen med BD SurePath Preservative Fluid (med bruk av en alikvot som blir fjernet før eller etter behandling for Pap-testen BD SurePath), PreservCyt Solution (med bruk av en alikvot som blir fjernet før eller etter behandling for Pap-testen PreservCyt) samt BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, aktuelle reagenser, BD Viper LT System samt BD FOX Extraction (ekstraksjon). Prøver gjennomgår et forvarmingstrinn i BD Pre-warm Heater (forvarmeapparat) for å homogenisere matriks, lysere celler og frigjøre DNA som kan ekstraheres og amplifiseres. Etter nedkjøling lastes prøvene på BD Viper LT System, som deretter utfører alle trinnene som inngår i ekstraksjon og amplifikasjon av mål-dna uten ytterligere brukerintervensjon. Prøven overføres til et ekstraksjonsrør som inneholder jernoksidpartikler i en oppløselig film. Syre tilsettes deretter for å senke ph og indusere en positiv ladning på jernoksidet, som igjen binder det negativt ladde DNA-et. Partiklene og det bundne DNA-et dras deretter til sidene av ekstraksjonsrøret av magneter, og den behandlede prøven aspireres til avfall. Partiklene vaskes, og en elusjonsbuffer med høy ph tilsettes for å elutere det rensede DNA-et. Til slutt brukes en nøytraliseringsbuffer til å justere ph i eluatet til det optimale nivået for amplifisering av DNA. BD Onclarity HPV Assay er basert på samtidig amplifisering og påvisning av mål-dna ved hjelp av amplifiseringsprimere og fluorescensmerkete detektorprober ved bruk av en sanntids polymerasekjedereaksjon (PCR). Reagensene tørkes i tre rør (G1, G2 og G3) som kan påvise genotype 14 av HPV og en prøvefremstilt intern kontroll som består av et DNA-fragment fra humant betaglobulingen. Hvert enkelt rør inneholder amplifiseringsprimerne, fluorescensmerkete detektorprober, DNA-polymerase nukleotider og andre reagenser som er nødvendige for amplifiseringen for de respektive analysene. BD Viper LT System pipetterer en del av den rensede DNA-løsningen fra hvert ekstraksjonsrør inn i tre BD Onclarity HPV PCR-rør (G1, G2 og G3) som deretter forsegles for å hindre kontaminasjon. Forekomst eller fravær av HPV-DNA fastslås i PCR-syklusen der signalet krysser en forhåndsbestemt terskel. I tillegg vil analysen ekstrahere, forsterke og detektere et fragment av det humane betaglobulingenet som en intern kontroll for å evaluere behandling, ekstraksjon og amplifisering av prøven. REAGENSER OG MATERIALER SOM FØLGER MED: Hver BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack (reagenspakke) inneholder: BD Onclarity HPV G1 PCR-rør, 2 x 96: Hvert G1 PCR-rør inneholder omtrent 32,5 pmol oligonukleotider, 20 pmol fluorescensmerkete detektorprober, 80 nmol dntps og 0,52 enheter av DNA-polymerase med stabilisatorer og bufferkomponenter. BD Onclarity HPV G2 PCR-rør, 2 x 96: Hvert G2 PCR-rør inneholder omtrent 42,5 pmol oligonukleotider, 30 pmol fluorescensmerkete detektorprober, 80 nmol dntps og 0,52 enheter av DNA-polymerase med stabilisatorer og bufferkomponenter. BD Onclarity HPV G3 PCR-rør, 2 x 96: Hvert G3 PCR-rør inneholder omtrent 42,5 pmol oligonukleotider, 25 pmol fluorescensmerkete detektorprober, 80 nmol dntps og 0,52 enheter av DNA-polymerase med stabilisatorer og bufferkomponenter. MERK: Hver pose inneholder én pose med tørkestoff. 1

Control Set for the (kontrollsett for) BD Onclarity HPV Assay: 24 BD Onclarity HPV positiv kontroll-rør som inneholder ca. 14 430 eksemplarer av HPV 16 linearisert plasmid, 8325 eksemplarer av HPV 18 linearisert plasmid, 8418 eksemplarer av HPV 56 linearisert plasmid og 3885 eksemplarer av et plasmid som inneholder en gensekvens fra humant betaglobin i bærernukleinsyre samt 24 BD Onclarity HPV negativ kontroll-rør som inneholder kun bærernukleinsyre. Konsentrasjonene av bærernukleinsyre og plasmider fastslås ved hjelp av spektrofotometri. BD Onclarity HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tubes (HPV væskebasert cytologiprøve (LBC) fortynningsmiddelrør): 400 rør som hvert inneholder ca. 1,7 ml buffer med salt, detergent og konserveringsmiddel. BD FOX PCR Extraction Tubes: 48 strimler à 8 rør som hvert inneholder ca. 10 mg av jernoksid i en oppløserlig film. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (PCR-ekstraksjonsreagenskar med punkteringsverktøy): Hvert ekstraksjonsreagenskar med 5 hulrom inneholder ca. 16,5 ml bindesyre, 72,5 ml vaskebuffer, 25,4 ml elusjonsbuffer, 19,4 ml nøytraliseringsbuffer med konserveringsmiddel samt 15,5 ml avfallsnøytraliseringsløsning. INSTRUMENT, UTSTYR OG FORBRUKSVARER Materialer som følger med: BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, BD Viper LT-instrument, BD Viper LT Instrument Plates (instrumentplaterplater), BD Viper LT Pipette Tips (pipettespisser), BD Viper LT Solid Waste Liners (fôringer for fast avfall), BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit (PCR rør/kar-sett), BD Viper LT System PCR Accessory Kit (PCR-tilbehørssett), BD Viper Pre-warm Heater, BD Viper LT Specimen Rack (prøvestativ), BD Viper Neutralization Pouches (nøytraliseringsposer), Specimen Tubes and Caps (prøverør og lokk) til bruk på BD Viper System (ekstraksjonsmodus), BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit (sett for innhenting og tørr transport av livmorhalsprøve for amplifisert DNA-analyse). Nødvendige materialer som ikke følger med: Nitrilhansker, overføringspipetter, polypropylenaerosolmotstandsdyktige spisser som kan levere 0,5 ± 0,05 ml, virvelblander, 0,5 % (v/v) natriumhypokloritt, 1 % (v/v) natriumhypokloritt, 3 % (vekt/volum) hydrogenperoksid, isopropylalkohol, nukleasefritt vann av molekylærbiologistandard. Oppbevarings- og håndteringskrav: BD Onclarity HPV LBC Diluent og BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent skal oppbevares ved 2 25 C. Alle andre reagenser kan oppbevares ved 2 33 C. Uåpnede reagenspakker er stabile til utløpsdatoen. Når en pose er åpnet, er PCR-rørene stabile i 4 uker hvis de er ordentlig forseglet, eller til utløpsdatoen (det som kommer først). Skal ikke fryses. ADVARSLER OG FORSIKTIGHETSREGLER 1. For in vitro-diagnostisk bruk. 2. Patogene mikroorganismer, blant annet hepatittvirus og humant immunsviktvirus, kan være til stede i kliniske prøver. Standard forsiktighetsregler 4-7 og institusjonsbaserte retningslinjer skal følges ved håndtering av alt materiale kontaminert med blod og andre kroppsvæsker. Se brukerhåndboken for BD Viper LT-instrumentet for flere advarsler, forsiktighetsregler og merknader som er spesifikke for BD Viper LT System. Prøve: 3. For væskebaserte cytologiprøver skal kun BD Onclarity HPV LBC Diluent Tubes brukes. 4. For livmorhalspenselprøver skal bare BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit brukes. 5. Optimale resultater for BD Onclarity HPV Assay forutsetter riktig prøvetaking, -håndtering og -transport. 6. For å redusere unødvendig blødning må du ikke rotere livmorhalspenselen mer enn nødvendig under prøvetakingen. 7. Hver prøve må merkes riktig når den sendes til laboratoriet. 8. Når skaftet på livmorhalspenselen brekkes av, må du passe på at innholdet ikke spruter eller renner ut eller skaper aerosoler. Unngå kontaminering av hodet til livmorhalspenselen. 9. Utvis varsomhet for å unngå krysskontaminering under prøvehåndteringstrinnene. Påse at prøvebeholderne ikke kommer i kontakt med hverandre, og fjern brukte materialer uten å la dem passere over åpne beholdere. Hvis hanskene kommer i kontakt med prøven, må du skifte hansker for å unngå krysskontaminering. 10. Under- eller overdispensering av LBC-prøve til rør med BD Onclarity HPV LBC Diluent kan påvirke analysens ytelse. Overfylling av rørene kan også føre til overflyt av væske på BD Viper LT-dekket, og kan føre til kontaminering. 11. Livmorhalsprøver må innhentes og testes før utløpsdatoen til røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent eller røret med BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent. 12. Bruk kun aerosolresistente pipettespisser til å overføre prøver til rør med BD Onclarity HPV LBC Diluent. Analyse/reagens: 13. BD Onclarity HPV Positive Control og Negative Control må forvarmes innen 24 timer etter hydrering. 14. Bruk kun prøve- og kontrollrør med punkterbare korker på BD Viper LT System. Ikke fjern punkterbare korker før instrumentet kjøres. Pass på å skifte ut alle punkterte korker med nye punkterbare korker før instrumentet kjøres. 15. Ikke bland eller bytt reagenser fra sett med forskjellige partinumre. 16. Ikke test rør med BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent hvis det mottas i laboratoriet uten at penselen er til stede. Det kan gi falskt negativt resultat. 17. Bruk kun BD Viper LT-pipettespissene som leveres av BD sammen med BD Viper LT System. 18. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool. 2

FARE H314 Forårsaker alvorlige forbrenninger og øyenskade. H302 Farlig ved svelging. P260 Ikke inhaler støv/damp/gass/tåke/spray. P280 Benytt vernehansker/verneklær/vernebriller/ansiktsskjerm. P303/361/353 VED HUDKONTAKT (eller håret): Tilsølte klær må fjernes straks. Skyll/dusj huden med vann. P304/340 VED INNÅNDING: Flytt personen til frisk luft og sørg for at vedkommende hviler i en stilling som letter åndedrettet. P405 Oppbevares innelåst. P501 Innholdet/beholderen skal kasseres i henhold til lokale/regionale/nasjonale/internasjonale retningslinjer. 19. Bruk kun BD Viper LT Clear Plate Sealers (klare plateforseglinger) på PCR-rør sammen med BD Viper LT System. 20. Reagensposer som inneholder ubrukte PCR-rør MÅ lukkes omhyggelig igjen etter åpning. Kontroller at en tørkepose er til stede før reagensposen forsegles på nytt. 21. PCR-rørene MÅ forsegles riktig med BD Viper LT Clear Plate Sealers før platen fjernes fra BD Viper LT System. Forseglingen sørger for en lukket reaksjon for amplifisering og påvisning og er nødvendig for å unngå kontaminering av instrumentet og arbeidsområdet med amplifiseringsprodukter. Forseglingen skal ikke på noe tidspunkt fjernes fra PCR-rørene. 22. For å forhindre kontaminering av arbeidsområdet med amplifiseringsprodukter må avfallsposene som leveres i BD Viper LT System PCR Accessory Kit, brukes ved kassering av testede PCR-rør. Pass på at posene er godt lukket før de kastes. 23. Selv om egne arbeidsområder ikke er nødvendig fordi utformingen til BD Viper LT reduserer muligheten for amplikonkontaminering i testomgivelsene, er det nødvendig med andre forsiktighetsregler for å kontrollere kontamineringen, særlig for å hindre kontaminering av prøven under manipulering. 24. SKIFT HANSKENE hvis de kommer i kontakt med prøven eller ser ut til å være våte, for å hindre kontaminering av andre prøver. Skift hansker før du forlater eller kommer inn i arbeidsområdet. 25. I tilfelle kontaminasjon se brukerhåndboken for BD Viper LT System for rengjøringsinstruksjoner. 26. Kontakt din lokale BD-representant i tilfelle en uvanlig situasjon skulle oppstå, slik som søl i BD Viper LT-instrumentet eller DNA-kontaminasjon som ikke kan fjernes med rengjøring. PRØVETAKING OG -TRANSPORT Livmorhalsprøver som kan testes med BD Onclarity HPV Assay, omfatter BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, BD SurePath Preservative Fluid (med bruk av en alikvot som blir fjernet før eller etter behandling for Pap-testen BD SurePath) samt PreservCyt Solution (med bruk av en alikvot som blir fjernet før eller etter behandling for Pap-testen ThinPrep). Ved forsendelse innenlands og utenlands skal prøver pakkes og merkes i samsvar med gjeldende lokale, nasjonale og internasjonale bestemmelser vedrørende transport av kliniske prøver og etiologiske/smittefarlige stoffer. Tids- og temperaturbetingelser for oppbevaring må opprettholdes under transport. INNHENTING AV PRØVE MED LIVMORHALSPENSEL 1. Sett BD Onclarity HPV Cervical Brush (HPV-livmorhalspensel) inn i endocervix til bare nederste del av busten er eksponert ved munningen. Drei sakte ¼ til ½ omdreining i én retning. For å redusere unødvendig blødning må du ikke dreie penselen mer enn nødvendig. 2. Fjern korken fra røret med BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent (fortynningsmiddel for HPV-livmorhalspensel), og plasser straks penselen inn til bunnen av røret. 3. Brekk skaftet forsiktig ved linjen. Unngå at innholdet spruter. 4. Sett korken tett på. OPPBEVARING OG TRANSPORT AV LIVMORHALSPENSELPRØVE Livmorhalspenselprøver i rør med BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent må oppbevares og transporteres til laboratoriet og/eller teststedet innen 30 dager etter prøvetaking hvis de oppbevares ved 2 30 C, eller innen 30 dager etter prøvetaking hvis de oppbevares nedfryst ved -20 C. Prøver må ikke oppbevares og transporteres etter utløpsdatoen til røret med Cervical Brush Diluent. INNHENTING AV LBC-PRØVE BD SurePath- eller PreservCyt-prøver må innhentes enten med en livmorhanlspensel eller en pensel/spatel-kombinasjon, som beskrevet i pakningsvedlegget for BD SurePath eller PreservCyt. Når de er innhentet, kan BD SurePath- eller PreservCyt-prøver oppbevares og transporteres i sine opprinnelige beholdere i opptil 30 dager ved 2 30 C eller 30 dager hvis de oppbevares nedfryst ved -20 C før overføring til rør med BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent. OPPBEVARING OG TRANSPORT AV LBC-PRØVE Overføring av LBC-prøver til rør med BD Onclarity HPV LBC Diluent før eller etter fjerning av en alikvot for behandling for enten BD SurePath- eller ThinPrep-testen. En 0,5 ml alikvot av enten BD SurePath- eller PreservCyt-prøve blir manuelt overført fra den opprinnelige beholderen til røret med BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent før eller etter behandling for Pap-testen BD SurePath eller ThinPrep. Bruk hansker når du håndterer rør med BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent og prøvebeholdere med BD SurePath eller PreservCyt. Hvis hanskene kommer i kontakt med prøven, skal de byttes umiddelbart for å unngå kontaminering av andre prøver. 3

Overføring av BD SurePath-prøve før eller etter behandling for BD SurePath-testen MERK: Se i pakningsvedlegget for BD PrepStain Slide Processor (objektglassbehandler) eller BD Totalys SlidePrep for instruksjoner om fjerning av en alikvot fra prøveglasset med BD SurePath før utføring av den væskebaserte Pap-testen BD SurePath. MERK: Håndter én prøve om gangen for behandling. 1. Merk et rør med BD Onclarity HPV LBC Diluent med pasientens ID. 2. Fjern korken fra røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent. 3. Kjør BD SurePath-prøvebeholderen i 10 20 s på en virvelblander for å sørge for at blandingen blir homogen. 4. Overfør 0,5 ml fra prøvebeholderen raskt (innen ett minutt etter virvelblanding) til røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent ved hjelp av en aerosolresistent spiss. 5. Kast pipettespissen. MERK: Det må brukes en egen pipettespiss for hver prøve. 6. Sett lokket godt fast på røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent. 7. Vend røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent 3 4 ganger for å sikre at prøven og fortynningsmidlet blandes godt. Overføring av PreservCyt-prøve før eller etter behandling for Pap-testen ThinPrep MERK: Se tillegget til brukerhåndboken for ThinPrep 2000/3000-systemet for instruksjoner om hvordan du tar ut en alikvot fra PreservCyt-prøvebeholdere før ThinPrep-testen utføres. MERK: Håndter én prøve om gangen for behandling. 1. Merk et rør med BD Onclarity HPV LBC Diluent med pasientens ID. 2. Fjern korken fra røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent. 3. Kjør PreservCyt-prøvebeholderen i høy hastighet på en virvelblander i 8 12 sek for å sørge for at blandingen blir homogen. 4. Overfør omgående 0,5 ml fra prøvebeholderen til røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent ved hjelp av en aerosolresistent spiss. 5. Kast pipettespissen. MERK: Det må brukes en egen pipettespiss for hver prøve. 6. Sett lokket godt fast på røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent. 7. Vend røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent 3 4 ganger for å sikre at prøven og fortynningsmidlet blandes godt. Oppbevaring og transport av prøver som er overført til rør med BD HPV LBC Diluent Etter manuell overføring til et rør med BD Onclarity HPV LBC Diluent kan den fortynnede prøven oppbevares ved 2 30 C i opptil 15 dager eller opptil 30 dager når den oppbevares ved -20 C. BEHANDLINGSPROSEDYRE FOR ALLE PRØVER MERK: Hvis prøvene har vært fryst, må du påse at de er fullstendig tint ved romtemperatur og blandet ved vending før du fortsetter. 1. Ved hjelp av Tube Layout Report (røroppsettrapport) setter du prøvene i riktig rekkefølge i BD Viper LT Specimen Rack (prøvestativ) og låser det på plass. 2. Prøvene er nå klare til å forvarmes. 3. Skift hansker før du fortsetter for å unngå kontaminering. KLARGJØRING AV KVALITETSKONTROLL 1. Ta lokket av ett rør med BD Onclarity HPV Negative Control (negativ kontroll) og ett med BD Onclarity HPV LBC Diluent. 2. Hell hele innholdet av røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent opp i BD Onclarity HPV Negative Control. 3. Sett lokket på den rehydrerte BD Onclarity HPV Negative Control. Sett på lokket igjen, og kast det tomme røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent. 4. Ta lokket av et rør med BD Onclarity HPV Positive Control (positiv kontroll) og ett med BD Onclarity HPV LBC Diluent. 5. Hell hele innholdet av røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent opp i BD Onclarity HPV Positive Control. 6. Sett på lokket på den rehydrerte BD Onclarity HPV Positive Control igjen. Sett på lokket igjen, og kast det tomme røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent. 7. Bruk Tube Layout Report (røroppsettraport), og plasser rehydrert BD Onclarity HPV Negative Control i passende posisjon i BD Onclarity LT Specimen Rack. 8. Bruk Tube Layout Report (røroppsettrapport), og plasser rehydrert BD Onclarity HPV Positive Control i passende posisjon i BD Onclarity LT Specimen Rack. 9. Kontroller er klare til forhåndsvarming sammen med prøvene. MERK: Kontroller må forvarmes innen 24 timer etter hydrering. FORVARMINGSPROSEDYRE MERK: Forvarmingsprosedyren må anvendes for alle prøver for å sikre at prøvematrisen er homogen før den settes i BD Viper LT System. Hvis prøvene ikke forvarmes, kan det ha en negativ virkning på egenskapene til BD Onclarity HPV Assay og/eller BD Viper LT System. MERK: Nedkjølte eller fryste prøver må tines fullstendig ved romtemperatur før forvarming. 1. Sett inn BD Viper LT Specimen Rack i BD Pre-warm Heater, og velg BD Onclarity HPV Assay-forvarmingsprotokollen på BD Viper LT-instrumentet. 2. BD Pre-warm Heater forvarmer prøver og kontroller automatisk i henhold til BD Onclarity HPV Assay-forvarmingsprotokollen. 4

3. Etter at BD Onclarity HPV Assay-forvarmingsprotokollen er fullført, fjerner du stativet fra varmeapparatet og laster det inn i BD Viper LT-instrumentet. 4. Se testprosedyren for testing av prøver og kontroller. 5. Etter forvarming kan prøver oppbevares opptil 7 dager ved 2 30 C eller i opptil 30 dager ved -20 C uten ytterligere forvarming før testing på BD Viper LT System. 6. Etter forvarming kan kontroller oppbevares i opptil 24 t ved 2 30 C uten ytterligere forvarming før testing på BD Viper LT System. TESTPROSEDYRE Se brukerhåndboken for BD Viper LT System for spesifikke instruksjoner om bruk og vedlikehold av systemkomponentene. Det optimale miljøforholdet for HPV-analysen er 18 27 C og 20 85% relative luftfuktighet. KVALITETSKONTROLL Kvalitetskontroll må utføres i samsvar med gjeldende lokale og/eller nasjonale forskrifter eller godkjenningskrav og laboratoriets standardprosedyrer for kvalitetskontroll. Det anbefales at brukeren refererer til aktuelle CLSI-retningslinjer og CLIA-regler for egnede kvalitetskontrollprosedyrer. Kontrollsettet for BD Onclarity HPV Assay leveres separat. Én positiv og én negativ kontroll må inkluderes i hver kjøring og for hvert nytt reagenspartinummer. Kontroller må plasseres i henhold til brukerhåndboken for BD Viper LT System. HPV Positive Control vil bare overvåke for alvorlig svikt i reagensene. HPV Negative Control overvåker for kontaminasjon av reagensene og/eller omgivelsene. Ytterligere kontroller kan testes i samsvar med retningslinjer eller krav i lokale og/eller nasjonale forskrifter eller godkjenningsorganisasjoner. Generell informasjon om kvalitetskontroll for BD Viper LT System: Plasseringen til PCR-rørene er vist i et fargekodet plateoppsettskjermbilde på LCD-skjermen. Pluss-symbolet (+) inne i røret angir den positive kvalitetskontrollprøven. Minus-symbolet (-) inne i røret angir den negative kvalitetskontrollprøven. Et kvalitetskontrollpar må være logget inn for hvert reagenssettnummer. Hvis kvalitetskontrollpar ikke er riktig logget inn, vises en meldingsboks som forhindrer at stativet lagres og at kjøringen fortsetter før innloggingen er fullført. Ytterligere (valgfrie) kvalitetskontrollrør for testing kan logges inn. Disse rørene blir testet som regulære prøver og påvirker ikke statusen bestått / ikke bestått for kjøringen. Se bruksanvisningen for BD Viper LT System for instruksjoner. MERK: BD Onclarity HPV Controls må hydreres manuelt før de lastes i BD Viper LT Specimen Rack. Tolkning av kvalitetskontrollresultater: BD Onclarity HPV Positive Control og BD Onclarity HPV Negative Control må teste som henholdsvis positiv og negativ for å gi pasientresultater. Hvis kontrollene ikke fungerer som forventet, anses kjøringen som ugyldig, og pasientresultatene rapporteres ikke av instrumentet. Hvis noen av kontrollene ikke gir de forventede resultatene, må hele kjøringen gjentas med et nytt sett kontroller, nye ekstraksjonsrør, nytt ekstraksjonsreagenskar og nye PCR-rør. Hvis problemet ikke blir løst, må du kontakte nærmeste BDrepresentant for å få nærmere informasjon. Tabell 1: Tolkning av kvalitetskontrollresultater Kontrolltype Symbol for rapportering av Kvalitetskontrolldisposisjon rørresultat BD Onclarity HPV Positive Control OK Kvalitetskontroll bestått BD Onclarity HPV Positive Control Kvalitetskontroll ikke bestått BD Onclarity HPV Positive Control BD Onclarity HPV Positive Control Kvalitetskontroll ikke bestått Kvalitetskontroll ikke bestått BD Onclarity HPV Negative Control OK Kvalitetskontroll bestått BD Onclarity HPV Negative Control Kvalitetskontroll ikke bestått BD Onclarity HPV Negative Control Kvalitetskontroll ikke bestått BD Onclarity HPV Negative Control Kvalitetskontroll ikke bestått Se tolkningen av testresultater for en beskrivelse av symbolene for rapportering av rørresultater. TOLKNING AV TESTRESULTATER BD Onclarity HPV Assay benytter sanntids-polymerasekjedereaksjonen til å påvise forekomst av humant papillomavirus (HPV) i kliniske prøver. Alle beregninger utføres automatisk av BD Viper LT Software (programvare). Forekomst eller fravær av klinisk relevant HPV-DNA fastslås i PCR-sykusen (Ct) der signalet passerer en forhåndsbestemt terskel. Analysen ekstraherer, forsterker og detekterer et fragment av det humane betaglobulingenet som en intern kontroll for å evaluere behandling, ekstraksjon og amplifisering og for å indikere forekomst av PCR-hemmere. Hvis det HPV-spesifikke signalet er større enn en syklusterskel, benytter algoritmen den interne kontrollen i tolkningen av resultatet. Hvis det HPV-spesifikke signalet er mindre enn eller lik en syklusterskel, ignorerer algoritmen den interne kontrollen. For HPV-prøver vises resultatet HR (kombinasjonen av alle genotyper) på en Tube Results Report (rørresultatrapport). Et positivt symbol i denne kolonnen indikerer at én eller flere genotyper som HPV-analysen kan påvise, har et positivt resultat. Kolonnen GT brukes til å rapportere resultater for genotyper som ikke er tilgjengelige i ditt område. Disse resultatene kan ikke kjøpes. Spesifikke genotyper og kombinerte genotyper vises i kolonnene. Hvis resultatene for en genotype er blitt kjøpt, blir disse resultatene rapportert som forklart nedenfor. Hvis et genotyperesultat ikke er blitt konfigurert for automatisk kjøp, blir disse resultatene maskert med et nøkkelikon. 5

Instrumentet kan konfigureres for kjøp / rapportering av spesifikke genotyper når kjøringen er fullført. Se brukerhåndboken for BD Viper LT System for instruksjoner om autorisering av automatisk genotyperapportering. Hvis resultatene fra analysekontrollen ikke er som forventet, blir ikke pasientresultatene rapportert. Se avsnittet Kvalitetskontroll for forventede kontrollverdier. Rapporterte resultater fastslås som følger. Tabell 2: Tolkning av HPV-testresultater for høyrisiko-hpv-genotype fra BD Onclarity HPV Assay Høyrisiko-HPV-resultat Tolkning Resultat HR Positiv for høyrisiko-hpv-typer HPV HR-positiv HR Negativ for høyrisiko-hpv-typer HPV-HR-negativ Eventuelt HPV-DNA kan ikke påvises Eventuelt HPV-DNA kan ikke påvises Eventuelt HPV-DNA kan ikke påvises Eventuelt HPV-DNA kan ikke påvises Intern kontroll ikke bestått Svikt i ekstraksjonsoverføring Væskenivåsvikt Feil Tabell 3: Tolkning av spesifikke HPV-testresultater for høyrisiko-hpv-genotype fra BD Onclarity HPV Assay HPV-genotyperesultat Tolkning Resultat 16 Positiv for HPV-type 16 HPV-type 16 positiv 16 Negativ for HPV-type 16 HPV-type 16 negativ 18 Positiv for HPV-type 18 HPV-type 18 positiv 18 Negativ for HPV-type 18 HPV-type 18 negativ 45 Positiv for HPV-type 45 HPV-type 45 positiv 45 Negativ for HPV-type 45 HPV-type 45 negativ P1 Positiv for HPV-typene 33 og/eller 58 HPV-type 33 og/eller 58 positiv P1 Negativ for HPV-typene 33 og/eller 58 HPV-type 33 og/eller 58 negativ 31 Positiv for HPV-type 31 HPV-type 31 positiv 31 Negativ for HPV-type 31 HPV-type 31 negativ P2 Positiv for HPV-typene 56, 59 og/eller 66 HPV-type 56, 59 og/eller 66 positiv P2 Negativ for HPV-typene 56, 59 og/eller 66 HPV-type 56, 59 og/eller 66 negativ 51 Positiv for HPV-type 51 HPV-type 51 positiv 51 Negativ for HPV-type 51 HPV-type 51 negativ 52 Positiv for HPV-type 52 HPV-type 52 positiv 52 Negativ for HPV-type 52 HPV-type 52 negativ P3 Positiv for HPV-typene 35, 39 og/eller 68 HPV-type 35, 39 og/eller 68 positiv P3 Negativ for HPV-typene 35, 39 og/eller 68 HPV-type 35, 39 og/eller 68 negativ GT GT Positive HPV-genotyperesultater ikke tilgjengelige i ditt område Negative HPV-genotyperesultater ikke tilgjengelige i ditt område HPV-genotyperesultater tilgjengelige for kjøp HPV-genotyperesultater ikke tilgjengelige for kjøp Begrensning på Positive HPV-genotyperesultater Begrensning på negative HPV-genotyperesultater Genotyperesultatet er låst HPV-resultat negativt, intern kontroll ikke bestått, væskenivåfeil eller ekstraksjonsoverføringsfeil Overvåkning for forekomst av DNA-kontaminasjon Minst én gang i måneden skal følgende testprosedyre gjennomføres for å overvåke overflater i arbeidsområdet og på utstyret for forekomst av DNA-kontaminasjon. Overvåkning av omgivelsene er avgjørende for å påvise kontaminasjon før det utvikler seg til et problem. 1. For hvert område som skal testes, bruker du en ren prøvetakingspensel fra BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit. 2. Hell litt nukleasefritt vann av molekylærbiologistandard i en liten, ren beholder. 3. Dypp penselen i det nukleasefrie vannet av molkylærbiologistandard, og stryk over det første området med en bred feilende bevegelse. 6

4. Ta korken av røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent, og sett penselen inn i fortynningsmidlet. Bland ved å røre med penselen i BD Onclarity HPV Diluent i 5 10 s. 5. Klem penselen mot siden av røret slik at væske renner tilbake til bunnen av røret. 6. Ta penselen forsiktig ut av røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent for å unngå sprut. Kast penselen. 7. Sett den svarte punkterbare korken godt på røret med BD Onclarity HPV LBC Diluent igjen. 8. Gjenta for hvert område som skal testes. 9. Når alle penselprøver er innhentet og klemt ut i fortynningsmiddel, skal du behandles dem i henhold til forvarmingsprosedyren og deretter i henhold til testprosedyren. Du finner mer informasjon om overvåking av omgivelsene og om rengjøringsprosedyrer i brukerhåndboken for BD Viper LT System. Hvis en kontaminasjonsforekomst ikke lar seg fjerne, skal du kontakte den lokale BD-representanten for ytterligere informasjon. BEGRENSNINGER VED PROSEDYREN 1. Optimal ytelse av testen forutsetter tilfredsstillende innhenting og håndtering av prøver. Se avsnittet Prøvetaking og transport i dette vedlegget. 2. Et negativt testresultat utelukker ikke muligheten for infeksjon, fordi testresultatene kan påvirkes av feil prøvetaking, teknisk feil eller forbytting av prøver, eller antallet organismer i prøven kan være under testens følsomhet. 3. BD Onclarity HPV Assay gir kvalitative resultater. 4. Bruk av BD Onclarity HPV Assay begrenses til personale som har opplæring i analyseprosedyren og BD Viper LT System. YTELSESEGENSKAPER BD Onclarity HPV Cervical Brush-prøver, BD SurePath-prøver og/eller PreservCyt-prøver ble innhentet fra 836 kvinner som samsvarte med protokollen, og som var henvist til oppfølging på grunn av unormal Pap-test eller HPV-infeksjon, eller kvinner som oppsøkte en klinikk for et rutinebesøk på to geografisk forskjellige steder i Europa. To prøver ble innhentet fra hver deltaker i denne rekkefølgen: En BD SurePath-prøve (sted A) eller en PreservCyt-prøve (sted B) og en BD Onclarity HPV Cervical Brush-prøve (transportert i et rør med BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent). For hver cytologibeholder som ble innhentet, ble 0,5 ml alikvotert til et rør med BD Onclarity HPV LBC Diluent. Cytologi, HPV DNA-resultater (digene Hybrid Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA Test ((hybridinnhenting 2 (hc2) høyrisiko HPV-DNA-test) og resultater for Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (HPVgenotypingtest) (RLA) var tilgjengelig for de fleste prøvene. Histologiresultater var tilgjengelig for de fleste av deltakerne som oppsøkte en høyrisikoklinikk. Hvert sted registrerte også restprøver (BD SurePath eller PreservCyt ) med tilhørende cytologiresultater (digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test), Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test og, der det var aktuelt, histologiresultater. For hver prøve som ble registrert, ble 0,5 ml alikvotert til et rør med BD Onclarity HPV LBC Diluent. Det ble registrert 510 samsvarende retrospektive prøver, med histologiresultater tilgjengelig for 234 kvinner. Alle prøver ble testet på BD Viper LT System i samsvar med pakningsvedlegget for analysen og brukerhåndboken. For hver medietype beregnet man den kliniske følsomheten og spesifisiteten for påvisning av sykdom, definert som (1) histologiresultater for cervikal intraepitelial neoplasi (CIN2 eller høyere) eller (2) histologiresultater for cervikal intraepitelial neoplasi (CIN3 eller høyere). Endelig dataanalyse omfatter BD Onclarity HPV-analyseresultater fra 472 BD SurePath-prøver, 361 PreservCyt-prøver og totalt 515 BD Onclarity HPV Cervical Brush-prøver: 247 BD Onclarity HPV Cervical Brush-prøver (i BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) for sted A og 268 BD Onclarity HPV Cervical Brush-prøver (i BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) for sted B. Ytelsesestimatene for påvisning av høygradig cervikal sykdom for BD Onclarity HPV Assay og hc2-analysen er vist i tabell 4 og 5 for BD SurePath-medier, tabell 8 og 9 for PreservCyt-medier og tabell 12 og 13 for BD Onclarity HPV Cervical Brush-prøver. BD Onclarity HPV Assay-resultater ble også sammenlignet med HPV DNA-resultater fra digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA-testen og Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping-testen (sammensatt komparator). Et positivt resultat fra begge analysene hc2 og RLA (høy risiko) er definert som sammensatt komparator-positiv, et negativt resultat for begge analysene hc2 og RLA (høy risiko) er definert som sammensatt komparator-negativ, og når de to analysene ikke stemmer overens (eller resultatene ikke var tilgjengelige for begge testene), er sammensatt komparator-resultatet definert som ubestemt. Prosentandel samsvar for positiv, negativ og samlet blir beregnet for hver medietype versus den sammensatte komparatoren. Endelig dataanalyse omfatter BD Onclarity HPV Assay og resultater for sammensatt komparator (uansett histologistatus) fra 670 BD SurePath-prøver og 674 PreservCyt-prøver. (Tabell 6 og 10) Den absolutte risikoen for sykdom (CIN2+ og CIN3+) i studiepopulasjonen for hver medietype ble beregnet for hver genotype eller genotypegruppe i BD Onclarity HPV Assay. De absolutte risikoene blir beregnet når genotypen (eller genotypegruppen) forekommer alene og/eller ved forekomst av andre genotyper. En tabell over absolutt risiko er vist for hver medietype. Hvert medium ble bare innhentet på ett sted, og dermed kan det forventes forskjeller i HPV- og genotypepositivitetsrater på grunn av variasjoner i populasjonen. (Tabell 7 og 11) Klinisk ytelse for BD SurePath-prøver Tabell 4: Ytelse for BD Onclarity HPV Assay med BD SurePath-medier sammenlignet med histologiresultater (CIN2+) BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA-test Estimat 95 % konfidensintervall Estimat 95 % Konfidensintervall Følsomhet 97,9% (190/194) (94,8 %, 99,2 %) 98,4 % (190/193) (95,5 %, 99,5 %) Spesifisitet 22,7% (63/278) (18,1 %, 27,9 %) 17,0 % (47/277) (13,0 %, 21,8 %) 7

Tabell 5: Ytelse for BD Onclarity HPV Assay med BD SurePath-medier sammenlignet med histologiresultater (CIN3+) BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA-test Estimat 95% Konfidensintervall Estimat 95% Konfidensintervall Følsomhet 97,7 % (126/129) (93,4 %, 99,2 %) 98,4 % (126/128) (94,5 %, 99,6 %) Spesifisitet 18,7 % (64/343) (14,9 %, 23,1 %) 14,0 % (48/342) (10,8 %, 18,1 %) Tabell 6: Ytelse for BD Onclarity HPV Assay med BD SurePath-medier sammenlignet med sammensatt komparator Resultat for sammensatt komparator BD Onclarity HPV Assay Positiv Negativ Ubestemt* Totalt Positiv prosent samsvar (95 % konfidensintervall) Negativ prosent samsvar (95 % konfidensintervall) Totalt prosent samsvar (95 % konfidensintervall) Positiv 532 6 27 565 Negativ 8 50 47 105 Totalt 540 56 74 670 98,5 % (97,1 %, 99,2 %) 89,3 % (78,5 %, 95,0 %) 97,7 % (96,1 %, 98,6 %) * hc2- og RLA-resultater samsvarer ikke, eller resultater var ikke tilgjengelig for begge tester. Tabell 7: Absolutt risiko for CIN2+ og CIN3+ for BD Onclarity HPV Assay-genotyper med BD SurePath-medier Infeksjon som skyldes én eller flere genotyper Infeksjon som skyldes én enkelt genotype eller genotypegruppe Infeksjon som skyldes én eller flere genotyper Infeksjon som skyldes én enkelt genotype eller genotypegruppe BD Onclarity HPV Assaygenotype Absolutt risiko CIN2+ 95 % konfidensintervall Absolutt risiko CIN2+ 95 % konfidensintervall Absolutt risiko CIN3+ 95 % konfidensintervall Absolutt risiko CIN3+ 95 % konfidensintervall HPV16 63,9 % (99/155) (56,1 %, 71,0 %) 64,9 % (48/74) (53,5 %, 74,8 %) 43,9 % (68/155) (36,3 %, 51,7 %) 47,3 % (35/74) (36,3 %, 58,5 %) HPV18 50,0 % (24/48) (36,4 %, 63,6 %) 50,0 % (7/14) (26,8 %, 73,2 %) 43,8 % (21/48) (30,7 %, 57,7 %) 42,9 % (6/14) (21,4 %, 67,4 %) HPV45 46,7 % (21/45) (32,9 %, 60,9 %) 23,5 % (4/17) (9,6 %, 47,3 %) 31,1 % (14/45) (19,5 %, 45,7 %) 17,6 % (3/17) (6,2 %, 41,0 %) HPV33/58 49,4 % (42/85) (39,0 %, 59,8 %) 47,1 % (16/34) (31,5 %, 63,3 %) 31,8 % (27/85) (22,8 %, 42,3 %) 23,5 % (8/34) (12,4 %, 40,0 %) HPV31 64,2 % (52/81) (53,3 %, 73,8 %) 72,7 % (16/22) (51,8 %, 86,8 %) 40,7 % (33/81) (30,7 %, 51,6 %) 50,0 % (11/22) (30,7 %, 69,3 %) HPV56/59/66 25,5 % (25/98) (17,9 %, 35,0 %) 0,0 % (0/29) (0,0 %, 11,7 %) 13,3 % (13/98) (7,9 %, 21,4 %) 0,0 % (0/29) (0,0 %, 11,7 %) HPV51 41,7 % (15/36) (27,1 %, 57,8 %) 25,0 % (2/8) (7,1 %, 59,1 %) 25,0 % (9/36) (13,8 %, 41,1 %) 12,5 % (1/8) (2,2 %, 47,1 %) HPV52 35,1 % (20/57) (24,0 %, 48,1 %) 33,3 % (4/12) (13,8 %, 60,9 %) 19,3 % (11/57) (11,1 %, 31,3 %) 16,7 % (2/12) (4,7 %, 44,8 %) HPV35/39/68 36,0 % (27/75) (26,1 %, 47,3 %) 33,3 % (7/21) (17,2 %, 54,6 %) 17,3 % (13/75) (10,4 %, 27,4 %) 19,0 % (4/21) (7,7 %, 40,0 %) Klinisk ytelse for PreservCyt-prøver Tabell 8: Ytelse for BD Onclarity HPV Assay med BD PreservCyt-medier sammenlignet med histologiresultater (CIN2+) BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA-test Estimat 95 % konfidensintervall Estimat 95 % konfidensintervall Følsomhet 94,7 % (160/169) (90,2 %, 97,2 %) 97,0 % (160/165) (93,1 %, 98,7 %) Spesifisitet 50,5 % (97/192) (43,5 %, 57,5 %) 40,8 % (75/184) (33,9 %, 48,0 %) 8

Tabell 9: Ytelse for BD Onclarity HPV Assay med BD PreservCyt-medier sammenlignet med histologiresultater (CIN3+) BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA-test Estimat 95 % konfidensintervall Estimat 95 % konfidensintervall Følsomhet 94,4 % (85/90) (87,6 %, 97,6 %) 97,7 % (85/87) (92,0 %, 99,4 %) Spesifisitet 37,3 % (101/271) (31,7 %, 43,2 %) 29,8 % (78/262) (24,6 %, 35,6 %) Tabell 10: Ytelse for BD Onclarity HPV Assay med BD PreservCyt-medier sammenlignet med sammensatt komparator Resultat for sammensatt komparator BD Onclarity HPV Assay Positiv Negativ Ubestemt* Totalt Positiv 246 5 18 269 Negativ 10 366 29 405 Totalt 256 371 47 674 Positiv prosent samsvar (95 % konfidensintervall) 96,1 % (93,0 %, 97,9 %) * hc2- og RLA-resultater samsvarer ikke, eller resultater var ikke tilgjengelig for begge tester. Negativ prosent samsvar (95 % konfidensintervall) 98,7 % (96,9 %, 99,4 %) Tabell 11: Absolutt risiko for CIN2+ og CIN3+ for BD Onclarity HPV Assay-genotyper med BD PreservCyt-medier BD Onclarity HPV Assaygenotype HPV 16 HPV 18 HPV 45 HPV 33/58 HPV 31 HPV 56/59/66 HPV 51 HPV 52 HPV 35/39/68 Infeksjon som skyldes én eller flere genotyper Absolutt risiko CIN2+ 77,1 % (84/109) 50,0 % (12/24) 50,0 % (6/12) 70,0 % (28/40) 67,7 % (42/62) 34,0 % (18/53) 48,0 % (12/25) 73,9 % (17/23) 38,5 % (10/26) 95 % konfidensintervall (68,3 %, 84,0 %) (31,4 %, 68,6 %) (25,4 %, 74,6 %) (54,6 %, 81,9 %) (55,4 %, 78,0 %) (22,7 %, 47,4 %) (30,0 %, 66,5 %) (53,5 %, 87,5 %) (22,4 %, 57,5 %) Infeksjon som skyldes én enkelt genotype eller genotypegruppe Absolutt risiko CIN2+ 81,4 % (57/70) 45,5 % (5/11) 25,0 % (1/4) 75,0 % (15/20) 71,0 % (22/31) 11,1 % (2/18) 27,3 % (3/11) 85,7 % (6/7) 40,0 % (2/5) Klinisk ytelse for BD Onclarity HPV Cervical Brush-prøver 95 % konfidensintervall (70,8 %, 88,8 %) (21,3 %, 72,0 %) (4,6 %, 69,9 %) (53,1 %, 88,8 %) (53,4 %, 83,9 %) (3,1 %, 32,8 %) (9,7 %, 56,6 %) (48,7 %, 97,4 %) (11,8 %, 76,9 %) Infeksjon som skyldes én eller flere genotyper Absolutt risiko CIN3+ 44,0 % (48/109) 29,2 % (7/24) 16,7 % (2/12) 35,0 % (14/40) 30,6 % (19/62) 9,4 % (5/53) 16,0 % (4/25) 26,1 % (6/23) 15,4 % (4/26) 95 % konfidensintervall (35,1 %, 53,4 %) (14,9 %, 49,2 %) (4,7 %, 44,8 %) (22,1 %, 50,5 %) (20,6 %, 43,0 %) (4,1 %, 20,3 %) (6,4 %, 34,7 %) (12,5 %, 46,5 %) (6,1 %, 33,5 %) Totalt prosent samsvar (95 % konfidensintervall) 97,6 % (96,1 %, 98,5 %) Infeksjon som skyldes én enkelt genotype eller genotypegruppe Absolutt risiko CIN3+ 50,0 % (35/70) 18,2 % (2/11) 0,0 % (0/4) 50,0 % (10/20) 41,9 % (13/31) 0,0 % (0/18) 18,2 % (2/11) 42,9 % (3/7) 20,0 % (1/5) 95 % konfidensintervall (38,6 %, 61,4 %) (5,1 %, 47,7 %) (0,0 %, 49,0 %) (29,9 %, 70,1 %) (26,4 %, 59,2 %) (0,0 %, 17,6 %) (5,1 %, 47,7 %) (15,8 %, 75,0 %) (3,6 %, 62,4 %) Tabell 12: Ytelse for BD Onclarity HPV Assay med BD Onclarity HPV Cervical Brush sammenlignet med histologiresultater (CIN2+) Sted A B BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA-test Estimat 95 % konfidensintervall Estimat 95 % konfidensintervall Følsomhet 97,2 % (104/107) (92,1 %, 99,0 %) 99,1 % (106/107) (94,9 %, 99,8 %) Spesifisitet 17,9 % (25/140) (12,4 %, 25,0 %) 21,4 % (30/140) (15,4 %, 28,9 %) Følsomhet 100,0 % (121/121) (96,9 %, 100,0 %) 97,5 % (116/119) (92,8 %, 99,1 %) Spesifisitet 37,4 % (55/147) (30,0 %, 45,5 %) 43,0 % (61/142) (35,1 %, 51,2 %) 9

Tabell 13: Ytelse for BD Onclarity HPV Assay med BD Onclarity HPV Cervical Brush sammenlignet med histologiresultater (CIN3+) Sted A B Analytiske studier BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA-test Estimat 95 % konfidensintervall Estimat 95 % konfidensintervall Følsomhet 97,3 % (72/74) (90,7 %, 99,3 %) 98,6 % (73/74) (92,7 %, 99,8 %) Spesifisitet 15,0 % (26/173) (10,5 %, 21,1 %) 17,3 % (30/173) (12,4 %, 23,7 %) Følsomhet 100,0 % (60/60) (94,0 %, 100,0 %) 98,3 % (57/58) (90,9 %, 99,7 %) Spesifisitet 26,4 % (55/208) (20,9 %, 32,8 %) 31,0 % (63/203) (25,1 %, 37,7 %) Analytisk følsomhet ved klinisk cutoff: Deteksjonsgrensen (LOD) ved klinisk cutoff for HPV ble bestemt for BD Onclarity HPV Assay ved bruk av cellelinjer som er positive for HPV: SiHa (HPV 16), HeLa (HPV 18) og MS751 (HPV 45) og klonet plasmid-dna som inneholder sekvensene for følgende HPV genotyper: HPV 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 i BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt-løsning og BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent som inneholder en HPV-negativ cellelinje (C33A). HPV cellelinjene ble testet individuelt, mens HPVplasmidene ble testet samlet i tre grupper: 1) HPV 31, 33, 51, 52 og 59; 2) HPV 56, 58 og 68; 3) HPV 35 og 66. Minst førtifem replikasjoner av hvert av de seks målnivåene for HPC-cellelinjer og tyve replikasjoner av hvert av de seks målnivåene for HPVplasmider ble testet for minst tre partier av reagenser og minst tre eksemplarer av BD Viper LT System. LOD er nivået av HPV-DNA i den ufortynnede prøven som gir positive resultater over klinisk i minst 95 % av tilfellene. Maksimal LOD-verdi for hver av HPVgenotypene og mediene er beskrevet i tabell 14. Tabell 14: Analytisk følsomhet Mål BD SurePath-medier (95 % konfidensintervall) PreservCyt-medier (95 % konfidensintervall) BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent (95 % konfidensintervall) SiHa (HPV 16) celler/ml 1584 (1276 1962) 1835 (1426 2358) 137 (131 144) HeLa (HPV 18) celler/ml 915 (739 1131) 1786 (1175 2715) 51 (46 56) MS751 (HPV 45) celler/ml 3793 (2944 4888) 5425 (4167 7066) 305 (284 343) HPV 31 eksemplarer/ml 3652 (3159 3868) 4118 (3898 4228) 692 (650 817) HPV 33 eksemplarer/ml 7326 (6578 8932) 8272 (7946 8743) 1376 (1272 1451) HPV 35 eksemplarer/ml 6820 (6477 7282) 7282 (6895 7674) 1552 (1317 1780) HPV 39 eksemplarer/ml 7894 (7115 8193) 8272 (7810 9398) 1531 (1419 1685) HPV 51 eksemplarer/ml 6697 (5796 7097) 5909 (5553 6824) 1229 (1155 1353) HPV 52 eksemplarer/ml 3582 (3414 4184) 4184 (3740 4761) 833 (744 934) HPV 56 eksemplarer/ml 4976 (4140 5698) 4774 (4479 5997) 836 (737 911) HPV 58 eksemplarer/ml 10 094 (9403 11 180) 11 488 (8989 12 360) 2990 (2656 7819) HPV 59 eksemplarer/ml 4400 (4145 5069) 4374 (4105 5482) 772 (722 899) HPV 66 eksemplarer/ml 3793 (3621 4030) 4462 (4008 4844) 701 (646 767) HPV 68 eksemplarer/ml 10 415 (9799 11 642) 10 481 (9816 12082) 2079 (1995 2125) Kryssreaktivitet: Et panel av bakterier, gjær og dyrkede virus sammen med klonet plasmid-dna som inneholder HPV-målsekvenser med høy og lav risiko, ble brukt til å evaluere den analytiske spesifisiteten til BD Onclarity HPV Assay på BD Viper LT System. Hver potensiell kryssreaktant ble testet individuelt i BD SurePath Preservative Fluid og PreservCyt-løsning som inneholder en HPV-negativ cellelinje (C33A). Mikroorganismene er beskrevet i tabell 15 og 16. BD Onclarity HPV Assay kryssreagerte ikke med noen av de testede mikroorganismene. 10

Tabell 15: Mikroorganismer testet for analytisk spesifisitet Bakterier* Virus** Actinomyces israelii Adenovirus, type 5 Atopobium vaginae Bacteroides fragilis Bacteroides ureolyticus Bifidobacterium adolescentis Bifidobacterium breve Bifidobacterium longum ssp. longum EBV-1-, B95-8-stamme HCMV, AD169-stamme HIV-1 HSV1 HSV2 Høyrisiko-HPV*** Chlamydia trachomatis HPV 16 Clostridium perfringens HPV 18 Corynebacterium genitalium HPV 31 Enterobacter cloacae ssp. cloacae HPV 33 Enterococcus faecalis HPV 35 Enterococcus faecium HPV 39 Escherichia coli HPV 45 Fusobacterium nucleatum ssp. nucleatum HPV 51 Gardnerella vaginalis HPV 52 Klebsiella pneumonia ssp. ozaenae HPV 56 Lactobacillus acidophilus HPV 58 Mycobacterium smegmatis HPV 59 Mycoplasma genitalium HPV 66 Neisseria gonorrhoeae HPV 68 Peptostreptococcus anaerobius Prevotella bivia Prevotella disiens Proteus mirabilis Proteus vulgaris Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Streptococcus agalactiae Streptococcus pyogenes Ureaplasma urealyticum Gjær/protozoer**** Candida albicans Trichomonas vaginalis * Bakterier ble testet ved ca. 1,0 x 10 7 CFU/mL unntatt følgende: Chlamydia trachomatis (1,0 x 10 7 EB/mL), Mycobacterium smegmatis (2,5 x 10 6 CFU/mL) og Ureaplasma urealyticum (8,0 x 10 6 CFU/mL). ** Virus testet ved 1,0 x 10 6 VP/mL. *** Høyrisiko-HPV-plasmid-DNA testet ved 1,0 x 10 6 eksemplarer/ml. **** Gjær (Candida albicans ble testet ved ca. 1,0 x 10 7 CFU/mL. Protozoer (Trichomonas vaginalis) ble testet ved 1,4 x 10 6 CFU/mL. 11

Tabell 16: Lavrisiko-HPV-plasmider testet for analytisk spesifisitet HPV 6 HPV 69 HPV 11 HPV 70 HPV 26 HPV 73 HPV 30 HPV 82 HPV 34 HPV 97 HPV 53 HPV 67 HPV c85 * Lavrisiko-HPV-plasmid-DNA testet ved 1,0 x 10 6 eksemplarer/ml. Forstyrrende stoffer: Potensialet for forstyrrelse i BD Onclarity HPV Assay på BD Viper LT System ble fastslått med eksogene og endogene stoffer som kan forekomme i kliniske livmorhalsprøver. Tilrettelagte HPV-negative prøver og HPV positive prøver (tilsatt SiHa-, HeLa- og MS751-celler sammen ved 3 x LOD) ble testet ved forekomst eller fravær av hvert av de potensielt forstyrrende stoffene. Stoffer som er brukt i disse studiene, er beskrevet i tabell 17. Konsentrasjonene representerer høyeste nivå av stoffer som ikke førte til forstyrrelse i BD Onclarity HPV Assay. Tabell 17: Potensielt forstyrrende stoffer BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent BD SurePath-medier PreservCyt-medier Potensielt forstyrrende stoff Konsentrasjon testet Konsentrasjon testet Konsentrasjon testet KY vaginalt glidemiddel 10 % (vekt/volum) 6 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) VCF vaginal prevensjonsfilm 3 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) VCF vaginalt prevensjonsskum 10 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) Conceptrol prevensjonsgel 1 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) Monistat 3* 2 % (vekt/volum) 2 % (vekt/volum) 1,8 % (vekt/volum) Clotrimazol 7 10 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) Vagistat-1 tioconazol 2 % (vekt/volum) 2 % (vekt/volum) 2 % (vekt/volum) Clindamycin vaginalkrem 9 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) Summer's Eve dusj 10 % (v/v) 10 % (v/v) 10 % (v/v) Zovirax (acyclovir) krem 10 % (vekt/volum) 8 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) Vandazole gel (metronidazol vaginalgel, 0,75 %) 10 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) 10 % (vekt/volum) Summer's Eve deodorant 2 % (vekt/volum) 3 % (vekt/volum) 2 % (vekt/volum) Bovint mucin 10 % (v/v) 10 % (v/v) 10 % (v/v) Progesteron 20 ng/ml 20 ng/ml 20 ng/ml Østradiol 1,2 ng/ml 1,2 ng/ml 1.2 ng/ml Fullblod 3 % (v/v) 5 % (v/v) 5 % (v/v) Leukocytter 1 x 10 6 celler/ml 1 x 10 6 celler/ml 1 x 10 6 celler/ml Sæd 10 % (v/v) 10 % (v/v) 10 % (v/v) Eddikksyrevask** 5 % (v/v) 5 % blod (v/v), Blod + eddikksyrevask 2,5 % eddiksyrevask (v/v) * Konsentrasjoner høyere enn de oppgitte førte til væskenivåsvikt under ekstraksjon av på BD Viper LT System. ** Eddiksyrevask består av en oppløsning med 1 del iseddik: 9 deler CytoLyt. 12

Forstyrrelse fra konkurrerende mål: Potensialet for hemming av HPV-påvisning på grunn av at ett mål er til stede ved høyt nivå og et annet mål er til stede ved lavt nivå under en blandet infeksjon ble evaluert for BD Onclarity HPV Assay. SiHa-, HeLa- og MS751-celler ble testet individuelt eller sammen ved 3 x LOD ved forekomst eller fravær av konkurrerende HPV-mål ved 1,0 x 10 6 eksemplarer/ml i BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution og BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent som inneholder en HPV-negativ cellelinje (C33A) (tabell 18). Tabell 18: Forstyrrelse fra konkurrerende mål HPV-analyserørtype Individuelle HPV-cellemål ved 3 x LOD HPV-plasmider ved 1 x 10 6 eksemplarer/ml Påvisning av HPV-cellemål ved forekomst eller fravær av konkurrerende genotyper (HPV-plasmider) G1-genotyper med G1-ko-amplifiserte mål SiHa (HPV 16) HPV 18 + HPV 45 Ja HeLa (HPV 18) HPV 16 + HPV 45 Ja HPV 45 (MS751) HPV 16 + HPV 18 Ja G1-genotyper med G2-ko-amplifiserte mål SiHa + HeLa + MS751 HPV 31 + HPV 33 + HPV 56 + HPV 58 + HPV 59 + HPV 66 Ja G1-genotyper med G3-ko-amplifiserte mål SiHa + HeLa + MS751 HPV 35 + HPV 39 + HPV 51+ HPV 52 + HPV 68 Ja Reproduserbarhet: Reproduserbarheten til BD Onclarity HPV Assay ble evaluert på BD Viper LT-instrumentet ved bruk av et panel med fire elementer som omfattet negative, sterkt negative, svakt positive og moderat positive prøver. De positive panelelementene bestod av SiHa-, HeLa- og MS751-celler, som ble tilført samlet til pooler av HPV-negative kliniske BD SurePath-prøver, og BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent som inneholdt en HPV-negativ cellelinje (C33A). Panelet ble testet med en lik fordeling av tre reagenspartier og tre instrumenter over 12 dager. Dataene er oppsummert i tabell 19. 13