MAX Enteric Viral Panel-NR 443987 P0230(03) 2018-06 Norsk Endringshistorikk Revisjon/dato Avsnitt Endringssammendrag (03) 2018-06 Innholdsfortegnelse Prosedyreprinsipper Tabell over reagenser og materialer Advarsler og forsiktighetsregler Bruksanvisning Tolkning av resultatene Uavklart resultat Analytisk inklusivitet Tabell 7 Side 14 26/spansk oversettelse Lagt til innholdsfortegnelse for EN og ES. Oppdatert løkkebeskrivelsen for samsvar med pakningsetiketten. Oppdatert løkkebeskrivelsen for samsvar med pakningsetiketten. Lagt til kreves for bruk med analysen. Lagt til nytt andre kulepunkt. Oppdatert løkkebeskrivelsen for samsvar med pakningsetiketten. Klargjøring av delvis UNR-tolkning. Klargjøring av når en test skal gjentas Oppdatert antallet testede stammer. Rettet LoD-cutoff for de testede stammene. Rettet kolonneoverskriftene Lagt til spansk oversettelse. 1
MAX Enteric Viral Panel-NR 443987 P0230(03) Til in vitro-diagnostisk bruk 2018-06 Skal brukes med BD MAX System Norsk 4 I BRUKSOMRÅDE BD MAX Enteric Viral Panel-NR (tarmviruspanel norovirus/rotavirus) utført på BD MAX System er en automatisk in vitro-diagnostisk test for direkte kvalitativ påvisning av og differensiering mellom tarmviruspatogener. BD MAX Enteric Viral Panel-NR påviser nukleinsyrer fra: Norovirus GI og GII Rotavirus A Testing utføres på ukonserverte bløte til diarépregede avføringsprøver eller Cary-Blair-konserverte avføringsprøver fra symptomatiske pasienter med mistanke om akutt gastroenteritt, enteritt eller kolitt. Testen blir utført direkte på prøven ved bruk av polymerasekjedereaksjon (PCR) i sanntid for oppformering av relevant genmål-dna/rna. Testen benytter hybridiseringsprober som er spesifikke for fluorogene gener, til påvisning av oppformert DNA. Denne testen er tiltenkt for bruk, i forbindelse med klinisk presentasjon, laboratoriefunn og epidemiologisk informasjon, som en hjelp til differensierende diagnose av infeksjoner med norovirus GI og GII, og rotavirus A. Resultater av denne testen skal ikke brukes som eneste grunnlag for diagnose, behandling eller andre beslutninger om pasienthåndtering. Positive resultater utelukker ikke samtidig infeksjon med andre organismer som ikke påvises med denne testen, og er kanskje ikke den eneste eller definitive årsaken til pasientens sykdom. Negative resultater i en situasjon med klinisk sykdom som er kompatibel med gastroenteritt, kan skyldes infeksjon med patogener som ikke påvises med denne testen, eller ikke-infeksiøse årsaker, som ulcerøs kolitt, irritabel tarm-syndrom eller Crohns sykdom. SAMMENDRAG OG FORKLARING AV PROSEDYREN Organismer som forårsaker tarmsykdommer, er en signifikant årsak til sykdom og død på verdensbasis. Tarmpatogener kommer inn i kroppen via mage-tarm-kanalen og blir vanligvis spredd via kontaminert mat eller vann eller kontakt med oppkast eller avføring. CDC anslår at det er 48 millioner tilfeller av matbåren sykdom i USA årlig, som forårsaker 128 000 sykehusinnleggelser og 3 000 dødsfall. 1 I utviklingsland forårsaker disse sykdommene ca. 2 millioner dødsfall årlig hos små barn. 2 De enkelte årsaksstoffene kan føre til litt forskjellige symptomer inkludert magekramper eller -smerter, dårlig appetitt, kvalme eller brekninger, men alle fører til diaré. 3 Gjentatte tilfeller av diaré og vedvarende sykdom med diaré forstyrrer tarmfunksjonen og -absorpsjonen og kan føre til feilernæring hos barn og forsinket vekst. 4 BD MAX Enteric Viral Panel-NR utført på BD MAX System kan gi resultater for BD MAX Enteric Viral Panel-NR-målene for 24 prøver på ca. 3 timer. BD MAX Enteric Viral Panel-NR påviser samtidig patogenene som er ansvarlige for gastroenteritt som skyldes norovirus GI og GII, og rotavirus A. Analysen inkluderer en intern Sample Processing Control (prøvebehandlingskontroll). Med BD MAX Enteric Viral Panel-NR er testingsprosessen automatisk, og den gjør operatørens behov for å gripe inn minst mulig, fra prøven blir plassert i BD MAX System til resultater er tilgjengelige. En bløt til diarépreget avføringsprøve blir innhentet og sendt til laboratoriet, homogenisert og overført med en løkke til et BD MAX Enteric Viral Panel Sample Buffer Tube (prøvebufferrør for tarmviruspanel). Prøvebufferrøret plasseres i BD MAX System, og følgende automatiserte prosedyrer utføres: Viruskapsidene lyseres, DNA/RNA trekkes ut på magnetiske kuler og konsentreres, og deretter tilsettes en alikvot av elutert DNA/RNA til PCR-reagensene som inneholder de genpesifikke primerne som brukes til å oppformere de genetiske målene i BD MAX PCR Cartridge (PCR-kassett), hvis de finnes. Analysen inkluderer også en prøvebehandlingskontroll. Prøvebehandlingskontrollen er til stede i ekstraksjonsrøret og gjennomgår trinnene ekstraksjon, konsentrasjon og oppformering for å overvåke for hemmende stoffer og instrument- eller reagenssvikt. Ingen operatørinnblanding er nødvendig når den kliniske prøven og BD MAX Unitized Reagent Strip (reagensremse) og BD MAX PCR Cartridge er satt inn i BD MAX System. BD MAX System utfører automatisk prøvelysering, DNA/RNA-ekstraksjon og -konsentrasjon, reagensrehydrering, oppformering av nukleinsyrer og påvisning av målsekvensen for nukleinsyrer ved bruk av polymerasekjedereaksjon (PCR) i sanntid. Oppformerte mål påvises med hydrolyseprober som er merket med slukkede fluoroforer. Oppformeringen, påvisningen og tolkingen av signalene utføres automatisk av BD MAX System. 2
PROSEDYREPRINSIPPER Avføringsprøver blir innhentet fra pasienter og transportert til laboratoriet ukonservert i en ren beholder eller konservert i Cary- Blair-transportmedium. En løkke blir satt inn i sin helhet i prøven, og prøvematerialet presses ut med en virvelbevegelse i et BD MAX Sample Buffer Tube (prøvebufferrør) som fulgte med BD MAX Enteric Viral Panel-settet. Prøvebufferrøret lukkes med en septumkork, virvelblandes og overføres til BD MAX System. Når arbeidslisten er generert og den kliniske prøven er lastet på BD MAX-instrumentet sammen med en BD MAX Enteric Viral Panel Unitized Reagent Strip (modulreagensstrimmel for tarmviruspanel) og PCR Cartridge, startes kjøringen. Operatøren trenger ikke å gripe inn etter dette. BD MAX System utfører automatisk prøveklargjøring, inkludert lysering av målorganismen, DNA/RNA-ekstraksjon og -konsentrasjon, reagensrehydrering samt oppformering og påvisning av målnukleinsyresekvens ved bruk av PCR i sanntid. Tolkningen av signalet utføres automatisk av BD MAX System. Analysen omfatter også en prøvebehandlingskontroll som finnes i ekstraksjonsrøret, og som det blir utført ekstraksjons-, konsentrasjons- og oppformeringstrinn for. Med prøvebehandlingskontrollen overvåkes forekomst av potensielt hemmende stoffer samt feil ved system eller reagens. Etter enzymatisk viruslysering ved høye temperaturer blir de frigjorte nukleinsyrene fanget opp av perler med magnetisk affinitet. Kulene med de bundne nukleinsyrene vaskes, og nukleinsyrene eluteres. Elutert DNA/RNA blir nøytralisert og overført til Master Mix-rørene for å rehydrere PCR-reagensene. Etter rehydrering dispenserer BD MAX System et fast volum av PCR-klar oppløsning i BD MAX PCR Cartridge. Systemet lukker mikroventiler i BD MAX PCR Cartridge for å hindre fordampning og amplikonkontaminering før revers transkriptase PCR blir initiert for å konvertere RNA til cdna og deretter sanntids PCR. De amplifiserte DNA-målene påvises ved bruk av hydrolysesonder (TaqMan) som er merket på den ene siden med et fluorescerende rapporteringsfargestoff (fluorofor) og på den andre siden med en slukkerdel. Prober merket med ulike fluoroforer brukes til å påvise amplikonene for virusmålene (norovirus GI og GII, og rotavirus A) og amplikonene for prøvebehandlingskontroll i tre ulike optiske kanaler i BD MAX System. Når probene er i sin opprinnelige tilstand, blir fluorescensen til fluoroforen undertrykt på grunn av nærheten til slukkeren. Ved forekomst av mål-dna hybridiserer imidlertid probene til sin komplementære sekvens og blir hydrolysert av 5 3 -eksonukleaseaktiviteten til DNA-polymerase når den syntetiserer den nascerende tråden langs cdna-templaten. Dette fører til at fluoroforene blir separert fra slukkermolekylene, og fluorescens blir frigjort. BD MAX System overvåker disse signalene i hver syklus og tolker dataene ved avslutningen av programmet for å rapportere de endelige resultatene. REAGENSER OG MATERIALER REF. Innhold Mengde 443987 BD MAX Enteric Viral Panel Master Mix (D6) Tørket PCR Master Mix som inneholder DNA-polymerase, nukleotider, mål- og prøvebehandlingskontrollspesifikke prober og primere. BD MAX Enteric Viral Panel Unitized Reagent Strips Reagensstrimler som inneholder alle flytende reagenser og engangspipettespisser som er nødvendige for prøvebehandling og DNA/RNA-ekstraksjon. BD MAX Enteric Viral Panel Extraction Tube (D4) Tørket ekstraksjonsreagens som inneholder DNA/RNA-magnetiske affinitetsperler, proteinase K og Sample Processing Control BD MAX Enteric Viral Panel Sample Buffer Tube BD MAX Disposable Inoculation Loops (kreves for bruk med analysen) 24 tester (2 x 12 rør) 24 tester 24 tester (2 x 12 rør) 24 tester (2 x 12 rør) Korker med septum 25 30 NØDVENDIG UTSTYR OG MATERIALER SOM IKKE FØLGER MED BD MAX PCR Cartridges (BD Diagnostic Systems katalognr. 437519) VWR Multi-Tube Vortexer eller tilsvarende (VWR, kat. nr. 58816-115) Vortex Genie 2 eller tilsvarende (VWR, kat. nr. 58815-234) Nalgene Cryogenic Vial Holder (VWR, kat. nr. 66008-783) Stativ som er kompatibelt med en virvelblander for flere rør (f.eks. Cryogenic Vial Holder (holder for kryogeniske beholdere) eller tilsvarende) Labfrakk og engangshansker uten pudder Stoppeklokke eller tidtaker For "ukonservert" avføringsprøvetype: Tørre, rene beholdere for innhenting av flytende eller bløte avføringsprøver. For konservert avføringsprøvetype: Cary-Blair-transportmedium (15 ml) 3
ADVARSLER OG FORSIKTIGHETSREGLER Fare H360 Kan skade forplantningsevnen eller gi fosterskader. P280 Benytt vernehansker/verneklær/vernebriller/ansiktsskjerm. P201 Innhent særskilt instruks før bruk. P202 Skal ikke håndteres før alle advarsler er lest og oppfattet. P308+P313 Ved eksponering eller mistanke om eksponering: Søk legehjelp. P405 Oppbevares innelåst. P501 Innhold/beholder skal kasseres i henhold til lokale/regionale/nasjonale/internasjonale retningslinjer. BD MAX Viral Panel-NR er bare til in vitro-diagnostisk bruk. BD MAX Disposable Inoculating Loops (engangsinokuleringsløkker) kreves for bruk med BD MAX Enteric Viral Panel og følger med analysesettet. Generelle løkker, uansett type og volum, er ikke anbefalt for bruk og ikke validert med ytelsen til BD MAX Enteric Viral Panel. Offentlige bestemmelser for varsling av rapporterbare sykdommer oppdateres av og til og omfatter en rekke organismer for overvåkning og undersøkelse av utbrudd. 5,6 Laboratorier har ansvaret for å følge offentlige bestemmelser for rapporterbare patogener og bør rådføre seg med offentlige helselaboratorier når det gjelder retningslinjer for innsending av isolater og/eller kliniske prøver. Produktet kan kun brukes i BD MAX System. Ikke bruk reagenser og/eller materialer som er utgått på dato. Ikke bruk settet hvis etiketten som forsegler ytterkartongen, er skadet ved levering. Du må ikke bruke reagenser hvis beskyttelsesposer er åpne eller skadet ved levering. Ikke bruk reagensen hvis tørkemiddelposen ikke er til stede eller er skadet inne i reagensposene. Ikke fjern tørkemiddelet fra reagensposene. Posene som beskytter reagensene, skal umiddelbart etter bruk lukkes med forseglingen. Fjern eventuell overflødig luft i posene før forsegling. Beskytt reagenser mot varme og fuktighet. Langvarig eksponering for fuktighet kan påvirke produktets ytelse. Du må ikke bruke reagenser hvis folien er brutt eller skadet. Ikke bland reagenser fra forskjellige poser og/eller pakker og/eller lotnummer. Du må ikke bytte om på eller gjenbruke korker, da det kan oppstå kontaminering som forstyrrer testresultatene. Kontroller at modulreagensstrimlene har korrekte væskenivåer (påse at væskene er på bunnen av rørene) (se figur 1). Kontroller at modulreagensstrimlene har alle pipettespissene på plass (se figur 1). Vær forsiktig når du bruker kjemiske løsninger, da lesbarheten av strekkoden på Master Mix og ekstraksjonsrøret kan påvirkes. Gode laboratorieteknikk er avgjørende for korrekt utførelse av denne analysen. Da denne testen er svært sensitiv analytisk sett, må ekstrem forsiktighet utvises for å bevare renheten til alle materialer og reagenser. I tilfeller der andre PCR-tester utføres i samme generelle område av laboratoriet, må du være forsiktig, slik at ikke BD MAX Enteric Viral Panel-NR, eventuelle andre reagenser som er nødvendige for testing, og BD MAX System kontamineres. Unngå alltid kontaminasjon av reagenser med mikrober, deoksyribonuklease (DNase) og ribonuklease (RNase). Du må skifte hansker før du håndterer reagenser og kassetter. For å unngå at miljøet kontamineres med målamplikoner, må ikke BD MAX PCR Cartridge brekkes av etter bruk. Forseglingene i BD MAX PCR Cartridges er utformet for å forhindre kontaminering. Laboratoriet skal rutinemessig utøve miljøovervåkning for å minimerer risikoen for krysskontaminering. Hvis BD MAX Enteric Viral Panel-NR utføres utenfor tids- og temperaturområdene som er anbefalt for transport og oppbevaring av prøver, kan det forekomme ugyldige resultater. Analyser som ikke utføres innenfor spesifiserte tids- og temperaturområder, må gjentas. Ytterligere kontroller skal testes i samsvar med krav i lokale, nasjonale og/eller regionale forskrifter eller kravene til godkjenningsorganisasjoner. Håndter alltid prøver som om de var smittebærende, og i samsvar med sikre laboratorieprosedyrer som dem som er beskrevet i CLSI-dokument M29 7 og i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. 8 Bruk verneklær og engangshansker ved håndtering av alle reagenser. Vask hendene grundig etter utføring av testen. Du må ikke pipettere med munnen. Du må ikke røyke, drikke eller spise i områder der prøver eller settreagenser håndteres. Kasser ubrukte reagenser og avfall i samsvar med nasjonale, kommunale, statlige og lokale forskrifter. Se i brukerhåndboken for BD MAX System 9 for ytterligere advarsler, forsiktighetsregler og prosedyrer. 4
OPPBEVARING OG STABILITET Innhentede prøver, enten ukonservert avføring eller avføring oppbevart i 15 ml modifisert Cary-Blair-transportmedium, skal holdes mellom 2 og 25 C under transport. Må beskyttes mot eksponering for høye temperaturer. Prøver kan oppbevares i opptil 120 timer (5 dager) ved 2 8 C eller i opptil 48 timer ved 2 25 C før testing. BD MAX Enteric Viral Panel Master Mix er stabil ved 2 25 C til og med oppgitt utløpsdato. Ikke bruk komponenter etter utløpsdatoen. BD MAX Enteric Viral Panel Master Mix Tubes leveres i forseglede poser. Forsegl posen igjen umiddelbart etter åpning for å beskytte produktet mot fuktighet. Master Mix-rørene er stabile i opptil 14 dager ved 2 25 C etter første åpning og ny forsegling av posen. BRUKSANVISNING Prøvetaking/transport For å innhente en akseptabel prøve må prosedyren for prøveinnhenting følges nøye. Ved bruk av en tørr, ren beholder innhentes flytende eller bløte avføringsprøver i henhold til følgende prosedyre: 1. Ukonserverte prøver: Overfør flytende eller bløt avføringsprøve til en tørr, ren beholder. Unngå kontaminering med vann eller urin, og unngå å blande prøven med toalettpapir eller såpe. Merk beholderen, og transporter den til laboratoriet i samsvar med institusjonens standard driftsprosedyrer (se delen Oppbevaring og stabilitet). 2. Cary-Blair-konserverte prøver: Overfør den flytende eller bløte avføringsprøven til en transportenhet på 15 ml i henhold til produsentens instruksjoner. Unngå kontaminering med vann eller urin, og unngå å blande prøven med toalettpapir eller såpe. Merk beholderen, og transporter den til laboratoriet i samsvar med institusjonens standard driftsprosedyrer (se delen Oppbevaring og stabilitet). Prøveklargjøring MERK: Ett (1) prøvebufferrør, én (1) kork med septum, én (1) Master Mix Tube (D6), ett (1) ekstraksjonsrør (D4) og én (1) modulreagensstrimmel må brukes for hver prøve og hver ekstern kontroll som skal testes. Ta ut det nødvendige antallet av materialer fra sine beskyttelsesposer eller esker. Ved oppbevaring av åpnede poser med Master Mix eller ekstraksjonsrør fjernes overskytende luft, og glidelåslukningen lukkes. 1. Merk et strekkodet BD MAX Sample Buffer Tube (klar kork) med korrekt prøveidentifikasjon. Ikke skjul, skriv på eller sett etikett over 2D-strekkoden. 2. Bland ikke-konserverte eller Cary-Blair-konserverte prøver med virvelblander på høy hastighet i 15 sekunder. 3. Ta den klare korken av prøvebufferrøret, og inokuler slik: a. Dypp en engangsinokuleringsløkke til hele løkkedelen er nede i prøven. Ikke dypp forbi løkken, da eventuell ekstra avføring på skaftet kan overbelaste PCR-reaksjonen. b. Sett den fylte løkken ned i prøvebufferrøret, og frigjør prøven ved å bruke en virvlende bevegelse. MERK: Det er ikke nødvendig å fjerne hele prøven fra løkken. Den resulterende løsningen i prøvebufferrøret skal være tefarget. 4. Sett kork på det inokulerte prøvebufferrøret igjen. Bruk en septumkork. 5. Sett prøvebufferrøret i et stativ som er kompatibelt med en virvelblander for flere rør, hvis det er tilgjengelig (dvs. holder for kryogenisk beholder eller tilsvarende). 6. Klargjør eventuelle ytterligere prøver for testing ved å gjenta trinn 1 til 5, og påse at hansker er rene før håndtering av ytterligere prøver. 7. Bland alle klargjorte prøver samtidig på maksimal hastighet i ett (1) minutt med virvelblanderen for flere rør. 8. Gå til avsnittet Bruk av BD MAX System for å utføre testing med BD MAX Enteric Viral Panel-NR på BD MAX System. Bruk av BD MAX System MERK: Se brukerhåndboken for BD MAX System 9 for detaljerte instruksjoner (delen «Bruk»). MERK: Testing av BD MAX Enteric Viral Panel-NR må utføres umiddelbart etter virvelblandingstrinnet ovenfor (se «Klargjøring av prøve», trinn 7). Hvis det er nødvendig med ny testing, kjører du prøven(e) i virvelblanderen på nytt. 1. Slå på BD MAX System (hvis det ikke allerede er gjort), og logg på ved å oppgi <user name> (brukernavn) og <password> (passord). 2. Du må skifte hansker før du håndterer reagenser og kassetter. 3. Ta ut det nødvendige antallet modulreagensstrimler fra BD MAX Enteric Viral Panel-NR-settet. Bank hver modulreagensstrimmel lett mot en hard overflate for å sikre at alle væskene er i bunnen av rørene. 4. Ta det nødvendige antallet fra de beskyttende posene av Extraction Tube og Mix Tube fra BD MAX Enteric Viral Panel-NR-settet. 5. Fjern overflødig luft, og lukk posene med vakuumforseglingen. 6. For hver prøve som skal testes, plasserer du én (1) modulreagensstrimmel på et rack på BD MAX system og starter med posisjon 1 på rack A. 7. Klikk ett (1) ekstraksjonsrør (D4) (hvit folie) inn i hver modulreagensstrimmel i posisjon 1 som vist på figur 1. 8. Knepp ett (1) BD MAX Enteric Viral Panel Master Mix-rør (D6) (grønn folie) inn i posisjon 2 på hver modulreagensstrimmel som vist på figur 1. 5
Figur 1: Klikk BD MAX Enteric Viral Panel-ekstraksjonsrør og BD MAX Enteric Viral Panel Master Mix-rør inn i modulreagensstrimler 9. Klikk på fanen Run (Kjør) og deretter underfanen Inventory (Oversikt). Angi settpartinummeret for BD MAX Enteric Viral Panel-NR og Master Mix-partinummer for BD MAX Entended Enteric Viral Panel-NR (for partisporbarhet) enten ved å skanne strekkoden med skanneren eller ved å legge det inn manuelt. MERK: Gjenta trinn 9 hver gang en ny sett-lot blir brukt. 10. Naviger til Worklist (Arbeidsliste). Velg <BD MAX ENT VIR NR 68> fra nedtrekksmenyen. 11. Velg riktig settpartinummer (finnes på den ytre esken til BD MAX Enteric Viral Panel-NR) og Master Mix-partinummer for BD MAX Enteric Viral Panel-NR fra rullegardinmenyen. 12. Angi ID for BD MAX Enteric Viral Panel-prøvebufferrøret, pasient-id og Accession Number (aksesjonsnummeret) (hvis aktuelt) inn i arbeidslisten, enten ved å skanne strekkoden med skanneren eller ved å legge inn manuelt. 13. Gjenta trinn 12 for alle gjenværende prøvebufferrør. 14. Plasser prøvebufferrørene i rack på BD MAX System som svarer til modulreagensstrimlene som er klargjort i trinn 6 til 8. MERK: Sett inn prøvebufferrørene i prøvestativet med 1D-strekkodeetikettene vendt utover (dette gjør det lettere å skanne prøvebufferrørene under prøveinnloggingen). 15. Plasser nødvendig antall BD MAX PCR Cartridge i BD MAX-systemet (se figur 2): Hver BD MAX PCR Cartridge har plass til 1 kjøring med opptil 12 prøver, noe som gir totalt 12 prøver. BD MAX System vil automatisk velge posisjonen og raden i BD MAX PCR Cartridge for hver kjøring. BD MAX PCR Cartridges brukes etter modellen "per kjøring OG stativ" (1 kjøring per kassett, og 1 kassett per stativ). For å maksimere bruken av BD MAX PCR Cartridge under bruk av modus for 2000 prøver velger du Run Wizard (Kjøringsveiviser) på fanen Worklist (Arbeidsliste) for tilordning av spor. Se brukerhåndboken for BD MAX System 9 for flere detaljer. Figur 2: Sett inn BD MAX PCR Cartridges 6
16. Sett inn racket/rackene i BD MAX System (se figur 3). Side A Side B Figur 3: Sett inn racket/rackene i BD MAX System 17. Lukk lokket på BD MAX System og klikk på <Start > for å begynne med behandling. 18. Ved slutten av hver kjøring må du kontrollere resultatene straks eller oppbevare prøvebufferrør ved 2 8 C i opptil 5 dager (120 timer) ELLER ved 2 25 C i maksimalt 48 timer til resultatene er kontrollert. MERK: Hvis en septumkork blir ødelagt under kjøringen, må du bytte den ut med en ny før prøven oppbevares. MERK: Klargjorte BD MAX Sample Buffer-rør kan oppbevares ved 2 8 C i maksimalt 120 timer (5 dager) ELLER ved 2 25 C i maksimalt 48 timer. Hvis du oppnår et ubestemt (IND), uavklart (UNR) eller ufullstendig (INC) resultat, eller hvis det oppstår en ekstern kontroll-feil, må du utføre en gjentatt test av det klargjorte prøvebufferrøret innenfor denne tidsrammen (se delen Prosedyre for gjentatt test). KVALITETSKONTROLL Kvalitetskontrollprosedyrer overvåker ytelsen til enheten. Laboratorier må fastsette antall, type og hyppighet av testing av kontrollmateriale i henhold til retningslinjer eller krav i nasjonale eller lokale bestemmelser eller fra akkrediteringsorganer for å overvåke effektiviteten av hele analyseprosessen. For generell veiledning om kvalitetskontroll kan det være hensiktsmessig for brukeren å se i Clinical Laboratory Standards Institute-dokumentene MM3 10 og EP12. 11 1. Eksterne kontrollmaterialer leveres ikke av BD. BD MAX System-programvaren bruker ikke eksterne positive og negative kontroller i den hensikt å tolke resultatene av prøvetester. Eksterne kontroller behandles som om de var pasientprøver. (Se tabell 2 for tolkning av analyseresultater fra eksterne kontroller.) 2. Én (1) ekstern positiv kontroll og én (1) ekstern negativ kontroll skal kjøres minst daglig inntil tilstrekkelig prosessvalidering oppnås på BD MAX System i hver laboratoriesetting. Redusert hyppighet av kontrolltesting skal være i samsvar med gjeldende bestemmelser. 3. Hensikten med ekstern positiv kontroll er å overvåke for vesentlige reagensfeil. Hensikten med ekstern negativ kontroll er å påvise kontaminasjon av reagens eller omgivelser (eller overføring) av målnukleinsyrer. 4. Ulike typer eksterne kontroller anbefales for å gjøre det mulig for brukeren å velge den som passer best for laboratoriets kvalitetskontrollprogram. a. Ekstern negativ kontroll: Kommersielt tilgjengelig kontrollmateriale eller en tidligere karakterisert prøve som er påvist som negativ. Det anbefales at den eksterne negativ kontrollen forberedes før den eksterne positive kontrollen for å redusere mulighetene for kontaminasjon som et resultat av kontrollforberedelse. b. Ekstern positiv kontroll: Kommersielt tilgjengelige kontrollmaterialer, for eksempel ZeptoMetrix-stammene som er oppgitt nedenfor (se tabell 1), eller tidligere karakteriserte prøver som er fastslått som positive. Tabell 1: Kommersielt tilgjengelige stammer for ekstern positiv kontroll Stamme for ekstern positiv kontroll Rotavirus A Rekombinant norovirus GI eller GII Delenummer ZeptoMetrix 0841CF eller 0810281CF ZeptoMetrix 0886CF eller 0887CF For klargjøring av suspensjon til ekstern kontroll anbefales det at hver viruskulturvæske fortynnes med en 1:10 fortynning i TE-buffer. Inokuler 5 μl av virussuspensjonen i det tilsvarende prøvebufferrøret. Behandle og test som en prøve (se delene Klargjøring av prøve og Bruk av BD MAX System). 5. Alle eksterne kontroller skal gi forventede resultater (positive for ekstern positiv kontroll, negative for ekstern negativ kontroll) og ingen ikke-beståtte eksterne kontroller (uavklart-, ubestemt- eller ufullstendig-resultater). 7
6. En ekstern negativ kontroll som gir et positivt testresultat, indikerer en prøvehåndterings- og/eller kontamineringshendelse. Gå gjennom teknikken for prøvehåndtering for å unngå forvekslinger og/eller kontaminering. En ekstern positiv kontroll som gir et negativt testresultat, indikerer et problem med prøvehåndteringen/-klargjøringen. Gå gjennom teknikken for prøvehåndtering/- klargjøring. 7. En ekstern kontroll som gir et testresultat som er uavklart, ubestemt eller ufullstendig, indikerer en feil ved reagens eller BD MAX System. Kontroller om det er feilmeldinger på monitoren til BD MAX System. Se i delen Oversikt over systemfeil i brukerhåndboken for BD MAX System 9 når det gjelder tolkning av advarsel- og feilkoder. Hvis problemet vedvarer, må du bruke reagenser fra en uåpnet pose eller et nytt BD Enteric Viral Panel-NR-sett. 8. Hvert ekstraksjonsrør til BD MAX Enteric Viral Panel inneholder en prøvebehandlingskontroll, som er et pansret RNA-konstrukt som inneholder en syntetisk mål-rna-sekvens. Prøvebehandlingskontrollen ekstraheres, eluteres og oppformeres sammen med eventuelt DNA/RNA som er til stede i den behandlede prøven, noe som sikrer forutsigbarhet for analysen. Prøvebehandlingskontrollen overvåker effektiviteten ved DNA/RNA-innhenting, -vasking og -elutering under prøvebehandlingstrinnene samt effektiviteten av RNA-konvertering til DNA og DNA-måloppformering og -påvisning under PCR-analyse. Hvis resultatet av prøvebehandlingskontrollen ikke oppfyller akseptanskriteriene, rapporteres for prøven som uavklart, men alle positive (POS) analyseresultater blir rapportert, og ingen mål blir betegnet som negative (NEG). Dette blir rapportert per Master Mix. Et resultat som er uavklart, indikerer prøverelatert inhibering eller reagenssvikt. Gjenta testingen av eventuelle prøver som rapporteres som uavklart, i henhold til delen «Prosedyre for testgjentakelse» nedenfor. TOLKNING AV RESULTATER Resultater finnes på fanen<results> (Resultater) i vinduet <Results> (Resultater) på monitoren til BD MAX-systemet. BD MAX System-programvaren tolker testresultatene automatisk. Resultater blir rapportert for hver av analyttene og for prøvebehandlingskontrollen. Et testresultat kan kalles NEG (negativt), POS (positivt) eller UNR (uavklart) basert på oppformeringsstatus for målet og prøvebehandlingskontrollen. IND (ubestemte) eller INC (ufullstendige) resultater skyldes svikt i BD MAX System. Ved et delvis UNR-resultat, når ett mål har et POS-resultat og det andre målet har et UNR-resultat, vil målet med et UNR-resultat ikke bli kalt NEG. Dette blir rapportert per Master Mix. Tolkning av resultater for BD MAX Enteric Viral Panel-NR er beskrevet nedenfor i tabell 2. Tabell 2: Tolkning av resultater for BD MAX Viral Panel-NR RAPPORTERT ANALYSERESULTAT NoV POS RoV POS NoV NEG RoV NEG NoV UNR RoV UNR Ubestemt (IND) Ufullstendig (INC) TOLKNING AV RESULTAT Norovirus GI- eller GII-RNA påvist Rotavirus A-RNA påvist Ikke noe norovirus-rna påvist, og prøvebehandlingskontroll påvist Ikke noe rotavirus A-RNA påvist, og prøvebehandlingskontroll påvist Ikke noe norovirus GI eller GII-RNA påvist, og prøvebehandlingskontroll påvist (tyder på feil på grunn av inhiberende prøve eller reagensfeil) Ikke noe rotavirus A-RNA påvist, og ingen prøvebehandlingskontroll påvist Kontroll påvist (tyder på feil på grunn av inhiberende prøve eller reagensfeil) Ubestemt resultat på grunn av svikt i BD MAX-systemet (med advarsel eller feilkoder a ) Ufullstendig kjøring (med advarsel eller feilkoder a ) a Se delen «Feilsøking» i brukerhåndboken for BD MAX System 9 for tolkning av advarsel- og feilkoder. PROSEDYRE FOR GJENTATT TEST MERK: Det er tilstrekkelig volum tilgjengelig for én gjentatt test fra prøvebufferrøret. For prøvebufferrør oppbevart ved 2 25 C må gjentatt testing utføres innen 48 timer etter innledende inokulering av prøvebufferrøret med prøven. For prøvebufferrør oppbevart ved 2 8 C kan gjentatt testing alternativt utføres innen 120 timer (5 dager) etter den opprinnelige inokuleringen av prøvebufferrør med prøven. Den gjenværende avføringsprøven kan også brukes til gjentatt testing innen 120 timer (5 dager) etter innhenting hvis den er oppbevart ved 2 8 C, eller innen 48 timer hvis den er oppbevart ved 2 25 C. MERK: Nye prøver kan bli testet i samme kjøring som gjentatte prøver. ULØST RESULTAT Uavklarte resultater kan forekomme hvis prøverelatert hemming eller en reagensfeil hindrer riktig oppformering av mål eller prøvebehandlingskontroll. Hvis prøvebehandlingskontrollen ikke oppformeres, blir prøven rapportert som UNR, men alle positive (POS) analyseresultater vil bli rapportert, og alle andre mål vil bli kalt UNR. BD MAX System rapporterer resultater for hvert mål individuelt, og et UNR-resultat kan forekomme for ett eller flere BD MAX Enteric Viral Panel-NR-mål. I tilfelle et fullstendig UNR-resultat, der alle mål har resultatet UNR, er det nødvendig å gjenta testen. Ved et delvis BD MAX Enteric Viral Panel-NR UNR-resultat, når ett mål har et POS-resultat, og det andre målet har et UNR-resultat, må testen gjentas som beskrevet ovenfor. I sjeldne tilfeller kan avvikende resultater observeres når en gjentatt test kjøres for de målene som opprinnelig ble rapportert som POS. I så fall blir et eventuelt positivt resultat beholdt. 8
Prøven(e) kan gjentas fra det/de korresponderende prøvebufferrøret/-rørene innenfor tidsrammene som er definert ovenfor. Virvelbland prøven(e) i ett (1) min, og start på nytt fra delen «Bruk av BD MAX System». Den gjenværende avføringsprøven kan også brukes til gjentatt testing med et nytt prøvebufferrør innenfor tidsrammene som er angitt ovenfor. Start på nytt fra delen Klargjøring av prøve. UBESTEMT RESULTAT Ubestemte resultater kan oppstå hvis det forekommer en systemsvikt. Prøven(e) kan gjentas fra det/de korresponderende prøvebufferrøret/-rørene innenfor tidsrammene som er definert ovenfor. Bland prøven(e) i ett (1) minutt i virvelblander, og start på nytt ved å følge instruksjonene i delen «Bruk av BD MAX System». Den gjenværende avføringsprøven, med et nytt prøvebufferrør, kan også brukes til gjentatt testing innenfor tidsrammen som er angitt ovenfor. Start på nytt fra delen Klargjøring av prøve. Når det gjelder tolkning av advarsel- eller feilkodemelinger, se i brukerhåndboken for BD MAX 9 (se delen «Feilsøking»). UFULLSTENDIG RESULTAT Ufullstendig-resultater kan forekomme hvis prøveklargjøringen eller PCR ikke blir fullført. Prøven(e) kan gjentas fra det/de korresponderende prøvebufferrøret/-rørene innenfor tidsrammene som er definert ovenfor. Virvelbland prøven(e) i ett (1) minutt, og start på nytt ved å følge instruksjonene i delen «Bruk av BD MAX System». Den gjenværende avføringsprøven, med et nytt prøvebufferrør, kan også brukes til gjentatt testing innenfor tidsrammen som er angitt ovenfor. Start på nytt fra delen Klargjøring av prøve. Hvis du vil ha informasjon om tolkning av advarsel- eller feilkodemeldinger, se brukerhåndboken for BD MAX System 9 (se delen «Feilsøking»). EKSTERN KONTROLLSVIKT Eksterne kontroller bør gi forventede resultater når de testes. Hvis prøver må gjentas som følge av et feil resultat for ekstern kontroll, må de gjentas fra sine prøvebufferrør sammen med nylig klargjorte eksterne kontroller innenfor tidsrammene som er angitt ovenfor. Bland prøven(e) i ett (1) minutt i virvelblander, og start på nytt ved å følge instruksjonene i delen «Bruk av BD MAX System». DYRKING AV PRØVER Dyrking og identifikasjon av organismer fra positive prøver skal utføres i henhold til laboratorieprosedyrer. BEGRENSNINGER VED PROSEDYREN Dette produktet skal kun brukes med BD MAX System. Dette produktet er tiltenkt for bruk bare med ukonserverte og Cary-Blair-konserverte humane avføringsprøver. Avføringsprøver fra rektalpensler eller fiksert avføring er ikke blitt validert med BD MAX Enteric Viral Panel-NR. Feilaktige testresultater kan forekomme som følge av uegnet prøvetaking, -håndtering eller -oppbevaring, teknisk svikt eller forveksling av prøver, eller fordi antallet organismer i prøven er under den analytiske sensitiviteten til testen. Hvis resultater av BD MAX Enteric Viral Panel-NR er IND, INC eller UNR (for ett eller flere mål), skal testen gjentas. Et positivt resultat av BD MAX Enteric Viral Panel-NR indikerer ikke nødvendigvis forekomst av levedyktige organismer. Det indikerer imidlertid tilstedeværelse av mål-dna/rna. Mutasjoner eller polymorfismer i primer- eller probebindingsområder kan påvirke påvisning av nye eller ukjente målvarianter og kan føre til et falskt negativt resultat med BD MAX Enteric Viral Panel-NR. BD MAX Enteric Viral Panel-NR påviser samtidig norovirus GI og GII og skiller ikke mellom artene. Som med alle PCR-baserte tester, kan det påvises ekstremt lave nivåer av målet under LoD for analysen. Det kan hende at resultatene ikke vil kunne reproduseres. Falske negative resultater kan forekomme som følge av tap av nukleinsyre grunnet utilstrekkelig innhenting, transport eller oppbevaring av prøver, eller som følge av utilstrekkelig lysering av virus. Prøvebehandlingskontrollen har blitt lagt til i testen for å være et hjelpemiddel ved påvisning av prøver som inneholder hemmere for PCR-amplifikasjon, og som en kontroll for reagensintegritet og analysesystemet som et hele. Prøvebehandlingskontrollen gir ingen indikasjoner på om nukleinsyre har gått tapt som følge av utilstrekkelig innhenting, transport eller oppbevaring av prøver, eller om viruskapsider har blitt tilstrekkelig lysert. Resultater fra BD MAX Enteric Viral Panel-NR skal brukes som et supplement til kliniske observasjoner og annen informasjon som er tilgjengelig for legen. Som for alle diagnostiske in vitro-tester er positive og negative prediktive verdier svært avhengig av prevalens. Ytelsen til BD MAX Enteric Viral Panel-NR kan variere avhengig av prevalens og testet populasjon. Resultater fra BD MAX Enteric Viral Panel-NR kan bli, men blir ikke nødvendigvis, påvirket av samtidig medisinsk behandling, som kan redusere mengden av mål som er til stede. Prøvebufferrøret er ikke utformet for å støtte levedyktighet av organismer. Hvis kultur er nødvendig, må den utføres fra den opprinnelige prøven. Ytelsen til denne testen er ikke blitt fastslått for overvåkning av behandling mot infeksjoner med norovirus GI og GII, og rotavirus A. Denne testen er en kvalitativ test, den gir ikke kvantitative verdier, og den indikerer ikke mengden av organismer som er til stede. Ytelsen til denne testen er ikke blitt evaluert for personer med svekket immunforsvar eller for pasienter uten symptomer på gastrointestinal infeksjon. Virkningen av interfererende stoffer er evaluert kun for dem som er oppgitt i dette pakningsvedlegget. Mulig interferens er ikke blitt evaluert for andre stoffer enn dem som er beskrevet i delen «Interferens» nedenfor. Interferens grunnet andre stoffer enn de som er beskrevet i delen om interferens nedenfor, kan føre til feilaktige resultater. Kryssreaktivitet med andre organismer enn de som er oppgitt i delen Analytisk spesifisitet nedenfor, er ikke blitt evaluert. 9
EGENSKAPER VED UTFØRELSEN Kliniske ytelseskarakteristikker for BD MAX Enteric Viral Panel-NR ble fastslått i en intern, simulert klinisk studie ved bruk av klinisk innhentede prospektive og frosne retrospektive prøver. Den kliniske studien bestod av 2 239 prøver, hvorav 1 048 var ukonserverte og 1 191 var Cary-Blair-konserverte prøver. Ytelsesresultatene fra den simulerte kliniske studien er presentert nedenfor for hvert mål i tabell 3 og 4. Tabell 3: Norovirusytelse: Kombinerte prøvetyper Referansemetode BD MAX Totalt P N P 137 7 144 N 9 1 287 1 296 Totalt 146 1 294 1 440 Positiv prosentvis overensstemmelse (PPA) : 93,8 % (88,7 %, 96,7 %) Positiv prosentvis overensstemmelse (NPA) : 99,5 % (98,9 %, 99,7 %) Tabell 4: Rotavirusytelse: Kombinerte prøvetyper Referansemetode BD MAX Totalt P N P 105 6 111 N 0 1 308 1 308 Totalt 105 1 314 1 419 Positiv prosentvis overensstemmelse (PPA) : % (96,5 %, %) Positiv prosentvis overensstemmelse (NPA) : 99,5 % (99,0 %, 99,8 %) Ikke-rapporterbar-frekvens Opprinnelig uavklart-frekvensen av de 1 724 prospektive prøvene som opprinnelig ble evaluert i denne studien, var 0,9 % av de Cary-Blair-konserverte og 2,2 % av de ukonserverte prøvene. Opprinnelig uavklart-frekvensen etter en gyldig gjentatt test var bare 0,1 % av de Cary-Blair-konserverte og 1,3 % av de ukonserverte prøvene (se tabell 5). Av de 1 724 prospektive prøvene som opprinnelig ble evaluert i denne studien, ble 0,5 % av de Cary-Blair-konserverte og 1,6 % av de ukonserverte prøvene opprinnelig rapportert som uavklarte. Etter en gyldig gjentatt test forble 0,1 % av de Cary-Blair-konserverte og ingen av de ukonserverte prøvene ubestemt (se tabell 5). Av de 1 724 prospektive prøvene som opprinnelig ble evaluert i denne studien, ble 0,1 % av de Cary-Blair-konserverte og 0,4 % av de ukonserverte prøvene opprinnelig rapportert som ufullstendige. Etter en gyldig gjentatt test forble 0,1 % av de Cary-Blairkonserverte og ingen av de ukonserverte prøvene ufullstendige (se tabell 5). Tabell 5: Ikke-rapporterbar-frekvenser for kombinert mål (totalt) Kombinert mål Uavklart-frekvens Ubestemt-frekvens Ufullstendig-frekvens Total frekvens Prøvetype Initial EVP Endelig EVP Initial EVP Endelig EVP Initial EVP Endelig EVP Initial EVP Endelig EVP Cary-Blairkonservert 0,9 9/952 (0,5, 1,8) Ukonservert 2,2 17/772 (1,4, 3,5) Kombinert 1,5 26/1 724 (1,0, 2,2) 0,1 1/943 (0,0, 0,6) 1,3 10/762 (0,7, 2,4) 0,6 11/1 705 (0,4, 1,2) 0,5 5/952 (0,2, 1,2) 1,6 12/772 (0,9, 2,7) 1,0 17/1 724 (0,6, 1,6) 0,1 1/943 (0,0, 0,6) 0,0 0/762 (0,0, 0,5) 0,1 1/1 705 (0,0, 0,3) 0,1 1/952 (0,0, 0,6) 0,4 3/772 (0,1, 1,1) 0,2 4/1 724 (0,1, 0,6) 0,1 1/943 (0,0, 0,6) 0,0 0/762 (0,0, 0,5) 0,1 1/1 705 (0,0, 0,3) 1,6 15/952 (1,0, 2,6) 4,1 32/772 (3,0, 5,8) 2,7 47/1 724 (2,1, 3,6) 0,3 3/943 (0,1, 0,9) 1,3 10/762 (0,7, 2,4) 0,8 13/1 705 (0,4, 1,3) Analytisk inklusivitet Et utvalg av målstammer for BD MAX Enteric Viral Panel-NR-analysen ble inkludert i denne studien. Utvelgelseskriterier for stammer omfattet prevalens, serotype og geografisk plassering, avhengig av relevans. Tjuesyv (27) stammer ble testet, inkludert stammer fra offentlige samlinger og godt karakteriserte kliniske isolater. 10
Inklusivitetstesting omfattet 22 stammer av norovirus GI og GII, og 5 stammer av Rotavirus. Stammene ble tested ved 3 x LoD (deteksjonsgrense) for den tilsvarende stammen i ukonservert avføringsmatriks. BD MAX Enteric Viral Panel-NR identifiserte alle stammene korrekt ved første testing. Analytisk sensitivitet Den analytiske sensitiviteten (deteksjonsgrensen LoD) for BD MAX Enteric Viral Panel-NR ble bestemt slik: Hver målorganisme ble preparert og kvantifisert før inklusjon i denne studien. Individuelle inokuleringsløkker ble dyppet i preparatet for den enkelte organisme og ble deretter overført til et prøvebufferrør som allerede inneholdt avføringsmatriks (konservert eller ukonservert) som på forhånd var fastslått som negativ for alle mål som påvises med BD MAX Enteric Viral Panel-NR. Hver organisme ble testet med minst 20 replikater per prøvetype (konservert eller ukonservert), av to operatører, ved bruk av 3 ulike produksjonspartier av BD MAX Enteric Viral Panel. LoD for en bestemt organisme ble bekreftet ved å teste minst 20 tilleggsreplikater ved den bestemte LoD-konsentrasjonen. Analytisk sensitivitet (LoD), definert som laveste konsentrasjon der 95 % eller mer av alle replikatene forventes å teste positivt (se tabell 6). Målorganisme Norovirus Rotavirus Tabell 6: Deteksjonsgrense for BD MAX Enteric Viral Panel-NR for individuelle mål Stamme Ukonservert LoD (cp/ml i avføring) Cary-Blair-konservert LoD (cp/ml i avføring) GI 6,28E+06 4,71E+06 GI 2,49E+05 2,49E+05 WA 6,46E+03 1,29E+04 Va70 1,16E+04 5,82E+03 Analytisk spesifisitet (kryssreaktivitet og eksklusivitet) BD MAX Enteric Viral Panel-NR ble benyttet på prøver som inneholdt fylogenetisk beslektede arter og andre organismer (bakterier, virus, parasitter og gjær) som man sannsynligvis finner i avføringsprøver. Bakteriecellene, gjærcellene, parasittene og virusene ble testet i prøvebufferrøret ved 10 6 CFU, celler eller genomekvivalenter/ml i avføring, eller 10 5 PFU/mL i avføring eller TCID50/mL i avføring eller tilsvarende mengde av RNA/DNA/PCR-reaksjon. Totalt 112 organismer ble testet, og ingen kryssreaktivitet ble observert. Forstyrrende stoffer Trettito (32) biologiske og kjemiske stoffer som av og til kan finnes i avføringsprøver, ble evaluert for mulig interferens med BD MAX Enteric Viral Panel-NR. I denne studien ble det inkludert en antibiotikablanding som bestod av en kombinasjon av 7 ulike antibiotika eller smertestillende midler som ble testet samtidig. Disse antibiotikaene eller smertestillende midlene omfattet naproksen natrium, ceftriakson dinatrium, erytromycin, metronidazol, sulfametoksazol, tetracyclin hydroklorid og trimetoprim. Hydrokortisonkrem ble vist å interferere på nivåer over 25 % volum/volum. RotaTeq-vaksine gav også positive resultater som forventet, fordi vaksinen kan være til stede i avføring opptil 9 dager etter vaksinering. 12 Resultatene viste ingen rapporterbar interferens med noe annet testet stoff (se tabell 7). I tillegg ble organismer som kan finnes endogent i avføringsprøver, evaluert for mulig interferens med BD MAX Enteric Viral Panel-NR. Fem (5) organismer ble testet ved høy konsentrasjon (1 x10 6 celler/ml avføring). Resultatene viste ingen rapporterbar interferens med noen testede mikroorganismer (se tabell 8). Tabell 7: Endogene og kommersielle eksogene stoffer testet med BD MAX Enteric Viral Panel-NR Merkenavn eller beskrivelse Resultat Merkenavn eller beskrivelse Resultat Fekalt fett NI Spermdrepende glidemiddel NI Humant DNA NI Stikkpille (glyserin) NI Slim NI Vagisil NI Humant fullblod NI Laksativer NI Hydrokortisonkrem I Antidiarémiddel (væske) NI Antiseptiske servietter NI Antidiarémiddel (pille) NI Klyster; mineralolje NI Antibiotikablanding NI Hemoroidegel NI Syrenøytraliserende midler NI Nystatinkrem NI NSAID NI Topiske antibiotika NI RoV-vaksine (rotavirus reassortant ATCC VR-2195 og VR-2415) NI I: Rapporterbar interferens med BD MAX Enteric Viral Panel-NR ved høye konsentrasjoner. NI: Ingen rapporterbar interferens med BD MAX Enteric Viral Panel-NR. 11
Tabell 8: Mikroorganismer som ble testet for interferens med BD MAX Enteric Viral Panel-NR Mikroorganisme Salmonella typhimurium Escherichia coli Proteus vulgaris Enterococcus faecalis Peptostreptococcus anaerobius NI: Ingen rapporterbar interferens med BD MAX Enteric Viral Panel-NR. Resultat Blandet infeksjon / kompetitiv interferens Studien av blandet infeksjon / kompetitiv interferens var designet for å evaluere evnen hos BD MAX Enteric Viral Panel-NR til å påvise lave positive resultater ved forekomst av andre mål med høye konsentrasjoner. Organismer (norovirus og rotavirus) for Master Mix D6 ble klargjort ved 95. persentil observert i den kliniske studien for å simulere et høyt belastningsmål for å tjene som høye mål i BD MAX Enteric Viral Panel Sample Buffer Tube. BD MAX Enteric Viral Panel-NR-analytten som ikke var til stede i Mix for høye mål ble tilsatt i prøvebufferrøret ved en konsentrasjon på 2x LoD som representerer et lavt belastningsmål med 5 μl ukonservert avføring og testet for å simulere blandede infeksjoner. I nærvær av høye belastninger ble alle organismene som svarte til sine respektive preparater for simulert blandet infeksjon, påvist med BD MAX Enteric Viral Panel-NR. Presisjon Presisjonen innenfor laboratoriet ble evaluert for BD MAX Enteric Viral Panel-NR på ett (1) sted. Testing blir utført over 12 dager med to kjøringer per dag (2 teknikere kjørte én hver) med totalt 24 kjøringer. Fem spesifikke målorganismer, med ulike konsentrasjoner, ble brukt til å skaffe panelmedlemmer for denne studien. Panelmedlemmene omfattet norovirus og rotavirus. De følgende verdiene ble brukt som tilsetningsnivåer for målorganismer som fantes i hvert panelmedlem: Moderat positiv (MP): 2,99x LoD Svakt positiv (LP): 1,99x LoD Sann negativ (TN): Intet mål Hvert panelmedlem ble tilsatt negativ ukonservert avføringsmatriks. Sanne negative prøver inneholdt ikke noe mål. Resultater er oppsummert etter mål og konsentrasjon i tabell 9. Tabell 9: Resultat av presisjonsstudie ved bruk av én lot av BD MAX Enteric Viral Panel-NR Kategori TN LP MP Samsvar med forventede resultater Norovirus 192/192 (98,0, ) 48/48 (92,6, ) 48/48 (92,6, ) NI NI NI NI NI Rotavirus 99,5 191/192 (97,1, 99,9) 48/48 (92,6, ) 48/48 (92,6, ) Reproduserbarhet Sted-til-sted-reproduserbarhetsstudien ble utført ved tre (3) kliniske steder ved bruk av ett (1) reagensparti. To (2) operatører utførte 2 kjøringer per dag, over fem (5) forskjellige dager (sammenhengende eller ikke), i totalt 30 kjøringer. Panelene som ble brukt, var de samme som er beskrevet under overskriften Presisjon ovenfor. Prosentvis samsvar for reproduserbarhet fra sted til sted var % for TN for alle mål, og lå i området 97,8 til % og 96,7 til % for henholdsvis LP og MP. Resultatene er oppsummert i tabell 10. De kvantitative reproduserbarhetsresultatene fra sted til sted og i henhold til mål er presentert i tabell 10. Ct-skår syklus-ep, et internt kriterium som brukes til å fastslå et endelig analyseresultat, ble valgt som en tilleggsmetode for å evaluere kvantitativ analysereproduserbarhet. Verdiene for gjennomsnittlig Ct-skår og gjennomsnittlig syklus-ep med varianskomponenter (SA og% CV) er vist i tabell 11. 12
Tabell 10: Resultater fra sted-til-sted-reproduserbarhetsstudie ved bruk av én lot med BD MAX Enteric Viral Panel-NR Kategori TN LP MP Samsvar med forventede resultater Norovirus (360/360) (90/90) (90/90) Rotavirus (360/360) 97,8 (88/90) (90/90) Tabell 11: Resultater for kvantitativ sted-til-sted-reproduserbarhet for BD MAX Enteric Viral Panel-NR PCR-metrikk Ct-skår Syklus-EP Parameter Norovirus Rotavirus SPC LP MP LP MP TN N 90 90 88 90 90 Gj.sn. 29,8 29,6 32,3 31,3 26,8 SA 0,41 0,43 0,66 0,52 0,27 % CV 1,4 1,4 2,0 1,7 1,0 N 90 90 88 90 90 Gj.sn. 4 553,4 4 129,3 737,5 925,2 8 581,7 SA 1 269,47 1 769,10 359,91 382,36 1 161,23 % CV 27,9 42,8 48,8 41,3 13,5 Parti-til-parti-reproduserbarhetsstudien ble utført ved ett (1) sted ved bruk av tre (3) reagenspartier. To (2) operatører utførte 2 kjøringer per dag, over fem (5) forskjellige dager (sammenhengende eller ikke), i totalt 30 kjøringer. Panelene som ble brukt, var de samme som er beskrevet under overskriften Presisjon ovenfor. Resultater fra 5 dager av nøyaktighets- og presisjonsstudien ble brukt til å sette sammen data for ett parti av reagenser for parti-til-parti-studien. Samlet prosentvis samsvar for reproduserbarhet fra parti til parti var 99,7 % til % for TN, og lå i området 97,8 til % og 98,9 til % og % for henholdsvis LP og MP. Resultatene er oppsummert i tabell 15. De kvantitative resultatene fra parti til parti og i henhold til mål er presentert i tabell 12. Ct-skår syklus-ep, et internt kriterium som brukes til å fastslå et endelig analyseresultat, ble valgt som en tilleggsmetode for å evaluere kvantitativ analysereproduserbarhet. Verdiene for gjennomsnittlig Ct-skår og gjennomsnittlig syklus-ep med varianskomponenter (SA og% CV) er vist i tabell 13. Tabell 12: Resultater for parti-til-parti-reproduserbarhet for BD MAX Enteric Viral Panel-NR Kategori TN LP MP Samsvar med forventede resultater Norovirus (360/360) (90/90) (90/90) Rotavirus 99,7 (359/360) (90/90) (90/90) 13
Tabell 13: Kvantitative resultater for parti-til-parti-reproduserbarhet for BD MAX Enteric Viral Panel-NR PCR-metrikk Ct-skår Syklus-EP Parameter Norovirus Rotavirus SPC LP MP LP MP TN N 90 90 90 90 90 Gj.sn. 29,7 29,5 32,0 31,1 26,8 SA 0,41 0,35 0,46 0,35 0,39 % CV 1,4 1,2 1,5 1,1 1,5 N 90 90 90 90 90 Gj.sn. 4 945,6 4 948,5 1 117,1 1 345,6 8 993,5 SA 2 117,85 2 255,71 267,15 220,59 966,88 % CV 42,8 45,6 23,9 16,4 10,8 Overførings-/krysskontaminering En studie ble gjennomført for å undersøke kontaminasjon innen kjøringer og mellom kjøringer (carryover) ved analyse av prøver med høy viruskonsentrasjon av analytter i BD MAX Enteric Viral Panel-NR. Et panel som bestod av ett høyt positivt medlem fra hver Master Mix som inneholdt én målorganisme og ett negativt medlem, ble brukt til å klargjøre flere prøver. Den negative prøven inneholder ingen målanalytt. Tolv (12) replikater av det høyt positive panelmedlemmet og 12 replikater av det negative panelmedlemmet ble testet i hver kjøring, vekslende med negative og positive prøver. To (2) operatører gjennomførte 3 påfølgende kjøringer på 3 ulike BD MAX-instrumenter med totalt 9 kjøringer som inneholdt 24 prøver. Av de 108 negative prøvene som ble testet i denne studien, oppnådde to prøver et positivt resultat. REFERANSER 1. CDC: Estimates of Foodborne Illness in the United States, Located at: http://www.cdc.gov/foodborneburden/2011-foodborne- estimates.html 2. Kosek et al. Bulletin of the World Health Organization (2003) 81:197 204. 3. NIH: Bacterial Gastroenteritis, Located at: http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/000254.htm 4. Petri WA, Miller M, Binder HJ, Levine MM, Dillingham R, and Guerrant RL. Enteric infections, diarrhea, and their impact on function and development. J. Clin. Invest. (2008) 118:1277 1290 5. Summary of Notifiable Diseases. available at <http://www.cdc.gov> 6. CIFOR Analysis of State Legal Authorities. available at <http://www.cifor.us/> 7. Clinical and Laboratory Standards Institute. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections; Approved Guideline. Document M29 (Refer to the latest edition). 8. Centers for Disease Control and Prevention, and National Institutes of Health. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. Chosewood L.C. and Wislon D.E. (eds) (2009). HHS Publication No. (CDC) 21 1112. 9. BD MAX System User s Manual (refer to the latest version) BD Life Sciences, Sparks, MD 21152 USA. 10. Clinical and Laboratory Standards Institute. Molecular Diagnostic Methods for Infectious Diseases; Approved Guideline, document MM3 (Refer to the latest edition). 11. Clinical and Laboratory Standards Institute. User Protocol for Evaluation of Qualitative Test performance; Approved Guideline, Document EP12 (Refer to the latest edition). 12. Catherine Yen, et al. Detection of fecal shedding of Rotavirus vaccine in infants following their first dose of pentavalent Rotavirus vaccine. Vaccine 2011 May 31:29(24) 4151 4155 14