CINtec PLUS Cytology Kit

Transkript

1 CINtec PLUS Cytology Kit TILSIKTET BRUK 100 Figur 1. Livmorhalsepitelcelle positiv for p16 INK4a (brun cytoplasmisk farge) og for Ki-67 (rød kjernefarge) CINtec PLUS Cytology Kit er en immunocytokjemianalyse for simultan kvalitativ deteksjon av p16 INK4a - og Ki-67-proteiner i livmorhalscytologiklargjøringer. Det er indisert til bruk som hjelpemiddel til identifisering av kvinner med høygradige cervikale intraepitel-lesjoner i en screeningpopulasjon, og i undergruppene av pasienter med Pap-cytologiresultat på ASC-US (atypiske skvamøse celler av ubestemt signifikans) eller LSIL (lavgradig, skvamøs intraepital lesjon) eller i pasienter med positive høyrisiko-hpv-testresultater. Tolkning av testresultatene kan kun gjøres av sertifisert personale i sammenheng med pasientens kliniske historie og tilleggsdiagnostiske tester som er utført. Produktet er beregnet på in vitro-diagnostisk bruk (IVD). SAMMENDRAG OG FORKLARING I eukaryotiske celler påvirkes fremdriften av celledelingssyklusen av et komplekst mønster av kontrollerte uttrykks- og post-omsettelige modifikasjoner av cellesyklusregulerende proteiner. Proteinet p16 INK4a spiller en stor rolle i denne reguleringsmekanismen av den eukaryotiske cellesyklusen. Det er en del av den retinoblastoma-protein (prb)-medierte kontrollen av G1/S-faseovergangen, og det utløser cellesyklusarrest i løpet av celledifferensieringsprosesser. Dermed gir p16 INK4a en anti-proliferativ effekt når uttrykt under vanlig cellesyklusprogresjon. I terminalt differensierte epitelceller er p16 INK4a - uttrykket ved nivåer som vanligvis ikke kan detekteres av immunhistokjemi.[1] Ki-67 er et proliferasjonsassosiert protein som kan detekteres utelukkende i kjernen av prolifererende celler. Detaljerte cellesyklusanalyser har vist at Ki-67-antigenet finnes på detekterbare nivåer i alle faser så vel som i mitose, mens hvilende celler i G0-fasen uttrykker ikke antigenet [2]. Da celler som overuttrykker p16 INK4a aktivt kan prolifereres bare når cellesykluskontrollmekanismen er svekket, bør uttrykket for både p16 INK4a og proliferasjonsmarkøren Ki-67 i den samme cellen gjensidig utelukke hverandre under normale fysiologiske forhold. Derfor kan samtidig uttrykk av p16 INK4a og Ki-67 i enkelte celler brukes som indikator for dereguleringen av cellesykluskontrollen i de respektive cellene. I cervikal neoplasi har p16 INK4a vist seg å være sterkt overuttrykt som konsekvens av den funksjonelle inaktiveringen av prb mediert av E7-onkoproteinet fra høyrisikotyper av humant papillomavirus (HR-HPV) [3;4]. Da E7 er nødvendig for å etablere og opprettholde en ondartet fenotype i HPV-assosiert prekreft- og kreftlesjoner, er overuttrykk av p16 INK4a direkte knyttet til den onkogene aktiviteten til de forskjellige HR-HPV-typene og er dermed foreslått som en surrogatmarkør for å forvandle HPV-infeksjoner [1;5]. Mange studier har analysert og påvist den kliniske nytten av p16 INK4a -immunofarging i livmorhistologi [1;3;5;7;8;4;9;10] og livmorcytologi [5;11;12]. Den konjunktive tolkningen av objektglass farget for p16 INK4a har vist seg i forskjellige studier å øke betydelig påliteligheten mellom observatører så vel som den diagnostiske nøyaktigheten for deteksjonen av CIN2 og lesjoner av høyere grad i histologiske livmorhalsvevsprøver [6;10;12]. I livmorcytologi har immunofarging for p16 INK4a vist seg å være et verdifullt verktøy for den effektive sorteringen av Pap-cytologikasuser kategorisert som ASC-US eller LSIL, med sensitivitetsnivåer for deteksjonen av underliggende CIN2 eller verre lesjoner som ligner på de ved HPV-testing, samtidig som at de gir betydelig høyere spesifisitet [12]. Deteksjon av p16 INK4a i cytologiprøver er også foreslått som en verdifull tilleggsmarkør for sorteringen av kvinner som testes positive for HR-HPV i cervikal kreftscreening [11;13]. Praktisk talt alle livmorintraepitele lesjoner av høy klasse (dvs. CIN2, CIN3 eller verre) har vist seg å overuttrykke p16 INK4a [3;6;8]. Da en stor andel epitelceller i CIN-lesjoner også viser proliferativ aktivitet, kan deteksjonen av cervikale epitelceller som samtidig uttrykker både p16 INK4a og Ki-67, brukes som indikator for forandret cellestatus. Derfor kan en tilnærming basert på evalueringen av cervikale cytologiprøver i forhold til forekomst av individuelle cervikalt epitelceller som viser et positivt dobbeltfargeresultat for p16 INK4a og Ki-67 gi både høy sensitivitet og spesifisitet for forekomsten av prekreft- og kreftsykdom [14;15;16;17;18;19;20;21]. PROSEDYREPRINSIPP CINtec PLUS Cytology Kit inneholder et sett reagenser for simultan immuncytokjemisk deteksjon av p16 INK4a - og Ki-67-proteiner i cytologiske prøver tatt fra livmorhalsen. Proteinene detekteres med en cocktail som er klar til bruk, bestående av primære monoklonale antistoffer som inneholder et monoklonalt antistoff mot mus, rettet mot humant p16 INK4a -protein (klone E6H4 ) og et primært, rekombinant antistoff mot kaniner, rettet mot humant Ki-67-protein (klone AC3). Etter cellekondisjonering, hemming av endogen peroksidaseaktivitet og inkubasjon med den primære antistoffcocktailen, bruker analysen to deteksjonssystemer som er klar til bruk og optimert til bruk på livmorhalscytologiprøver: et anti-mus sekundært antistoff av geit kovalent koblet til HQ-haptener (patentbeskyttet hapten) og et anti-hq-hapten, pepperrotperoksidase (HRP)- konjugert tertiært antistoff optimert for deteksjonen av den monoklonale antistoffklonen av mus E6H4 et anti-kanin sekundært antistoff av geit kovalent koblet til NP-haptener (patentbeskyttet hapten) og et anti-np-hapten, alkalisk fosfatase (AP)-konjugert tertiært antistoff optimert for deteksjonen av den monoklonale antistoffklonen av kanin AC3 De kromogene reaksjonene er basert på den HRP-formidlede konverteringen av 3,3 - diaminobensidin-tetrahydroklorid (DAB) og den AP-formidlede konverteringen av Fast Red med naftolfosfat som resulterer i henholdsvis en brun bunnfelling på p16 INK4a -antigenstedet og en rød bunnfelling på Ki-67-antigenstedet. Etter automatisert kontrastfarging og bluing følger en totrinns monteringsprosedyre. Først monteres objektglasset med et vannholdig monteringsmedium. Deretter må objektglassene dekkes med glass ved hjelp av et permanent monteringsmedium. Fargingsresultatene kan evalueres med lysmikroskopiinspeksjon / NO Rev D

2 Figur 2. Deteksjon av humant p16 INK4a -protein MEDFØLGENDE REAGENSER Hvert CINtec PLUS Cytology Kit inneholder nok reagens til 100 tester. Rød bunnfelling Celle Celle HQ Linker DABbunnfelling p16- primærantistoff E6H4 NP Linker Ki-67- primærantistoff AC3 Figur 3. Deteksjon av humant Ki-67-protein HQ NP HQ Målantigen NP Målantigen H2O2 DAB HRP Multimer Naftolfosfat Fast Red AP Multimer CINtec PLUS Primary Antibody Cocktail (p16/ki-67) inneholder en cocktail av monoklonal antistoffklone av mus E6H4 rettet mot humant p16 INK4a -protein og primært rekombinant antistoffklone av kanin AC3 rettet mot humant Ki-67-protein (<5 µg/ml totalt antistoff) i et protein som inneholder buffer med ProClin 300, et konserveringsmiddel. CINtec PLUS Red anti-rabbit NP Linker inneholder NP-merket anti-kanin av geit IgG (<10 µg/ml; NP er et patentbeskyttet hapten som er kovalt festet til antistoffet av geit) i en buffer som inneholder protein med ProClin 300, et konserveringsmiddel. CINtec PLUS Red AP Multimer inneholder et monoklonalt anti-np-merket AP tertiært antistoff fra mus (<20 µg/ml) i en buffer som inneholder protein med ProClin 300, et konserveringsmiddel. CINtec PLUS DAB Peroxidase Inhibitor inneholder hydrogenperoksidløsning (<5 %). CINtec PLUS DAB anti-mouse HQ Linker inneholder HQ-merket anti-mus av geit IgG (<40 μg/ml; HQ er et patentbeskyttet hapten som er kovalt festet til antistoffet av geit) i en buffer som inneholder protein med ProClin 300, et konserveringsmiddel. CINtec PLUS DAB HRP Multimer inneholder et monoklonalt anti-hqmerket HRP tertiært antistoff fra mus (<10 μg/ml) i en buffer som inneholder protein med ProClin 300, et konserveringsmiddel. CINtec PLUS DAB inneholder 3,3'-diaminobensidin-tetrahydroklorid (<1 %) i en patentert stabiliseringsløsning med et patentert konserveringsmiddel. CINtec PLUS DAB H2O2 inneholder hydrogenperoksid (<1 %) i en fosfatbufferløsning. REKONSTITUSJON, BLANDING, FORTYNNING, TITRERING CINtec PLUS Cytology Kit er optimalisert for bruk på VENTANA BenchMark GX, XT og ULTRA automatiserte fargemaskiner for objektglass. Det er ikke nødvendig med rekonstitusjon, fortynning eller titrering av settets reagenser. Avvik fra anbefalte prosedyrer for fiksering og videre behandling av de cervikalt cytologiske prøvene kan gi betydelig variasjon i resultater, og nødvendiggjøre vanlig utførelse av interne kontroller. Du finner mer informasjon om kontroller i avsnittet Kvalitetskontroll. NØDVENDIGE MATERIALER SOM IKKE FØLGER MED Følgende reagenser og materialer er nødvendige for farging, men følger ikke med i CINtec PLUS Cytology Kit. Ikke alle produkter som er oppgitt i pakningsvedlegget er tilgjengelige i alle markeder. Ta kontakt med din lokale representant. 1. Egnede kontroller (valgfritt, se avsnittet Kvalitetskontroll) 2. HematoxylinCounterstain 3. Bluing Reagent 4. Reaction Buffer Concentrate (10X) 5. Cell Conditioning Solutions (CC1 / ULTRA CC1) 6. Cell Conditioning Solutions (CC2 / ULTRA CC2), nødvendig på instrumentet, men ikke i bruk 7. EZ Prep Concentrate (10X), nødvendig på instrumentet, men ikke i bruk 8. SSC Concentrate (10X), nødvendig på instrumentet, men ikke i bruk 9. Liquid Coverslip (LCS/ ULTRA LCS) 10. Denaturert etanol av reagensgrad (renhet 95 %) 11. VENTANA BenchMark GX, XT eller ULTRA automatisert fargemaskin for objektglass 12. SuperFrost PLUS-objektglass for mikroskop (Thermo Fisher Scientific) for tradisjonelle celleprøver anbefales 13. ThinPrep Arcless-objektglass eller ThinPrep -objektglass FOR SPECIAL PROCESSING (Hologic-ordrenr ) 14. BD SurePath PreCoat-objektglass (inkludert i SurePath GYN-settet) 15. CC/Mount vannholdig monteringsmedium (Diagnostic BioSystems P/N: K 002; Sigma-Aldrich P/N: C9368) 16. Valgfri: Tørkeovn som kan opprettholde en temperatur på 60 C ± 5 C 17. Xylen (histologisk kvalitet) 18. Avionisert eller destillert vann 19. Dekkglass og xylenbasert monteringsmedium eller plastfilmdekkglassmetode tilstrekkelig for å dekke cytologiklargjøringer 20. Lysmikroskop 21. Mildt oppvaskmiddel CINtec PLUS Red Naphthol Phosphate inneholder naftolfosfat (<1 %) med ProClin 300, et konserveringsmiddel. CINtec PLUS Fast Red inneholder Fast Red (<1 %) i acetatbuffer med ProClin 300, et konserveringsmiddel / NO Rev D

3 OPPBEVARING Oppbevares ved 2 til 8 C. Skal ikke fryses. Dette reagenssettet kan brukes umiddelbart etter at det er tatt ut av kjøleskapet. For å sikre riktig tilførsel av reagenser og stabiliteten til reagensene skal dispenserlokket settes på igjen etter hver bruk, og dispenserne skal umiddelbart settes i kjøleskapet i stående posisjon. CINtec PLUS Cytology Kit har en utløpsdato. Når reagensene oppbevares riktig, vil de være stabile frem til datoen som er angitt på etiketten. Bruk ikke produktet etter holdbarhetsdatoen for angitt oppbevaringsmetode. Det finnes ikke bestemte tegn som kan vise ustabilitet for dette produktet. Derfor skal det kjøres positive og negative kontroller samtidig med ukjente prøver. Du skal kontakte din lokale representant umiddelbart hvis du oppdager tegn på reagensustabilitet. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER 1. Beregnet for bruk i forbindelse med in vitro-diagnostikk (IVD). 2. Kun til profesjonell bruk. 3. Ikke bruk produktet hvis emballasjen eller noen av komponentene er skadet. Dersom emballasjen kompromitteres eller komponentene skades, informer din lokale representant om dette umiddelbart. 4. Reagensene er optimalt fortynnet, og ytterligere fortynning kan føre til tap av antigenfarging. Brukeren må validere enhver slik endring. 5. ProClin 300 brukes som konserveringsmiddel. Det er klassifisert som irriterende stoff og kan forårsake sensibilisering ved hudkontakt. Ta rimelige forholdsregler ved håndtering. Unngå at reagenser kommer i kontakt med øyne, hud og slimhinner. Bruk verneklær og hansker. I avsnittet Medfølgende reagenser finner du en liste over dispensere som inneholder dette konserveringsmidlet. 6. Materiale som stammer fra mennesker eller dyr, skal håndteres som smittefarlig materiale og deponeres i henhold til korrekt prosedyre. 7. Ta rimelige forholdsregler ved håndtering av reagenser. Unngå at reagenser kommer i kontakt med øyne, hud og slimhinner. Unngå innånding av reagenser. Bruk engangshansker og egnede verneklær ved håndtering av antatte kreftfremkallende eller giftige materialer. Hvis reagenser kommer i kontakt med sensitive områder, må du skylle med rikelige mengder vann. 8. Unngå mikrobiologisk forurensning av reagenser da det kan gi gale resultater. 9. Rådfør deg med lokale og/eller nasjonale myndigheter når det gjelder anbefalte metoder for avfallshåndtering. 10. For ytterligere sikkerhetsinformasjon, se produktets sikkerhetsdatablad og oversikt over symboler og risikotekst på Ved håndtering og avhending av cytologiske prøver, inkludert alle prøver før og etter fiksering, så vel som alle materialer som er utsatt for dem, følg forholdsreglene for sikkerhet for håndtering av potensielt smittefarlig materiale så vel som gjeldende krav til avfallsavhending. PRØVEKLARGJØRING Cytologiske prøver må håndteres riktig for å bevare prøvene for immunocytokjemiske prosedyrer. Alle prøver skal utsettes for standardmetoder for cellebehandling. For å unngå skjulende elementer, som blod og slim, og oppnå en prøve som er tilstrekkelig i henhold til Bethesda-retningslinjene, skal klinikere følge anbefalte teknikker for prøvetaking [22,23]. Følgende metoder for klargjøring av objektglass er egnet til bruk med CINtec PLUS Cytology Kit: ThinPrep (Hologic Inc.)-objektglass klargjort på en ThinPrep 2000 eller 5000 Processor (Hologic Inc.) ved bruk av ThinPrep Arcless-objektglass eller ThinPrep - objektglass FOR SPECIAL PROCESSING (Hologic-ordrenr ) i samsvar med produsentens anbefaling; BD SurePath (BD Diagnostics Tripath)-objektglass klargjort i samsvar med produsentens anbefaling; Manuelt klargjorte objektglass (tradisjonelle celleprøveobjektglass). Det anbefales å kjøre riktige kontroller samtidig med pasientprøver (se avsnittet Kvalitetskontroll for mer informasjon). ThinPrep -prøveklargjøring Cytologisk prøve i PreservCyt -løsning beregnet på immunocytokjemifarging med CINtec PLUS Cytology Kit kan oppbevares mellom 4 C og 30 C og testes innen 6 uker av prøvetaking. ThinPrep Arcless-objektglass eller ThinPrep -objektglass FOR SPECIAL PROCESSING (Hologic-ordrenr ) er nødvendige for immunocytokjemisk farging med CINtec PLUS Cytology Kit på VENTANA Benchmark GX, XT og ULTRA automatiserte fargemaskiner for objektglass. ThinPrep -prøveklargjøring med ThinPrep 2000 Processor ThinPrep (Hologic Inc.)-objektglass klargjøres på en ThinPrep 2000 Processor (Hologic Inc.) i samsvar med produsentens instruksjoner. Etter at ThinPrep 2000 Processor-sekvensen er fullført, sitter det behandlede objektglasset i en ampulle med fikseringsmiddel som inneholder en 95 % etanolløsning av reagensgrad. Vær forsiktig når du fjerner ampullen fra fikservæskebadholderen til ThinPrep 2000 Processor, og overfør det behandlede objektglasset fra ampullen i en objektglassbeholder som inneholder en etanolløsning på 95 % av reagensgrad. Inkuber objektglasset i etanol i minst 15 minutter til maks. 60 minutter. Bytt etanolløsningen i ampullen med fikseringsmiddel og objektglassbeholderen etter hver 20 objektglass er klargjort. Ved fullføring av inkubasjonstiden, fjern objektglasset fra etanolbeholderen og la tørke mens det ligger horisontalt på et flatt underlag i minst 60 minutter. Tørkede objektglass kan lagres ved romtemperatur, beskyttet mot lys, og må farges med CINtec PLUS Cytology Kit innen 3 dager etter klargjøring. ThinPrep -prøveklargjøring med ThinPrep 5000 Processor ThinPrep (Hologic Inc.)-objektglass klargjøres på en ThinPrep 5000 Processor (Hologic Inc.) i samsvar med produsentens instruksjoner. Etter at ThinPrep 5000 Processor-sekvensen er fullført, sitter de behandlede objektglassene i et objektglasstativ som er senket i en 95 % etanolløsning av reagensgrad, som inneholder et fikseringsvæskebad. Fjern forsiktig fikseringsvæskebadet fra ThinPrep 5000 Processor og inkuber objektglassene i ytterligere minst 15 minutter, maks. 60 minutter. Bytt etanolløsningen i ampullen med fikseringsmiddel og objektglassbeholderen etter hver kjøring. Ved fullføring av inkubasjonstiden, fjern objektglassene fra etanolbeholderen og la tørke mens de ligger horisontalt på et flatt underlag i minst 60 minutter. Tørkede objektglass kan lagres ved romtemperatur, beskyttet mot lys, og må farges med CINtec PLUS Cytology Kit innen 3 dager etter klargjøring. Før immunocytokjemisk farging med CINtec PLUS Cytology Kit, fjern den originale objektglassetiketten som brukes av ThinPrep 5000 Processor, og sett på tilsvarende etikett generert av VENTANA BenchMark GX, XT eller BenchMark ULTRA automatisert fargemaskin for objektglass. BD SurePath -prøveklargjøring Cytologisk prøve i SurePath -konserveringsmiddel beregnet på immunocytokjemifarging med CINtec PLUS Cytology Kit kan lagres i opptil 4 uker ved romtemperatur (mellom 15 C og 30 C), eller i 6 måneder i kjøleskap mellom 2 C og 10 C. BD SurePath -prøveklargjøring umiddelbart etter behandling av et Pap-objektglass Når en anriket cellepellet er laget for klargjøring av et objektglass for Pap-farging, kan det brukes umiddelbart for klargjøring av et nytt objektglass som skal farges med CINtec PLUS Cytology Kit. Følg produsentens anbefaling for bruk av "Klargjøring av objektglass" [alternativ 2] for GYN-prøver på PrepStain -instrumentet. Det resuspenderte volumet må endres til 0 ml i menyalternativet "Change Sample/Stain Parameters" (Skift prøve-/fargeparametre). BD SurePath -prøveklargjøring fra en konservert cellepellet Anrikede cellepellets kan konserveres ved å legge til ca. 2 ml av SurePath konserveringsmiddel og sette deksel på prøveglassene for lagring (se produsentens instruksjoner for mer informasjon). Fra prøvetakingsdatoen kan cellepellets som er resuspendert i konserveringsvæske lagres i opptil 4 uker ved romtemperatur (mellom 15 C og 30 C), eller i 6 måneder i kjøleskap ved 2 C til 10 C. For å behandle et objektglass for CINtec PLUS Cytology Kit, må du først romtemperere prøven i 60 minutter. Start med det andre sentrifugeringstrinnet i GYN-anrikingsprosessen og fortsett gjennom resten av forhåndsprosesseringstrinnene som skissert i produsentens instruksjon for reprosessering av konserverte cellepellets. Følg produsentens anbefaling for bruk av "Klargjøring av objektglass" [alternativ 2] for GYN-prøver på PrepStain -instrumentet. For alle klargjøringsalternativene som er oppgitt over, fjern objektglasstativet fra PrepStain instrumentet når prøveoverføringstrinnet er fullført. Vend på stativet for å helle ut væsken. Pipetter 2 ml av en 95 % etanolløsning av reagensgrad til hvert bunnfellingskammer og hell umiddelbart. Skyll med 2 ml av en 95 % etanolløsning av reagensgrad på nytt og inkuber i 10 minutter. Hell for andre gang ved å invertere stativet. Fjern bunnfellingskamrene fra objektglassene og la objektglassene tørke mens de ligger horisontalt på et flatt underlag i / NO Rev D

4 minst 60 minutter. Tørkede objektglass kan lagres ved romtemperatur, beskyttet mot lys, og må farges med CINtec PLUS Cytology Kit innen 3 dager etter klargjøring. Konvensjonell klargjøring av celleprøver Tradisjonelle celleprøver skal fikseres med cytologisk sprayfikseringsreagens som inneholder polyetylenglykol (f.eks. Safetex Cytology Fixative, Andwin Scientific) umiddelbart etter prøvetaking. Sprayfikserte, tradisjonelle celleprøveobjektglass kan lagres ved romtemperatur, beskyttet mot lys, og må farges med CINtec PLUS Cytology Kit innen 7 dager etter klargjøring. Ingen videre forhåndsprosessering kreves før lasting av objektglass på VENTANABenchMark GX, XT og ULTRA automatiserte fargemaskiner. FARGINGSPROSEDYRE CINtec PLUS Cytology Kit er utviklet til bruk på VENTANA BenchMark GX, XT og ULTRA automatiserte fargemaskiner for objektglass i kombinasjon med VENTANAtilleggsreagenser og tilbehør. Se tabell 1, 2 og 3 for anbefalte fargingsprotokoller. CINtec PLUS Cytology Kit er optimert med parametrene som indiseres i tabell 1, 2 og 3. Likevel må brukeren validere resultatene som oppnås med dette settet. Parametrene for de automatiserte protokollene kan vises, skrives ut og redigeres i henhold til instruksjonene i brukerhåndbøkene for hvert instrument. Tabell 1. Anbefalt fargingsprotokoll for ThinPrep -, SurePath - og tradisjonelle celleprøveobjektglass på VENTANA BenchMark GX automatisert fargemaskin for objektglass ved bruk av Hematoxylin (P/N ) og Bluing Reagent (P/N ). Tabell 2. Anbefalt fargingsprotokoll for ThinPrep -, SurePath - og tradisjonelle celleprøveobjektglass på VENTANA BenchMark XT automatisert fargemaskin for objektglass ved bruk av Hematoxylin (P/N ) og Bluing Reagent (P/N ). Fargingsprosedyre Tilgjengelige valg XT CINtec PLUS Cytology Prøveklargjøringstype ThinPrep SurePath Tradisjonell ThinPrep Valgt Ikke valgt Ikke valgt SurePath Ikke valgt Valgt Ikke valgt Andre Ikke valgt Ikke valgt Valgt Cellekondisjoneringsvalg Ikke tilgjengelig Ikke tilgjengelig 16 min Antistoffink.tid 16 min 20 min 16 min HQ Linker-ink.tid 12 min 16 min 12 min HRP Multimer-inc.tid 8 min 8 min 8 min NP Linker-ink.tid 8 min 16 min 8 min AP Multimer-ink.tid 8 min 8 min 8 min Kontrastfarge Hematoxylin 4 min Hematoxylin 4 min Hematoxylin 4 min Fargingsprosedyre GX CINtec PLUS Cytology Kontrastfarge Bluing 4 min Bluing 4 min Bluing 4 min Prøveklargjøringstype Tilgjengelige valg ThinPrep SurePath Tradisjonell ThinPrep Valgt Ikke valgt Ikke valgt SurePath Ikke valgt Valgt Ikke valgt Andre Ikke valgt Ikke valgt Valgt Cellekondisjoneringsvalg Ikke tilgjengelig Ikke tilgjengelig 16 min Antistoffink.tid 16 min 20 min 16 min HQ Linker-ink.tid 12 min 16 min 12 min HRP Multimer-inc.tid 6 min 8 min 8 min NP Linker-ink.tid 8 min 16 min 8 min AP Multimer-ink.tid 8 min 8 min 8 min Kontrastfarge Hematoxylin 4 min Hematoxylin 4 min Hematoxylin 4 min Kontrastfarge Bluing 4 min Bluing 4 min Bluing 4 min Tabell 3. Anbefalt fargingsprotokoll for ThinPrep -, SurePath - og tradisjonelle celleprøveobjektglass på VENTANA BenchMark ULTRA automatisert fargemaskin for objektglass ved bruk av Hematoxylin (P/N ) og Bluing Reagent (P/N ). Fargingsprosedyre Tilgjengelige valg U CINtec PLUS Cytology Prøveklargjøringstype ThinPrep SurePath Tradisjonell ThinPrep Valgt Ikke valgt Ikke valgt SurePath Ikke valgt Valgt Ikke valgt Andre Ikke valgt Ikke valgt Valgt Cellekondisjoneringsvalg Ikke tilgjengelig Ikke tilgjengelig 16 min Antistoffink.tid 16 min 16 min 16 min HQ Linker-ink.tid 12 min 16 min 12 min HRP Multimer-inc.tid 8 min 8 min 8 min NP Linker-ink.tid 8 min 16 min 8 min AP Multimer-ink.tid 8 min 8 min 8 min Kontrastfarge Hematoxylin 4 min Hematoxylin 4 min Hematoxylin 4 min Kontrastfarge Bluing 4 min Bluing 4 min Bluing 4 min / NO Rev D

5 Drift av BenchMark GX, XT og ULTRA automatisert fargemaskin for objektglass 1. Sett på objektglassets strekkodeetikett, som tilsvarer protokollen som skal utføres. 2. Legg inn CINtec PLUS Cytology Kit-dispenserne og nødvendige tilleggsreagenser i reagensbrettet, og plasser reagensbrettet på den automatiserte fargemaskinen for objektglass. 3. Kontroller bulkvæske og fjern avfall. 4. Last objektglassene på den automatiserte fargemaskinen. 5. Start fargekjøringen. 6. Når kjøringen er ferdig, må du fjerne objektglassene fra den automatiserte fargemaskinen. PROSEDYRE ETTER BEHANDLING MONTERING OG BRUK AV DEKKMATERIALE For å opprettholde optimal sensitivitet og forhindre falming av kromogener, kreves en totrinns monteringsprosedyre. Fjern objektglassene fra VENTANA BenchMark GX, XT eller ULTRA automatisert fargemaskin for objektglass og rist forsiktig, og skyll objektglassene med vann fra kranen, avionisert eller destillert vann og vaskemiddel til Liquid Coverslip er fjernet helt fra objektglassene. MERK: Vær forsiktig så vannet ikke treffer objektglassene direkte. La vannet renne med minimal kraft. Objektglassene vil bli montert etter en totrinnsprotokoll, og følgende trinn må utføres i rekkefølge: 1. Vannholdig montering: Inkuber objektglassene i destillert eller avionisert vann i minst 1 min. Objektglass som ikke dekkes med dekkmateriale skal bli liggende i avionisert eller destillert vann ved bruk av CC/Mount vannholdig monteringsmedium til de andre objektglassene. Fjern enkeltobjektglass fra destillert eller avionisert vann og tørk forsiktig av baksiden av objektglasset med tørkepapir for å fjerne overflødig vann. Ikke tapp eller tørk av vann foran på objektglasset (prøveside). Hold objektglasset så vidt i vinkel og påfør 4 6 dråper av CC/Mount vannholdig monteringsmedium (Diagnostic BioSystems P/N: K 002; Sigma- Aldrich P/N: C9368) per ThinPrep - eller SurePath -objektglass og 8 dråper per tradisjonelle celleprøveobjektglass. Unngå at det dannes luftbobler. For å forhindre bobledannelse kan den første dråpen kastes på et tørkepapir før du påfører CC/Mount på prøveklargjøringsområdet på objektglasset. Vipp objektglasset forsiktig og roter det for å danne et tynt lag monteringsmedium og dekke prøven helt (ikke påfør glass- eller filmdekke ennå); sjekk fordelingen av monteringsmediet på objektglasset ved visuell inspeksjon. Rengjør overflødig CC/Mount vannholdig monteringsmedium fra baksiden og kantene på objektglasset. Bruk våtserviett om nødvendig. Før tørking, legg objektglass horisontalt: a) Inkuber ThinPrep - eller SurePath -objektglass ved C i 1 time, eller natten over ved romtemperatur. b) Inkuber tradisjonelle celleprøver ved 37 C i 4 timer eller ved 60 C i 1 time, eller natten over ved romtemperatur. 2. Dekke av glass eller film: Etter at CC/Mount vannholdig monteringsmedium har tørket helt, må objektglassene romtempereres om nødvendig. Inkuber objektglassene i xylen i minst 1 minutt til maks. 20 minutter. Dekk deretter over dekkglassene med et xylenbasert monteringsmedium eller xylenbasert filmdekkmetode. MERK: Objektglass må ikke dehydreres ved stigende alkoholserie før de dekkes med glass eller film. La det xylenbaserte monteringsmediet tørke ved romtemperatur. MERK: For å minimere falming, beskytt objektglassene fra lys og oppbevar dem i romtemperatur. KVALITETSKONTROLL Avvik fra anbefalte prosedyrer for fiksering og videre behandling av livmorhalscytologiprøvene kan gi betydelig variasjon i resultater. Hvis produktet svikter på grunn av problemer med håndtering eller ustabilitet, resulterer det ikke i tydelige tegn. Derfor skal egnede kontroller kjøres samtidig med pasientprøver. Positiv kontroll Prøver som behandles på samme måte som pasientprøven(e) skal brukes som positive kontroller. Positive kontroller indikerer riktig klargjorte prøver og riktige fargingsteknikker. Én positiv kontroll skal inkluderes i hver fargekjøring. Kjente positive kontroller skal bare brukes ved overvåking av korrekt utførelse av behandlede vev og testreagenser, og ikke som hjelp til å bestemme spesifikk diagnostisering av pasientprøver. Hvis de positive vevskontrollene ikke viser egnet positiv farging, bør resultater med testprøvene anses som ugyldige. Negativ kontroll En mengde forskjellige celletyper som finnes i representative livmorhalscytologiprøver og som er kjent som negative for uttrykket av p16 INK4a - og Ki-67-antigenene (f.eks. overflatiske celler) kan fungere som intern negativ kontroll for å evaluere bakgrunnsfarging. Analysebekreftelse Brukeren skal verifisere ytelsen av CINtec PLUS Cytology Kit på positive og negative prøver med kjente ytelsesegenskaper før førstegangsbruk i en diagnostisk prosedyre. FARGINGSTOLKNING / FORVENTEDE RESULTATER CINtec PLUS Cytology Kit-fargeprosedyrene gir to unike fargede reaksjonsprodukter: et brunt bunnfall på p16 INK4a -antigenstedene, og et rødt bunnfall på Ki-67-antigenstedene. Brun farging av celler (cytoplasma og/eller kjerner) indikerer p16 INK4a -overuttrykk. Rød farging av celler (kjerner) indiserer uttrykk for Ki-67. Celler farget for begge antigener viser brun cytoplasmisk farging med typisk uttalte røde kjerner. En kvalifisert patolog/cytoteknolog med erfaring i immuncytokjemiske prosedyrer og opplært i tolkningen av objektglass farget med CINtec PLUS Cytology Kit må evaluere eventuelle kontroller før resultatene tolkes. Tolkning av testresultatene kan kun gjøres av sertifisert personale i sammenheng med pasientens kliniske historie og tilleggsdiagnostiske tester som er utført. For tolkningen av cervikale cytologiobjektglass farget med CINtec PLUS Cytology Kit skal objektglass evalueres i forhold til forekomsten av cervikale epitelceller som viser både brun cytoplasmafarging og rød kjernefarging som tyder på samtidig p16 INK4a - og Ki-67- uttrykk. I tillegg, i likhet med rapportering av Pap-cytologiresultater, bør prøver evalueres for prøvens tilstrekkelighet i henhold til Bethesda-retningslinjene fra 2001 (eller TBS) [23] ved rapportering av CINtec PLUS Cytology-testresultatet. Positivt testresultat Forekomsten av én eller flere livmorhalsepitelceller med medlokalisering av brun cytoplasmisk immunfarging og rød kjerneimmunfarging i samme celle anses som et positivt CINtec PLUS Cytology-testresultat. Negativt testresultat Hvis ingen livmorhalsepitelceller viser samtidig brun cytoplasmisk immunfarging og rød kjerneimmunfarging, vurderes CINtec PLUS Cytology-testresultatet som negativt. Forekomsten av livmorhalsepitelceller som viser immunoreaktivitet bare for én, men ikke for begge markører (som bare brun farging for kun p16 INK4a eller bare rød farging for Ki-67) anses ikke for å være positivt testresultat for CINtec PLUS Cytology Kit. BEGRENSNINGER 1. Kun til profesjonell bruk. Spesiell opplæring kreves for utførelsen av immuncytokjemiske prosedyrer. 2. Evaluering av mikroskopobjektglass farget med CINtec PLUS Cytology Kit bør utføres bare med en sertifisert fagperson som er opplært til å tolke disse testresultatene. 3. Den kliniske tolkningen av en positiv eller negativ farging skal evalueres i sammenheng av klinisk presentasjon og cytologiske kriterier. 4. Tolkningen av fargingsresultater med CINtec PLUS Cytology Kit beror på intensiteten og kvaliteten av hematoksylinkontrastfargingen. Avvik fra de anbefalte reagensene og inkubasjonstidene krever validering av kunden da overflødig eller ufullstendig kontrastfarging kan forstyrre med riktig tolkning av resultatene. 5. Tradisjonelle celleprøveobjektglass beregnet på bruk til farging med CINtec PLUS Cytology Kit skal klargjøres ved å bruke SuperFrost PLUS (Thermo Fisher / NO Rev D

6 Scientific)-objektglass for mikroskop og Safetex Cytology Fixative (Andwin Scientific), en cytologisk sprayfikseringsreagens som inneholder polyetylenglykol. Avvik fra denne anbefalingen krever kundens validering. 6. Bruk av prøver fra ThinPrep 3000 Processor er ikke anbefalt for klargjøring av ThinPrep -prøver, siden sprayfikseringsprosedyren som utføres av instrumentet kan føre til betydelig celletap når de klargjorte objektglassene farges med CINtec PLUS Cytology Kit. 7. ThinPrep Arcless-objektglass eller ThinPrep -objektglass FOR SPECIAL PROCESSING (Hologic-ordrenr ) er nødvendige for klargjøring av ThinPrep -prøver for immunocytokjemisk farging med CINtec PLUS Cytology Kit på VENTANA BenchMark GX, XT og ULTRA automatiserte fargemaskiner for objektglass. ThinPrep -mikroskopobjektglass med trykt screeningområde kan føre til inkonsekvente fargeresultater. 8. Produsenten gir disse antistoffene/reagensene ved optimal fortynning til bruk i henhold til instruksjonene som er gitt heri, for immuncytokjemitesting på klargjorte, væskebaserte cytologiobjektglass (LBC) eller tradisjonelle celleprøveobjektglass. Ethvert avvik fra anbefalte testprosedyrer kan gjøre erklærte forventede resultater ugyldige. Behørige kontroller bør benyttes og dokumenteres. Brukere som avviker fra de anbefalte testprosedyrene, må i disse tilfellene selv bære ansvaret for tolkningen av pasientresultater. FEILSØKING 1. Hvis det ikke kommer væske fra en reagensdispenser, kontroller om det er fremmedlegemer eller partikler i primingskammeret eller menisken. Hvis dispenseren er blokkert, må du ikke bruke den. Kontakt den lokale representanten. Ellers kan du prime dispenseren på nytt ved å holde den over en avfallsbeholder, fjerne dysehetten og presse på toppen av dispenseren. 2. Hvis den positive kontrollen viser svakere farging enn forventet, sjekk om den valgte protokollen stemmer med den spesifikke prøvetypen, for eksempel krever SurePath -cytologiklargjøringer lengre cellekondisjoneringstid enn ThinPrep - objektglass eller tradisjonelle celleprøveklargjøringer. Sjekk også for å sikre at alle dispensersylindre ikke inneholder rester. 3. Hvis den positive kontrollen er negativ, skal den kontrolleres for å sikre at objektglasset har korrekt strekkodeetikett. Hvis objektglasset er riktig merket, sjekk også for å sikre at alle dispensersylindre er fri for rester. 4. Hvis høy bakgrunn observeres, reduseres inkubasjonstider i fargingsprotokollene. Sjekk også for å sikre at bulkløsningen av reaksjonsbuffer ble riktig formulert. 5. Hvis svak farging observeres, økes inkubasjonstider i fargingsprotokollene. På et tradisjonelt celleprøveobjektglass kan også cellekondisjoneringens inkubasjonstid justeres. 6. Den røde bunnfellingen som brukes til å indikere Ki-67 proteinuttrykk er alkoholløselig. Hvis Ki67-farging er svak eller ikke til stede, sjekk at alkoholholdig hematoksylin ikke ble brukt og at anbefalt prosedyre etter behandling ble fulgt i henhold til instruksjonene i Prosedyre etter behandling montering og bruk av dekkmateriale. 7. Hvis prøven vaskes av objektglasset, skal objektglass kontrolleres for å sikre at prøven ble riktig klargjort i henhold til avsnittet Prøveklargjøring og at anbefalt type mikroskopobjektglass ble brukt. 8. Du finner korrigerende tiltak i avsnittet Fargingsprosedyre, i brukerhåndboken for instrumentet eller ved å kontakte din lokale representant. YTELSESEGENSKAPER Ytelsen til CINtec PLUS Cytology Kit ble evaluert ved bruk av analytisk spesifisitet, reproduserbarhet og samsvarsstudier, som beskrevet i følgende avsnitt. Analytisk spesifisitet Analytisk spesifisitet av CINtec PLUS Cytology Kit ble evaluert ved å hemme primærantistoffklonene E6H4 og AC3 med tilsvarende epitopspesifikke peptider. Væskebaserte cytologiobjektglass (LBC) fra en cellelinje som overuttrykte begge antigener ble brukt for å evaluere effekten av spesifikk peptidhemming på fargingsytelsen til begge antistoffer. Binding av antistoffene til deres epitopspesifikke peptider førte til hemming av antistoffene som ble påvist ved å redusere fargingen sammenlignet med en kontroll uten peptider. I tillegg ble ingen av antistoffene hemmet av det andre antistoffets epitopspesifikke peptid, hvilket tyder på at uspesifikke peptider ikke hemmer disse antistoffene. Reproduserbarhet Reproduserbarhetsstudier for CINtec PLUS Cytology Kit ble utført for å demonstrere: Reproduserbarhet mellom partier for CINtec PLUS Cytology Kit Reproduserbarhet innen og mellom kjøringer på VENTANA BenchMark GX, XT og ULTRA automatiserte fargemaskiner for objektglass Reproduserbarhet innen plattformer på VENTANA BenchMark GX, XT og ULTRA automatiserte fargemaskiner for objektglass Reproduserbarhet mellom plattformer mellom VENTANA BenchMark GX, XT og ULTRA automatiserte fargemaskiner for objektglass Alle studiene oppfylte forhåndsbestemte godkjenningskriterier. Samsvarsstudier Ytelsen til CINtec PLUS Cytology Kit for bruk på VENTANA BenchMark GX, XT og ULTRA automatiserte fargemaskiner for objektglass ble evaluert ved å sammenligne med Roche mtm CINtec PLUS Kit (predikatenhet, Roche mtm laboratories AG, Mannheim) som tidligere har demonstrert høy følsomhet og spesifisitet for forekomst av forestående og eksisterende kreftsykdom i livmorhalscytologiprøver med hensyn til forekomsten av individuelle epitelceller fra livmorhalsen som viste et positivt dobbelt fargeresultat for p16 INK4a og Ki-67 [14;15;16;17;18;19;20;21]. Samsvarsstudier er utført ved bruk av pasientprøver fra den tiltenkte populasjonen med et Pap-cytologiresultat med NILM (negative for intraepitellesjoner eller ondartethet), ASC- US, LSIL og HSIL for hver av de individuelle klargjøringsmetodene for livmorhalscytologi: ThinPrep (Hologic Inc.), BD SurePath (BD Diagnostics Tripath) og tradisjonelle celleprøveobjektglass. For LBC-prøver ble to objektglass klargjort fra hver pasientprøve. For tradisjonelle celleprøver ble to objektglass laget fra samme pasient ved samme besøk, og prøvematerialet delt mellom de to objektglassene ("delt prøve"-teknikk). Ett objektglass ble testet ved bruk av CINtec PLUS Cytology Kit på VENTANA BenchMark automatisert fargemaskin, og ett ble farget med referanseenheten. Avlesningsalgoritme for LBC-prøver: Hvert objektglass ble lest av to kvalifiserte lesere. Hvis de var enige om resultatet, ble dette regnet som endelig resultat for dette objektglasset. Hvis de var uenige i et resultat, utførte en tredje leser en adjudiseringsavlesning, og majoritetsresultatet ble det endelige resultatet for dette objektglasset. Avlesningsalgoritme for tradisjonelle celleprøveobjektglass: Hvert objektglass ble lest av to kvalifiserte lesere. Hvis begge leserne scoret objektglasset som positivt, var det endelige resultatet for dette objektglasset positivt. Hvis de var uenige om resultatet, ble objektglasset vurdert av tre lesere som et konsensuspanel, og resultatet av dette ble det endelige resultatet for objektglasset. Hvis begge leserne scoret objektglasset som negativt, ble objektglasset lest av en tredje leser for å bekrefte det negative resultatet. Hvis den tredje leseren bekreftet det negative resultatet, var objektglassets endelige resultat negativt. Hvis den tredje leseren scoret objektglasset som positivt, gikk objektglasset til et konsensuspanel for vurdering, og resultatet fra dette ble objektglassets endelige resultat. Overensstemmelsen av testresultater rapporteres som positiv prosentoverensstemmelse (PPA) og negativ prosentoverensstemmelse (NPA) mellom CINtec PLUS Cytology Kit for bruk på VENTANA BenchMark automatisert fargemaskin og predikatenheten. Tabell 4. Overensstemmelse av testresultater mellom CINtec PLUS Cytology Kit og predikatenheten på ThinPrep -klargjøringer av objektglass med livmorhalscytologi. CINtec PLUS Cytology Kit (n) Predikatenhet (N) Total PPA (n/n) (95 % konfidensintervall) = 140/157 x 100 % = 89,2% ((83,3-93,1%) NPA (n/n) (95 % konfidensintervall) = 147/172 x 100 % = 85,5 % (79,4 90,0 %) / NO Rev D

7 Tabell 5. Samsvarende testresultater mellom CINtec PLUS Cytology Kit og referanseenheten for SurePath -klargjorte cervikale cytologiobjektglass. CINtec PLUS Cytology Kit (n) Predikatenhet (N) Total PPA (n/n) (95 % konfidensintervall) = 56/65 x 100 % = 86,2 % ((75,7 92,5 %) NPA (n/n) (95 % konfidensintervall) = 108/111 x 100 % = 97,3 % (92,4 99,1 %) Tabell 6. Samsvarende testresultater mellom CINtec PLUS Cytology Kit og referanseenheten for cervikale cytologiobjektglass for tradisjonelle celleprøver. CINtec PLUS Cytology Kit (n) Predikatenhet (N) Total PPA (n/n) (95 % konfidensintervall) = 98/118 x 100 % = 83,1% (75,3-88,8%) NPA (n/n) (95 % konfidensintervall) = 72/89 x 100 % = 80,9% (71,5-87,7%) REFERANSER 1. Wentzensen N, von Knebel Doeberitz M. Biomarkers in cervical cancer screening. Dis Markers. 2007;23: Scholzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown. J Cell Physiol. 2000;182: Klaes R, Friedrich T, Spitkovsky D, et al. Overexpression of p16 INK4a as a specific marker for dysplasia and neoplastic epithelial cells of the cervix uteri. Int J Cancer 2001;92: Sano T, Oyama T, Kashiwabara K, et al. Expression status of p16 protein is associated with human papillomavirus oncogenic potential in cervical and genital lesions. Am J Pathol. 1998;153: Cuschieri K, Wentzensen N. Human papillomavirus mrna and p16 detection as biomarkers for the improved diagnosis of cervical neoplasia. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2008;17: Bergeron C, Ordi J, Schmidt D, et al. Conjunctive p16 INK4a testing significantly increases accuracy in diagnosing high-grade cervical intraepithelial neoplasia. Am J Clin Pathol. 2010;133: Del Pino M, Garcia S, Fusté V, et al. Value of p16 INK4a as a marker of progression/ regression in cervical intraepithelial neoplasia grade 1. Am J Obstet Gynecol. 2009; 201(5): Ordi J, Garcia S, del Pino M, et al. p16 INK4a immunostaining identifies occult CIN lesions in HPV-positive women. Int J Gynecol Pathol. 2008;28: Wang SS, Trunk M, Schiffman M, et al. Validation of p16 INK4a as a marker of oncogenic human papillomavirus infection in cervical biopsies from a populationbased cohort in Costa Rica. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2004;13: Galgano MT, Castle PE, Atkins KA, et al. Using biomarkers as objective standards in the diagnosis of cervical biopsies. Am J Surg Pathol. 2010;8: Carozzi F, Confortini M, Dalla Palma P, et al. Use of p16 INK4a over-expression to increase the specificity of human papillomavirus testing: a nested substudy of the NTCC randomised controlled trial. Lancet Oncol. 2008;9: Denton K, Bergeron C, Klement P, et al. The sensitivity and specificity of p16 INK4a Cytology versus HPV Testing for Detecting High-Grade Cervical Disease in the Triage of ASC-US and LSIL Pap Cytology Results. Am J Clin Pathol. 2010;134: Carozzi F, Gillio-Tos A, Confortini M, et al. Risk of high-grade cervical intraepithelial neoplasia during follow-up in HPV-positive women according to baseline p16- INK4a results: a prospective analysis of a nested substudy of the NTCC randomised controlled trial. Lancet Oncol. 2013;14(2): Ikenberg H, Bergeron C, Schmidt D, et al., PALMS study group (2013). Screening for Cervical Cancer Precursors with p16/ki-67 Dual-stained Cytology: Results of the PALMS Study. J Natl Cancer Inst. 2013;105(20): Schmidt D, Bergeron C, Denton KJ, et al. p16/ki-67 Dual-stain cytology in the triage of ASCUS and LSIL Papanicolaou cytology: Results from the European Equivocal or Mildly Abnormal Pap Cytology Study (EEMAPS). Cancer Cytopathol. 2011;119(3): Petry KU, Schmidt D, Scherbring S, et al. Triaging Pap cytology negative, HPV positive cervical cancer screening results with p16/ki-67 Dual-stained cytology. Gynecol Oncol. 2011;121(3): Ravarino A, Nemolato S, Macciocu E, et al. CINtec PLUS immunocytochemistry as a tool for the cytologic diagnosis of glandular lesions of the cervix uteri. Am J Clin Pathol. 2012;138(5): Singh M, Mockler D, Akalin A, et al. Immunocytochemical colocalization of p16( INK4a ) and Ki-67 predicts CIN2/3 and AIS/adenocarcinoma. Cancer Cytopathol. 2012;120(1): Waldstrøm M, Christensen RK, Ornskov D. Evaluation of p16 INK4a /Ki-67 dual stain in comparison with an mrna human papillomavirus test on liquid-based cytology samples with low-grade squamous intraepithelial lesion. Cancer Cytopathol. 2013;121(3): Wentzensen N, Schwartz L, Zuna RE, et al. Performance of p16/ki-67 immunostaining to detect cervical cancer precursors in a colposcopy referral population. Clin Cancer Res. 2012;18(15): Killeen JL, Dye T, Grace C, et al. Improved Abnormal Pap Smear Triage Using Cervical Cancer Biomarkers. J Low Genit Tract Dis Jun 11. [Epub ahead of print] 22. Birdsong G., Husain M., Faison T, et al. Cervicovaginal Cytology Based on the Papanicolaou Technique; Approved Guideline- Third Edition. CLSI document GP15- A3. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; Solomon D, Davey D, Kurman R, et al. The 2001 Bethesda system. Terminology for reporting results of cervical cytology. JAMA. 2002;287: OPPHAVSRETT BENCHMARK, CINtec, VENTANA og VENTANA-logoen er varemerker tilhørende Roche. Alle andre varemerker tilhører sine respektive eiere Ventana Medical Systems, Inc. KONTAKTINFORMASJON Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D Mannheim Germany / NO Rev D