iview DAB Detection Kit

iview DAB Detection Kit 760-091 05266157001 Figur 1 illustrerer den indirekte deteksjonsmetoden. DAB Precipitate + Copper H 2O 2 DAB 250 BRUKSOMRÅDE Ventana Medical Systems' (Ventana) iview DAB Detection Kit er et indirekte biotinstreptavidin-system for å påvise mus-igg, mus-igm og primærantistoffer fra kanin. Settet er beregnet på laboratoriebruk for å identifisere mål ved bruk av immunhistokjemi (IHC) i formalinfikserte, parafininnstøpte og frosne vevsnitt på BenchMark- og BenchMark XT-instrumenter ved bruk av lysmikroskopi. Dette produktet skal tolkes av en kvalifisert patolog i forbindelse med histologisk undersøkelse, relevant klinisk informasjon og egnede kontroller. Dette produktet er beregnet på in vitro-diagnostisk bruk (IVD). SAMMENDRAG OG FORKLARING Immunhistokjemi (IHC) er en teknikk som brukes i laboratorier til diagnostiske formål. IHC bruker spesifikke primærantistoffer for å lokalisere og binde antigener i fikserte eller frosne vevsnitt. Bindingen av antistoffet til antigenet visualiseres med en indirekte deteksjonsmetode. De vanligste teknikkene for indirekte metoder bruker et biotinylert sekundærantistoff som er rettet mot artene primærantistoff og et enzym med et kromogensystem med tilsvarende substrat. Denne kombinasjonen fører til en farget utfelling på stedet for den spesifikke antistoffbindingen. iview DAB Detection Kit bruker en indirekte metode for å visualisere spesifikke antistoffer bundet til antigener ved å avsette en brunfarget utfelling. PRINSIPPENE FOR PROSEDYREN iview DAB Detection Kit påviser spesifikke mus-igg, IgM og kanin IgG-antistoffer bundet til et antigen i parafininnstøpte og frosne vevsnitt. Det spesifikke antistoffet lokaliseres ved hjelp av et biotinkonjugert sekundærantistoff. Etter dette trinnet tilsettes et Streptavidin- HRP (pepperrotperoksidase) enzymkonjugat som bindes til biotinet som er til stede på sekundærantistoffet. Komplekset visualiseres deretter med hydrogenperoksidsubstrat og 3, 3 -diaminobenzidintetrahydroklorid (DAB) kromogen, som produserer en brun utfelling som lett kan observeres med lysmikroskopi. Fargingsprotokollen består av flere trinn hvor reagensene inkuberes i forhåndsbestemte tidsrom ved spesifiserte temperaturer. På slutten av hvert innkuberingstrinn vasker BenchMark- og BenchMark XT-instrumentet snittene for å fjerne ubundet materiale og setter på en flytende dekkløsning som minimerer fordampning av vannholdige reagenser fra objektglasset. 1 Resultater tolkes med lysmikroskopi og hjelper i differensialdiagnostisering av patofysiologiske prosesser, som kan være assosiert med et bestemt antigen, men ikke nødvendigvis. For mer detaljert informasjon om betjening av instrumentet, se den aktuelle brukerhåndboken. Biotinylated Secondary Antibody Tissue Primary Antibody Figur 1. iview DAB Detection-reaksjon Target Antigen iview DAB Detection Kit Streptavidin HRP (SA-HRP) MATERIALER OG METODER Medfølgende reagenser iview DAB Detection Kit inneholder tilstrekkelig reagens til 250 tester. Én 25 ml dispenser iview Inhibitor inneholder 3 % hydrogenperoksidløsning. Én 25 ml dispenser iview Biotinylated Ig Secondary Antibody inneholder affinitetsrenset biotinylert geit-anti-mus-igg og IgM, (<200 μg/ml) og biotinylert geit-anti-kanin-igg (<200 μg/ml) i fosfatbuffer med ProClin 300, et konserveringsmiddel. Én 25 ml dispenser iview SA-HRP inneholder en konjugert streptavidinpepperrotperoksidaseløsning (<300 μg/ml) med proteinstabilisator og ProClin 300, et konserveringsmiddel. Én 25 ml dispenser iview DAB Substrate inneholder diaminobenzidin (2 g/l) i en egen stabiliseringsløsning med eget konserveringsmiddel. Én 25 ml dispenser iview H2O2 inneholder 0,04 % til 0,08 % hydrogenperoksid i en fosfatbufferløsning. Én 25 ml dispenser iview Copper inneholder kobbersulfat (5 g/l) i en acetatbuffer med eget konserveringsmiddel. Rekonstituering, blanding, fortynning, titrering Deteksjonssettet er optimert for bruk på et BenchMark- og BenchMark XT-instrument. Det er ikke nødvendig med noen rekonstituering, blanding, fortynning eller titrering med settreagenser. Ytterligere fortynning kan forårsake tap av antigenfarging. Brukeren må validere alle slike endringer. Forskjeller i vevprosessering og prosedyrer før undersøkelsen i laboratoriet kan frembringe betydelig variabilitet i resultater. For mer informasjon om kontroller, se avsnittet om kvalitetskontrollprosedyrer. Nødvendige materialer og reagenser som ikke medfølger Følgende reagenser og materialer vil kunne være påkrevd til farging, men følger ikke med deteksjonssettet: 1. Primærantistoff 2. Negativ reagenskontroll 3. Positive og negative vevkontroller (se pakningsvedleggene for antistoffene om hvilke typer som anbefales) 2012-03-29 1 / 5 14910NO Rev F

4. Endogenous Biotin Blocking Kit (etter behov for spesifikke bruksområder) 5. Amplification Kit (etter behov for spesifikke bruksområder) 6. Protease 1 (etter behov for spesifikke bruksområder) 7. Protease 2 (etter behov for spesifikke bruksområder) 8. Protease 3 (etter behov for spesifikke bruksområder) 9. Hematoxylin Counterstain (etter behov for spesifikke bruksområder) 10. Hematoxylin II Counterstain (etter behov for spesifikke bruksområder) 11. Bluing Reagent (etter behov for spesifikke bruksområder) 12. Reaction Buffer-konsentrat (10X) 13. Cell Conditioning Solution 1 (CC1) (etter behov for spesifikke bruksområder) 14. Cell Conditioning Solution 2 (CC2) (etter behov for spesifikke bruksområder) 15. Antibody Diluent (etter behov for spesifikke bruksområder) 16. EZ Prep Concentrate (10X)-løsning 17. Etanol eller reagensalkohol (histologisk kvalitet) 18. Liquid Coverslip (High Temperature) 19. BenchMark- eller BenchMark XT-instrument 20. Objektglass for mikroskop, positivt ladde 21. Tørkeovn som kan opprettholde en temperatur på 60 C ± 5 C 22. Strekkodeetiketter (som passer til negativ reagenskontroll og primærantistoffet som testes) 23. Xylen (histologisk kvalitet) 24. Avionisert eller destillert vann 25. Dekkglass og dekkglassmetode som er tilstrekkelig til å dekke vev 26. Lysmikroskop (20 80X) 27. Mildt oppvaskmiddel Oppbevaring og håndtering Oppbevares ved 2 8 C. Skal ikke fryses. Brukeren må validere eventuelle andre oppbevaringsbetingelser enn de som er spesifisert på pakningsvedlegget. Dette deteksjonssettet kan brukes rett etter at det er tatt ut av kjøleskapet. For å sikre korrekt tilførsel av reagenser og stabilitet for hver reagens, skal dispenserlokket settes på igjen etter hver bruk, og dispenseren skal umiddelbart settes i kjøleskapet i stående posisjon etter hver bruk. Alle deteksjonssett har holdbarhetsdato. Når det oppbevares på forsvarlig måte, vil produktet være stabilt frem til datoen som er angitt på etiketten. Ikke bruk produktet etter holdbarhetsdatoen for angitt oppbevaringsmetode. Det finnes ikke bestemte tegn som kan vise ustabilitet for dette produktet. Derfor skal det kjøres positive og negative kontroller samtidig med ukjente prøver. Ta umiddelbart kontakt med din lokale støtterepresentant ved indikasjon på reagensustabilitet. Innsamling av prøver og preparering for analyse Formalinfikserte, parafininnstøpte vev er egnet for bruk med iview DAB Detection Kit og et BenchMark- og BenchMark XT i-instrument (se avsnittet Materials and Reagents Needed but Not Provided). Det anbefalte vevfikseringsmiddelet er 10 % nøytral bufret formalin (NBF). 2 Det kan forekomme varierende resultater som følge av vevsnittykkelse, fikseringstype, ufullstendig forlenget fiksering eller spesielle prosedyrer, slik som f.eks. dekalsifisering av beinmargpreparater. Hvert snitt bør tilskjæres i aktuell tykkelse (2 5 µm) til primærantistoffet som brukes, og legges på et objektglass. Objektglass som inneholder vevsnittet, kan bakes/varmes opp i minst 2 timer (men ikke mer enn 24 timer) i en ovn med en temperatur på 60 C ± 5 C. Objektglasset varmes opp for å tørke vevet etter montering av objektglasset og for å forbedre vevets adhesjon til glasset. MERK: Se pakningsvedlegget til primærantistoffet for å finne informasjon om oppvarmingsbegrensinger. Langvarig oppvarming av vevet kan føre til redusert antigentilgjengelighet. Riktig fikserte og innstøpte vevprøver som uttrykker antigenet, forblir stabile hvis de lagres på et kjølig sted (15 25 C). Clinical Laboratory Improvement Act (CLIA) fra 1988, 42CFR493.1259 (b) krever at "Laboratoriet må oppbevare fargede objektglass i minst ti år fra undersøkelsesdatoen og beholde prøvebiter i minst to år etter undersøkelsesdatoen". Hvert laboratorium skal validere snittobjektglassenes stabilitet med sine egne prosedyrer og miljølagringsforhold. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER 1. Til in vitro-diagnostisk bruk (IVD). 2. ProClin 300 brukes som konserveringsmiddel for enkelte reagenser i dette deteksjonssettet (se Reagents Provided). Den er klassifisert som et irritament og kan forårsake sensibilisering ved hudkontakt. Ta rimelige forholdsregler ved håndtering. Unngå at reagenser kommer i kontakt med øyne, hud og slimhinner. Bruk verneklær og -hansker. 3. Advarsel: Mulig karsinogen. International Agency for Research on Cancer (IARC) og US National Toxicology Program (NTP) har oppført benzidin, en sammensetning som er nært beslektet med 3, 3 -diaminobenzidintetrahydroklorid (DAB), som et kjent humant karsinogen. 4. Materialer av humant eller animalsk opphav skal håndteres som potensielt biologisk farlige og avhendes med egnede forholdsregler. 5. Ta rimelige forholdsregler når reagenser skal håndteres. Unngå at reagenser kommer i kontakt med øyne, hud og slimhinner. Bruk engangshansker og egnede verneklær ved håndtering av mistenkte karsinogener eller giftige stoffer. 6. Hvis reagenser kommer i kontakt med følsomme områder, skyll med rikelige mengder vann. Unngå innånding av reagenser. 7. Se til at avfallsbeholderen er tom før oppstart av en kjøring på instrumentet. Hvis denne forholdsregelen ikke tas, kan avfallsbeholderen flomme over og brukeren kan risikere å gli og falle. 8. Unngå mikrobiell kontaminasjon av reagensene, da dette kan gi feil resultater. 9. Rådfør deg med lokale og/eller landets myndigheter for å fastsette anbefalte metoder for avfallshåndtering. 10. Se produktets sikkerhetsdatablad for ytterligere informasjon. BRUKSANVISNING iview DAB Detection Kit er utviklet for bruk på BenchMark- og BenchMark XTinstrumenter i kombinasjon med Ventana primærantistoffer og tilbehør. Parametrene for automatiserte prosedyrer kan vises, skrives ut og redigeres i henhold til prosedyren i brukerhåndboken for instrumentet. Andre betjeningsparametere for instrumentet er forhåndsinnstilte på fabrikken. Prosedyrene for farging på BenchMark- og BenchMark XT-instrumenter er som følger. Se brukerhåndboken for å finne mer detaljerte anvisninger og ekstra protokollalternativer. Om en prøve behøver cellekondisjonering er avhengig av antistoffet. Se pakningsvedlegget til antistoffet for anvisninger. BenchMark og BenchMark XT-instrumenter 1. Sett på strekkodeetikett som tilsvarer protokollen som skal gjennomføres. 2. Plasser primærantistoffet, dispensere for det aktuelle deteksjonssettet og nødvendige tilleggsreagenser på reagensbrettet, og plasser dem på den automatiserte fargemaskinen. 3. Sjekk væskemengde og tøm avfall. 4. Last objektglassene på den automatiserte fargemaskinen. 5. Start fargekjøringen. 6. Når kjøringen er ferdig, må du fjerne objektglassene fra den automatiserte fargemaskinen. 7. Fortsett til anbefalt prosedyre etter prosessering av instrumentet. Anbefalte prosedyrer etter prosessering av instrumentet 1. Vask objektglassene i et mildt oppvaskmiddel for å fjerne dekkglassløsningen. 2. Skyll objektglassene grundig i destillert vann for å fjerne alt rengjøringsmiddel. 3. Dehydrer, klarer og dekk til med permanent monteringsmiddel. De fargede objektglassene bør leses innen to til tre dager etter fargingen, og er stabile i minst to år hvis de oppbevares riktig ved romtemperatur (15 25 C). 2012-03-29 2 / 5 14910NO Rev F

Kvalitetskontrollprosedyrer Positiv vevskontroll En positiv vevkontroll skal kjøres med hver fargingsprosedyre som utføres. Optimal laboratoriepraksis er å inkludere et positivt kontrollvevsnitt på samme objektglass som pasientvevet. Denne praksisen hjelper til med å oppdage manglende bruk av primærantistoff eller andre kritiske reagenser på pasienttest-objektglasset. Vev med svak positiv farging vil være mer egnet til optimal kvalitetskontroll. De positive vevkomponentene for farging brukes til å bekrefte at antistoffet er tilført og at instrumentet fungerer som det skal. Dette vevet kan inneholde både positive og negative fargingsceller eller vevkomponenter og kan tjene som vev til både positiv og negativ kontrollprøve. Kontrollvev bør være fra nylig foretatt obduksjon, biopsi eller kirurgiske prøver som er preparert eller fiksert så snart som mulig på samme måte som prøvesnittene. Slike vev kan benyttes til å overvåke alle trinn i prosedyren fra vevspreparering til og med farging. Bruk av vevsnitt som er fiksert eller prosessert på en annen måte enn testprøven, vil gi kontroll for alle reagenser og metodetrinn, bortsett fra fiksering og vevprosessering. Vevkontroller som er kjent positive bør bare brukes ved overvåking av korrekt resultat for prosesserte vev og testreagenser, og ikke som hjelp til å bestemme spesifikk diagnose i pasientprøver. Hvis de positive vevskontrollene ikke gir positiv farging, bør resultater med testprøvene betraktes som ugyldige. Negativ vevskontroll Det samme vevet som brukes til positiv vevkontroll, kan brukes som negativ vevkontroll. Den varianten av celletyper som kan finnes i de fleste vevsnitt, gir interne seter for negativ kontroll, men dette må verifiseres av brukeren. Komponentene som ikke farges, bør vise fravær av spesifikk farging og gi indikasjon på bakgrunnsfarging. Hvis det forekommer spesifikk farging på setene for negativ vevkontroll, bør resultater med pasientprøvene betraktes som ugyldige. Uforklarlige avvik Uforklarlige avvik i kontroller bør henvises til din lokale støtterepresentant umiddelbart. Hvis resultater fra kvalitetskontrollene ikke oppfyller spesifikasjonene, vil pasientresultatene være ugyldige. Se avsnittet Feilsøking i dette pakningsvedlegget. Identifiser og korriger problemet, og gjenta deretter pasientprøvene. Negativ reagenskontroll En negativ reagenskontroll må kjøres for hver prøve for å bidra til tolking av resultatene. En negativ reagenskontroll må brukes i stedet for primærantistoffet for å evaluere ikkespesifikk farging. Objektglasset skal farges med Negative Control Mouse eller Negative Control Rabbit, etter behov. Hvis det benyttes en annen negativ reagenskontroll, fortynn til samme konsentrasjon som primærantistoff-antiserumet med Ventana Antibody Diluent. Fortynningsmiddelet alene kan brukes som et alternativ til de ovennevnte negative reagenskontrollene. Inkubasjonsperioden for den negative reagenskontrollen bør være lik inkubasjonsperioden for primærantistoffet. Når det brukes paneler med flere antistoffer i seriesnitt, kan en negativ reagenskontroll på ett objektglass tjene som negativ eller ikke-spesifikk bakgrunnskontroll for bindingen for andre antistoffer. Analysebekreftelse Før første gangs bruk av et primært antistoff eller fargingssystem i en diagnostisk prosedyre, bør spesifisiteten til det primære antistoffet verifiseres ved å teste det på et antall vevsprøver med kjente immunhistokjemiske egenskaper som kan representere kjente positive og negative vev (se avsnittet om positiv vevskontroll som er beskrevet i produktvedlegget for det primære antistoffet og kvalitetskontrollanbefalingene fra College of American Pathologists Laboratory Accreditation Program, Anatomic Pathology Checklist 3 eller CLSI Approved Guideline 4 eller begge disse dokumentene). Disse kvalitetskontrollprosedyrene bør gjentas for hver ny produksjonsserie av et antistoff eller hver gang det gjøres en endring i analyseparametrene. Vev som er oppført i avsnittet om ytelsesegenskaper for primærantistoffet, er egnet til verifisering av analysen. Tolkning av resultater iview DAB Detection Kit gjør at et brunfarget reaksjonsprodukt utfelles ved antigenstedene som lokaliseres av primærantistoffet. En kvalifisert patolog med erfaring fra immunhistokjemiske rutiner må evaluere kontroller og kontrollere fargingsproduktet før resultatene tolkes. Farging av negative kontrollprøver må noteres først, og disse resultatene må sammenlignes med det fargede materialet for å bekrefte at det genererte signalet ikke er årsaken til ikke-spesifikke interaksjoner. Positiv vevskontroll Den fargede positive vevskontrollen bør først undersøkes for å bekrefte at alle reagenser fungerer riktig. Hvis det finnes et reaksjonsprodukt med riktig farge i målcellene, vil dette være tegn på positiv reaktivitet. Avhengig av inkubasjonstiden og styrken av det benyttede hematoxylinet, vil kontrastfarging gi en blek til mørk blå farging av cellekjernen. Overdreven eller ufullstendig kontrastfarging kan hindre riktig tolkning av resultater. Hvis den positive vevskontrollen ikke gir positiv farging, bør alle resultater med testprøvene betraktes som ugyldige. Negativ vevskontroll Den negative vevskontrollen bør undersøkes etter den positive vevskontrollen for å verifisere den spesifikke merkingen av målantigenet av primærantistoffet. Fravær av spesifikk farging i den negative vevskontrollen bekrefter manglende kryssreaktivitet for antistoff til celler eller cellekomponenter. Hvis det forekommer spesifikk farging i de negative vevskontrollene, bør resultater med pasientprøvene betraktes som ugyldige. Ikke-spesifikk farging, hvis dette forekommer, har diffust utseende. Sporadisk lysfarging i bindevev vil også kunne observeres i vevsnitt som er fiksert i for mye formalin. Intakte celler bør brukes når resultater av farging skal tolkes. Nekrotiske eller degenererte celler gir ofte ikke-spesifikk farging. Pasientvev Pasientprøver bør undersøkes sist. Positiv fargingsintensitet bør vurderes i lys av eventuell ikke-spesifikk bakgrunnsfarging i den negative reagenskontrollen. På samme måte som for alle andre immunhistokjemiske tester betyr et negativt resultat at antigenet det dreier seg om, ikke ble påvist, og ikke at antigenet ikke er til stede i cellene eller det analyserte vevet. Om nødvendig, skal det brukes et panel med antistoffer som hjelp ved påvising av falske negative reaksjoner. Morfologien til enhver vevsprøve bør også undersøkes med et snitt farget med hematoksylin og eosin når et immunhistokjemisk resultat skal tolkes. Pasientens morfologiske funn og relevante kliniske data må tolkes av en kvalifisert patolog. BEGRENSNINGER Generelle begrensninger 1. IHC er en diagnostisk prosess i flere trinn som krever spesialisert opplæring i valg av egnede reagenser og vev, fiksering, prosessering, preparering av det immunhistokjemiske objektglasset, samt tolking av fargingsresultatene. 2. Vevfargingen er avhengig av håndteringen og behandlingen av vevet før det farges. Uriktig fiksering, dypfrysing, opptining, vask, tørking, oppvarming, snitting eller kontaminasjon med annet vev eller væsker kan frembringe artefakter, fanging av antistoff eller falske, negative resultater. Uoverensstemmende resultater kan resultere fra variasjoner i fikserings- og innstøpningsmetoder, eller fra naturlige uregelmessigheter i vevet. 3. Overdreven eller ufullstendig kontrastfarging kan hindre riktig tolkning av resultater. 4. Klinisk tolking av positiv farging eller fraværet av slikt, må evalueres i lys av sykehistorikk, morfologi og andre histopatologiske kriterier. Klinisk tolking av farging eller fraværet av dette, må suppleres med morfologiske undersøkelser og riktige kontroller i tillegg til andre diagnostiske tester. Det er ansvaret til en kvalifisert patolog å ha grundig kunnskap om antistoffene, reagensene og metodene som brukes for å tolke det fargede preparatet. Farging må utføres i et sertifisert, akkreditert laboratorium under oppsyn av en patolog som har ansvar for å gjennomgå de fargede objektglassene og sikre at de negative og positive kontrollene er adekvate. 5. Ventana leverer antistoffer og reagenser ved optimal fortynning til bruk når de medfølgende anvisningene følges. Avvik fra anbefalte testprosedyrer kan ugyldiggjøre forventede resultater. Aktuelle kontroller må benyttes og dokumenteres. Brukere som avviker fra anbefalte testprosedyrer må godta ansvaret for tolkningen av pasientresultatene. 6. Reagensene vil kunne vise uventede reaksjoner i vev som tidligere ikke har vært testet. Muligheten for uventede reaksjoner selv i vevgrupper som er testet, kan ikke helt utelukkes på grunn av den biologiske variabiliteten for antigenekspresjon i neoplasmer eller annet patologisk vev. 5 Ta kontakt med den lokale støtterepresentanten med dokumenterte uventede resultater. 7. Vev fra personer som er infisert med hepatitt B-virus og som har hepatitt B overflateantigen (HBsAg), vil kunne utvise ikke-spesifikk farging med peroxidase fra pepperrot. 6 2012-03-29 3 / 5 14910NO Rev F

8. Når det brukes ved blokkeringstrinn, vil normale sera fra den samme animalske kilden som de sekundære antisera, kunne forårsake falske negative eller falske positive resultater på grunn av autoantistoffer eller naturlige antistoffer. 9. På samme måte som for alle andre immunhistokjemiske tester, betyr et negativt resultat at antigenet ikke ble påvist, og ikke at antigenet ikke var til stede i cellene eller det analyserte vevet. Spesifikke begrensninger 1. Hvert trinn i prosedyren til deteksjonssettet er optimalisert på BenchMark- og BenchMark XT-instrumentene og er forhåndsinnstilt. På grunn av variasjoner innen vevsfiksering og -prosessering, kan det være nødvendig å øke eller redusere inkubasjonstiden for primærantistoffet på individuelle prøver. Inkubasjonstiden for primærantistoffet avhenger av graden av vevsfiksering, og kan strekke seg fra 8 til 32 minutter. For mer informasjon om fikseringsvariabler, se "Immunohistochemistry Principles and Advances" 7 eller "Immunomicroscopy: A Diagnostic Tool for the Surgical Pathologist. 8 2. Deteksjonssettet, i kombinasjon med Ventana primærantistoffer og tilbehør, påviser antigen som overlever rutinemessig formalinfiksering, vevprosessering og snitting. 3. Dette deteksjonssettet er optimert for bruk med Reaction Buffer vaskeløsning, primærantistoffer, tilbehør og BenchMark-instrumenter. Bruken av Reaction Buffervaskeløsning er viktig for at deteksjonssettet skal fungere riktig. Brukere som fraviker anbefalte testprosedyrer, må ta ansvar for tolkingen av pasientprøver under disse forholdene. 4. Dette deteksjonssettet er optimert for bruk med LCS (Predilute), også kjent som LCS eller Liquid Coverslip (High Temperature). LCS er en forhåndsfortynnet dekkløsning som brukes som en barriere mellom de vannholdige reagensene og luften, samt som en reagens til å fjerne parafin fra vevsprøver under avparafiniseringsprosessen. LCS-barrieren reduserer fordamping og gir dermed et stabilt vannholdig miljø for IHC eller in situ hybridiseringsreaksjoner (ISH) som utføres på Ventana automatiserte fargemaskiner. 5. Andre inkubasjonstider og temperaturer enn de som er spesifisert, kan gi feilaktige resultater. Brukeren må validere enhver slik endring. YTELSESEGENSKAPER Reproduserbarhetsstudier iview DAB Detection Kit testing av reproduserbarhet ble utført ved å farge seriesnitt fra 3 nøytrale bufrede formalinfikserte, parafininnstøpte vev ved bruk av 3 primærantistoffer, et mus-igg (anti-cd45ro) farget på tonsill, et mus-igm (anti-cd57) farget på tonsill og en kanin-igg (anti-psa) farget på prostata ved bruk av BenchMark automatiserte fargemaskiner. Alle primærantistoffer ble inkubert i minst 16 minutter og objektglassene kontrastfarget ved bruk av Hematoxylin etterfulgt av Bluing Reagent. Alle objektglass farget med et primærantistoff ble sammenlignet med hensyn til fargingsegnethet og intensitet, og scoret av en kvalifisert objektglassleser. a. Fargekjøringer for reproduserbarhet innen kjøringer (samme primærantistoff farget på en plattform sammenlignet) ble utført 1 gang daglig på 3 separate dager for hver fargemaskintype (BenchMark-instrument). Hver kjøring inkluderte 10 objektglass for et spesifikt primærantistoff, hvilket resulterte i én kjøring med 10 objektglass for hvert antistoff på hver fargemaskintype. Reproduserbarhet innen kjøringer var 100 % (10 av 10 objektglass for hvert antistoff, per dag) for BenchMark automatisert fargemaskin. b. Reproduserbarhet mellom kjøringer ble beregnet ut fra antallet objektglass farget i 3 kjøringer per fargemaskintype. Fargekjøringer ble utført 1 gang daglig på 3 separate dager for hver fargemaskintype (BenchMark-instrument). Hver kjøring inkluderte 10 objektglass for et spesifikt primærantistoff, hvilket resulterte i kjøring med 30 objektglass for hvert antistoff over en 3-dagers periode. Reproduserbarhet mellom kjøringer var 100 % (30 av 30 objektglass for hvert antistoff) for BenchMark automatisert fargemaskin. c. Reproduserbarhet mellom instrumenter ble beregnet ut fra antallet objektglass farget i 9 kjøringer på tvers av alle fargemaskintyper. Det ble utført 1 fargekjøring per dag på 3 separate dager for hver fargemaskintype (BenchMark-instrument). iview DAB Detection Kit reproduserbarhet mellom instrumentene var 100 % (90 av 90 fargede objektglass, evaluerte objektglass inkluderte alle de 3 primærantistoffene). FEILSØKING 1. Hvis den positive kontrollen har svakere farging enn forventet, bør andre positive kontroller som kjøres på samme tid, sjekkes for å fastslå om det skyldes primærantistoffet eller en av de vanlige sekundærreagensene. 2. Hvis den positive kontrollen er negativ, skal den kontrolleres for å sikre at objektglasset har korrekt strekkodeetikett. Hvis objektglasset har riktig strekkodeetikett, bør andre positive kontroller som kjøres på samme tid, sjekkes for å fastslå om det skyldes primærantistoffet eller en av de vanlige sekundærreagensene. Vev vil kunne være innsamlet, fiksert eller avparafinisert på uriktig måte. Riktig prosedyre må følges ved innsamling, oppbevaring og fiksering. 3. Hvis det forekommer for mye bakgrunnsfarging, kan det foreligge for høye nivåer av endogent biotin. Inkluder et biotinblokkeringstrinn i din protokoll (Endogenous Biotin Blocking Kit). 4. Hvis ikke all parafin er fjernet, er det mulig at det ikke finnes noe farging. Avparafiniseringsprosedyren bør gjentas. 5. Hvis den spesifikke antistoffargingen er for intens, bør kjøringen gjentas med inkubasjonstiden forkortet med 4 minutters intervaller til ønsket intensitet på fargingen oppnås. 6. Hvis vevsnittene vaskes av objektglasset, bør objektglassene sjekkes for å sikre at de er positivt ladet. 7. For korrigerende tiltak, se avsnittet Bruksanvisning, brukerhåndboken for instrumentet eller kontakt din lokale støtterepresentant. 8. Hvis en reagensdispenser ikke dispenserer væske, kontroller primingskammeret eller menisk for fremmedlegemer eller partikler, slik som fibrer eller utfelling. Hvis dispenseren er blokkert, ikke bruk dispenseren og ta kontakt med din lokale støtterepresentant. Utfør ellers ny priming av dispenseren ved å rette dispenseren over en avfallsbeholder, fjerne dysehetten og trykke ned på toppen av dispenseren. REFERANSER 1. Elias JM, Gown AM, Nakamura RM, Wilbur DC, Herman GE, Jaffe ES, Battifora H, Brigati DJ. Quality control in immunohistochemistry. Report of a workshop sponsored by the Biological Stain Commission. Am J Clin Pathol. 1989;92(6): 836-843. 2. Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009. 3. College of American Pathologists Laboratory Accreditation Program, Anatomic Pathology Checklist, 2009. 4. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) formerly NCCLS. Quality Assurance for Immunocytochemistry: Approved Guideline. CLSI document MM4-A (ISBN 1-56238-396-5). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087-1898 USA, 1999. 5. Herman GE, Elfont EA. The taming of immunohistochemistry: the new era of quality control. Biotech Histochem. 1991;66(4):194-199. 6. Omata M, Liew CT, Ashcavai M, Peters RL. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen. A possible source of error in immunohistochemistry. Am J Clin Pathol. 1980;73(5):626 32. 7. Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002. 8. Taylor C, Cote RJ. Immunomicroscopy: A Diagnostic Tool for the Surgical Pathologist. 2nd Edition. Philadelphia, PA: W.B. Saunders Company; 1986. OPPHAVSRETT BENCHMARK, ultraview, VENTANA, og VENTANA-logoen er varemerker som tilhører Roche. Alle andre varemerker tilhører de respektive eierne. Ventana gir kjøperen en enkel brukslisens under amerikanske patentnumre 6045759, 6945128 og 7378058 og alle motsvarende patenter i utlandet. 2012 Ventana Medical Systems, Inc. 2012-03-29 4 / 5 14910NO Rev F

KONTAKTINFORMASJON Ventana Medical Systems, Inc. 1910 E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona 85755 USA +1 520 887 2155 +1 800 227 2155 (USA) www.ventana.com Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany 2012-03-29 5 / 5 14910NO Rev F