Fiksering. Er det viktig?
2. Parafininnstøpt materiale 1 Fiksering 2 Dehydrering 3 Klaring 4 Parafininnfiltrasjon 5 Parafininnstøping FIKSERING ----hvorfor er dette trinnet så viktig?
3. Kjemisk fiksering -immobilisering og stabilisering av vev Målet er å beholde vevets opprinnelige struktur. *Stabilisere makromolekyler *Hindre autolyse /forråtnelse Fikseringsmidler deles i to grupper: Gelerende ( eks formalin) Koagulerende ( eks alkohol)
4. Kjemisk fiksering -protein, vist i 3D (tærtiærstruktur) -sidekjeder som stikker ut fra overflaten, topp og bunn.
5. Protein sett ovenfra - overflaten er hydrofil og bundet til vann molekyler - hydrofobi midten Hydrofil gruppe Hydrofob gruppe
6. Gelerende fikseringsmidler Formalinmolekyler binder seg til proteinene i vevet. Proteinets sekundær og tærtiær struktur bevares. Formalin virker kun svakt denaturerende på protein i vev Stabiliserer antigenet i dets naturlige posisjon.
7. Formalinfiksering, trinn 1 Formalin trenger inn i vevet. Formaldehydmolekylene har stoppet den metabolske prosessen og fester seg til sidekjedene. Men, dette er bare trinn 1. Makromolekylene er ennå ikke tilstrekkelig stabilisert for å tåle dehydrering, kjemikaler eller varme. Hva trenger vi?
8. Formalinfiksering, trinn 2 Nok tid! Formalin har trengt helt inn i vevet og det dannes kryssbindinger. Vevet er stabilisert og vil nå tåle dehydrering, kjemikaler og varme. Hva vil skje hvis vi dropper trinn 2?
9. Alkoholfiksering - hydrofilegrupper vender innover mot midten, nye bindinger internt. - hydrofobegrupper vender ut Denaturering. Proteinet åpnes og endrer struktur Hydrofil gruppe Hydrofob gruppe
10. Hva er formalin? Formaldehyd løst i vann = formalin. Mest brukt er 4% formaldehyd = 10% nøytral bufret formalin (NBF)
11. Formalinfiksering Vevs tykkelse og type Volum formalin Konsentrasjon formalin (ny) Temperatur Tid
12. Hva er tilstrekkelig fikseringstid? Svinekotelett. Fiksert 1 time i 10% nøytral buffret formalin (NBF) Romtemperatur.
13. Fiksert 4 timer
14. Fiksert 12 timer
15. Fiksert 24 timer
16. Hva skjer med vevet under fremføring når det ikke er skikkelig fiksert? Vevet har ikke vært lenge nok i 10 % formalin selv om vevet ser fiksert ut. Trinn 2 tar lang tid(kryssbindinger) Resultatet er en blanding av gelerende fiksering (formalin) og koagulerende fiksering (sprit).
17. Og slik blir snittet.. Kan det preparatet reddes?
18. Hudbiten fremført en gang til.
19. Tonsille, hurtigprogram (30 minutter formalin)
20. Tonsille, 4 timer fiksering
21. Tonsille, fiksert 24 timer
22. Hvis vi får snitt, som ikke ser så verst ut, ved for lite fiksering, hvorfor er det da så viktig med optimal fiksering?
23. BCl6, ulik fikseringstid i formalin. 4 timer 24 time
24. Hvilke tiltak kan vi gjøre for å unngå mangelfull fiksering? - Skifte formalin ofte - La noe stormakro stå et ekstra døgn før beskjæring, også gjennomskjære før fiksering (f.eks.mamma) - Øk lengden på formalin i fremføringsmaskinen - Tynnere skiver ved beskjæring - «Hjelp» patologene å forstå viktigheten
25. I USA sier de: Garbage in, garbage out! Bilde