QUANTA Lite TM GPA (Gastrisk parietalcelle-antistoff) ELISA For In Vitro-diagnostikk CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet

Transkript

1 QUANTA Lite TM GPA (Gastrisk parietalcelle-antistoff) ELISA For In Vitro-diagnostikk CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet Anvendelsesområde QUANTA Lite TM GPA (Gastrisk parietalcelle-antistoff) er en enzymkoblet immunsorbent analyse (ELISA) for semikvantitativ påvisning av gastrisk parietal celle (H+/K+) ATPase-antistoffer av IgG klasse i humant serum. Forekomsten av gastrisk parietal celle (H+/K+) ATPase-antistoffer kan brukes sammen med kliniske resultater og andre laboratorietester som støtte i diagnosen av forhold med fohøyede nivåer av anti-gastrisk parietal celle (H+/K+) ATPase-antistoffer inkludert pernisiøs anemi. Sammendrag og forklaring av testen Pernisiøs anemi er en kronisk sykdom og er sluttfasen til type A (autoimmun) kronisk atrofisk gastritt. Type A kronisk atrofisk gastritt rammer bunnen av og selve magesekken, mens type B (ikke-immun) rammer antrum-delen i tillegg til bunn av og selve magesekken. Type A er assosiert med pernisiøs anemi og type B med H. pylori-infeksjon. 1-3 Under utviklingen til type A fra kronisk atrofisk gastritt til gastrisk atrofi blir gastriske parietalceller, som produserer intrinsisk faktor (IF), og HCI ødelagt og produksjonen av intrinsisk faktor og HCI elimineres. Intrinsisk faktor er essensiell for absorpsjonen av vitamin B 12 fra tarmene og dens fravær fører til vitamin B 12 -mangel og megaloblastisk anemi. Pernisiøs anemi er vanligvis langsom i begynnelsen og den utvikles fra kronisk atrofisk gastritt til gastrisk atrofi og klinisk anemi i løpet av år. Gjennomsnittsalder ved diagnose er 60 år. Selv om sykdommen ofte ikke gjenkjennes før anemi eller andre symptomer blir signifikante, kan de underliggende gastriske skadene bli gjenkjent mange år før anemi utvikles. 3,4 En økt forekomst av autoimmune sykdommer, inkludert autoimmun tyroiditt (Hashimotos tyroiditt), type 1 diabetes, Addisions sykdom, Graves sykdom og alvorlig myasteni ses hos pasienter med pernisiøs anemi. Pasienter med pernisiøs anemi har blitt rapportert å ha tre ganger økt risiko for gastrisk karsinom og 13 ganger økt risiko for gastrisk karsinoid. 5 Autoantistoffer mot gastriske parietalceller finnes hos cirka 90% av pasienter med pernisiøs anemi og hos rundt 30% av førstegrads slektningene til pasientene med pernisiøs anemi. 1-3 Gastriske parietalcelleantistoffer (GPA) påvises normalt ved indirekte immunfluorescens (IFA) ved bruk av vevsbestanddeler fra gastrisk mukosa fra gnagere. 2 Gastriske parietalcelle-antistoffer rettes mot membranbundet antigen i sekretoriske canaliculi og tubulovesikler til de gastriske parietalcellene. 6 Målantigenet til GPA har blitt identifisert som gastrisk H+/K+ ATPase (gastrisk protonpumpe) som er ansvarlig for syredannelsen i magesekklumen GPA binder seg til både α- og β-subenhetene til H+/K+ ATPase. 9 GPA-prevalens øker med alderen og har blitt rapportert hos 2,5% av en normalpopulasjon mellom år og hos 9,6% av en populasjon som er i 80-årene. 3 En nylig studie rapporterte at en høy prevalens av GPA og assosiert autoimmun gastrisk sykdom forekommer hos type 1 diabetes og anbefaler sterkt at diabetikere med anemi og/eller gastrointestinale symptomer skal testes for GPA. 12 Økte nivåer av GPA har blitt funnet hos pasienter med tyroid sykdom, jernmangelanemi, alopcia areata og vitiligo. 13,14 Påvisning av GPA med IFA er arbeidskrevende, krever subjektiv tolkning av resultatene av godt opplært personell og er utsatt for varierende kvalitet og reproduserbarhet mht vevsbestanddelene som brukes til å produsere IFA-slidene. Med identifikasjonen av gastrisk H+/K+ ATPase α- og β-enheter som hovedmolekylmålene til gastriske parietalcelle-antistoffer, har sensitive og spesifikke ELISA-analyser for påvisning av GPA-antistoffer blitt konstruert. 15 Bruk av ELISA-analyser gjør det mulig å bruke standardiserte, reproduserbare og objektive testresultater for GPA. Prosedyreprinsipper Renset humant H+/K+ ATPase-antigen, isolert fra gastrisk mukosa fra svin, bindes til brønnene til en mikrotiterplate av polystyren under betingelsene som vil konservere antigenet i naturlig tilstand. Forhåndsfortynnede kontroller og fortynnet pasientserum blandes i separate brønner slik at tilstedeværende H+/K+ ATPase-antistoff bindes til det immobiliserte antigenet. Ubundet prøve vaskes vekk og et enzym-merket anti-human IgG-konjugat tilsettes hver brønn. En andre inkubasjon gjør det mulig for det enzym-merkede anti-humane IgG-antistoffet å binde seg til pasientens antistoff som har - 1 -

2 festet seg på mikrobrønnene. Etter å ha vasket bort enzym-merket anti-humant IgG-antistoff som ikke har festet seg, måles gjenværende enzymaktivtet ved å tilsette et substrat og fargeutviklingen måles. Analysen kan avleses spektrofotometrisk ved å måle og sammenlikne fargeintensiteten som utvikles i pasientbrønnene med fargen i kontrollbrønnene. Reagenser 1. Mikrotiter ELISA-plate av polystyren dekket med renset H+/K+ ATPase-antigen (12-1 x 8 brønner), med holder i foliepakning inneholdende tørkemidler 2. ELISA negativ kontroll, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum uten humane antistoffer mot H+/K+ ATPase, forhåndsfortynnet, 1,2mL 3. GPA ELISA lav positiv, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum med ikke-humane antistoff mot H+/K+ ATPase, forhåndsfortynnet, 1,2 ml 4. GPA ELISA høy positiv, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum med antistoff mot H+/K+ ATPase, forhåndsfortynnet, 1,2 ml 5. HRP prøvediluent prøve, 1 ampulle rosafarget som inneholder fosfatbufret saltvann, Tween 20, proteinstabilisatorer og konserveringsmiddel, 50 ml 6. HRP vaskekonsentrat, 1 ampulle med 40x konsentrat rødfarget som inneholder fosfatbufret saltvann og Tween 20, 25 ml Se metodeavsnittet for veiledning om fortynning. 7. HRP IgG-konjugat, (geit), anti-humant IgG, 1 ampulle blåfarget som inneholder buffer, proteinstabilisatorer og konserveringsmiddel, 10 ml 8. TMB-kromogen, 1 ampulle som inneholder stabilisatorer, 10 ml 9. HRP stoppløsning, 0,344M svovelsyre, 1 ampulle fargeløs, 10 ml Advarsler 1. ADVARSEL: Dette produktet inneholder et kjemikalie (0,02% kloramfenikol) i prøvediluenten, kontrollene og konjugat antatt som kreftfremkallende i staten California. 2. Alt materiale fra menneskekilder brukt i preparatet til kontroller for dette produktet har blitt testet og funnet negativ for antistoff mot HIV, HBsAg og HCV av metoder klarert av det amerikanske helsetilsynet (FDA). Imidlertid kan ingen testmetode gi fullstendig sikkerhet om at HIV, HBV, HCV eller andre smittsomme agens er fraværende. Derfor skal GPA ELISA lav positiv, GPA ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll behandles på samme måte som potensielt smittefarlig materiale Natriumazid brukes som konserveringsmiddel. Natriumazid er en gift og kan være giftig ved svelging eller ved opptak gjennom huden eller via øynene. Natriumazid kan reagere med blyeller kobberrør og danne potensielt eksplosive metallazider. Bruk rikelig med vann i vaskene, hvis de brukes for avfallshåndtering av reagenser, for å forhindre oppsamling av azider. 4. HRP-konjugatet inneholder et fortynnet giftig/korrosivt kjemikalie som kan være giftig ved svelging av store mengder. Unngå hud- og øyenkontakt for å forhindre mulig kjemisk forbrenning. 5. TMB-kromogenet inneholder et kjemikalie som kan være skadelig ved inhalering, svelging eller opptak gjennom huden. Unngå inhalering, svelging eller hud- og øyenkontakt for å forhindre skader. 6. HRP-stoppløsningen inneholder en fortynnet svovelsyreoppløsning. Unngå eksponering av baser, metaller eller andre forbindelser som kan reagere med syrer. Svovelsyre er giftig og korrosiv og kan være giftig ved svelging. Unngå hud- og øyenkontakt for å forhindre mulig kjemisk forbrenning. 7. Bruk egnet personlig verneutstyr når du arbeider med reagensene som er levert. 8. Dersom du søler reagenser skal disse straks vaskes bort. Du skal være oppmerksom på alle kommunale, statlige og lokale miljøbestemmelser ved avfallsbehandling. Forholdsregler 1. Dette produktet brukes for in vitro-diagnostikk. 2. Utbytting av komponenter andre enn de som leveres med dette systemet kan føre til inkonsistente resultater. 3. Ufullstendig eller ineffektiv vasking og utilstrekkelig væskefjerning fra ELISA-brønnremsene vil forårsake dårlig presisjon og/eller høy bakgrunn

3 4. Tilpassing av denne analysen for bruk sammen med, helt eller delvis, automatiske prøveprosessorer eller andre væskebehandlingsapparater, kan gi avvikende testresultater i forhold til de som utføres ved hjelp av manuell prosedyre. Det er hvert enkelt laboratoriums ansvar å stadfeste at deres automatiske prosedyre gir testresultater innenfor akseptable grenser. 5. En rekke faktorer påvirker analyseprestasjonene. Herunder inkluderes starttemperaturen til reagensene, lufttemperaturen, pipetteteknikkens nøyaktighet og reproduserbarhet, hvor grundig det er vasket og fjernet væske fra brønnen til ELISA-remsen, fotometeret som er brukt til å måle resultatene og inkubasjonstidenes varighet under analysen. Det er nødvendig med konsistens konsistens for å oppnå nøyaktige og reproduserbare resultater. 6. Det anbefales at man holder seg strengt innenfor rammene til protokollen. 7. Ufullstendig forsegling av glidelåsen til posen som inneholder mikrobrønnremsene og tørkemidlene vil resultere i degradasjon av antigen og dårlig presisjon. 8. Uakseptabelt lave sbsorbanser kan observeres etter to eller flere bruk fra én enkel flaske med HRP-konjugat over en tidsperiode. Det er viktig å følge alle anbefalte behandlingsprosedyrer for HRP-konjugatet for å forhindre at dette oppstår. 9. Kjemisk kontaminasjon av HRP-konjugatet kan forårsakes av ufullstendig rengjøring eller skylling av utstyr eller instrumenter. Avfall fra vanlige laboratoriekjemikalier slik som formalin, blekemiddel, etanol eller vaskemiddel vil forårsake degradasjon av HRP-konjugatet over tid. Skyll alt utstyret og alle instrumentene grundig etter bruk av kjemiske rengjørings- og desinfeksjonsmidler. Oppbevaringsbetingelser 1. Lagre alle reagensene i kitet ved 2-8 C. Ikke frys. Reagensene er stabile helt til de går ut på dato hvis de oppbevares og behandles på foreskriftsmessig vis. 2. Ubrukte antigen-dekkede mikrobrønnremser skal forsvarlig forsegles på ny i folieposen som inneholder tørkemidlene og oppbevares ved 2-8 C. 3. Fortynnet vaskebuffer er stabil i én uke ved 2-8 C. Innhenting av prøver Denne prosedyren skal utføres med en serumprøve. Tilsetting av azid eller andre konserveringsmidler til testprøvene kan påvirke resultatene. Mikrobielt kontaminerte, varmebehandlede prøver eller prøver som inneholder synlige partikler skal ikke brukes. Sterkt hemolysert eller lipemisk serum eller prøver skal unngås. Etter innhenting skal serumet skilles fra blodklumpen. CLSI (NCCLS) dokument H18-A3 anbefaler følgende oppbevaringsbetingelser for prøver: 1) Ikke oppbevar prøver i romtemperatur lenger enn i 8 timer. 2) Hvis analysen ikke fullføres innen 8 timer, kjøl prøven ned til 2-8 C. 3) Hvis analysen ikke fullføres innen 48 timer, eller ved forsendelse av prøven, frys den ned til -20 C eller lavere. Nedfryste prøver må blandes godt etter tining og før testing. Prosedyre Leverte materialer 1 GPA ELISA-mikrotiterplate (12-1 x 8 brønner), med holder 1 1,2mL forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll 1 1,2mL forhåndsfortynnet GPA ELISA lav positiv 1 1,2mL forhåndsfortynnet GPA ELISA høy positiv 1 50mL HRP-prøvediluent 1 25mL HRP-vaskekonsentrat, 40x konsentrat 1 10mL HRP IgG-konjugat, (geit), anti-humant IgG 1 10mL TMB-kromogen 1 10mL HRP-stoppløsning, 0,334M svovelsyre Påkrevd tilleggsutstyr (ikke levert) Mikropipetter for å forsyne 5, 100, og 500µL Engangs mikropipettetips - 3 -

4 Testrør for pasientprøvefortynninger, 4mL volum Destillert eller deionisert vann 1L beholder for fortynnet HRP-vaskekonsentrat Mikrotiterplateleser som er i stand til å måle OD ved 450nm (og 620nm for dobbel bølgelengdeavlesninger) Metode Før du starter 1. Bring alle reagenser og prøver opp til romtemperatur (20-26 o C) og bland godt. 2. Fortynn HRP-vaskekonsentratet ut (1:40) ved å blande innholdet av HRP-vaskekonsentratflasken med 975mL destillert eller deionisert vann. Hvis hele platen ikke skal kjøres i denne perioden, kan du forberede en mindre mengde ved å blande 2,0mL av konsentratet med 78mL destillert eller deionisert vann for hver 16 brønner som skal brukes. Den fortynnede bufferen er stabil i én uke ved 2-8 o C. 3. Gjør klar en oppløsning (1:101) for hver pasientprøve ved å blande 5µL fra prøven med 500µL av HRP-prøvediluent. Fortynnede prøver må brukes innen 8 timer etter klargjøring. IKKE FORTYNN GPA ELISA lav positiv, GPA ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll. 4. Bestemmelse av forekomst eller fravær av H+/K+ ATPase antisoff ved hjelp av arbitrære enheter krever to brønner for hver av de tre kontrollene og én eller to brønner for hver pasientprøve. Det anbefales at prøvene kjøres i duplikat. Analyseprosedyre 1. ALLE REAGENSER MÅ BRINGES TIL ROMTEMPERATUR (20-26 C) FØR DU BEGYNNER ANALYSEN. Plasser påkrevd antall av mikrobrønner/remser i holderen. Legg straks tilbake remser som du ikke skal bruke tilbake i posen med tørkemidler og forsegl forsvarlig for å minimalisere eksponering for vanndamp. 2. Tilsett 100µL av forhåndsfortynnet GPA ELISA lav positiv, GPA ELISA høy positiv, ELISA negativ kontroll og de fortynnede pasientprøvene til brønnene. Dekk brønnene og sørg for 30 minutters inkubasjon ved romtemperatur på en vannrett overflate. Inkubasjonstiden begynner etter at siste prøve tilsettes. 3. Vasketrinn: Aspirer innholdet av hver brønn grundig. Tilsett µL av fortynnet HRPvaskebuffer til alle brønnene og deretter aspirer. Gjenta denne sekvensen to ganger til (totalt tre vasker). Inverter platen og bank på absorberende materiale for å fjerne resterende væske etter siste vask. Det er viktig å tømme hver brønn fullstendig etter hvert vasketrinn. Du opprettholder den samme sekvensen for aspirasjon som den som ble brukt for prøvetilsetning. 4. Tilsett 100μL av HRP-IgG-konjugatet til hver brønn. Konjugatet skal fjernes fra flaskene under standard aseptiske forhold og gode laboratorieteknikker. Bare fjern den koblingsmengden fra flasken som er nødvendig for analysen. DU SKAL ALDRI RETURNERE UBRUKT KONJUGAT TIL FLASKEN FOR Å UNNGÅ POTENSIELL MIKROBIELL OG/ELLER KJEMISK KONTAMINERING. Som i trinn 2, sørg for 30 minutters inkubasjon av brønnene. 5. Vasketrinn: Gjenta trinn Tilsett 100µL av TMB-kromogenet til hver brønn og sørg for 30 minutters inkubasjon i mørke ved romtemperatur. 7. Tilsett 100µL av HRP-stoppløsningen til hver brønn. Du opprettholder den samme sekvensen og timing ved tilsetting av HRP-stoppløsning som den som ble brukt for TMB-kromogenet. Bank forsiktig på platen med en finger for å blande brønnene grundig. 8. Avles absorbans (OD) fra hver brønn ved 450nm innen én time etter å ha stoppet reaksjonen. Hvis du ønsker bikromatiske målinger, kan du bruke 620nm som referansebølgelengde. Kvalitetskontroll 1. GPA ELISA lav positiv, GPA ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll skal kjøres med hvert oppsetti for å sikre at alle reagenser og prosedyrer fungerer som de skal. 2. Merk at da GPA ELISA lav positiv, GPA ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll er forhåndsfortynnet, kontrollerer de ikke for prosedyremessige metoder tilknyttet fortynning av prøver

5 3. Tilleggskontroller kan utføres i henhold til veiledninger eller krav fra lokale, statlige og/eller kommunale myndigheter eller akkrediterte organisasjoner. Egnet tilleggskontrollsera kan forberedes ved å aliquotere innsamlede humane serumprøver og oppbevaring ved < -20 C. 4. Alle kriteriene oppgitt nedenfor må oppfylles for å betrakte testresultatene som gyldige. Hvis noen av disse kravene ikke oppfylles, skal testen betraktes som ugyldig og analysen må gjentas. a. Absorbansen av forhåndsfortynnet GPA ELISA høy positiv må være høyere enn absorbansen til forhåndsfortynnet GPA ELISA lav positiv, og denne må være høyere enn absorbansen til forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll. b. Forhåndsfortynnet GPA ELISA høy positiv må ha en høyere absorbans enn 1,0, mens absorbansen til forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll ikke kan være over 0,2. c. Absorbansen til GPA ELISA lav positiv må være mer enn doble av ELISA negativ kontroll eller over 0,25. d. ELISA negativ kontroll og GPA ELISA høy positiv er ment for å kontrollere for substansiell reagensfeiling. GPA ELISA høy positiv vil ikke sikre presisjon ved analysens cut-off. e. Bruker henvises til CLSI (NCCLS) dokument C24-A3 for videre veiledning for egnet kvalitetskontrollpraksis. 17 Beregning av resultater OD-middelverdien for hvert sett av duplikater bestemmes først. Reaksjonen for hver prøve kan deretter beregnes ved å dele prøvens OD-middelverdi med OD-middelverdien for GPA ELISA lav positiv. Resultatet multipliseres med antall tildelte GPA ELISA lav positiv enheter som står oppgitt på etiketten. Prøve OD Prøveresultat = x GPA ELISA lav positiv (enheter) GPA ELISA lav positiv OD (enheter) Reaksjon er relatert til antistoffmengde fremstilt på ikke-lineært vis. Selv om økninger og minskinger av pasientens antistoffkonsentrasjoner vil gjenspeiles i form av tilsvarende stigning eller fall i reaksjon, er endringen ikke proporsjonal (dvs. en fordobling av antistoffkonsentrasjon vil ikke fordoble reaksjonen). Hvis det påkreves en nøyaktigere kvantifisering av pasientens antistoff, skal serielle fortynninger av pasientprøven kjøres og den siste fortynningen som måles positiv i analysen, skal rapporteres som pasientens antistofftiter. Tolkning av resultater ELISA-analysen er meget følsom for teknikk og er i stand til å påvise selv små forskjeller i pasientpopulasjonen. Verdiene som vises nedenfor er bare foreslåtte verdier. Hvert laboratorium bør etablere eget referanseområde basert på egne teknikker, kontroller, utstyr og pasientpopulasjoner i henhold til deres etablerte prosedyrer. Prøven kan da klassifiseres som negativ, tvetydige eller positiv (IgG antistoff til H+/K+ ATPase oppdaget) henhold til tabellen nedenfor. Enheter Negative 0,0 20,0 Tvetydige 20,1 24,9 Positiv > 25 Tvetydige prøver bør retestet før resultater utgis. 1. Et positivt resultat indikerer forekomst av H+/K+ ATPase antistoffer og antyder muligheten for pernisiøs anemi eller relatert sykdommer. 2. Et negativt resultat indikerer ingen forekomst av H+/K+ ATPase-antistoff eller nivåer under analysens cut-off. 3. En prøve med tvetydige GPA-nivåer kan ikke bedømmes for antistoffstatus. Hvis resultatene forblir tvetydige etter gjentatt testing, skal resultatet rapporteres som tvetydig og/eller skal det tas ny prøve for testing

6 4. Det foreslås at resultatene som rapporteres av laboratoriet skal inneholde uttalelsen: Følgende resultater ble fremstilt med INOVA QUANTA Lite TM GPA ELISA. GPA-verdier fremstilt med forskjellige fabrikanters analysemetoder kan ikke brukes om hverandre. Størrelsen av rapportert IgG-nivåer kan ikke korreleres til et endepunkttiter. Prosedyrebegrensninger 1. Forekomsten av immunkomplekser eller andre immunglobulinaggregater i pasientprøven kan forårsake et forhøyet nivå av ikke-spesifikk binding og produsere feilaktige positive analyseresultater. 2. Et negativt gastrisk parietalcelle-antistoffresultat utelukker ikke forekomsten av pernisiøs anemi. 3. Et negativ GPA-resultat utelukker ikke forekomsten av GPA, fordi konsentrasjonen av antistoff kan være under påvisningsgrensen til analysen. 4. Et positivt testresultat indikerer bare forekomsten av antistoff mot H+/K+ ATPase og indikerer ikke nødvendigvis forekomsten av en autoimmun sykdom eller en annen sykdom. 5. Analysens prestasjonsevne har ikke blitt etablert for pediatriske pasienter. 6. Resultatene til denne analysen bør brukes sammen med kliniske resultater og andre serologiske tester. 7. Prestasjonsegenskapene til analysen har ikke blitt etablert for annet prøvemateriale enn serum. Forventede verdier Evnen til QUANTA Lite TM GPA ELISA til å påvise H+/K+ ATPase-antistoffer ble evaluert ved sammenlikning av en kommersielt tilgjengeli H+/K+ ATPase ELISA sett. En sammenlikning av resultatene fremstilt med QUANTA Lite TM GPA ELISA og med en indirekte immunfluorescensanalyse ved bruk av musenyre/magesekk vevsbestanddeler ble også utført. Prevalensen av GPA hos friske normalpopulasjoner øker med alderen fra cirka 2,5% i 30-årene til 9,6% i 80-årene. Forekomsten av GPA er generelt høyere hos kvinner enn hos menn. For menn under 55 år var 5,5% positive for GPA sammenliknet med 14,7% av kvinnene. For individer over 55 år hadde 9,2% menn og 22,3% kvinner GPA. 4 Normalområde Et kombinert panel av 210 prøver fra asymptomatiske, friske individer ble testet med QUANTA Lite TM GPA ELISA-settet. Alder varierte fra (median, 32). Av de 210 prøvene, var 154 (73,3%) fra menn og 56 (26,7%) fra kvinner. Middelverdien var 7,3 enheter innenfor et område på 1,3 til 84,1 enheter. To av de 7 GPA-positive prøvene var GPA IFA-positive. Ved å utelukke fire tvetydige resultater ble det oppnådd spesifisitet på 96,6% (199/206). Relativ sensitivitet og spesifisitet Resultatene ved testing av 20 prøver fra pasienter med pernisiøs anemi med QUANTA Lite TM GPA ELISA og et prediktivt GPA ELISA-sett vises i tabell 1. Sammenlikning av resultater fremstilt med IFA ved bruk av musenyre/magesekk-slides på dette panelet vises i tabell 2. Tabell 3 viser komparative resultater fra QUANTA Lite TM GPA ELISA og resultatene fra det prediktive GPA ELISA-settet for et panel med 41 prøver. Tabell 1: QUANTA Lite TM GPA (gastrisk parietal-antistoff) og prediktive GPA ELISA-resultater fra pasientpanelet med pernisiøs anemi QUANTA Lite GPA ELISA RESULTATER Prediktive GPA ELISA N=20 Pos (15) TV (0) Neg (5) Positive Pos (14) Tvetydige TV (5) Negative Neg (1) Overensstemmelse (ved utelukking av tvetydige resultater): 100% (15/15) - 6 -

7 Tabell 2: QUANTA Lite TM GPA og ANA (Musnyre/mage) IFA-resultater fra pasientpanelet med pernisiøs anemi QUANTA Lite GPA ELISA RESULTATER GPA IFA N=20 Pos (15) TV (0) Neg (5) Positive Pos (15) Tvetydige TV (0) Negative Neg (5) Overensstemmelse: 100% (20/20) Tabell 3: QUANTA Lite TM GPA (gastrisk parietal-antistoff) og prediktive GPA ELISA-resultater fra prøver tilsendt for GPA testing. QUANTA Lite GPA ELISA RESULTATER Prediktive GPA ELISA N=41 Pos (19) TV (2) Neg (20) Positive Pos (22) Tvetydige TV (0) Negative Neg (19) Overensstemmelse (ved utelukking av tvetydige resultater): 89,7% (35/39) Kryssreaksjoner Sera fra pasienter med autoimmune eller infeksjonssykdomsantistoffer eller forskjellige kliniske tilstander inkludert H. pylori (7), tyroid peroksidase (5), tyroid-m (5), tyroid-t (4), beta-2 glykoprotein (5), LKM-1 (5), autoimmun hepatitt, type1 (14), mitokondrium M2 (4) ble testet for kryssreaktivitet med QUANTA Lite TM GPA ELISA. En H. pylori og to TPO-prøver var positive med QUANTA Lite TM GPA ELISA. Disse 3 prøvene var også positive for GPA med IFA. Presisjon og reproduserbarhet Innen serien presisjonen for QUANTA Lite TM GPA ELISA ble evaluert ved å teste seks prøver totalt ni ganger hver. Resultatene, oppsummert i tabell 4, viser intra-analysepresisjon. Tabell 4: Innen serien presisjonen for QUANTA Lite TM GPA ELISA Spec. A Spec. B Spec. C Spec. D Spec. E Spec F. Middelenheter 40,7 93,4 35,4 58,3 47,0 10,5 SD 2,3 5,7 3,2 5,4 5,1 0,7 CV % 5,6 6,1 9,0 9,2 10,8 6,9 Mellom serier-presisjonen ble vurdert ved å teste i duplikat et panel av 5 prøver to ganger daglig over tre dager. Tabell 5: Mellom serier-presisjonen for QUANTA Lite TM GPA ELISA Spec. 1 Spec. 2 Spec.3 Spec. 4 Spec. 5 Middelenheter 32,7 95,2 11,4 32,9 5,9 SD 1,61 2,25 0,37 1,77 0,42 CV % 4,9 2,4 3,2 5,4 7,1-7 -

8 Referanser 1. Gleeson PA and B-H Toh. Molecular Targets in Pernicious Anemia. Immunology Today 12(7): , Gleeson PA, Van Driel IR and B-H Toh. Parietal Cell Antibodies. In: Autoantibodies. Peter JB and Y Shoenfeld, eds., Elsevier Science B.V. pp , Toh B-H, Van Driel IR and PA Gleeson. Pernicious Anemia. N. Eng. J. Med. 37(20): , Lee GR. Pernicious Anemia and other causes of vitamin B12 (cobalamin) deficiency. In: Wintrobe s Clinical Hematology, 10 th ed, Williams & Wilkins, pp , Hsing AW, Hansson L-E, McLaughlin JK, et al. Pernicious anemia and subsequent cancer: a populationbased cohort study. Cancer 71: , Hoedemaeker PJ and S Ito. Ultrastructural localization of gastric parietal cell antigen with peroxidasecoupled antibody. Lab. Invest. 22: , Burman P, Mardh S, Norberg L and FA Karlsson. Parietal cell antibodies in pernicious anemia inhibit H+/K+ -adenosine triphosphatase, the proton pump of the stomach. Gastroenterol. 96: , Toh B-H, Gleeson PA, Simpson RJ, et al. The 60- to 90 kda parietal cell autoantigen associated with autoimmune gastritis is a β subunit of the gastric H+/K+ ATPase (proton pump). PNAS 87: , Callagham JM, Khan MA, Alderuccio F, Van Driel IR, Gleeson PA and B-H Toh. α and β subunits of the gastric H+/K+ ATPase are concordantly targeted by parietal cell autoantibodies associated with autoimmune gastritis. Autoimmun. 16: , Ma JY, Borch K and S Mardh. Human gastric H,K-adenosine triphosphatase β-subunit is a major autoantigen in atrophic corpus gastritis. Expression of the recombinant human glycoprotein in insect cells. Scand. J. Gastroenterol. 29: , Claeys D, Galler G, Appelmelk BJ, Negrini R and T Kirchner. The gastric H+/K+-ATPase is a major autoantigen in chronic Helicobacter pylori gastritis with body mucosa atrophy. Gastroenterol. 115: , DeBlock CRM, DeLeeuw IH, Van Gaal LF and the Belgian Diabetes Registry. High prevalence of manifestations of gastric autoimmunity in parietal cell antibody-positive type 1 (insulin-dependent) diabetic patients. J. Clin. Endocrin. Metab. 84(1): , Mandry, RC, Ortiz LJ, Lugo-Somolinos A and JL Sanchez. Organ-specific autoantibodies in Vitiligo patients and their relatives. Int. J. Dermatol. 35(1): , Kumar B, Sharma VK and S Sehgal. Anti-smooth muscle and anti-parietal cell antibodies in Indians with alopecia areata. Int. J. Dermatol. 34(8): , Chuang JS, Callagham JM, Gleeson PA and B-H Toh. Diagnostic ELISA for parietal cell autoantibody using tomato lectin-purified gastric H+/K+-ATPase (proton pump). Autoimmun. 12:1-7, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories: Centers for Disease Control/National Institutes of Health, Fifth Edition, National Committee for Clinical Laboratory Standards, Feb Statistical quality control: Principles and definitions; Approved Guideline-3 rd edition C-23-A3, Vol. 25, No. 25. Fabrikkert av: Technical Service NOR November 2007 INOVA Diagnostics, Inc. Rev Old Grove Road San Diego, CA United States of America Autorisert representant i EU: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: