Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering. Erik Søderlund/Birgitte Lindeman

Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 1 Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 2 Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering Risikovurdering av kjemikalier Erik Søderlund/Birgitte Lindeman Data collection and evaluation Exposure identification Hazard identification Exposure: measure and modelling Risk characterisation MOS Extrapolation No adverse effect levels Basic steps in risk assessment Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 3 Risikovurdering av kjemikalier Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 4 Effekter og eksponeringsgrupper som skal omfattes ved risikovurdering av kjemikalier Effekter Irritasjon Etsing Sensibilisering (allergi) Mutagenitet Karsinogenitet Reproduksjonstoksisitet Eksponeringsgrupper Arbeidere Forbrukere Generelle befolkning Spesielt sensitive grupper Eksponeringsveier Svelging Hudkontakt (og slimhinner) Innånding Spesielle veier (injeksjon, implantasjoner) European Chemicals Bureau: http://ecb.jrc.it/ for info om tester, regelverk m.v. Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 5 Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 6 Acute toxicity oral (LD 50, ikke lenger i EU Annex V) Acute Toxicity Fixed Dose metoden (420/EU B.1 bis) Limit tests (oral og dermal: 2000 mg/kg kv; Innhalasjon: 5 mg/l/4 t aerosoler/partikler og 20 mg/l/4t gasser/damper) Acute Toxic Class metoden (EU B.1 tris) Opp og ned metoden (OECD TG 425) Acute toxicity inhalation (EU B.2) Acute toxicity dermal (EU B.3) (In vitro og in vivo dermale absorpsjonstester; OECD TG 427 og 428) Identifisere de doser hvor toksiske effekter forekommer, type og graden av skadevirkninger NOAEL-verdier bestemmes vanligvis ikke i studier av akutt toksisitet Eksponeringsveier: Vanligvis oral, i tillegg inhalasjon for flyktige væsker (gasser/damper) og/eller dermal

Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 7 Vurdere testing for akutt toksisitet Grunnlag for ikke å teste for akutt toksisitet ved svelging Stoffet er etsende Stoffet antas ikke å føre til systemisk toksisitet ved doser lavere enn de som er etsende Grunnlag for å vurdere å teste / ikke teste for akutt toksisitet ved innånding Stoffer har høyt damptrykk Stoffet består av små inhalerbare partikler (MMAD < 100 µm) Eksponering grunnet aerosoldannelse ved produksjon eller bruk Stoffet er etsende Stoffet er ikke akutt toksisk ved svelging Stoffet tas lett opp via mage-tarm-kanalen Grunnlag for å vurdere å teste for akutt toksisitet ved hudeksponering Dersom toksiske effekter er funnet i tester for hud-/øyeirritasjon og/eller tester for hudallergi eller Stoffet tas lett opp igjennom huden og fører død (LD50 oral < 200 mg/kg) eller systemisk toksisitet ved svelging eller Det foreligger mulighet for omfattende hudeksponering (og LD50 oral < 2000 mg/kg) Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 8 Vurdere testing for akutt toksisitet Evaluering av toksikologiske data Godt dokumenterte humandata viktig, spesielt når det gjelder subjektive symptomer (hodepine og lignende) Begrensninger i bruk av humandata ligger ofte i lav eksponering, mangelfull rapportering, manglende informasjon om eksponeringsnivåer, få personer som er eksponert, andre eksponeringsveier, osv Dyreforsøk Standardtester for akutt toksisitet (OECD, EU Annex V) Ikke-standardtester (flere studier som viser tilsvarende resultater, case-bycase vurdering av de enkelte studier) Andre studier enn akutt toksisitetsstudier ( range findings studies, in vivo mikrokjernestudier) Ingen aksepterte in vitro metoder Strukturlikhet (lett vannløslige salter av stoffer som er akutt toksiske) Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 9 Ved risikokarakteriseringen skal det legges vekt på: Formen på dose-respons kurven (dersom data er tilgjengelig) Hvilke deler av befolkningen som eksponeres (spesielle grupper som barn eldre, syke, osv) Stoffets flyktighet Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 10 Dersom det er tilstrekkelig forskjell mellom human eksponering og de(n) dose(r) som gir akutte skadevirkninger i forsøksdyr eller mennesker er det ikke nødvendig med ytterligere studier og det er ikke nødvendig med risikoreduserende tiltak. Dersom det ikke kan konkluderes med at det ikke er nødvendig med ytterligere testing og at ytterligere studier i liten grad vil kunne forbedre risikovurderingen kan det være nødvendig med risikoreduserende tiltak. Krav om ytterligere testing kan være aktuelt dersom det foreligger peak eksponering via andre eksponeringsveier enn for de hvor man har informasjon om akutte skadevirkninger og hvor det ikke er mulig å ekstrapolere fra en eksponeringsvei til en annen. Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 11 Definisjoner og tester Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 12 er lokale effekter (opptrer der hvor stoffet først kommer i kontakt med kroppen). Irriterende stoffer er stoffer som innen kort tid etter eksponering fører til lokale betennelsesreaksjoner - reversible effekter. Etsende stoffer er stoffer som innen kort tid etter eksponering fører til ødelegges av vevet de kommer i kontakt med - irreversible effekter. Det finnes egne sett av kriterier for å skille etsende mellom irriterende stoffer og fra stoffer som ikke har denne type effekter (se forskrift om klassifisering og merking av kjemikalier). Tester for hud- og øyeirritasjon: Dyretester: EU, Anneks V B.4 (hud); B.5 (øye); In vitro-tester: B.40 (hud, etsing, TER); OECD TG 431 (hud, etsing, HSM); in vitro irritasjonstester valideres; (Q)SARs, matematisk modellering Irritasjon, våt sement Etseskader etter eksponering for etylenoksid

Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 13 Hensikt Avdekke om et stoff er eller sannsynligvis er irriterende/etsende for mennesker Om det ut fra dyrestudier eller in vitro studier må kunne antas at stoffet er irriterende/etsende for hud, øyne eller luftveiene Om det ut fra bruk av stoffet er holdepunkter for at det er irriterende/- etsende for hud, øyne og slimhinner hos mennesker som eksponeres Få informasjon om eventuell forsinket effekt, graden av effekt og om denne er reversibel eller ikke Vurdere all tilgjengelig informasjon før stoffet testes in vivo for å unngå testing av stoffer som er etsende eller sterkt irriterende (benytte EU B.40 in vitro/ex vivo for å avdekke mulig hudirriterende potensiale) Informasjon fra tester for irritasjon/etsing Hud: rødhet, skorpedannelse, væskeansamling eller vevsnekrose Øyne: Uklarhet i hornhinnen, irissskader, rødhet i bindehinnen, væskeansamling i bindehinnen, vedvarende øyeskade eller blindhet Luftveier: Ingen dyretest vurdering oftest basert på human erfaring Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 14 Vurdering av dyre- og humandata Gode humandata kan gi verdifulle opplysninger om irritasjon ved hudkontakt og innånding. Ofte er humandata den eneste muligheten til å vurdere om et stoff kan irritere luftveiene. Erfaring har vist at det ofte er vanskelig å få gode humandata når det gjelder øyeirritasjon. Ofte foreligger resultater fra flere dyrestudier som ikke tilfredsstiller dagens krav til testing. Dersom resultatene fra disse i stor grad er konsistente kan de gi tilstrekkelig informasjon om stoffets hud- /øyeirriterende/etsende potensiale. Dersom det er stor grad av forskjell når det gjelder graden av irritasjon mellom de ulike studiene er det nødvendig å vurdere studiene individuelt og så velge det som er mest pålitelig. Positive in vitro studier kan være tilstrekkelig for å konkludere at et stoff er hud- eller øyeirriterende, men kan ikke benyttes til å konkludere at et stoff ikke er irriterende. Fysikalsk-kjemiske data (ph) kan benyttes til å identifisere stoffer som er etsende, men kan ikke benyttes til å si at et stoff er ikke-irriterende. Stoffer som har avfettende egenskaper kan føre til hudirritasjon (sprekkdannelse og hudavflassing). Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 15 Dose-responssammenheng Ut fra eksisterende OECD/EU tester for irritasjon er det ikke mulig å angi en ikke-irriterende konsentrasjon av stoffet. Det må i så fall foreligge data fra en rekke studier hvor stoffet er undersøkt ved ulike konsentrasjoner. I forbindelse med inhalasjonsstudier vil det være mulig å angi en konsentrasjon som ikke irriterer luftveiene. I slike tilfeller vil dose-respons kurven gi viktig informasjon om hvor meget eksponering må reduseres for å redusere risikoen for irritasjon. Usikkerhet i de type studier som benyttes for å avdekke irriterende egenskaper Humanstudier lider ofte av at det er mangelfull rapportering av studiene, manglende angivelse av konsentrasjoner, subjektive effekter og lite antall personer som inngår i studiene. Studier utført etter gjeldende testretningslinjer vil gi entydig informasjon om stoffet har irriterende egenskaper i den arten det er studert og det er en generell oppfatning at stoffer som er irriterende i dyrestudier også er irriterende hos mennesker. In vitro studier som er godt mekanistisk funderte vil kunne benyttes til vurdere om et stoff er irriterende, men ikke omvendt. Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 16 Dersom man kjenner til de konsentrasjoner av stoffet som ikke fører til irritasjon hos mennesker bør det gjøres en kvantitativ risikovurdering ved at disse konsentrasjoner sammenholdes med aktuell eksponerings nivåer. Dersom man ikke har kunnskap om hvilke konsentrasjoner som er ikkeirriterende bør det gjøres en pragmatisk vurdering av risiko basert på eksponeringsvei, graden av human eksponering og bruksmønster. Ved vurdering av risiko for irritasjon skal det i alle tilfelle tas hensyn til: 1. Foreligger det en sammenheng mellom dose(konsentrasjon) og graden av irritasjon; 2. Graden av irritasjon når kun en konsentrasjon/dose ble undersøkt; 3. I hvilken grad skaden er reversibel eller ikke; 4. Foreligger opplysninger om langvarig eller gjentatt eksponering for stoffet; 5. Benyttes stoffet som sådan eller foreligger det i produkter; 6. Relevante fysikalsk-kjemiske egenskaper (fysisk form, eventuelle hydrolyseprodukter, ph osv) Lokale effekter er effekter som observeres der hvor stoffet først kommer i kontakt med kroppen Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 17 En systemisk effekt er en effekt som opptrer et annet sted enn der stoffet først kommer i kontakt med kroppen Med kronisk og subkronisk toksisitet forstås skadelige effekter som først opptrer ved langvarig eller gjentatt eksponering. Reproduksjonstoksisitet, arvestoffskade og kreft er effekter som ikke inngår når effekter som skyldes gjentatt eksponering vurderes. Kreft, arvestoff- og reproduksjonsskade vurderes separat i egne tester Hensikt Hvilke skadevirkninger kan tenkes å opptre ved gjentatt eksponering identifisering av målorganer og skadetyper Avdekke dose-responssammenhenger Identifisere en null-effekt-dose (NOAEL) som kan benyttes i risikokarakterisering Tilgjengelige data Epidemiologiske data Erfaring (enkelttilfeller, case studies ) Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 18 Dyredata Standard EU tester (B.7-9 subakutt, B.26-29 subkronisk og B30 kronisk) Spesialstudier (nevrotoksisitet, immuntoksisitet og effekter på endokrine systemer)

Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 19 Forhold som skal være vurdert før et gjentatt eksponeringsforsøk startes: Stoffets fysiske form (gass, væske, fast stoff, pulver) Fysikalsk-kjemiske parametere (løselighet, log Kow, damptrykk) Resultatet av tidligere toksikologiske studier Stoffets kjemiske struktur og eventuell likhet med andre stoffer med kjent toksisitet (SAR) Forurensninger i stoffet og mulig metabolitter eller nedbrytningsprodukter Relevante data når det gjelder å velge eksponeringsvei Nødvendigheten av å ta med ytterligere vev for morfologi og kliniskkjemiske og hematologiske parametere Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 20 Kriterier for valg av 90-dagers og ikke 28-dagers test som den første testen for toksisitet ved gjentatt eksponering Stoffet antas å ha lav systemisk toksisitet, men kan føre til lungefibrose. Stoffet forventes å ha noe toksisitet, produksjonen antas å være økende og det foreligger toksikologisk informasjon som gjør det mulig å fastsette relevante testdoser. Typen av de antatte effekter er slik at de ikke vil kunne oppdages i et 28- dagers studie. Eksponeringsmønsteret (nivå, hyppighet og varighet) er slik at det er mer relevant med en 90-dagers studie enn en 28-dagersstudie. Studier av spesifikke organeffekter For visse typer effekter gir standardtester for gjentatt eksponering ingen fullgod karakterisering av skaden, kun indikasjoner på skade (SAR). Nevrotoksistet: forandret morfologi, nevrofysiologi, adferd og nevrokjemi Immunotoksisitet: immunsuppresjon og autoimmunitet. Effekter på endokrine systemer:skjoldbruskkjertel, gonader og binyrer - endringer i hormonnivåer (tyroksin, testosteron og andrenalin). Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 21 Evaluering av data Nyttige for å identifisere skadevirkninger, men kan sjelden benyttes alene for å kartlegge dose-responssammenhenger. Ofte blandet eksponering, hyppigheten av effektene er lave, antallet individer som er eksponert er lavt og ofte kan det være lang latenstid før skadevirkninger oppstår Hetrogen sammensatt populasjon som eksponeres (kjønn, alder, sykdom, ernæring og genetisk sammensetning/polymorfismer) Dyrestudier Velge den dyreart som er mest lik menneske når det gjelder toksikokinetikk og toksikodynamikk; Eller velge den art som er mest sensitiv Foretrekker tester som er mest relevante mht eksponeringsvei, hyppighet og varighet av eksponeringen. Tester hvor det er mulig å bestemme en NOAEL (LOAEL) Tester med lengre eksponering (en 90-dags test foretrekkes fremfor en 28- dags test). Tester som er utført etter GLP og aksepterte testretningslinjer foretrekkes. Dose-respons sammenheng: Typen av skade Dose-effekt sammenheng Tid-effekt sammenheng Dose-respons sammenheng Tid-respons sammenheng Biologisk relevant effekt Reversibilitet Hyppigheten/variasjon av tilsvarende effekt i kontrolldyrene (historiske kontroller) Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 22 Identifisering av NOAEL: Bestemmelse av NOAEL Benchmark dose Lokale effekter: For lokale effekter som først opptrer ved gjentatt eksponering bør det bestemmes en NOAEL (LOAEL) Den kvantitative NOAEL-verdien (mg/kg/dag) er avhengig av antallet og avstand mellom de doser (konsentrasjoner) som benyttes i studiet. Eksisterende testretningslinjer anbefaler minst 3 dosegrupper + kontroll og den høyeste dosen skal gi en effekt, men ikke død eller tydelig lidelse, eller være minst 1000 mg/kg/dag. Den laveste dosen skal ikke gi noen effekt. Det bør benyttes 2 eller 4 gangers intervaller mellom dose. Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 23 Hva er, er ikke en adverse effekt? En ikke-adverse (helseskadelig) effekt kan sies å være en biokjemisk, adferdsmessig, morfologisk eller fysisk forandring som ikke påvirker den generelle helsetilstanden, vekst, utvikling eller levealder hos det eksponerte individ (ecetoc technical report no 85, 2003). Trinn 1: forskjellen skyldes trolig ikke eksponering dersom: Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 24 Det forligger ingen åpenbar doserespons; Den skyldes observasjoner i ett eller et lite antall dyr, outlier(s); Manglende presisjon i det endepunktet som måles; Er innen den normale variasjonen i historiske kontroller; Observert effekt klart forskjellig fra det som er forventet ut fra antatt virkningsmekanisme, gruppeeffekter osv. Trinn O: er det en forskjell mellom test og kontroll grupper? Trinn 1: skyldes forandringen i en effekt en eksponering? Trinn 2: er effekten adverse? Effekten er vist å være adverse Effekten er ikke vist å være adverse Ytterligere vurdering ikke nødvendig Ytterligere vurdering ikke nødvendig En adverse effekt er en biokjemisk forandring eller patologisk skade som enten alene eller i kombinasjon fører til effekter som negativt påvirker organismens funksjon eller reduserer organismens mulighet til å svare på andre miljøpåvirkninger Trinn 2: den observerte effekten er trolig ikke adverse dersom: Det er ingen forandring i dyrets generelle funksjoner eller i det organ eller vev som er påvirket Den er sekundær til en annen adverse effekt Det er en adaptiv respons Den er forbigående Effekten opptrer isolert (det foreligger ikke forandringer i andre parametere som assosieres med den observerte skadevirkning Effekten er ikke et ledd i en kjede av kontinuerlige forandringer som utvikles med tid til en etablert type skade Den er en konsekvens av den eksperimentelle modellen som benyttes Basert på ECETOC TR No 85, 2003

EU kriterier når R48 (alvorlige skadevirkninger ved gjentatt eller langvarig påvirkning) ikke skal anvendes: Kliniske observasjoner eller forandringer i økning i kroppsvekt, fôrinntak eller vanninntak som kan ha en viss toksikologisk betydning, men som i seg selv ikke tyder på alvorlig skade. Små endinger i klinisk biokjemi, hematologi eller urinanalyse som er tvilsom eller er av minimal toksikologisk betydning. Endringer i organvekt uten tegn til funksjonsforstyrrelser. Ulike tilpassningsreaksjoner og hudirritasjon. Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 25 Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 26 Anslå hyppigheten og alvorligheten av skadevirkninger som sannsynligvis vil opptre i befolkningen ut fra beregnet eller målt eksponering for et stoff Bestemme NOAEL (LOAEL) for de kritiske effektene av stoffet Velge den laveste kritiske NOAEL-verdien og benytte den i risikovurderingen av stoffet Eksponering av ulike befolkningsgrupper (høyt eksponerte, følsomme grupper): målte og beregnede eksponeringsverdier Gjøre risikovurdering for yrkeseksponerte, forbrukere og personer som eksponeres indirekte fra miljøet Beregne sikkerhetsmarginer (Margins Of Safety (MOS)) Beregne (u)sikkerhet forbundet med NOAEL-verdiene Vurdere MOS-verdier opp mot NOAEL-verdier og (u)sikkerhetsfaktorer Når det er påvist artsspesifikke toksisitetsmekanismer som ikke anses relevante hos mennesker MOS = N(L)OAEL Eksponeringsdose Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 27 Metoder: akutt, irritasjon/etsing og gjentatt eksponering - 28 Eksempler på (u)sikkerhetsfaktorer Variabilitet mellom arter: 10 (TK 3,16; TD 3,16) Interindividuell variabilitet: 10 (TK 4; TD 2,5) Forskjeller i eksponering (rute, varighet, mv): 2-7 Dose- respons: 3 (LOAEL NOAEL) Pålitlighet av database: 1-10 Sikkerhetsfaktorer benyttes ofte til å beregne minimal MOS values. Lavere MOS-verdier ved yrkeseksponering tolereres. Eksponering indirekte via miljøet eller for spesielt sensitive befolkningsgrupper vil kunne kreve høyere MOSverdier - konklusjoner På bakgrunn av MOS-verdier (MOS vs minimal MOS) og eller kvalitativ vurdering av risiko for skadevirkninger å komme frem til en eller flere av følgende konklusjoner (eksisterende kjemikalier): (i) Det er behov for ytterligere informasjon og/eller testing (ii) Det er på dette tidspunkt ikke behov for ytterligere informasjon og/eller testing og det er ikke behov for ytterligere risikoreduserende tiltak utover de som benyttes i dag (iii) Det er et behov for å redusere risiko; risikoreduserende tiltak som allerede benyttes skal tas med i vurderingen The end