EnVision FLEX, High ph, (Link)

EnVision FLEX, High ph, (Link) Kode K8000 5. utgave Settet inneholder nok reagenser til 400-600 prøver. For Autostainer Link-instrumenter. Alternative reagenser Kode Produktnavn Tester K8004 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 200-430 K8005 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) 200-430 K8006 EnVision FLEX Antibody Diluent 400-600 K8007 EnVision FLEX Wash Buffer (20x) K8008 EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) 400-600 K8009 EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER), (Link) 130-200 K8021 EnVision FLEX+ Mouse (LINKER), (Link) 130-200 Andre alternativer K8020 FLEX IHC Microscope Slides 500 (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.1/11

Innholdsfortegnelse Side Tiltenkt bruk... 3 Sammendrag og forklaring... 3 Reagenser... 4 A. Materialer som følger med... 4 B. Materialer som er nødvendige, men som ikke følger med... 4 C. Alternative reagenser... 5 Forholdsregler... 5 Oppbevaring... 7 Klargjøring av reagenser... 7 Prøvetaking og -klargjøring... 7 Prosedyre... 8 A. Forbehandlingsprosedyre... 8 B. Fargingsprosedyre... 9 Kvalitetskontroll... 10 Tolkning av resultatene... 10 Begrensninger... 10 Symbolforklaring... 11 (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.2/11

NORSK Tiltenkt bruk Til in vitro-diagnostisk bruk. Dako EnVision FLEX deteksjonssystem er beregnet for bruk innen immunhistokjemi sammen med Autostainer Link-instrumenter. Systemet påviser primære antistoffer fra mus og kanin, og reaksjonen visualiseres av EnVision FLEX DAB+ Chromogen. Ved bruk sammen med EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) (kode K8009) eller EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (kode K8021) kan signalforsterkning av primære antistoffer fra henholdsvis kanin eller mus, oppnås. EnVision FLEX-reagenser er beregnet for bruk på formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Sammendrag og forklaring Dako EnVision FLEX deteksjonssystem er utformet til å være et fleksibelt system, og gir en optimal farging på Autostainer Link-instrumenter ved bruk av protokollen som anbefales i dette pakningsvedlegget. Før farging skal formalinfikserte, parafin-innstøpte vevssnitt utsettes for avparafinisering og hydrering etterfulgt av varmeindusert epitopavmaskering (HIER) ved bruk av målavmaskeringsmetoden som er spesifisert i pakningsvedlegget til det primære antistoffet. Vennligst se også prosedyreavsnittet for 3-i-1 prøveklargjøring. Kode K8000 inkluderer EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM828). Alternativt anbefales EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (kode K8004) eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kode K8005). Noen primære antistoffer krever enzymatisk forhåndsbehandling av vev for optimal farging i stedet for HIER. Endogen peroksidase skal blokkeres med EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (SM801) som er inkludert i settet. Takket være en effektiv vaskeprosedyre og tilstedeværelsen av stabiliserende proteiner i Dako-reagensene, er det ikke nødvendig med ekstra blokkeringstrinn for å redusere ikkespesifikk bakgrunnsfarging. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (DM831) som er inkludert i settet eller er tilgjengelig som en alternativ reagens (kode K8007), anbefales. Primære antistoffer leveres ikke med settet. Vi anbefaler bruk av Dako FLEX bruksklare primærantistoffer eller Dako konsentrerte primærantistoffer. EnVision FLEX Antibody Diluent (kode K8006) anbefales til fortynningen av Dako konsentrerte primærantistoffer. EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) (kode K8009) kan brukes for å oppnå en optimal signalforsterkning av primærantistoffer fra kanin. For signalforsterkning ved bruk av primærantistoffer fra mus, kan det brukes EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (kode K8021 eller inkludert i kode K8002). Som en veiledning: EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) gir 2 3-ganget signalforsterkning, og EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) gir 4 5-ganget signalforsterkning. Dako EnVision FLEX /HRP Detection Reagent (SM802) i settet består av en dekstranstamme som et stort antall peroksidasemolekyler (HRP) og sekundærantistoffmolekyler har koblet seg til. En unik kjemi brukes til koblingsreaksjonen, som gjør det mulig med binding av inntil 100 HRP-molekyler og inntil 20 antistoffmolekyler per stamme. Substratsystemet i settet består av to komponenter: EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM827), en konsentrert diaminobenzidinløsning (DAB) og EnVision FLEX Substrate Buffer (SM803) som inneholder hydrogenperoksid. Før bruk må EnVision FLEX DAB+ Chromogen fortynnes i EnVision FLEX Substrate Buffer. Substratsystemet gir et kontrastrikt, brunt sluttprodukt på stedet for målantigenet. EnVision FLEX Hematoxylin (kode K8008) anbefales for kontrastfarging. Reagensen gir en klar blåfarging av cellekjernen. De fargede vedsnittene kan monteres enten med vannholdig eller organisk løsemiddelbasert monteringsmiddel. (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.3/11

Reagenser A. Materialer som følger med SM801 SM802 DM827 SM803 DM828 DM831 EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent 3 x 40 ml, bruksklar Fosfatbuffer som inneholder hydrogenperoksid, 15 mmol/l NaN 3 og rengjøringsmiddel. EnVision FLEX /HRP 3 x 40 ml, bruksklar Dekstran koblet med peroksidasemolekyler og sekundærantistoffmolekyler fra geit mot immunoglobuliner fra kanin og mus. I bufret løsning som inneholder stabiliserende protein og konserveringsmiddel. EnVision FLEX DAB+ Chromogen 3 x 3 ml 3,3'-diaminobenzidintetrahydroklorid i organisk løsemiddel. Fargen på denne reagensen kan variere fra mørk fiolett til fargeløs uten at dette har noen påvirkning på settets ytelse. EnVision FLEX Substrate Buffer 12 x 20 ml Bufret løsning som inneholder hydrogenperoksid og konserveringsmiddel. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 9 x 30 ml, 50x konsentrert Tris/EDTA-buffer, ph 9 EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 4 x 1 l, 20x konsentrert Tris-bufret saltvannsløsning som inneholder Tween 20, ph 7,6 (±0,1). B. Materialer som er nødvendige, men som ikke følger med Autostainer Link-instrument Dako PT Link Dako Proteinase K, bruksklar (ved behov) Dako FLEX bruksklare primærantistoffer eller riktig fortynnede konsentrerte primærantistoffer fra kanin eller mus fra Dako Dako FLEX Ready-to-Use Rabbit eller Mouse Universal Negative Control eller egnet negativ kontrollreagens for primærantistoffet Dako instrumenteringstilbehør Objektglass til mikroskop, f.eks. FLEX IHC Microscope Slides Generelle laboratoriumreagenser for avparafinisering av parafininnstøpte vevssnitt Monteringsmiddel (basert på vannholdig eller organisk løsemiddel) og dekkglass (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.4/11

C. Alternative reagenser K8004 DM828 K8005 DM829 K8006 DM830 K8007 DM831 K8008 SM806 K8009 SM805 K8021 SM804 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 3 x 30 ml, 50x konsentrert Tris/EDTA-buffer, ph 9 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) 3 x 30 ml, 50x konsentrert Citratbuffer, ph 6,1 EnVision FLEX Antibody Diluent 120 ml, bruksklar Tris-buffer, ph 7,2, som inneholder 15 mmol/l NaN 3 og protein. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 1 l, 20x konsentrert Tris-bufret saltvannsløsning som inneholder Tween 20, ph 7,6 (±0,1). EnVision FLEX Hematoxylin 3 x 45 ml, bruksklar Vannholdig løsning av hematoksylin. EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) 40 ml, bruksklar Bufret løsning som inneholder stabiliserende protein og et antimikrobielt middel. Inneholder reagens som er tilstrekkelig til 130 200 tester, basert på bruk av 200 300 µl per test. EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) 40 ml, bruksklar Bufret løsning som inneholder stabiliserende protein og et antimikrobielt middel. Inneholder reagens som er tilstrekkelig til 130-200 tester, basert på bruk av 200 300 µl per test. Forholdsregler 1. For profesjonelle brukere. 2. EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) og EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) inneholder stoffer som stammer fra dyr, og det kan ikke utelukkes at spormengder av humane stoffer kan være til stede på grunn av produksjonsprosedyrene. Riktig håndtering bør brukes, i likhet med alle andre produkter som er utvunnet fra biologiske kilder. 3. Ikke utsett EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX Substrate Buffer, EnVision FLEX DAB+ Chromogen, EnVision FLEX Substrate Working Solution eller EnVision FLEX Hematoxylin for sterkt lys i løpet av prosedyren. (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.5/11

4. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) og EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) inneholder 5-<10% Nonoxinol: Advarsel H319 Gir alvorlig øyeirritasjon. H411 Giftig, med langtidsvirkning, for liv i vann. P280 Bruk vernebriller eller ansiktsvern. P273 Unngå utslipp til miljøet. P264 Vask hendene grundig etter håndtering. P305 + P351 + P338 VED KONTAKT MED ØYNENE: Skyll forsiktig med vann i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser dersom dette enkelt lar seg gjøre. Fortsett skyllingen. P337 + P313 P501 Ved vedvarende øyeirritasjon: Søk legehjelp. Disponer innholdet og emballasje i henhold til lokale, regionale, nasjonale og internasjonale forskrifter. 5. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) inneholder 10-30% 2-Amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3- diol hydrochloride: Advarsel H319 Gir alvorlig øyeirritasjon. H315 Irriterer huden. P280 Bruk vernehansker. Bruk vernebriller eller ansiktsvern. Bruk verneklær. P264 Vask hendene grundig etter håndtering. P302 + P352 + VED HUDKONTAKT: Vask med mye vann. Tilsølte klær må fjernes. Tilsølte P362-2 + P363 klær må vaskes før de brukes på nytt. P332 + P313 Ved hudirritasjon: Søk legehjelp. P305 + P351 + VED KONTAKT MED ØYNENE: Skyll forsiktig med vann i flere minutter. P338 Fjern eventuelle kontaktlinser dersom dette enkelt lar seg gjøre. Fortsett skyllingen. P337 + P313 Ved vedvarende øyeirritasjon: Søk legehjelp. 6. For EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent er et sikkerhetsdatablad tilgjengelig på anmodning for profesjonelle brukere. 7. EnVision FLEX DAB+ Chromogen inneholder 1 5 % 3,3 -diaminobenzidintetrahydroklorid og er merket med: Fare H350 H341 P201 P202 P280 P308 + P313 P405 P501 Kan forårsake kreft. Mistenkes for å kunne forårsake genetiske skader. Innhent særskilt instruks før bruk. Skal ikke håndteres før alle advarsler er lest og oppfattet. Bruk vernehansker. Bruk vernebriller eller ansiktsvern. Bruk verneklær. Ved eksponering eller mistanke om eksponering: Søk legehjelp. Oppbevares innelåst. Disponer innholdet og emballasje i henhold til lokale, regionale, nasjonale og internasjonale forskrifter. 8. EnVision FLEX Antibody Diluent (kode K8006) inneholder natriumazid (NaN 3 ), en svært giftig kjemikalie i ren form. Selv om det ikke klassifiseres som farlig ved produktkonsentrasjonene, kan natriumazid reagere med bly- og kopperrør og danne svært eksplosive ansamlinger av metallazider. Ved avhending, skyll rikelig med vann for å forhindre ansamling av metallazid i rørene. 9. Bruk egnet personlig verneutstyr for å unngå kontakt med øyne og hud. 10. Ubrukt løsning skal avhendes i henhold til lokale, regionale og nasjonale forskrifter. (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.6/11

Oppbevaring Oppbevar reagensene EnVision FLEX og EnVision FLEX+ ved 2 8 C. Oppbevar EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX /HRP og EnVision FLEX Substrate Buffer på et mørkt sted ved 2 8 C. Oppbevar EnVision FLEX Hematoxylin (kode K8008) på et mørkt sted ved romtemperatur. Skal ikke brukes etter utløpsdatoen som er stemplet på flaskene. Hvis reagensene oppbevares under andre forhold enn de som er spesifisert, må forholdene verifiseres av brukeren. Den klargjorte Substrate Working Solution skal oppbevares på et mørkt sted ved 2 8 C og brukes innen 5 dager. Hvis det observeres uventet farging som ikke kan forklares med variasjoner i laboratorieprosedyrer, og det er mistanke om at det er et problem med produktet, ta kontakt med Dakos tekniske avdeling. Klargjøring av reagenser A.1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM828, kode K8004) Tynn ut tilstrekkelig mengde EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 1:50 i destillert eller avionisert vann for fargebehandlingen som er planlagt. Hvis Dako PT Link brukes til forhåndsbehandlingen, kan fortynningen utføres ved å tømme innholdet i flasken med Target Retrieval Solution (50x) på Dako PT Link-beholderen og tilføre destillert eller avionisert vann til den merkede linjen (Fill Line). Ubrukt fortynnet løsning kan lagres ved 2 8 C i én måned. Kast løsningen om den virker uklar. Når den blir brukt i PT Link i 3-i-1 prøveklargjøringsprosedyre, kan den fortynnede løsningen brukes 3 ganger i løpet av 5 dager, hvis den oppbevares ved romtemperatur. A.2 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (DM829, kode K8005) Tynn ut tilstrekkelig mengde EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) 1:50 i destillert eller avionisert vann for fargebehandlingen som er planlagt. Hvis Dako PT Link brukes til forhåndsbehandlingen, kan fortynningen utføres ved å tømme innholdet i flasken med Target Retrieval Solution (50x) på Dako PT Link-beholderen og tilføre destillert eller avionisert vann til den merkede linjen (Fill Line). Ubrukt fortynnet løsning kan lagres ved 2 8 C i én måned. Kast løsningen om den virker uklar. Når den blir brukt i PT Link i 3-i-1 prøveklargjøringsprosedyre, kan den fortynnede løsningen brukes 3 ganger i løpet av 5 dager, hvis den oppbevares ved romtemperatur. A.3 EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (DM831, kode K8007) Tynn ut tilstrekkelig mengde EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 1:20 i destillert eller avionisert vann for fargebehandlingen som er planlagt. Fortynn ved å tilføre den konsentrerte Wash Buffer til en forhåndsmålt mengde destillert eller avionisert vann for å minimere skummingen. Rør forsiktig inntil den fortynnede løsningen synes homogen. Ubrukt fortynnet løsning kan lagres ved 2 8 C i én måned. Kast løsningen om den virker uklar. Når den blir brukt i PT Link i 3-i-1 prøveklargjøringsprosedyre, kan den fortynnede løsningen brukes 3 ganger i løpet av 5 dager, hvis den oppbevares ved romtemperatur. A.4 EnVision FLEX Substrate Working Solution EnVision FLEX Substrate Working Solution som inneholder DAB klargjøres ved å blande den grundig med 1 dråpe EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM827) per 1 ml EnVision FLEX Substrate Buffer (SM803). Bruk EnVision FLEX Substrate Working Solution innen 5 dager (oppbevares på et mørkt sted ved 2 8 C). Prøvetaking og -klargjøring Prøvene skal være formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Fikseringstid er avhengig av fiksativ og vevstype/tykkelse. For eksempel skal vevsblokker med en tykkelse på 3 4 mm fikseres i nøytralbufret formalin i 18 24 timer. Den optimale tykkelsen på parafininnstøpte snitt er omtrent 4 µm. Prøvene skal monteres på objektglass for mikroskop, f.eks. FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020). Snittene skal monteres på objektglassene så flate og rynkefri som mulig. For mange rynker vil påvirke fargingsresultatene. (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.7/11

MERK: Objektglassene for mikroskopet må ha en bredde som egner seg for Autostainer Linkinstrumentet. Vennligst se brukerhåndboken for det enkelte Dako-instrumentet for definisjon av brukbare objektglass for mikroskop. Parafinsnitt skal monteres fra et forhåndsvarmet vannbad som inneholder destillert eller avionisert vann. Vannbadet skal ikke inneholde noen additiver (slik som gelatin, poly-l-lysin osv.). Snitt skal tørkes ved oppvarming, generelt ved en temperatur på maksimalt 60 C i inntil 60 minutter. For å sikre riktig feste av snittene på objektglassene, er det viktig å tømme av vannet fra undersiden av snittene før ovnstørkingen. Prosedyre Autostainer Link-instrumenter bruker teknikker som er basert på ulike prinsipper for å oppnå et optimalt fargingsresultat. Før kjøring av protokoller på Autostainer Link-instrumentet, vennligst les nøye gjennom brukerhåndboken for det spesielle Dako-instrumentet. For å kunne sikre reproduserbar epitopavmaskering, anbefales det alltid å laste objektglassholderen fullstendig med objektglass. Dette sikrer en identisk oppvarming av snittene i hver omgang. A. Forbehandlingsprosedyre Anbefalt klargjøringsprosedyre for 3-i-1 prøve med PT Link: Avparafinisering, rehydrering og varmeindusert epitopavmaskering (HIER) kan utføres på formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt ved bruk av 3-i-1 prøveklaringjøringsprosedyren: 1. Fremstill en arbeidsløsning ved å fortynne EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x)-konsentratet 1:50 i destillert eller avionisert vann. 2. Fyll PT Link-beholdere med tilstrekkelig mengde (1,5 l) arbeidsløsning for å dekke vevssnittene. 3. Still inn PT Link til å forvarme løsningen til 65 C. 4. Senk de monterte, formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnittene ned i den forvarmede EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbeidsløsning) i PT Link-beholdere, og inkuber i 20 minutter ved 97 C. 5. La snittene nedkjøles i PT Link til 65 C. 6. Fjern alle Autostainer-objektglasstativer med objektglassene fra PT Link-tanken, og dypp glassene umiddelbart i et glass/en beholder (f.eks. PT Link Rinse Station, kode PT109) med fortynnet, romtemperert EnVision FLEX Wash Buffer (20x). 7. La objektglassene ligge i den fortynnede, romtempererte EnVision FLEX Wash Buffer (20x) i 1 5 minutter. 8. Plasser objektglassene på et Autostainer Link-instrument, og fortsett med fargingen. Snittene bør ikke tørke ut under behandlingen eller under den immunhistokjemiske fargingsprosedyren. 9. Etter farging anbefales det å utføre dehydrering, klarning og permanent montering. MERK: Når den blir brukt i PT Link i 3-i-1 prøveklargjøringsprosedyre, kan den fortynnede Target Retrieval Solution og den fortynnede Wash Buffer brukes 3 ganger i løpet av 5 dager, hvis de oppbevares ved romtemperatur. HIER-prosedyre med PT Link: Etter avparafinisering og hydrering til buffer (vann) skal vevssnittene gjennomgå varmeindusert epitopavmaskering (HIER): 1. Fremstill en arbeidsløsning ved å fortynne EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x)- konsentratet 1:50 i destillert eller avionisert vann. 2. Fyll PT Link-beholdere med tilstrekkelig mengde (1,5 l) arbeidsløsning for å dekke vevssnittene. 3. Still inn PT Link til å forvarme løsningen til 65 C. 4. Avparafiniser og rehydrer manuelt vevssnitt som er montert på objektglass. 5. Senk de romtempererte vevssnittene ned i den forvarmede EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbeidsløsning), og inkuber i 20 minutter ved 97 C. 6. La snittene nedkjøles i PT Link til 65 C. (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.8/11

7. Fjern alle objektglasstativer fra PT Link-beholderen, og dypp glassene umiddelbart i et glass/en beholder (f.eks. PT Link Rinse Station, kode PT109) med fortynnet, romtemperert EnVision FLEX Wash Buffer (20x). 8. La objektglassene ligge i den fortynnede, romtempererte EnVision FLEX Wash Buffer (20x) i 1 5 minutter. 9. Plasser objektglassene på et Autostainer Link-instrument, og fortsett med fargingen. Snittene bør ikke tørke ut under behandlingen eller under den immunhistokjemiske fargingsprosedyren. 10. Etter fargingen skal objektglassene monteres ved bruk av et vannholdig eller permanent monteringsmiddel. MERK: Når den blir brukt i PT Link til HIER-prosedyren, kan den fortynnede Target Retrieval Solution og den fortynnede Wash Buffer brukes 3 ganger i løpet av 5 dager, hvis de oppbevares ved romtemperatur. HIER-prosedyre med Coplin-glass: Etter avparafinisering og hydrering til buffer (vann) skal vevssnittene gjennomgå varmeindusert epitopavmaskering (HIER): 1. Plasser fargingsglassene som inneholder fortynnet EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x) i vannbad. 2. Varm opp vannbad og glass som er fylt med EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbeidsløsning) til 95 99 C. Dekk til glassene me d lokk for å stabilisere temperaturen og unngå fordampning. 3. Senk de romtempererte snittene i den forvarmede EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbeidsløsning) i fargingsglassene. 4. Bring temperaturen på vannbadet og EnVision FLEX Target Retrieval Solution tilbake til 95 99 C. Inkuber i 20 ( ±1) minutter ved 95 99 C. 5. Ta ut hele glasset med objektglassene fra vannbadet. La objektglassene nedkjøles i EnVision FLEX Target Retrieval Solution i 20 (±1) minutter ved romtemperatur. 6. Hell EnVision FLEX Target Retrieval Solution i en annen beholder, og skyll snittene med fortynnet, romtemperert EnVision FLEX Wash Buffer (20x) i 1 5 minutter. 7. Plasser stativet med de skyllede snittene på et Autostainer Link-instrument. Begynn umiddelbart den forhåndsprogrammerte fargingskjøringen. MERK: Når den blir brukt i Coplin-glass til HIER-prosedyren, kan den fortynnede Target Retrieval Solution og den fortynnede Wash Buffer brukes kun 1 gang (engangsbruk). Noen epitoper tåler ikke HIER, og noen krever enzymatisk forbehandling. Vennligst se pakningsvedlegget for det enkelte Dako primærantistoffet. Vevssnittene bør ikke tørke ut under behandlingen eller under påfølgende immunhistokjemiske fargingsprosedyre. Det anbefales å bruke FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020) for bedre adhesjon av vevssnittene til objektglassene. B. Fargingsprosedyre Dako FLEX bruksklare primærantistoffer kan brukes med Dako EnVision FLEX Detection System, påført på formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. En fortynningsveiledning for Dako konsentrerte primærantistoffer finnes i pakningsvedlegget til det konsentrerte primærantistoffet. De konsentrerte primærantistoffene skal fortynnes i EnVision FLEX Antibody Diluent (DM830, kode K8006). Fargingstrinnene og de anbefalte inkubasjonstidene er forhåndsprogrammert i Autostainer Linkprogramvaren som følgende visualiseringssystemprotokoller: FLEX og FLEX 2x5 DAB (FLEX-protokoller) FLEX+ Mouse og FLEX+ Mouse 2x5 DAB (FLEX+ Mouse (LINKER)-protokoller) FLEX+ Rabbit og FLEX+ Rabbit 2x5 DAB (FLEX+ Rabbit (LINKER)-protokoller) (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.9/11

Det anbefalte reagenspåføringsvolumet er 1 x 200 µl eller 2 x 150 µl per objektglass. Hvis protokollene ikke er tilgjengelige på Autostainer Link-instrumentet som brukes, ta kontakt med Dakos tekniske avdeling. Optimale inkubasjonstider for primærantistoff og EnVision FLEX /HRP er avhengige av påført primærantistoff. Vennligst se pakningsvedlegget for det enkelte Dako primærantistoffet. Brukeren må verifisere den brukte protokollen. Når fargingsprosedyren er fullført, må prøvene monteres. Det anbefales å utføre dehydrering, klaring og permanent montering når objektglassene er behandlet med 3-i-1 prøveklargjøringsprosedyren. Objektglass som er behandlet med HIER-prosedyren kan monteres ved bruk av et vannholdig eller permanent monteringsmiddel. For vannholdig montering anbefales monteringsmidler, slik som f.eks. Dako Glycergel Mounting Medium, kode C0563 eller Faramount Aqueous Mounting Medium kode S3025. Kvalitetskontroll Hver fargingskjøring skal inkludere en kjent positiv kontrollprøve for å sikre riktig ytelse av alle de brukte reagensene. Hvis den positive kontrollprøven ikke viser positiv farging, skal merkingen av testprøvene anses som ugyldig. En negativ kontrollreagens skal brukes sammen med hver prøve for å identifisere enhver ikke-spesifikk farging. Hvis en ikke-spesifikk farging ikke klart kan differensieres fra den spesifikke fargingen, skal merkingen av testprøven betraktes som ugyldig. Tolkning av resultatene Substrate Working Solution, som inneholder diaminobenzidin, gir en brun farge på stedet for målantigenet som gjenkjennes av primærantistoffet. Den brune fargen skal være til stede på den positive kontrollprøven ved det forventede stedet for målantigenet. Hvis det finnes ikke-spesifikk farging, vil denne gjenkjennes som en heller diffus, brun farging på objektglassene som er behandlet med den negative kontrollreagensen. Cellekjernen vil farges blå av hematoksylinkontrastfargen. Begrensninger 1. Kun for automatisk bruk på Autostainer Link-instrumenter. Ved gjennomføring av manuelle farginger, må den optimale prosedyren bestemmes og verifiseres av brukeren, med mindre annet er spesifisert i pakningsvedlegget for det spesifikke Dako primærantistoffet. 2. Kun for bruk på formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Ved bruk av frosne snitt eller celleutstryk, må den optimale prosedyren bestemmes og verifiseres av brukeren, med mindre annet er spesifisert i pakningsvedlegget for det spesifikke Dako primærantistoffet. Endringer i prosedyren kan ha innvirkning på antallet tester som leveres med settet. (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.10/11

Symbolforklaring Ka talog nummer Temperaturbe gren sning Partikode GH S-fa resymbol (se avsnittet om forholdsregler) In vitro-diag nostisk medisinsk utstyr Oppb evares mørkt Brukes før GH S-fa resymbol (se avsnittet om forholdsregler) Se bruksanvisninger Inneholder nok til <N> teste r Produsent Dako EnVision -systemene dekkes av den amerikanske patenten 5.543.332 og den europeiske patenten 594.772. Produsent: Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Danmark Tlf. +45 44 85 95 00 Faks.+45 44 85 95 95 (128149-002) P04113NO_01_K8000/2015.04 p.11/11