Validering og verifisering av metoder innen kjemisk prøving. Akkrediteringsdagen 2. desember 2015

Transkript

1 Validering og verifisering av metoder innen kjemisk prøving Akkrediteringsdagen 2. desember 2015

2 Temaer som vil berøres Forskjellen på verifisering og validering av kjemiske analysemetoder. Hvorfor, når og hvordan gjennomføre en validering evt. verifisering? Registrerte avvik ved bedømming av verifisering eller valideringer. Praktisk eksempel. Side 2

3 Validering og verifisering hva er forskjellen? Verifisering Verifisere fra latin versus betyr å vise riktigheten av. Vise at en metode som er validert av andre, f.eks. en standardmetode, fungerer i eget laboratorium. En verifisering forutsetter at metoden «kopieres» uten noen endringer. Validering Validere fra italiensk validare som betyr å gjøre gyldig, bekrefte gyldigheten av. ISO 17025: en bekreftelse fra en undersøkelse og fremskaffing av objektivt bevis på at de spesielle kravene for en bestemt anvendelse tilfredsstilles. Vise at en metode eller endringer i en metode fungerer etter forutsetninger gitt av laboratoriet selv eller av andre, f.eks. kunder, myndigheter etc. Side 3

4 Verifisering Hvorfor skal vi verifisere? Vise riktigheten av en validert metode i egen lab Bruke eget utstyr Eget personale Egne laboratoriefasiliteter (temperaturforhold, lysforhold, instrumentering etc.) Når skal vi verifisere? Ved innføring av en standardisert metode Ved bytte av instrumentering Ved flytting av instrumentering Kan brukes ved opplæring av ansatte Side 4

5 Hvordan verifisere? Utarbeid en plan hvor metoden settes opp identisk med referansemetoden. Bestem hvilke elementer som skal verifiseres f.eks. Måleområde Måleusikkerhet Andre elementer gitt i referansemetoden Punkter som robusthet og selektivitet forutsettes ofte som bestemt i forbindelse med standardiseringen. Gjennomfør prøvingen etter den oppsatte planen. Side 5

6 Hvordan verifisere? Sammenstill resultatene og vurder dem opp mot resultatene gitt i referansemetoden. Konkluder om metoden fungerer i eget laboratorium (like gode eller bedre resultater enn referansemetoden). Dokumenteres i en rapport. Evt. dokumentert opplæring av personale. Side 6

7 Hvorfor validere og når? Hvorfor? Vi må kunne vise at analysemetoden har den ytelsen som er nødvendig i forhold til de kravene som er stilt. Når? Ved modifikasjoner av allerede etablerte metoder Ved modifikasjoner av deler av standardiserte metoder Ved innføring av ikke standardiserte metoder Side 7

8 Hvordan validere? Identifisere ytelsesbehovet og ytelsesevnen til metoden. Hvorfor skal vi ha metoden? Hvilke forutsetninger har vi? Kundens behov evt. krav Hva er det mulig å forvente av metoden? Forholdene ved laboratoriet som personale, utstyr, miljøforhold etc. Side 8

9 Hvordan validere? Utarbeid en valideringsplan basert på det definerte ytelsesbehovet Identifisere hvilke elementer som skal valideres Måleområde Spesifisitet Linearitet evt. annen type kalibreringskurve Presisjon Nøyaktighet Følsomhet Robusthet Deteksjonsgrense Planen settes opp slik at det blir flest mulig svar på færrest mulige forsøk. Er det noen deler av valideringen som kan settes opp slik at flere spørsmål kan besvares gjennom samme forsøk? Side 9

10 Hvordan validere? Reelle prøver i forhold til syntetiske løsninger Matrikseffekter Eventuelle endringer i planen (dokumenteres) Sammenstille resultater Konkludere og rapportere om metodens ytelse i forhold til kravene som ble stilt. Utarbeide metodebeskrivelse Evt. opplæring av aktuelt personell Side 10

11 Avvik som ofte registreres ved bedømminger Manglende planlegging/valideringsplan Hvilke krav skal stilles til metoden? Hvilke forutsetninger har vi Instrumenter Laboratoriefasiliteter Personellressurser Hvilke forsøk må vi gjennomføre for å få svarene vi trenger? Side 11

12 Avvik som ofte registreres ved bedømminger Hva er måleområdet? Hvilken type kalibreringskurve? Vekting særlig aktuelt i kromatografiske metoder. Krav til kalibreringskurven. Hvor robust er metoden? Hvor er de kritiske punktene? Hvor mye tåler metoden før ytelsen ikke er som forventet? Side 12

13 Avvik som ofte registreres ved bedømminger Bidragene til usikkerheten Usikkerhet i hele måleområdet Multimetoder: Manglende validering for alle enkeltkomponenter som skal bestemmes evt. en dokumentert vurdering av at flere enkeltkomponenter kan behandles på samme måte. Side 13

14 Avvik som ofte registreres ved bedømminger Metodeforskriften Mangler detaljer som gjør det mulig å gjennomføre prøvingen uten å kunne teknikken godt fra tidligere. Manglende SLP deltakelse Ikke testet ut på alle aktuelle matrikser Side 14

15 Praktisk eksempel Validering av PAH i vann Utarbeid en valideringsplan Hvorfor skal vi ha metoden? Hvilke typer vann skal metoden valideres for? Hvilke enkeltkomponenter skal metoden valideres for? Hva slags instrumentering skal vi bruke? Instrumentelle betingelser (som et utgangspunkt) Er det spesifikke kundekrav? Hvilke egne krav stilles til metoden? Er det noen kunnskap fra tidligere vi kan trekke veksler på? Dette beskrives i tilfelle for å dokumentere tidligere kunnskap/erfaringer med metoden. Hvilke parametre skal valideres evt. hvorfor ikke? Tidsperspektiv Ansvar for gjennomføringen Side 15

16 Vurdering av hvilke valideringsparametre som må bestemmes Valideringsparameter Nedre måleområde Bestemmes ja/nei Ja Begrunnelse Nedre måleområde må bestemmes for alle enkeltkomponenter, da det vil være aktuelt å analysere så lave nivåer som mulig. Nivået må antas å være forskjellig for ulike vanntyper. LOD/LOQ Ja Dette er sentrale begreper ved fastsettelsen av nedre måleområde (se over). Øvre måleområde Presisjon (repetebarhet) Nei Ja Vi har allerede en metode for PAH i sediment. Det antas at analytt i ekstrakt vil ha samme egenskaper i det øvre måleområde for PAH i vann som vi har i ekstrakt fra PAH i sediment, og at kalibreringskurven kan etableres på samme måte. Utføres, men forventes å ligge på samme nivå eller bedre enn for presisjon PAH i sedimenter Side 16

17 Valideringsparametre forts. Valideringsparameter Presisjon (Reproduserbarhet) Bestemmes Ja/nei Ja Begrunnelse In-house reproduserbarhet ansees som sentral bl.a. ved fastsettelse av måleusikkerheten Riktighet Ja En veldig sentral parameter. Tidligere tester på ekstrakter for PAH i sedimenter gir en pekepinn på hva som kan forventes, men må bestemmes for ulike vanntyper. Nøyaktighet Ja En sentral parameter. Vi vet at den kromatografiske delen av analysen fungerer bra (fra PAH i sedimenter), men har ikke erfaring med ekstraksjonstrinnet. Selektivitet Nei Det er tidligere validert for PAH i sedimenter, og det antas ikke å være mer krevende kromatogrammer for PAH i vann enn for PAH i sedimenter. Deteksjon ved massespektrometri er spesifikk. Tilsvarende settes opp for øvrige valideringsparametre Side 17

18 Valideringsparametre forts. Kilde: NOKLUS Side 18

19 Valideringsparametre, fremdrift og krav. Valideringsparameter Nedre måleområde Rentvann Nedre måleområde Sigevann Krav Tester som bør gjennomføres Tidsperiode// ansvarlig 5 ng/l for hver enkeltkomponent 100 ng/l for hver enkeltkomponent Baseres på bestemmelsen av LOD/LOQ (se under) samt kunnskap om interferenser. Forsøk gjennomføres med sigevann uten forventet innhold av PAH. 6 replikater. STD av signalene i området for hver enkelt komponent bestemmes. LOD/LOQ Se over Utføres vha blanke ekstrakter. Konsentrasjon bestemmes på 10 paralleller. Testen gjentas tre ganger på forskjellige dager. LOD = 3*STD blank, LOQ = 10*STD blank Jan 16/TS Feb 16/TS Jan 16/TS Side 19

20 Valideringsparametre, fremdrift og krav. Valideringsparameter Presisjon Repeterbarhet Presisjon Reproduserbarhet Riktighet (SLP og SRM) Krav Tester som bør utføres Tidsperiode/ ansvarlig < 10 % RSD for verdier over 10*LOQ < 15 % RSD for verdier over 10*LOQ < 20 % avvik fra sann verdi Det tillages kalibreringskontrolløsning med samme matriks som kalibreringsløsningene. To konsentrasjonsnivåer, tilsvarende 10 ng/l og 100 ng/l vann. Det benyttes 10 repeterende injeksjoner avlesninger. Testen skal gjentas minst 2 ganger over 2 forskjellige dager. Kalibreringskontrolløsningen fra repeterbarhetstesten benyttes. To konsentrasjoner. 3 replikater, gjentas 4 ganger over en periode på minst to uker. Det skal måles på minst tre replikater fra SRM. Deltakelse i SLP så fort som mulig. Tilsvarende for øvrige valideringsparametre Utføres parallelt med LOD/LOQ Mars 16/TS Mars 16/TS Side 20

21 Konklusjon og rapport Beregn resultater ut i fra forsøkene som er gjennomført. Dette kan med fordel gjøres underveis i prosessen for evt. å korrigere forsøkene underveis. Gjennomfør vurderinger i forhold til kravene som ble stilt Konkluder om metodens egnethet Etabler kontrollregime Skriv ferdig metodedokumentet Side 21

22 Relevante referanser «Trollboka» Håndbok for beregning av måleusikkerhet ved miljølaboratorier Side 22

23 Takk for oppmerksomheten Torgunn Sætre NEDRE ROMERIKE VANNVERK NEDRE ROMERIKE AVLØPSSELSKAP 1. desember 2015 Side 23