Chlamydia trachomatis-iga-pelisa medac. Norsk 498-TMB-VPN/010512

Transkript

1 Chlamydia trachomatisigapelisa medac Norsk TMBVPN/010512

2 FABRIKANT medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Fehlandtstraße 3 D20354 Hamburg DISTRIBUSJON medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Geschäftseinheit Diagnostika Theaterstraße 6 D22880 Wedel Telefon: ++49/ 4103 / Fax: ++49/ 4103 / TINGE ADDRESS Telefon: ++49/ 4103 / Fax: ++49/ 4103 / TMBVPN/010512

3 Chlamydia trachomatisigapelisa medac Enzyme immunoassay for påvisning av IgA antistoff mot Chlamydia trachomatis Cat. no.: 498TMB KUN FOR IN VITRO DIAGNOSTISK BRUK INTRODUKSJON Chlamydia er gramnegative bakterier. De har en intracellulær livs syklus i den mucosale overflate, endothelialceller, smooth muscle celler, og i følge nyere oppdagelser i visse vevs strukturer i det sentrale nervesystem. Chlamydia er avhengig av energirike fosfater i sine verts celler og er derfor energi parasitter. Slekten Chlamydia omfatter fire arter: C. pneumoniae, C. trachomatis, C. psittaci, og C. pecorum. C. pneumoniae og C. trachomatis er humane patogener. C. psittaci er patogene for mennesker og en del dyrearter. Opptil nå har, C. pecorum bare blitt isolert fra dyr. C. trachomatis er en av de mest hyppige seksuelt overførte patogener i verden. Det forårsaker infeksjoner i urogenital traktus og i øynene. Under fødsel kan C. trachomatis bli overført til barnet og forårsake neontal konjunktivitt og pneumonia. C. trachomatis er gruppert i 19 serotyper som er årsak til forsjellige kliniske manifestasjoner. Serotypene AC forårsaker endemisk trakom, en øyesykdom som kan medføre blindhet. Den berører flere hundre millioner mennesker i utviklingsland. Lymphogranuloma venereum, en tropisk seksuelt overførbar sykdom skyldes serotypene L 1 L 3. I industrialiserte land er det serotypene DK som forårsaker de fleste seksuelt overførte genitale infeksjonene. De fleste C. trachomatis infeksjoner hos kvinner er asymptomatiske. Dette resulterer i mange kroniske sykdommer. Infeksjonen starter i cervix med cervicitt som resultat. Uretritt er mindre vanlig hos kvinner. Mellom primærinfeksjonen og klinisk sykdom kan det ofte gå måneder og i noen tilfelle også år. Asymptomatisk C. trachomatis infeksjoner med kan medføre kronisk endometritits, adnexitis, periappendicitis, perihepatitis, peritonitis og reaktive arthritits. Denne arthritis form er også kjent hos menn som så kallet posturethritic reactive arthritis. 498TMBVPN/

4 Gjentatt adnexitis kan ofte medføre infertilitet. Hos menn kan asyptomatisk uretritt medføre epididymitis og prostatitis. Denne betennelsestilstanden kan påvirke mobiliteten til spermier, noe som kan gi redusert fertilitet. Peripheral C. trachomatis patogener kan påvises med høy sensitivitet og spesifisitet ved hjelp av laboratoriemetoder som ELISA, IFT, PCR, LCR. De to siste høy sensitive metodene blir bruk for å påvise patogener i sed også. Tilstedeværelse av PCR/LCR inhibitorer leder ofte til falske negative resultater. Den klassiske metoden ved å isolere patogener fra cellekultur er problematisk på grunn av toksiske substanser i sæden. Dette resulterer også i falske negative resultater. En mulighet til å overvinne disse diagnostiske svakhetene er basert på påvisning av sekretorisk IgA mot C. trachomatis i sæd væske. Den første immun responsen etter kontakt med patogenet produserer den genitale mucosa C. trachomatis spesifikt sekretorisk IgA. I forskjellige stadier manifesterer sekretorisk IgA seg bare som en immun respons som en lokalt begrenset prosess. I tillegg reflekterer påvisbart serumantistoff en allerede systemisk spredning av infeksjonen. Chlamydia inneholder felles immunodominante antigener, lik det genus spesifikke lipopolysakkaridet (LPS). For å lage arts spesifikk serologi, er C. trachomatisspesifikt immunogeniske strukturer nødvendig. Disse strukturer er lokalisert i den variable dominant av de viktigste ytre membran protein (MOMP). Hittil har mikroimmunofluorescence test (MIF) vært ansett for å være den såkalte gull standard for arts spesifikk serologi. MIF antigenene består av renset fikserte total elementær legemer. Derfor kan ikke kryssreaktivitet mellom artene utelukkes. Chlamydia trachomatispelisa medac brukes et syntetisk peptid fra den immundominante regionen av MOMP. Med dette høyt spesifikke antigen er en diskriminering av C. trachomatisspesifikt antistoff fra hele chlamydia antistoff responsen mulig. Ved infeksjoner av kronisk karakter er serologi metoder å foretrekke Her er påvisning av IgA antistoff i kombinasjon med IgG antistoff avgjørende. Serologi er også indikert som tilleggs metode i diagnosen av mistenkte perifere C. trachomatis infeksjoner og for behandlings oppfølging. 498TMBVPN/

5 TEST PRINSIPP Platen er coated med syntetisk C. trachomatisspesifikt peptid. C. trachomatisspesifikt antistoff fra prøven bides til antigenet. Peroxidasekonjugert antihuman IgA antistoff bindes til IgA antistoff (P = peroxidase). Inkubering med TMBsubstrat (*). Reaksjonen stoppes ved tilsetning av svovelsyre. Absorbsjonen leses så fotometrisk. Testens fordeler Ingen falske positive resultater forårsaket av kryssreaktivitet med andre klamydia arter. Ikke infeksiøst antigen materiale. Kjemisk definert antigen struktur. Brytbare mikrobrønn strips gir god utnyttelse av testen. 498TMBVPN/

6 KIT INNHOLD Cat. no.: 498TMB 1. MTP Mikroplate: 12 x 8 brønner (merket med CTA, med ramme og tørremiddel vakumforseglet i en aluminium pose), brytbare, Uformede, coated med C. trachomatisspesifikt, syntetisk peptid og NBCS, ferdig til bruk. 2. CONTROL Negativ kontroll: 1 flaske med 1,5 ml, humant serum, ferdig til bruk, blåfarget, inneholder NBCS, fenol, ProClin TM 300 og gentamycine sulfat. 3. CONTROL + Positiv kontroll: 1 flaske med 1,5 ml, humant serum, ferdig til bruk, blåfarget, inneholder BSA, fenol, ProClin TM 300 og gentamycine sulfat. 4. WB Vaskebuffer: 1 flaske med 100 ml, PBS/Tween (10 x), ph 7,2 7,4, inneholder ProClin TM BACDIL Prøve fortynning: 1 flaske med 110 ml, PBS/Tween/NBCS, ph 7,0 7,2, ferdig til bruk, blåfarget, inneholder ProClin TM CON Konjugat: 4 flasker med 4,5 ml i hver, geit antihuman IgA, HRPkonjugert, ferdig til bruk, gul farget, inneholder BSA, phenol, ProClin TM 300 og gentamycine sulfat. 7. TMB TMBsubstrat: 1 flaske 10 ml, ferdig til bruk. 8. STOP Stopp løsning: 2 flasker med 11 ml i hver, 0,5 M svovelsyre acid (H 2 SO 4 ), ferdig til bruk. 498TMBVPN/

7 1. OPPBEVARING OG HOLDBARHET Materiale/Reagenser Tilstand Lagring Holdbarhet Test kit uåpnet Inntil utløpsdato Mikroplate åpnet i pose 12 uker med tørremiddel Kontroller åpnet uker Vaske buffer fotynnet uker Prøve fortynning åpnet uker Konjugat åpnet uker TMBsubstrat åpnet uker Stopp løsning åpnet Inntil utløpsdato Ikke bruk reagensene etter utløpsdato. 2. UTSTYR SOM ER NØDVENDIG, MEN SOM IKKE FØLGER MED I KITET 2.1. Destillert vann (H 2 O redist.). Bruk av deionisert vann kan forstyrre test prosedyren Justerbare mikro pipetter Rene glass eller plastikk beholdere til fortynning av vaskebuffer og prøver Passende utstyr for vasking av mikroplater (eks multistepper eller ELISA vasker) Inkubator for 37 C Mikroplate leser med filtre for 450 nm og nm. 3. TILLAGING AV REAGENSER Alle kit komponenter må få romtemperatur før bruk. Beregn det nødvendige antall brønner som trengs Mikroplate Aluminium posen må forsegles helt tett igjen etter hver gang det taes ut brønner. Oppbevaring og stabilitet til brønnene er nevnt i avsnitt TMBVPN/

8 3.2. Vaskebuffer Bland en del vaskebuffer (10x) med ni deler destillert vann (f.eks 50 ml vaskebuffer (10x) med 450 ml vann). 10 ml fortynnet vaskebuffer trenges til 8 brønner. Krystaller i vaskebufferen (10x) må løses opp ved oppvarming (maks. 37 C) og/eller risting ved romtemperatur. Ikke bland test spesifikke reagenser (mikroplate, kontroller, konjugat) fra ulike kit lot nr. Prøve fortynning, vaskebuffer, TMBsubstrat og stopp løsning kan innbyrdes byttes i alle Chlamydia og MycoplasmaELISA medac. Reagenser fra andre produsenter kan ikke brukes. Gyldige og reproduserbare resultater kan bare oppnåes hvis prosedyre er fulgt nøyaktig. 4. PRØVER 4.1. Testen for serum og for sædvæske prøver. Pasientprøvene kan oppbevares i 7 dager ved 28 C. For lengre oppbevaring må prøvene fryses ved 20 C. Unngå gjentatte tining og frysing av prøvene Forbehandling av sera og sædvæske, eks. inaktivering er ikke nødvendig. Imidlertid må de ikke være kontaminert med mikroorganismer eller inneholde røde blodlegemer Sera må fortynnes 1:50 med prøve fortynning. De kan fortynnes ytterliggerer for titer bestemmelser Sæd må sentrifugeres i 15 min ved 600 xg. Supernatanten (sædvæske) er nå ferdig for videre prosessering Sædvæske må fortynnes 1:10 med prøve fortynning. 5.A. TEST PROSEDYRE 5.1 Klipp opp aluminium posen overfor zip låsen og ta ut det nødvendige antall mikroplate brønner (se 3.1.). Mikroplate brønnene er ferdig til bruk og trenger ikke å pre vaskes. 498TMBVPN/

9 5.2. Pipetter 50 µl prove fortynning til brønn A1 som blank (se 6.A.), og 50 µl av den negative kontrollen (i duplikat), positiv kontroll og de fortynnede pasient prøvene Inkuber mikroplate brønnene i 60 min (± 5 min) ved 37 (± 1 C) i et fuktighetskammer eller med brønnene forseglet med dekkfolie Etter inkubasjonen vaskes mikroplate brønnene tre ganger med 200 µl vaskebuffer per brønn. Pass på at alle brønnene fylles. Etter vaskingen bankes mikroplate brønnene mot et filter papir. Brønnene må ikke få tørke ut! Fortsett umiddelbart! 5.5. Tilsett konjugat (gul farget) til hver brønn. 50 µl konjugat må pipetteres til brønnene hvis testen gjøres manuelt. NB!: Hvis det brukes automatisk utstyr må 60 µl konjugat tilsettes hver brønn grunnet høyere fordamping i utstyrets inkuberings kammer. Egnetheten til testen for automatisering er bekreftet under evaluering av testen. Men vi anbefaler å kontrollere samsvarheten med det utstyret som laboratoriet bruker Inkuber igjen i 60 min (± 5 min) ved 37 o C (± 1 C) i et fuktighetskammer eller med brønnene forseglet med dekkfolie Etter inkuberingen vaskes brønnene igjen(se 5.4.) Tilsett 50 µl TMBsubstrate til hver brønn og inkuber i 30 min (± 2 min) ved 37 o C (± 1 C) i et fuktighetskammer eller med brønnene forseglet med dekkfolie mørkt. Positive prøver blir blå Stopp reaksjonen ved å tilsette 100 µl stopp løsning til hver brønn. Positive prøver blir gule. Vask/tørk undersiden av mikroplatebrønnene før de leses av i fotometeret og pass på at det ikke er luftbobler i brønnene. Avlesningen må gjøres innen 15 minutter etter tilsetting av stopp løsningen. o C 498TMBVPN/

10 5.B. TABELL FOR TEST PROSEDYRE Prøve fortynning Negativ kontroll Positiv kontroll Prøve Blank (A1) 50 µl Negativ kontroll 50 µl Positiv kontroll 50 µl Prøve 50 µl Inkuber i 60 min ved 37 C, vask 3 x med 200 µl vaskebuffer Konjugat 50/60 µl*) 50/60 µl*) 50/60 µl*) 50/60 µl*) Inkuber i 60 min ved 37 C, vask 3 x med 200 µl vaskebuffer TMBsubstrat 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl Inkuber i 30 min ved 37 o C mørkt Stopp løsning 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Fotometerisk avlesning ved 450 nm (ref nm) *) manuell/automatisk prosedyre (se 5.5.) 6.A. BEREGNING AV RESULTATER (VALIDERING) Avles OD verdiene ved 450 nm (referanse bølgelengde nm). Trekk OD verdien til blank (brønn A1) fra alle de andre OD verdiene. Blank OD verdien må være < 0,100. Gjennomsnitts OD verdien til de negative kontrollene må være < 0,100. OD verdien til den positive kontrollen må være > 0,800. Serum cutoff Cutoff = gjennomsnitts OD verdien til de negative kontrollene + 0,270 Grå sone = Cutoff ± 10 % 498TMBVPN/

11 Sædvæske cutoff Cutoff = Gjennomsnitt OD verdi til den negative kontrollen + 0,05 Grå sone = Cutoff ± 10 % Repeter kjøringen hvis resultatene ikke møter spesifikasjonen. 6.B. REVALUERING AV RESULTATENE 6.B.1. KVALITATIVE Resultat OD < grå sone OD til cutoff ± 10 % OD > grå sone Validering negativ usikker positiv 6.B.2. SEMIKVANTITATIVE CutoffIndex: OD _ Prøve _ OD Cutoff Validering < 0,9 negativ 0,9 1,1 usikker > 1,1 positiv Prøver med OD verdier innen gråsonen bør retestes sammen med en ny prøve tatt 14 dager senere for å se etter titer endring. Resultatene må alltid tolkes i sammen med IgG og med kliniske data og andre diagnostiske parametre. Høye konsentrasjoner av hemoglobin, bilirubin og av lipider i serum har ingen innvirkning på resultatene. 498TMBVPN/

12 6.C. SPESIFIKT IgG/IgA TOLKNING I SERUM Mulige Resultater IgG IgA / +/ + +/ +/ + Tolkning 1. IgG og IgA positiv; indikasjon på infeksjon. Ytterligere tolkning er avhengig av symptomer og titer utvikling. 2. Bare IgG positiv; indikasjon på en tidligere infeksjon. Ved klinisk mistanke om infeksjon undersøk om det er en firefoldig IgG titer økning mellom to serumprøver og retest for IgA. 3. IgG positiv, IgA i grå sonen; Muligens en begynnelse eller en avtagende infeksjon; retest IgA etter dager. 4. Bare IgG i gråsonen; tidligere infeksjon kan ikke utelukkes. I tilfelle klinisk mistanke retest IgG og IgA etter dager. 5. Bare IgA positiv; muligens et tidlig stadium av infeksjon eller enkeltstående, vedvarende IgA; retest IgA og IgG ettet dager. 6. Bare IgA i i grå sonen; muligens et tidlig stadie av infeksjon; retest IgA og IgG etter dager. 7. IgG i gråsonen, IgA positiv; muligens et tidlig stadie av infeksjon; retest IgA og IgG etter dager. 8. IgG og IgA negative; ingen serologisk indikajon på infeksjon. I tilfelle berettiget klinisk mistanke gjør, en direkte antigen test og retest IgA og IgG etter dager. Kommentarer: I tilfelle ved akutt chlamydial infeksjon kan de serologisk antistoff resultat være negativt selv om positiv klinikk og antigen påvisning. Hvis det ønskes en serologisk bekreftelse på et positivt antigen resultat eller om oppfølgings prøve er ønsket, anbefales det å teste dager etter serokonversjon. 498TMBVPN/

13 6.D. SPESIFIK IgA TOLKNING FOR SÆDVÆSKE Mulige Resultater Serum Sæd Væske Tolkning IgG IgA IgA Bare sædvæske IgA positiv; indikasjon på lokalt begrenset C. trachomatis infeksjon. 2. Serum IgA og sædvæske positiv; indikasion på en begynnende C. trachomatis spredning. 3. Bare serum IgA positiv; indikasjon på en tidlig utbredelse C. trachomatis eller et enkelt tilfelle av vedvarende IgA. 4. Serum IgG, IgA, og sædvæske IgA positiv; indikasjon på en utbredt C. trachomatis infeksjon. 5. Serum IgG og sædvæske IgA positiv; indikasjon på en utbredt C. trachomatis infeksjon. 6. Serum IgA og IgG positiv; indikasjon på en fremskreden utbredt C. trachomatis infeksjon. 7. Bare serum IgG positiv; indikasjon på en tidligere C. trachomatis infeksjon. 8. Negativ for alle antistoffer; ingen serologisk indikasjon på en C. trachomatis infeksjon. 498TMBVPN/

14 7. KARRAKTERISTISKE EGENSKAPER Vi har fått følgende karakteristiske egenskaper ved diagnostisk evaluering. 7.A. SPESIFISITET OG SENSITIVITET Sera fra barn, alder < 10 år og pasienter med serologisk bestemt (MIF) C. pneumoniae infeksjon ble målt for å avgjøre spesifisitet. Sera fra tre forskjellige pasientgrupper ble testet for avgjørelse av sensitivitet/prevalens. Pasient Gruppe Spesifisitet IgA IgG Barn < 10 år 98% (n=100) 99% (n=100) Pasienter med C. pneumoniae infeksjon (MIF positiv) 100% (n=47) 100% (n=47) STD pasienter dyrknings negativ C.trachomatispELISA Sensitivitet/Prevalens 6,2% (n=112) 25,0% (n=96) for C.trachomatis MIF 3,6% (n=112) 27,1% (n=96) STD pasienter dyrknings positive C.trachomatispELISA 24,6% (n=114) 65,1% (n=106) for C.trachomatis MIF 20,2% (n=114) 67,0% (n=106) Blod givere Artritt pasienter¹ C.trachomatispELISA C.trachomatispELISA 6,4% (n=299) 15,1% (n=299) 41,0% (n=83) 48,2% (n=83) ¹Seraene ble preselektert i henhold til positive IgG resultater i genus spesifikk Chlamydien relisa. 498TMBVPN/

15 7.B. PREVALENS For vurdering av prevalensen av C. trachomatis IgA antistoff i sæd væske og korresponderende serum prøver fra sædgivere (fertile menn) med fertilitets problemer sammenlignet. C. trachomatis IgA prevalens* asymptomatiske menn Sæd givere (n=116) menn med fertilitets problemer (n=171) Sædvæske 9,5%** 26,9%** Serum 5,2% 12,3% * Schuppe et al ** p < 0,05 Menn med fertilitets problemer Korrelasjon mellom serum IgA og sædvæske IgA Sædvæske IgA Serum IgA (12,3%) (26,9%) 171 IgA titer i serum og sædvæske korrelerer ikke (p < 0,001). 498TMBVPN/

16 7.C. PRESISJON Prøve Intraassay variasjon Prøve Interassay variasjon (n = 13) Gj.sn. SD CV (%) n Gj.sn SD CV (%) OD OD NC 0,037 0,007 18,9 21 NC 0,029 0,003 10,3 BC 0,336 0,015 4,5 21 BC 0,314 0,025 8,0 PC 1,346 0,062 4,6 21 PC 1,262 0,069 5,5 N 1 0,144 0,014 9,7 21 N 3 0,112 0,009 8,0 N 2 0,818 0,050 6,1 24 N 4 0,633 0,048 7,6 NC = negativ kontroll; BC = svak positiv kontroll (ikke inkludert i kitet); PC = positiv kontroll GENERELLE RÅD For å unngå kryss kontaminasjon ikke bland flaskene og de tilhørende korkene. Reagensene må forsegles umiddelbart etter bruk for å forhindre fordampning og mikrobiell kontaminasjon. Etter bruk må reagensene oppbevares som anbefalt for å garantere holdbarheten. Etter bruk må alle komponenter i kitet oppbevares i deres originale forpakning for å unngå blanding med andre reagenser eller lot nr. (se også 3.). HELSE OG SIKKERHETS INFORMASJON De lokale helsemyndigheters reguleringer må følges. Reagenser av human opprinnelse er testet negativt på HBsAg og på antistoff mot HIV1/2 og HCV. Men det anbefales på det sterkeste at dette materialet så vel som det som er av animalsk opprinnelse (se kit innhold) behandles som potensielt smittefarlig. KASSERING Rester av kjemikalier og reagenser er å anse som risikoavfall. Kassering skal skje i henhold til lokale eller nasjonale regler. Ta kontakt med lokal myndighet som vil gi råd om hvordan risikoavfall skal håndteres. Dato utgave: TMBVPN/

17 LITTERATUR Christiansen, G., Pedersen, L., Clausen, J.D., Birkelund, S.: Cell and molecular biology of Chlamydia. In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, September. pp. 36 (1996). DeSchreyer, A., Meheus, A.: Epidemiology of sexually transmitted diseases: The global picture. Bull. World Health Organization 68, (1990). Hoyme, U.B., Spitzbart, H.: Past and current prevalence of Chlamydia trachomatis in women in Germany. In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria 1114 September. p. 391 (1996). Keck, C., GerberSchafer, C., Clad, A., Wilhelm, C., Breckwoldt, M.: Seminal tract infections: Impact on male fertility and treatment options. Hum. Reprod. Update 4, (1998). Köhler, M., Jendro, C. (1997): Bedeutung der Persistenz von Chlamydia trachomatis im Gelenk für die Pathogenese der Chlamydieninduzierten Arthritis unter Berücksichtigung der therapeutischen Implikationen. Akt. Rheumatol. 22, (1997). Land, J.A., Evers, J.L., Goossens, J.V.: How to use chlamydia antibody testing in subfertility patients. Hum. Reprod. 13, (1998). Nickel, J.C.: Chronic Prostatitis: An infectious disease? Infect. Urol. 13, 3138 (2000). Ochsendorf, F.R., Ozdemir, K., Rabenau, H., Fenner, T., Oremek, R., Milbradt, R., Doerr, H.W.: Chlamydia trachomatis and male infertility: ChlamydiaIgA antibodies in seminal plasma are C. trachomatis specific and associated with an inflammatory response. Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 12, (1999). Paavonen, J.: Chlamydia trachomatis: A major cause of mucopurulent cervicitis and pelvic inflammatory disease in women. In: Sexually Transmitted Diseases. Advances in Diagnosis and Treatment. Curr. Probl. Dermatol. Elsner. P., Eichmann, A. (eds.). Basel, Karger, 24, (1996). Patton, D., AskienazyElbhar, M., HenrySuchet, J., Campbell, L.A., Cappucio, A., Tannous, W., Wang, S.P., Kuo, S.C.: Detection of Chlamydia trachomatis in fallopian tube tissue in women with postin 498TMBVPN/

18 fectious tubal infertility. Am. J. Obstet. Gynecol. 171, (1994). Petersen, E.E., Clad, A.: Genitale Chlamydieninfektionen. Deutsches Ärzteblatt 92, A (1995). Petersen, E.E., Clad, A., Mendel, R., Prillwitz, J., Hintz, K.: Prevalence of chlamydial infections in Germany: Screening of asymptomatic women and men by testing first void urine by ligase chain reaction (LCR). In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, 1114 September. p. 415 (1996). Saikku, P.: Diagnosis of acute and chronic Chlamydia pneumoniae infections. In: Chlamydial Infections. Orfila, J., Byrne, G.I., Chernesky, M.A., Grayston, J.T., Jones, R.B., Ridgway, G.L., Saikku, P., Schachter, J., Stamm, W.E., Stephens, R.S. (eds.). Proceedings of the Eighth International Symposium on Human Chlamydial Infections, Chateau de Montvillargenne, GouvieuxChantilly, France, 1924 June. p (1994). Schachter, J.: The intracellular life of chlamydia. Curr. Top. Microbiol. Immun. 138, (1988). Schachter, J.: Evolution of diagnostic tests for Chlamydia trachomatis infections. In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, 1114 September. pp (1996). Schuppe, H.C., Bispink, G., Peet, D.J., Propping, D.,Böttcher, M., Dettlaff, S.: The significance of antibodies against C. trachomatis in seminal plasma. IV th European Chlamydia Congress, 2000 Helsinki. Ward, M.E.: The immunobiology and immunopathology of chlamydial infections. APMIS 103, (1995). Weström, L.V.: Chlamydia and its effect on reproduction. J. Brit. Fertil. Soc. 1, 2330 (1996). Wolff, H.: The biologic significance of white blood cells in semen. Fertil. Steril. 63, (1995). Wolff, H., Neubert, U., Zebhauser, M., Bezold, G., Korting, H.C., Meurer, M.: Chlamydia trachomatis induces an inflammatory response in the male genital tract and is associated with altered semen quality. Fertil. Steril. 55, (1991). Wollenhaupt, J., Zeidler, H.: Klinik, Diagnostik und Therapie der Chlamydieninduzierten Arthritis. Akt. Rheumatol. 22, (1997). 498TMBVPN/