DiViD-prosjektet Er type 1 diabetes en virussykdom? LARS KROGVOLD FORSKNINGSGRUPPE FOR BARNE - OG UNGDOMSDIABETES OSLO UNIVERSITETSSYKEHUS

Størrelse: px

Begynne med side:

Download "DiViD-prosjektet Er type 1 diabetes en virussykdom? LARS KROGVOLD FORSKNINGSGRUPPE FOR BARNE - OG UNGDOMSDIABETES OSLO UNIVERSITETSSYKEHUS"

Ranveig Rønningen
8 år siden
Visninger:

1 DiViD-prosjektet Er type 1 diabetes en virussykdom? LARS KROGVOLD FORSKNINGSGRUPPE FOR BARNE - OG UNGDOMSDIABETES OSLO UNIVERSITETSSYKEHUS

2 Er type 1 diabetes en virussykdom? 1. Ja 2. Nei 3. Vet ikke

3 OK, vi googler det!!

4 Et skritt tilbake hva er feil i kroppen ved T1D? Kroppen, nærmere bestemt betacellene i bukspyttkjertelen, slutter å lage insulin Det skjer oftest gradvis Vi kan ikke stanse det, og en vakker dag kommer sykdommen til syne Høyt blodsukker Da er toget gått Insulin brunt; glukagon rødt

lage insulin Det skjer oftest gradvis Vi kan ikke stanse det, og en

5 Men, hva skyldes det egentlig?? Arv Noen gener, særlig HLA klasse II-gener, er assosiert med økt risiko for T1D Studier av det humane arvematerialet har avslørt en rekke andre kandidat-gener som gir en lett økt risiko for T1D Lista over gener utvides stadig.. Miljø Noe i maten? Kumelk Gluten Andre proteiner? Noe du mangler? Vitamin D Noe fremmed? Virus Bakterier Annet?

det humane arvematerialet har avslørt en rekke andre kandidat-gener som gir en lett økt

6 Virus og T1D, noe helt nytt? The Journal of Infectious Diseases, Vol. 41, No. 3 (Sep., 1927), pp

7 En kasuistikk Et barn med nyoppdaget type 1 diabetes døde etter innleggelse med diabetes syreforgiftning Et virus (Coxackie B4) ble funnet i bukspyttkjertelen Viruset ble gitt til mus Musene utviklet deretter type 1 diabetes.

virus (Coxackie B4) ble funnet i bukspyttkjertelen

8 Det er gjort masse forskning Det er sett på: Blodprøver Hvite blodlegemer Avføringsprøver Tynntarmsprøver Spyttprøver Urinprøver Noe tyder på sammenheng Noe tyder ikke på sammenheng Men: Det mangler bevis!!!

Tynntarmsprøver Spyttprøver Urinprøver Noe tyder på

9 Et paradoks: Vi vet ikke årsaken til sykdommen.. - Men, vi undersøker aldri det syke organet ved sykdomsdebut!

10 The Diabetes Virus Detection study (DiViD) Den første studien hvor det er tatt: Vevsprøver fra bukspyttkjertelen Frivillige voksne pasienter Nylig diagnostisert med type 1 diabetes

11 Diabetes Virus Detection Project (DiViD) Primært mål: Lete etter virus i bukspyttkjertelen hos pasienter med nyoppdaget T1D I tillegg: Beskrive betennelse og funksjon i buksputtkjertel og tynntarm Ansvarlige: Lars Krogvold, stipendiat og barnelege Knut Dahl-Jørgensen, hovedveileder Kristian Hanssen, biveileder

betennelse og funksjon i buksputtkjertel og tynntarm Ansvarlige: Lars

12 Inklusjons og eksklusjonskriterier Inklusjon Kvinner og menn i alderen år med nydiagnostisert type 1 diabetikere siste to uker Klassisk T1D: Minst ett forhøyet autoantistoff Fastende c-peptid > 0,1 nmol/l Insulindose > 0,1 E/kg/døgn Skriftlig informert samtykke Eksklusjon Graviditet Blødningshistorie Trc < 100 x 10 9 /l Alkohol eller narkotikamisbruk

autoantistoff Fastende c-peptid > 0,1 nmol/l Insulindose > 0,1 E/kg/døgn Skriftlig

13 Resultater Totalt 6 pasienter (tre kvinner, tre menn) ble inkludert i studien

14 Kliniske data Pasient Alder Kjønn BMI Uker til biopsi HbA1c% ved biopsi Insulin U/kg/dag Antall positive autoantistoffer HLA risiko alleler* ,0 4 6,7 0,5 4 Ja ,9 3 10,3 0,35 3 Ja ,7 9 7,1 0,17 3 Ja ,6 5 7,4 0,4 3 Ja ,6 5 7,4 0,36 3 Ja ,7 5 7,1 0,52 1 Ja * Nærvær av HLA DR3, HLA DR4 eller begge

Ja 2 24 20,9 3 10,3 0,35 3 Ja 3 34 23,7 9 7,1 0,17 3 Ja 4 31 25,6 5 7,4 0,4 3 Ja 5

15 Virusundersøkelser i pankreas, ikke så lett som man kan tro. Immunhistokjemi: Antistoff mot et enterovirus kapselprotein, VP1 (DAKO, Glostrup, Denmark) Ekspresjon av MHC klasse I, regnes som markør på virus PCR-analyser: RNA hentet fra øyer og exokrint vev i kultur RNA hentet fra 30 mg frossent vev RNA sequencing

Glostrup, Denmark) Ekspresjon av MHC klasse I, regnes som markør på virus

16 Kontrollgrupper Immunhistokjemi PCR 9 organdonores uten diabetes fra npodregisteret Alle uten diabetesantistoffer Alder 25 år (18-38) 6 organdonores fra Uppsala Alle uten diabetesantistoffer Alder 67 år (55-70)

17 Immunhistokjemi-generelt Baserer seg på at man tilsetter et antistoff til vevet, som fester seg til et kjent antigen (dersom det er der) kalles indirekte immunhistokjemi Det bindes så til et sekundært antistoff, deretter til en polymer som binder et fargestoff Fargestoffet er det vi ser i mikroskopet

indirekte immunhistokjemi Det bindes så til et sekundært antistoff,

18 Immunhistokjemi-DiViD Farging med spesifikt antistoff for å påvise enterovirus protein 1 (VP1) Utført i to separate laboratorier Påfølgende snitt fra to forskjellige parafinblokker fra hver av pasientene

Utført i to separate laboratorier Påfølgende snitt

19 Resultater IHC 6 av 6 pasienter, mot 2 av 9 kontroller, var positive for VP1 i endokrint vev (p<0,01) Et lavt antall øyer og celler er affisert: Totalt 2492 øyer ble identifisert i de 12 snittene 42 øyer (1,7%) med totalt 60 intenst VP1+-celler ble identifisert

celler er affisert: Totalt 2492 øyer ble identifisert i de 12

20 Funn, enterovirusprotein 1 (vp1) Case 1, Uppsala Case 2, Exeter

21 Funn, enterovirusprotein 1 (vp1) Case 3, Exeter Case 3, Tampere

22 Hyperekspresjon klasse I MHC Hyperekspresjon av klasse I MHC i Langerhanske øyer er et klassisk funn ved nyoppdaget T1D Dette er nært korrelert med interferon α, som kan frigjøres fra cellene under en virusinfeksjon Hyperekspresjon av klasse I MHC kan indikere vevsrespons på virusinfeksjon

23 Polymerase chain reaction (PCR) En meget følsom metode for å oppdage kjente RNA-sekvenser (arvestoff) fra virus Man trenger en «primer», som man vet reagerer mot det man leter etter Deretter lager man cdna Dette dobler man, om og om igjen

24 PCR undersøkelser, DiViD Kulturmedium Frossen vevsprøve Øyene ble isolert og dyrket i Uppsala RNA ekstrahert fra kulturmediet RNA analysert i: Uppsala Tampere 30 mg med hurtigfrosset vev Knust og homogenisert RNA ekstrahert

25 Resultater PCR 4 av 6 pasienter (2, 4, 5, 6) var positive for enterovirus RNA i Uppsala og Tampere i medium fra øykultur på dag 1 og/eller dag 3, men ikke på dag 6 Pasient6 var også positiv i frossent vev Ingen av de 6 kontrollene var positive Alle pasientene og kontroller var negative for andre virus (rhino, noro, rota, paercho) i både endokrin og eksokrin kultur

26 Resultater PCR Signalet var veldig lavt for alle de positive prøvene, noe som antyder lite virus Fra alle de positive prøvene så ble PCR-produktet sekvensert, og nærvær av «enterovirale sekvenser» ble bekreftet Det betyr: Dette kommer fra enterovirus, men vi kan ikke si sikkert akkurat hvilket virus det er

27 Sekvenser av PCR-produkter, Uppsala Case Sequence GTACCTTTGTGCGCCTGTTTTATTACCCCCTCCCCTAACTGTAACTTAGAAGTAATACACACCGATCAACAGTAAG TGTGGCACGCCAGCCATGCTCCGATCAAGCACTTCTGTTCCCCCGGACCGAGTATCAATAGACTGCCCACGCGGT 2 TGAAGGAGAAAGTGTCCGTTATCCGGCCAACTACTTcGAGAAGCCCAGTAACACCATGGAAGTTGCAGAGTGTT TCGCTCAGCACAACCCCAGTGTAGATCAGGTCGATGAGTCACTGCATACCCCACGGGTGACCGTGGCAGTGGCT GCGTTGGCGGCCTGCCTATGGGGAAGCCCATAGGACGCTCTAATACAGACATGGTGTGAAGAGTCTATTGAGCTA GTTGGTAGTCCTCCGGCCCCTGAATGCGGCTAATCCTAACTGTGGAGCATACGCCCTCAAGCCAGGGGGCAGTG TGTcGTAACGGGCAACTCTGCAGCGGAACCGACTAC 4 5 NNGCCNGTATAGGAATAAATAGAAACACGGACACCCAAAGTAGTCGGTTCNNCNNNNNANTTACCCGTTACGAC ACACCACCCACTGGTTTGTGGGCATGTGCTCCACAGTTAGGATTAGCCGCATTCAGGGNN AANAGTAAAAGAAACACGGACACCCAAAGTAGTCGGTTCCGCTGCNNAGTTACCCATTACGACAGACTGCCCA CTGGCTTGTGGGTNNCTGCTCCGCAGTTAGGATTAN GTGGGCAGTCTGTCGTAATGGGTAACTCTGCAGCGGAACCGACTACTTTGGGTGTCCGTGTTTCTTTTACTCTTT 6 TATTGGCTGCTTATGGTGACAATAAAAGAGTAAAAGAAACACGGACACCCAAAGTAGTCGGTTCCGCTGCAGAG TTACCCATTACGACAGACTGCCCACTGGTTTGTGGGTATNTGCTCCGCAGTTAGGATTAGCCGCANTCAGGGNN

28 RNA-sekvensering, Oslo RNA ble isolert fra fryst vev fra pasienter 1-6 og sekvensert på HiSeq 2000 ved Morten Eike Ingen virale sekvenser ble oppdaget ved standard sekvensering Dette illustrerer at det fortsatt er en forskjell i følsomhet mellom PCR og RNA-sekvensering

29 Oppsummering virusfunn i pankreas Metode Immunhistokjemi VP1 Entero specific RT-PCR Viral RNA RNA sequencing Materiale Pankreasøyer Håndplukkede øyer* Hele pankreas** Hele pankreas** Laboratorium Tampere Exeter Uppsala Tampere Tampere Oslo Case 1 Positiv Positiv Negativ Negativ Negativ Negativ 2 Positiv Positiv Positiv Positiv Negativ Negativ 3 Positiv Positiv Negativ Negativ Negativ Negativ 4 Positiv Negativ Positiv Positiv Negativ Negativ 5 Positiv Positiv Positiv Positiv Negativ Negativ 6 Positiv Positiv Negativ* Positiv Positiv Negativ Publisert i Diabetes, 2014 Nov 24 * Positiv i RNA fra den eksokrine kulturen, som også inneholder ukjent mengde endokrint vev

30 Konklusjoner DiViD er den første studien av pasienter med nyoppdaget T1D som viser mulig tilstedeværelse av enterovirus i bukspyttkjertelen øyene Virus er påvist med flere ulike teknikker Resultatene kan være forenlig med en vedvarende, lavvirulent enterovirusinfeksjon i bukspyttkjertelen hos pasienter med nyoppdaget T1D Denne studien er imidlertid basert på bare 6 pasienter og videre studier er nødvendig for å avklare om virus spiller en primær rolle i patogenesen av T1D

31 Hva vet vi og hva vet vi ikke: Vi vet: Vi vet ikke: Det er relativt vanlig med virus i bukspyttkjertelen hos pasienter med nyoppdaget T1D Det er svært uvanlig med virus i bukspyttkjertelen hos pasienter uten T1D Om virus fører til T1D Om behandling eller forebygging (vaksine) av virusinfeksjon påvirker forløpet av T1D

32 Takk til: Mine veiledere: Knut Dahl-Jørgensen Kristian F. Hanssen PEVNET (Persistent Virus Infection in Diabetes Network): Uppsala Oskar Skog Gun Frisk Olle Korsgren Tampere Heikki Hyöty Sami Oikarinen Maarit Oikarinen Jutta Laiho Exeter Noel Morgan Sarah Richardson Pia Leete Linköping Johnny Ludvigsson Oslo universitetssykehus Barneklinikken Terje Rotwelt Anne Amdam kirurgisk avdeling: Trond Buanes Bjørn Edwin Trine Roald, spesialsykepleier Sykepleiere og leger på lokalsykehus Pasientene som deltok i studien

Like dokumenter

Kan anti-viral behandling bevare insulinproduksjonen hos barn med

The Diabetes Virus Detection and Intervention Trial (DiViDIntervention) Kan anti-viral behandling bevare insulinproduksjonen hos barn med nyoppdaget diabetes? Dagen for vårt informasjonsmøte om DiViDIntervention-studien