HIV infeksjon Aktuelle mikrobiologiske analyser. Anne Marte Bakken Kran Mikrobiologisk avd. OUS, Ullevål

Størrelse: px

Begynne med side:

Download "HIV infeksjon Aktuelle mikrobiologiske analyser. Anne Marte Bakken Kran Mikrobiologisk avd. OUS, Ullevål"

Rebecca Didriksen
8 år siden
Visninger:

1 HIV infeksjon Aktuelle mikrobiologiske analyser Anne Marte Bakken Kran Mikrobiologisk avd. OUS, Ullevål 1

2 HIV infeksjon: Dagens plan Epidemiologi, virologi og behandling HIV primærdiagnostikk EIA Western blot Provirus HIV 2 Hurtigtester Analyser ved erkjent HIV infeksjon HIV RNA kvantitering 2 Resistens

blot Provirus HIV 2 Hurtigtester Analyser ved

3 Forekomst i Norge 3

4 Struktur og oppbygning: Typer, grupper, subtyper og varianter 4

5 Struktur og oppbygning: HIV Lipidmembran Capsid/core protein (p24) Transmembran glykoproteiner: gp120 gp41 Envelope Matrixprotein (p17) Virus genom (RNA) Virusenzymer: Protease, revers transkriptase, integrase 5

gp41 Envelope Matrixprotein (p17) Virus genom (RNA)

6 HIV behandling: Livssyklus HIV gp120 gp41 CCR5 Adaptert fra Emini EA., The International AIDS Vaccine Initiative 6

7 HIV behandling: Medikamenter CCR5 antagonister Nukleosid analoger (NRTI) Non nukleosid analoger (NNRTI) Protease hemmere (PI) gp120 gp41 CCR5 Fusjonshemmere Integrasehemmere Adaptert fra Emini EA., The International AIDS Vaccine Initiative 7

hemmere (PI) gp120 gp41 CCR5 Fusjonshemmere Integrasehemmere

8 HIV behandling: Medikamenter gp120 gp41 Fusjonshemmere CCR5 antagonister Maraviroc (MVC) CCR5 Enfuvirtide (FI) Integrasehemmere Raltegravir (INT) Elvitegravir Dolutegravir Nukleosid analoger (NRTI) Lamivudin (3TC) Abacavir (ABC) Zidovudin (AZT) Stavudin (d4t) Zalcitabin (ddc) Didanosin (ddi) Emtricitabin (FTC) Tenofovir (TDF) Non nukleosid analoger (NNRTI) Protease hemmere (PI) Atazanavir (ATV) Darunavir (DRV) Indinavir (IDV) Lopinavir (LPV) Nelfinavir (NFV) Saquinavir (SQV) Fosamprenavir (FPV) Tiprinavir (TPV) Ritonavir (RTV) Efavirenz (EFV) Nevirapin (NVP) Etravirin (ETV) Rilpivirin (RPV) Adaptert fra Emini EA., The International AIDS Vaccine Initiative 8

(TDF) Non nukleosid analoger (NNRTI) Protease hemmere (PI) Atazanavir (ATV) Darunavir (DRV) Indinavir (IDV) Lopinavir (LPV) Nelfinavir (NFV) Saquinavir (SQV)

9 HIV behandling: HAART Highly Active AntiRetroviral Therapy = cart (combination ART) Kombinasjon av minst 3 ulike medikamenter, fra mist to ulike klasser Vanlige startregimer: 1 PI/r + 2 NRTI 1 NNRTI + 2 NRTI 9

10 Kombinasjonsbehandling 6 ulike klasser av medikamenter Effektiv: >>90% oppnår full virussuppresjon Livslang behandling, ikke kurativ Bivirkninger Kostbart, ikke tilgjengelig for alle Resistens Ikke full restitusjon av immunresponser Dramatisk reduksjon i sykelighet og dødelighet 10

Bivirkninger Kostbart, ikke tilgjengelig for alle Resistens Ikke full

11 Eradikering er det mulig? Towards an HIV Cure Latent reservoar etableres tidlig Utilgjengelig for behandling Pågående forskning: Hva regulerer latens og reaktivering? Shock and kill (HDAC inhibitorer) Epigenetikk studier Deeks S, Nature

12 HIV diagnostikk Hvilke tester har vi og når skal de brukes? 12

13 Aktuelle analyser Diagnostikk av ny infeksjon EIA (Ag/As påvisning) Antistoff konfirmasjonstester (Western Blot) Nukleinsyrepåvisning (kvalitativ), for eksempel provirus Hurtigtester Erkjent HIV infeksjon (klinisk oppfølging) HIV 1 RNA RT PCR (kvantitativ) Resistensundersøkelser Kvantitering av CD4+ T celler (Immunologisk avd) 13

provirus Hurtigtester Erkjent HIV infeksjon (klinisk oppfølging) HIV 1 RNA RT PCR

14 Diagnostikk: tidslinje for antigen og antistoff www,depts.washington.edu: University of Washington

15 Diagnostikk av HIV infeksjon >2 3 mnd etter smitteeksponering HIV Combo test (Ag/As): REAKTIV Konfirmasjonstest (Western Blot): POSITIV Tidlig diagnostikk: HIV Combo test (Ag/As): REAKTIV Kan bli reaktiv allerede 2 uker etter smitte Konfirmasjonstest (Western Blot): INKONKLUSIV (eller negativ) MÅ AVKLARES! HIV ELLER USPESIFIKK REAKSJON? 15

(Ag/As): REAKTIV Kan bli reaktiv allerede 2 uker etter smitte Konfirmasjonstest

16 Aktuelle analyser: EIA Kombinasjonstester (Ag / As) p24 Ag IgM og IgG mot ulike env Ag, både HIV 1 og HIV 2 Rene Ag tester (med nøytralisasjon) Rene As tester Reaktiv etter smitte tidligst ca: 10 dager 3 uker 7 12 dager dager Frikjent : Prøvemateriale: Negativ Serum Ag/As undersøkelse (evtplasma) 3 mnd etter eksponering 16

Reaktiv etter smitte tidligst ca: 10 dager 3 uker 7 12 dager 10 14 dager Frikjent

17 Aktuelle analyser: Western Blot Verifisering av HIV As ved reaktiv primærtest IgG mot env, gag og pol kodede proteiner HIV 2 (p36) Utvikling kan følges i gjentatte prøver Prøvemateriale: serum (evt plasma) 17

kodede proteiner HIV 2 (p36) Utvikling kan følges i

18 Utvikling av viruskomponenter og antistoffer 18

19 Western blot: Tolkning Produsentens anbefaling Mest brukt i Norge + 19

20 Western blot: Tolkning Positiv: Minst ett bånd fra hver gruppe (Red Cross) Inkonklusiv WB: ny prøve etter 3 uker Avklare: Omslagsfase (utvikling i båndmønster) Uspesifikk reaksjon (ofte p24, ingen utvikling) Husk: Tap av båndmønstre ved langtkommet immunsvikt Maternelle antistoffer hos barn < 18mnd 20

båndmønster) Uspesifikk reaksjon (ofte p24, ingen utvikling) Husk: Tap av

21 Avklare inkonklusiv WB Rene Ag tester (med nøytralisasjon) Påviser p24 Prøvemateriale: Serum (evt plasma) Kan gjøres i samme serumprøve som WB Provirus Betydelig bedre sensitivitet Prøvemateriale EDTA fullblod Må be om ny prøve Kontrollprøve etter 3 uker vil alltid avklare 21

22 Diagnostikk: HIV 1 DNA PCR HIV integrert i infiserte celler (provirus DNA ) Prøvemateriale: EDTA blod (holdbar 3 døgn) Kan gjøres i lymfoid vev Avklare vertikal smitte Tidlig diagnostikk 22

23 Hvorfor provirus og ikke HIV RNA kvantitering? Kvalitativ HIV RNA kan bekrefte diagnosen Tidligere positiv enn provirus Flere falske negative NB! Ingen spesifisitetskontroll! Ingen mulighet til sekvensering Provirus kan påvises selv ved ikke påvisbar plasma VL Under behandling I kronisk latensfase 23

24 Primærdiagnostikk: Forenklet algoritme + + +/ HIV 2 bånd 24

25 HIV 2: Aktuelle analyser Antistoffer mot HIV 2 fanges opp i de fleste primærtester (Ag/As) HIV 2 bånd i WB (velg WB med HIV 2 bånd!) Konfirmasjonstesting HIV 2 (Ullevål og FHI) (New Lav Blot II og Pepti Lav 1 2) Betydelig kryssreaksjon mellom HIV 1 og HIV 2! Dobbeltinfeksjon sjelden! 25

26 26

27 * * * * * * * * 27

28 HIV 2: Aktuelle analyser Kvalitativ PCR (Ullevål): DNA og RNA Kvantitativ PCR/Resistensundersøkelser: SMI Utføres to ganger pr år (mai og november) Videresendes kun hvis påvisbar i kvalitativ PCR ved Ullevål 28

29 Hva med hurtigtester? Påviser antistoff mot HIV 1 og HIV 2 (finnes også med HIV 1 Ag komponent) God sensitivitet / spesifisitet (98 99%) NB! falske positive (ca 0.5%) NB! lenger vindusperiode Skal bekreftes med prøve til laboratoriet Velegnet bedside i enkelte situasjoner Hurtigtestprosjekter pågår for tiden i høyrisikopopulasjoner i flere byer i Norge 29

30 Aktuelle analyser ved erkjent HIV 1 infeksjon Erkjent HIV 1 infeksjon (klinisk oppfølging) HIV 1 RNA RT PCR (kvantitativ) Resistensundersøkelser Kvantitering av CD4+ T celler (immunologisk avd) 30

31 Aktuelle analyser: HIV RNA kvantitering Oppfølging av erkjent HIV infeksjon Måler virusmengde i plasma Verktøy i klinisk oppfølging Prøvemateriale: EDTA plasma De fleste bruker kommersielle kit (RT PCR) Nedre deteksjonsgrense 20 kopier/ml Betydelig variabilitet 31

32 EDTA plasma Holdbarhet HIV 1 RNA kvantitering: Fullblod: 6 timer Gel glass: 72 timer Prøveforsendelse Celler kontaminerer plasma fra gel glass transportert etter sentrifugering Lekkasje av celler gjennom gelbarriere Celle assosiert HIV DNA amplifiseres i PCR Re sentrifugering reduserer virusmengde Prøver tatt på EDTA glass med gel må sentrifugeres på nytt 32 etter ankomst i laboratoriet før plasma overføres til andre rør.

33 RESISTENSUNDERSØKELSER 33

34 Resistensundersøkelser Sekvensering av genene som koder for målenzymene Protease/revers transkriptase Integrase Tropismeundersøkelse før oppstart med CCR5 antagonist Sekvensering av V3 loop (gp120) Prøvemateriale: Plasma Samme som HIV 1 RNA kvantitering 34

35 Resistenstesting: når? Ved diagnosetidspunkt (overvåkning av primærresistens, MSIS) (ev. før behandlingsstart) Ved terapisvikt Gravide kvinner Post eksposisjonsprofylakse (Index case) Ved terapisvikt: Prøve tas under pågående behandling 35

36 Resistenstesting ved terapisvikt Prøve tas under pågående behandling Under et sviktende behandlingsregime vil seleksjonsbetingelsene favorisere resistent virus. Dersom antiretroviral behandling seponeres, vil villtypevirus dominere, og eventuelle resistente virusvarianter vil utgjøre for liten andel av den totale viruspopulasjonen til å kunne oppdages. 36

37 Overvåkning av primærresistens Ved diagnosetidspunkt Kobles til MSIS meldenummer Kun protease og revers transkriptasehemmere Egen rekvisisjon Ved overvåkning av primærresistens: HUSK! MSIS meldenummer! 37

38 NY rekvisisjon fra 2012 Kan lastes ned fra: (skjemaer) Anbefaler åsende denne til rekvirent sammen med meldeskjema, med ferdig utfylt MSIS nr 38

39 Takk for oppmerksomheten! 39

Like dokumenter

Diagnostikk av HIV-infeksjon

Diagnostikk av HIV-infeksjon Anne-Marte Bakken Kran Førsteamanuensis, konst. overlege Mikrobiologisk avd. OUS, Ullevål HIV diagnostikk Primærdiagnostikk: Hvilke tester har vi og når skal de brukes? Analysestrategier