Flått og Tick borne encefalitt (TBE):

Transkript

1 Flått og Tick borne encefalitt (TBE): Åshild Andreassen, Kirsti Vainio, Susanne Dudman og Gabriel Ånestad Avdeling for Virologi (SMVI), Nasjonalt folkehelseinstitutt (FHI). Nasjonalt referanselaboratorium for TBE

2 Flått, Tick borne encefalitt virus (TBE) epidemiologi og prosjekter Flått, vert og miljø TBE og vektor Sykdomstilfeller i Norge Resultater fra pågående prosjekt Nye og pågående prosjekter

3 TBE virus Tidligere kjent som Central European encephalitis-cee oppdaget av Zilber i Russland 1937 Sfærisk, lipidmembran dekket av glykoprotein M og E TBEV: RNA virus, et flavivirus i TBEserokompleks inkluderer bl.a. 3 subtyper TBE virus: Europeisk, sibirsk og fjerne østen type Fjerne østen type har de høyeste rapporterte mortalitetsrater opptil 20%

4 Flaviviruses West Nile Yellow fever Dengue Japanese encephalitis Tick-borne encephalitis Baxter

5 TBE - livssyklus TBEV overføres via flåttbitt fra Ixodes ricinus i Europa eller ved inntak av TBEV i upasteurisert melk eller melkeprodukter som f. eks ost. Hovedvert: sau >ku>geit (ny Polsk studie) Voksne flått har mer virus enn nymfer og larver når man relaterer det til livslang infeksjon. Smågnagere er hovedreservoiret på grunn av lengre viremisk fase enn i større dyr.

6 Andre vertsdyr: Hunder Hester Kyr Geiter Sauer I tillegg til smågnagere Fugler

7

8 Vertsdyr for flått mulig spedningsvei for TBE virus Skogmus (Apodemus) er den vanligste verten

9 Økning i vekstsesong mellom Spredning avi. Ricinus korrelerer til vekstsesong ( days > 5 C) (Norut, Høgda et al. 2001)

10 Øker forekomsten av I. ricinus i Norge? Ingen flått ble obsertvert på hjort I Norge før 1943 (Tambs-Lyche 1943, s. 531) Mulige årsaker til økt prevalens av I. ricinus Økning av rådyr og hjortebestand Tilgroing av landskapet Økt vekstsesong

11 TBE økning de siste 30 år* 100% økning avtbe fra i Europa (bortsett fra Østerriket, vaksinasjon siden1981) *Mansfield et al. Tick-borne encephalitis virus a review of an emerging zoonosis. J Gen Virol 2009;90:

12 Tilfeller av TBEV i Diagnoseår Antall Sannsynlig smittested i Norge Norge Tromøy Tromøy Lyngdal Mandal Søgne * Farsund, Mandal * Tromøy, Larvik * Tromøy, Grimstad, Eydehavn, Homborsund, Arendal, Farsund, Grimstad, Vestfold, Telemark ** * Tromøy/Arendal, Mandal * Arendal, Farsund, Kristiansand, Lindesnes, Porsgrunn Flåttsesongen i Norge; april-november, høyest antall i juni-juli Viktigste aktivitetet for smitte: skogbruk og gårdsbruk Totalt 60 registrerte tilfeller av TBE fra , de fleste er infisert i Norge. Hos voksne: oftere påvist hos menn enn kvinner *, ** Aust-Agder, Larvik, Lindesnes, Risør, Sandefjord** * 1-2 tilfeller smittet utenlands **1-2 tilfeller med ukjent smittested

13 Norge 0,2-0,3 Skarpaas et al., 2006 Baxter

14 Hensikten med TBE studien Etablere PCR metode for TBEV analyse i forbindelse med referanselab funksjon Studere prevalensen av TBEV i flått fra kjente og ukjente områder i Sør Norge som grunnlag for vaksineanbefaling

15 Metoder for Mikrobiologisk diagnose Diagnose av TBE virus: ved dyrking, PCR eller immunologiskeanalyser. Prøver til PCR må tas innen den første viremiske fasen (uke 1-2) IgM kan detekteres opptil måneder etter akutt infeksjon IgG øker når IgM avtar.

16 SMVI ble i 2008 referanse lab for TBEV diagnostikk i Norge Etablerte metoder for deteksjon av TBEV på SMVI pr 2009: 4 serologiske tester : 3 ELISA + 1 Immunofluorescence (samme antistoff, forskjellige kit) Under utvikling: 3 PCR metoder testes ut, (to fra E protein region og en fra NS5 region)

17 TBE prosjekt Vi analysere nå ca 6000 flått innsamlet på sørlandskysten i mai/juni lokalisasjoner fra kjente og ukjente områder langs sørlandskysten.

18 Flått innsamling 2009 Solveig Jore med pinsett og rør S6 Lyngdal Kvålsvik S4 Skjernøya Ytre farestad S3 - Tromøy Skarestrand Preben Ottesen og Solveig Jore ved Harald Reisos hytte

19 Lokalisasjoner Risør S1, Dalen, 90 prøver (900 flått) ferdig analysert Arendal S2, Tromøy Kirke, 73 prøver (730 flått) ferdig analysert S3, Tromøy (Skarestrand), 62 prøver (620 flått) ferdig analysert Mandal S4, Skjernøya, 28 prøver (280 flått) er isolert. S5, Skjernøysundkilen, 78 prøver (780 flått) 28 prøver er analysert Lyngdal S6, Kvålsvik, ikke isolert S7, Vasstøl, ikke isolert Totalt antall isolert: 3310 flått (pr )

20 TBE prosjekt Tre PCR metodene er testet ut på flått fra Østfold og mot kjente prøver fra Sveits og Østerriket. Resultat av metode utprøving: Av 3 metoder fant vi: 1 Realtime PCR metode, ubrukelig hos oss, bare falske positive ved våre betingelser eller ikke sensitiv ved publiserte betingelser, Schwaiger and Cassinotti Nested PCR metode moderat følsom (10-5 fortynning av standard ca 0.5 virus kopier/ul standard). Metode utviklet ved SMI i Sverige og publisert av Tone Skarpaa. 1 Realtime PCR metode svært følsom (10-6 fortynning av standard ca 0.05 virus kopier/ul standard). Metoden er utviklet på Veterinærinstituttet i Oslo. Standard: prøve med kjent virusinnhold fra Sveits, Spiez lab, Christian Beuret (PhD).

21 TBE prosjekt Ut fra resultatene på disse testene har vi valgt å gå videre med to av PCR metodene: Screening av flåttprøver med metode utviklet på Veterinærinstituttet Verifisering av positive prøver med Pyrosekvensering, PyroMark ID, Qiagen SMI Nested PCR (publisert av Skarpaas) Standard sekvensering på ABI 3130 Genetic Analyzor Realtime diagram

22 TBE prosjekt Flåttprøvene blir slått sammen 10 og 10 fra hver prøve. Resultater: Er ferdig med 5 av 7 lokalisasjoner (ca 3310 flått) fra Sør- Norge. Positive funn i Arendal og Mandal

23 TBE prosjekter på SMVI SMVI har gjort sereologiske analyser av 120 sera fra hjort og rådyr for TBEV, positive er testet også med TBE Nøytralisasjonstest (NT) i Wien samt Louping Ill virus (LIV) ELISA /NT i Skottland I 2011 ønsker vi også analysere humane sera for antistoff deteksjon av TBEV i lagrete sera og innsamlete prøver fra blodgivere Vår-høst 2011 innsamling av flått fra de positive lokalisasjonene for å gjøre metoden mer sensitiv (fortynningseffekt kan medføre underregistrering av positiveprøver). Vår-høst 2011 innsamling fra andre lokalisasjoner for ytterligere å vurdere prevalensen i sør-norge.

24 TBE prosjekter på SMVI Eksterne prosjekter vi er med i: 250 RNA isolater fra det sørlige Polen vil bli analysert på samme måte i løpet av vinteren Mulig utvidet samarbeid med Polen avhengig av finansiering.

25 TBEV samarbeid Dr.Scient Åshild K Andreassen, Dr. med. Susanne G. Dudman MD, Dr.Vet Gabriel Ånestad og Dr.Scient Kirsti Vainio. Avd for Virology Analyser og publisering Dr. philos Preben Ottesen, Avd for Skadedyrkontroll Innsamling og vurdering av flått samt publisering Eksternt samarbeid Veterinærhøyskolen: PhD student dr.vet. Solveig Jore. Innsamling og vurdering av flått samt publisering Dr.Vet Bjørnar Ytrehus. Innsamling av blodprøver fra hjort og rådyr for analyse med modifisert ELISA. 1 Publikasjon er ute Helse-Vest: MD. Reidar Hjetland Innsamling av blodprøver fra blodgivere for analyse med modifisert ELISA samt publisering Det medisinske universitetet i Katowice PhD K. Solarz, PhD student Piotr Cuber og PhD student Marek.. Innsamling av 2500 flått fra sørlige del av Polen Isolering av RNA i Polen, analyser i Norge Samarbeid om publikasjon

26 Tusen takk for oppmerksomheten