(12) PATENT (19) NO (11) (13) B1. (51) Int Cl. NORGE. Patentstyret

Transkript

1 (12) PATENT (19) NO (11) (13) B1 NORGE (1) Int Cl. A61K 39/02 (06.01) A61K 39/09 (06.01) A61K 39/2 (06.01) A61K 39/116 (06.01) A61K 39/08 (06.01) A61K 39/08 (06.01) A61K 39/09 (06.01) A61K 39/ (06.01) A61K 39/112 (06.01) A61K 39/39 (06.01) A61P 31/04 (06.01) A61P 37/04 (06.01) Patentstyret (21) Søknadsnr (86) Int.inng.dag og søknadsnr PCT/EP01/07288 (22) Inng.dag (8) Videreføringsdag (24) Løpedag () Prioritet , GB, , GB, , GB, (41) Alm.tilgj (4) Meddelt (73) Innehaver GlaxoSmithKline Biologicals SA, Rue de l'institut 89, RIXENSART, BE-13, Belgia (72) Oppfinner Pierre Michel Desmons, c/o GlaxoSmithKline Biologicals SA, Rue de l'institut 89, BE-13 RIXENSART, Belgia Carine Capiau, c/o GlaxoSmithKline Biologicals SA, Rue de l'institut 89, BE-13 RIXENSART, Belgia Jan Poolman, c/o SmithKline Beecham Biologicals SA, 89, Rue de l'institut, BE-13 RIXENSART, Belgia Dominique Boutriau, c/o GlaxoSmithKline Biologicals SA, Rue de l'institut 89, BE-13 RIXENSART, Belgia Dominique Lemoine, c/o GlaxoSmithKline Biologicals SA, Rue de l'institut 89, B-13 Rixensart, BE-, Belgia (74) Fullmektig Bryn Aarflot AS, Postboks 449 Sentrum, 04 OSLO, Norge (4) Benevnelse Multivalent immunogent preparat, samt anvendelse og fremstilling derav (6) Anførte publikasjoner PARADISO et al; Glycoconjugate Vaccines: Future Combinations; Dev. Biol. Standard, vol. 87, 1996, s WO A1 CHOO et al; Immunogenicity and reactogenicity of a pneumococcal conjugate vaccine administered combined with a Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine in United Kingdom infants; Pediatr. Infect. Dis., vol. 19, nr. 9, 00, s , ISSN GRANOFF et al; MF9 Adjuvant Enhances Antibody Responses of Infant Baboons Immunized with Haemophilus influenzae Type b and Neisseria meningitidis Group C Oligosaccharide-CRM197 Conjugate Vaccine; Infection and immunity, vol. 6, nr., 1997, s , ISSN (7) Sammendrag Et multivalent vaksinepreparat er beskrevet som omfatter et konjugat av kapsel- polysakkaridet fra H. influenzae b ikke adsorbert på et aluminium- adjuvans-salt og to eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider. Et multivalent vaksinepreparat er også beskrevet som omfatter en helcelle pertussis- komponent, tetanus-toksoid, difteri-toksoid. Hepatitt B overflate-antigen, et konjugat av kapselpolysakkaridet fra H. influenzae b og et konjugat av et kapselpolysakkarid fra N. meningitidis type A eller C (eller begge). Videre er et multivalent vaksinepreparat beskrevet som omfatter en helcelle pertussis- komponent, tetanus-toksoid, difteri-toksoid og en lav dose av et konjugat av kapselpolysakkaridet fra H. influenzae b.

2 1 1 2 Foreliggende oppfinnelse angår multivalent immunogent preparat, samt anvendelse og fremstilling derav. Kombinasjonsvaksiner (som gir beskyttelse mot multiple patogener) er meget ønskelige for å minimalisere antallet immuniseringer nødvendig for å gi beskyttelse mot multiple patogener, for å senke administreringskostnader og for å øke akseptans og dekningsgrad. Det godt dokumenterte fenomen antigen-konkurranse (eller interferens) kompliserer utvikling av multi-komponent vaksiner. Antigen-interferens refererer til observasjonen at administrering av multiple antigener ofte resulterer i en redusert respons på visse antigener i forhold til immunresponsen observert når slike antigener blir administrert individuelt. Kombinasjonsvaksiner er kjent som kan forhindre Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae og eventuelt Hepatitt B virus og/eller Haemophilus influenzae type b (se for eksempel, WO 93/24148 og WO 97/00697). PARADISO et al; Glycoconjugate Vaccines: Future Combinations; Dev. Boil. Standard, vol 87,1996, p beskriver en kombinasjon av HbOC med syv pneumokokk-konjugater og MenC konjugat. WO A1 beskriver en konjugatvaksine so minneolder pneumokokk, meningokokk og syntetiske Hib konjugater. CHOO et al; Immunogenicity and reactogenicity of a pneumoccal conjugate vaccine administred combined with a Haemophilus influenza type b conjugate vaccine in United Kingdom infants; Pediatr. Infect. Dis., vol. 19, nr.9, 00, p , ISSN beskriver en kombinasjon av HbOC Hib konjugatvaksine med en 7-verdig pneumokokkvaksine. GRANOFF et al; MF9 Adjuvant enhances Antibody Respnses of Ing\fant Baboons Immunized with Haemophilus influenzae Tye b and Neisseria meningitides group C Oligosaccharide-CRM197Conjugate Vaccine; Infection and immunity, vol. 6, nr., 1997, p , ISSN beskriver en vaksine inneholdende Hi bog MenC konjugater som er adjuvant-behandlet med MF9 eller alun eller er ikke-adjuvant behandlet som en kontroll. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig multivalent immunogent preparat, kjennetegnet ved at det omfatter et konjugat av et bærerprotein og kapsel-polysakkaridet eller oligosakkaridet fra H. influenzae type B i en dose på

3 g av polysakkarid eller oligosakkarid, hvor nevnte preparat i tillegg omfatter en eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider som er i stand til å gi beskyttelse til en vert mot infeksjon av bakteriene fra hvilke de er avledet, hvor en eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider inkluderer N. meningitides serogruppe C kapsel-polysakkarid eller oligosakkarid konjugert til bærerproteinet, og hvor alle polysakkarid(er) eller oligosakkarid(er) er ikke-adjuvante. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge krav 1, kjennetegnet ved at de/det en eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider omfatter to eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge krav 1 eller 2, kjennetegnet ved at de ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider er konjugert til et bærerprotein. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge krav 2, kjennetegnet ved at to eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider innbefatter N. meningitidis serogruppe A kapsel-polysakkarid eller oligosakkarid konjugert til et bærerprotein, og N. meningitidis serogruppe C kapsel-polysakkarid eller oligosakkarid konjugert til et bærerprotein. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge krav 1, kjennetegnet ved at to eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider innbefatter N. meningitidis serogruppe C kapsel-polysakkarid eller oligosakkarid konjugert til et bærerprotein, og N. meningitidis serogruppe Y kapsel-polysakkarid eller oligosakkarid konjugert til et bærerprotein. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge krav 1 eller 2, kjennetegnet ved at det omfatter mer enn syv ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge krav 6, kjennetegnet ved at ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider er pneumokokk-kapsel-polysakkarider eller oligosakakarider.

4 3 1 2 Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-7, kjennetegnet ved at de ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider er valgt fra en gruppe bestående av: N. meningitidis serogruppe A kapsel-polysakkarid, N. meningitidis serogruppe C kapsel-polysakkarid, N. meningitidis Serogruppe Y kapsel-polysakkarid, N. meningitidis serogruppe W kapsel-polysakkarid, Streptokokk pneumoniae serotype 1 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 2 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 3 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 4 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 6A kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 6B kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 7F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 8 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 9N kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 9V kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype A kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 11A kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 12F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 14 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 1B kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 17F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 18C kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 19A kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 19F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 22F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 23F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 33F kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe I kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe II kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe III kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe IV kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe V kapselpolysakkarid, Staphylococcus aureus type kapsel-polysakkarid, Staphylococcus aureus type 8 kapsel-polysakkarid, Vi polysakkarid fra Salmonella typhi, N. meningitidis LPS, M. catarrhalis LPS og H. influenzae LPS eller oligosakkarider derav. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge krav 1-8, kjennetegnet ved at det anvendte bærerprotein(er) er valgt fra gruppen omfattende: tetanus-toksoid, difteri-toksoid, CRM197, rekombinant difteri-toksin, OMPC fra N. meningitidis, pneumolysin fra

5 4 1 2 S. pneumoniae og protein D fra H. influenzae. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-8, kjennetegnet ved at bærerproteinet som blir anvendt er tetanus toksoid. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge krav 9, kjennetegnet ved at kapsel-polysakkaridet eller oligosakkaridet fra H. influenzae type B og de ytterligere polysakkarider eller oligosakkarider ikke er konjugert til samme bærer. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge krav 11, kjennetegnet ved at kapsel-polysakkaridet eller oligosakkaridet fra H. influenzae type B og de ytterligere polysakkarider eller oligosakkarider ikke alle er konjugert til CRM197. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-12, kjennetegnet ved at CDAP blir anvendt for syntese av polysakkarid- eller oligosakkarid-bærerkonjugater. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-13, kjennetegnet ved at det inneholder 1- g av hvert polysakkarid eller oligosakkarid. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre anvendelse av multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-14 ved fremstilling av et medikament for behandling eller forebygging av sykdommer forårsaket av infeksjon med Haemophilus influenzae. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-14, for anvendelse i et medikament. Foreliggende oppfinnelse angår følgelig videre fremgangsmåte for fremstilling av et multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-14 omfattende trinnet med sammenblanding av de individuelle komponenter. Metoder for fremstilling tetanus-toksoid (TT) er velkjente på området. For eksempel blir TT fortrinnsvis produsert ved rensning av toksinet fra en kultur av Clostridium tetani fulgt av kjemisk detoksifisering, men blir alternativt fremstilt ved rensning av en rekombinant eller genetisk detoksifisert analog av toksinet (for eksempel som beskrevet i EP 9281). Tetanus-toksoid omfatter også

6 1 2 immunogene fragmenter av full-lengde proteinet (for eksempel Fragment C se EP ). Metoder for fremstilling av difteri-toksoid (DT) er også velkjent på området. For eksempel blir DT fortrinnsvis produsert ved rensning av toksinet fra en kultur av Corynebacterium diphtheriae fulgt av kjemisk detoksifisering, men blir alternativt produsert ved rensning av en rekombinant eller genetisk detoksifisert analog av toksinet (for eksempel CRM197 eller andre mutanter som beskrevet i US 4,709,017, US,843,711, US,601,827 og US,917,017). Acellulære pertussis-komponenter (Pa) er velkjent på området. Eksempler omfatter pertussis-toksoid (PT), filamentøs hemagluttinin (FHA), pertactin (PRN) og agglutinogener 2 og 3. Disse antigener blir delvis eller godt renset. Fortrinnsvis blir 2 eller flere acellulære pertussis-komponenter anvendt i vaksinen. Mer foretrukket blir 2, 3, 4 eller alle av de ovenfor eksempelvise acellulære pertussis-komponenter innført i vaksinen. Mest foretrukket er PT, FHA og PRN inkludert. PT kan produseres ved en rekke metoder, for eksempel ved rensning av toksinet fra en kultur av B. pertussis fulgt av kjemisk detoksifisering eller alternativt ved rensning av en genetisk detoksifisert analog av PT (for eksempel som beskrevet i US,08,862). Metoder for fremstilling av drepte, helcelle Bordetella pertussis (Pw) egnet for foreliggende oppfinnelse er beskrevet i WO 93/24148, som er egnede fremstillings-metoder for å produsere DT-TT-Pw-HepB og DT-TT-Pa-HepB vaksiner. Bakterielle kapsel-polysakkarid-konjugater kan omfatte hvilket som helst bærerpeptid, polypeptid eller protein omfattende minst én T-hjelper epitop. Fortrinnsvis er bærer-protein(er) anvendt valgt fra gruppen omfattende: tetanustoksoid, difteri-toksoid, CRM197, rekombinant difteri- toksin (som beskrevet i hvilken som helst av US 4,709,017, WO 93/22, WO 9/33481 eller WO 00/48638), pneumolysin (fortrinnsvis kjemisk detoksifisert eller en detoksifisert mutant) fra S. pneumoniae, OMPC fra N. meningitidis og protein D (PD) fra H. influenzae (EP 946). På grunn av den kjente effekt av bærer-undertrykkelse er det fordelaktig om i hvert av preparatene ifølge foreliggende oppfinnelse, polysakkarid-antigener inneholdt deri ( n antigener) er konjugert til mer enn én bærer. Således kan (n-1) av polysakkaridene være båret (separat) på én type bærer og 1 på en forskjellig bærer eller (n-2) på én og 2 på to forskjellige bærere,

7 6 1 2 etc. For eksempel kan i en vaksine inneholdende 4 bakterielle polysakkaridkonjugater, 1, 2 eller alle fire være konjugert til forskjellig bærere). Protein D blir imidlertid fordelaktig anvendt som en bærer i preparatene ifølge oppfinnelsen ettersom det kan anvendes for forskjellige (2, 3, 4 eller mer) polysakkarider i et preparat uten en markert bærer-undertrykkelse-effekt. Mest foretrukket er Hib til stede som et TT-konjugat og MenA, MenC, MenY og MenW er enten TT- eller PD-konjugater. Protein D er også en anvendelige bærer ettersom det tilveiebringer et ytterligere antigen som kan gi beskyttelse mot H. influenzae. Polysakkaridet kan være bundet til bærerproteinet ved hvilken som helst kjent metode (for eksempel av Likhite, U.S. Patent 4,372,94 og av Armor et al., U.S. patent 4,474,77). Fortrinnsvis blir CDAP-konjugering utført (WO 9/08348). Ved CDAP blir cyanylerings-reagenset 1-cyano-dimetylamino-pyridiniumtetrafluorborat (CDAP) fortrinnsvis anvendt for syntese av polysakkarid-proteinkonjugater. Cyanylerings-reaksjonen kan utføres under relativt milde betingelser, som unngår hydrolyse av de alkalisk sensitive polysakkarider. Denne syntese tillater direkte kobling til et bærerprotein. Det immunogene preparatet ovenfor kan videre omfatte én, to, tre, fire, fem, seks eller syv komponenter valgt fra den følgende liste: N. meningitidis type Y polysakkarid [MenY] (fortrinnsvis konjugert), N. meningitidis type W polysakkarid [MenW] (fortrinnsvis konjugert), Vi-polysakkaridet fra Salmonella typhi, N. meningitidis (fortrinnsvis serotype B) ytre membranvesikler, én eller flere N. meningitidis (fortrinnsvis serotype B) ytre membran (overflate-eksponert) proteiner, drept, svekket Hepatitt A virus (HepA - fortrinnsvis produktet kjent som Havrix [SmithKline Beecham Biologicals]) og inaktivert polio-virus (IPV - fortrinnsvis omfattende typer 1, 2 og 3 som er standard i vaksinetypen, mest foretrukket Salk poliovaksine) uten vesentlige interferens-problemer for noen av antigenene i preparatet. De immunogene preparater ifølge foreliggende oppfinnelse kan fortrinnsvis bli formulert som en vaksine for in vivo administrering til verten på en slik måte at de individuelle komponenter av preparatet blir formulert slik at immunogenisiteten av individuelle komponenter ikke vesentlig blir svekket av andre individuelle komponenter i preparatet. Med ikke vesentlig svekket, menes at ved immunisering blir en antistoff-titer mot hver komponent oppnådd som er mer enn

8 %, fortrinnsvis mer enn 70%, mer foretrukket mer enn 80%, enda mer foretrukket mer enn 90% og mest foretrukket mer enn 9-0% av titeren oppnådd når antigenet blir administrert isolert. De immunogene preparater ifølge foreliggende oppfinnelse kan fortrinnsvis bli formulert som en vaksine for in vivo administrering til verten, slik at de gir et antistoff-titer bedre enn kriteriet for serobeskyttelse for hver antigene komponent for en akseptabel prosentdel mennesker. Dette er en viktig test for bedømmelse av en vaksines effektivitet for hele populasjonen. Antigener med en assosiert antistoff-titer over hvilken en vert er betraktet å være serokonvertert mot antigenet er velkjent og slike titere er publisert av organisasjoner så som WHO. Fortrinnsvis blir mer enn 80% av en statistisk signifikant prøve av individer serokonvertert, mer foretrukket mer enn 90%, enda mer foretrukket mer enn 93% og mest foretrukket 96-0%. Det immunogene preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse blir fortrinnsvis tilsatt adjuvans. Egnede adjuvantia omfatter et aluminiumsalt så som aluminiumhydroksyd-gel (alun) eller aluminiumfosfat, men kan også være et salt av kalsium, jern eller sink eller kan være en uoppløselig suspensjon av acylert tyrosin eller acylerte sukkere, kationisk eller anionisk derivatiserte polysakkarider eller polyfosfazener. Adjuvanset kan også velges å være en preferensiell fremkaller av en TH1- type respons for å bidra til den celle-medierte del av immunresponsen. Høye nivåer av Th1-type cytokiner har en tendens til å favorisere induksjon av cellemedierte immunresponser på et gitt antigen, mens høye nivåer av Th2- type cytokiner har tendens til å favorisere induksjon av humorale immunresponser på antigenet. Egnede adjuvans-systemer som fremmer en overveiende Th1-respons omfatter monofosforyl lipid A eller et derivat derav, spesielt 3-de-O-acylert monofosforyl lipid A og en kombinasjon av monofosforyl lipid A, fortrinnsvis 3-de- O-acylert monofosforyl lipid A (3D-MPL) sammen med et aluminiumsalt. Et forbedret system involverer kombinasjon av et monofosforyl lipid A og et saponinderivat, spesielt kombinasjonen av QS21 og 3D-MPL som beskrevet i WO 94/0013 eller et mindre reaktogent preparat hvor QS21 blir behandlet med kolesterol som beskrevet i WO 96/ Et spesielt kraftig adjuvans-preparat som omfatter QS21, 3D-MPL og tocopherol i en olje i vann emulsjon er beskrevet

9 8 1 2 i WO 9/172. Vaksinen kan i tillegg omfatte et saponin, mer foretrukket QS21. Preparatet kan også omfatte en olje i vann emulsjon og tocopherol (WO 9/172). Umetylerte CpG-inneholdende oligonukleotider (WO 96/02) er også preferensielle fremkallere av en TH1-respons og er egnet for anvendelse ved foreliggende oppfinnelse. Aluminiumsalter er foretrukne adjuvantia i de immunogene preparater ovenfor. Spesielt bør HepB fortrinnsvis være adsorbert på aluminiumfosfat før blanding med de andre komponenter. For å minimalisere nivåene av adjuvans (spesielt aluminiumsalter) i preparatene ifølge foreliggende oppfinnelse kan polysakkarid-konjugatene være uten adjuvans. Et spesielt foretrukket DTPw-preparat omfatter: TT, DT, Pw, HepB (fortrinnsvis adsorbert på aluminiumfosfat), Hib (fortrinnsvis konjugert på TT og/eller uadsorbert), MenA (fortrinnsvis konjugert på protein D) og MenC (fortrinnsvis konjugert på protein D). Fortrinnsvis kan vaksinen leveres i 2 beholdere, idet den første inneholder DTPw-HepB i en flytende form og en andre inneholdende Hib-MenA-MenC i en lyofilisert form. Innholdet av beholderene kan blandes ekstemporert før administrering til en vert i en enkel injeksjon. Vaksinepreparatene ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes for å beskytte eller behandle et pattedyr mottagelig for infeksjon, ved hjelp av administrering av nevnte vaksine via systemisk eller mukosal rute. Disse administreringer kan omfatte injeksjon intramuskulært, intraperitonealt, intradermalt eller subkutant; eller mukosal administrering til oral/fordøyelses-, respiratoriske og genitourinære kanaler. Mengden av antigen i hver vaksinedose blir valgt som en mengde som fremkaller en immunobeskyttende respons uten betydelige, ugunstige bivirkninger i typiske vaksiner. En slik mengde vil variere avhengig av hvilket spesifikke immunogen som blir anvendt og hvorledes det blir presentert. Generelt er det forventet at hver dose vil omfatte 0,1-0 g av polysakkarid, fortrinnsvis 0,1-0 g, fortrinnsvis 0,1- g, av hvilke 1 til g er det mest foretrukne område. Innholdet av protein-antigener i vaksinen vil typisk være i området 1-0 g, fortrinnsvis -0 g, mest typisk i området - 2 g. Etter en innledende vaksinering kan personene motta én eller flere booster-immuniseringer med tilstrekkelig mellomrom.

10 9 1 2 Vaksine-fremstilling er generelt beskrevet i Vaccine Design ( The subunit and adjuvant approach (ed. Powell M.F. & Newman M.J.) (199) Plenum Press New York). Innkapsling i liposomer er beskrevet av Fullerton, US-patent 4,23,877. Interessant har oppfinnerene også funnet at for vaksiner omfattende TT, DT, Pw og Hib, kan overraskende en vesentlig lavere dose av Hib anvendes i kombinasjonsvaksinen (sammenlignet med standarddosen på g pr. 0, ml dose) for å oppnå minst ekvivalente antistoff-titere mot H. influenzae type b kapsel-polysakkarid-antigen. Dette er motsatt av hva som ville være forventet. Fortrinnsvis er mengden av konjugat pr. 0, ml dose av bulkvaksine mindre enn g (av polysakkarid i konjugatet), mer foretrukket 1-7 eller 2-6 g og mest foretrukket ca. 2,, 3, 4 eller g. Mest foretrukket blir Hib-konjugatet ikke adsorbert på aluminium-adjuvans-salt før det blir blandet med DTPwvaksinen. En ytterligere observasjon som oppfinnerene har gjort er det faktum at kombinasjonsvaksiner omfattende et Hib-konjugat fremkaller betydelig høyere anti-hib antistoff-titere hos en vert (sammenlignet med en monovalent, uadsorbert Hib-konjugat-vaksine) hvis Hib-konjugatet blir administrert i en vaksine som i tillegg omfatter 1, men spesielt 2 eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider og Hib-polysakkaridet (og fortrinnsvis alle polysakkaridene) i vaksinen ikke er adsorbert på et adjuvans (spesielt aluminiumsalter). Et ytterligere uavhengig aspekt ved foreliggende oppfinnelse er derfor tilveiebringelse av et multivalent immunogent preparat omfattende et konjugat av et bærerprotein og kapsel-polysakkaridet av H. influenzae type B (Hib), hvor nevnte preparat i tillegg omfatter 1, men spesielt 2 eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider (fortrinnsvis mer enn 2, 3, 4,, 6, 7, 8, 9,, 11, 12 eller 13) som er i stand til å gi beskyttelse til en vert mot infeksjon av bakteriene fra hvilke de er avledet og hvor Hib-polysakkaridet (og fortrinnsvis ingen av nevnte polysakkarider) i preparatet er adsorbert på et aluminium-adjuvans-salt. Mest foretrukket er intet aluminium-adjuvans-salt til stede i preparatet. Ved at et antigen ikke blir adsorbert på et aluminium-adjuvans-salt menes at et spesielt eller dedikert adsorpsjonstrinn for antigenet på friskt

11 1 2 aluminium-adjuvans-salt ikke er involvert ved fremgangsmåten for formulering av preparatet. Hib kan være konjugert til hvilken som helst bærer som kan gi minst én T- hjelper-epitop (eksempler på hvilket er beskrevet ovenfor) og fortrinnsvis tetanustoksoid. Fortrinnsvis er de ytterligere bakterielle polysakkarider også konjugert til et bærerprotein (eksempler på hvilket er beskrevet ovenfor). I spesifikke utførelsesformer er kapsel-polysakkarid fra H. influenzae type B og de ytterligere polysakkarider ikke konjugert til samme bærer (Hib og ingen av de ytterligere polysakkarider deler samme bærer), spesielt når bæreren er CRM197. I de foretrukne utførelsesformer av eksemplene er minst én av polysakkaridene i preparatet konjugert på protein D, imidlertid er dette ikke essensielt for ytelsen ved foreliggende oppfinnelse i virkeligheten trenger hverken Hib eller noen av de ytterligere polysakkarider være konjugert på protein D. I en spesifikk utførelsesform av oppfinnelsen ovenfor er bare Hib og ytterligere bakterielle polysakkarider (og konjugater derav) eneste antigener til stede i preparatet. En mengde av polysakkarid som er i stand til å gi beskyttelse til en vert (en effektiv mengde) kan lett bestemmes av fagfolk. Generelt er det forventet at hver dose vil omfatte 0,1-0 g polysakkarid, fortrinnsvis 0,1-0 g, fortrinnsvis 0,1- g, av hvilke 1 til g er det mest foretrukne område. Hib-konjugatet er fortrinnsvis til stede i en mengde på 3-1 g (av polysakkarid i konjugatet), mer foretrukket 4-12 g og mest foretrukket - g. Totalt er ikke mindre enn 2 g av ytterligere polysakkarid (spesielt når konjugert) til stede i preparatet pr. 0, ml dose og fortrinnsvis er ikke mindre enn 3, 4,, 6, 7, 8, 9,, 11, 12, 13, 14, 1, 17,, 2,, 3, 40, 4 eller 0 g inkludert. Fortrinnsvis er ikke mer enn 0 g av ytterligere polysakkarid inkludert pr. 0, ml dose. Fortrinnsvis er de ytterligere bakterielle polysakkarider valgt fra en gruppe bestående av: N. meningitidis serogruppe A kapsel-polysakkarid (MenA), N. meningitidis serogruppe C kapsel-polysakkarid (MenC), N. meningitidis serogruppe Y kapsel-polysakkarid (MenY), N. meningitidis serogruppe W kapselpolysakkarid (MenW), Gruppe B Streptokokk gruppe I kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe II kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk

12 gruppe III kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe IV kapselpolysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe V kapsel-polysakkarid, Staphylococcus aureus type kapsel-polysakkarid, Staphylococcus aureus type 8 kapsel-polysakkarid, Vi polysakkarid fra Salmonella typhi, N. meningitidis LPS, M. catarrhalis LPS og H. influenzae LPS. Med LPS menes enten nativt lipopolysakkarid (eller lipo-oligosakkarid) eller lipo-polysakkarid hvor lipid A-delen blir detoksifisert ved hvilken som helst av flere kjente metoder (se for eksempel WO 97/18837 eller WO 98/33923) eller hvilket som helst molekyl omfattende O- polysakkaridet avledet fra nevnte LPS. Med N. meningitidis LPS menes én eller flere av de 12 kjente immunotyper (L1, L2, L3, L4, L, L6, L7, L8, L9, L, L11 eller L12). Kombinasjoner av preparater kan inneholdende eller omfatte: 1) konjugert Hib, konjugert MenA og konjugert MenC; 2) konjugert Hib, konjugert MenY og konjugert MenC; og 3) konjugert Hib og konjugert MenC. Mengden av PS i hvert av konjugatene ovenfor kan være eller g av hver pr. 0, ml human dose. Eventuelt kan preparatene ovenfor også omfatte N. meningitidis serotype B ytre membran-vesikler eller ett eller flere N. meningitidis serotype B ytre membran- (overflate-eksponerte) proteiner eller én eller flere N. meningitidis LPS (som definert ovenfor) for å fremstille en global meningitt-vaksine. Fortrinnsvis er MenA, MenC og MenY enten TT- eller PD-konjugater. De ytterligere bakterielle polysakkarider kan også være valgt fra hvilke som helst av kapsel-pneumokokk-polysakkaridene (fortrinnsvis mer enn 7, mer foretrukket 11 eller mer og mest foretrukket 13 eller mer) så som fra serotype: 1, 2, 3, 4,, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, A, 11A, 12F, 14, 1B, 17F, 18C, 19A, 19F,, 22F, 23F eller 33F. Fortrinnsvis er pneumokokk-polysakkaridene konjugerte (mest foretrukket PD-konjugater). For eksempel kan pneumokokk-polysakkarider avledet fra minst fire serotyper (omfattende for eksempel 6B, 14, 19F og 23F) eller fra minst 7 serotyper (omfattende for eksempel 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F og 23F) velges fra listen ovenfor. Mer foretrukket blir polysakkarider fra mer enn 7 serotyper inkludert i preparatet, for eksempel minst 11 serotyper. For eksempel omfatter preparatet i én utførelsesform 11 kapsel-polysakkarider avledet fra serotyper 1, 3, 4,, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F og 23F (fortrinnsvis konjugert). Minst 13

13 polysakkarid-antigener (fortrinnsvis konjugert) kan være inkludert, selv om ytterligere polysakkarid-antigener, for eksempel 23 valent (så som serotyper 1, 2, 3, 4,, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, A, 11A, 12F, 14, 1B, 17F, 18C, 19A, 19F,, 22F, 23F og 33F) også er omfattet. For vaksinasjon av eldre (for eksempel for forhindring av lungebetennelse) er det fordelaktig å inkludere serotyper 8 og 12F (og mest foretrukket også 1 og 22) i det foretrukne 11 valente antigen-preparat beskrevet ovenfor for å danne en 13/1 valent vaksine, mens for spedbarn eller småbarn (hvor otitis media er av større bekymring) blir serotyper 6A og 19A fordelaktig inkludert for å danne en 13 valent vaksine. Pneumokokk-polysakkaridene kan være adsorbert på aluminium-adjuvanssalter eller ikke. Hib (fortrinnsvis lyofilisert) og pneumokokk-polysakkaridene (fortrinnsvis i en flytende form) kan blandes ekstemporert før administrering til en vert ved en enkel administrering/injeksjon. Med et slikt preparat er det mulig, ved immunisering, å oppnå antistoff-titere mot Hib kapsel-polysakkarid i over 0% av titere oppnådd når Hib-konjugatet blir administrert isolert. Ved foretrukne utførelsesformer, skjer ingen (betydelig) skadelig effekt for pneumokokkpolysakkarid-konjugatene (når det gjelder beskyttende effektivitet) i kombinasjonen sammenlignet med deres administrering isolert. Dette kan bedømmes ved måling av post-primære geometriske gjennomsnittlige konsentrasjoner (GMC) av anti-polysakkarid-antistoff 1 måned etter siste primære dose (idet primære doser er grunn-administreringer - vanligvis 3 - i de første årene av livet). GMC (i g/ml) for en vaksine bør fortrinnsvis være over % (mer foretrukket over 60, 70, 80 eller 90%) av GMC når pneumokokk-polysakkaridene blir administrert uten Hib-konjugatet. En andre indikasjon på at ingen skadelig effekt har skjedd er hvis % individer med antistoff-konsentrasjoner på ikke mindre enn 0, g/ml avviker med ikke mer enn % (fortrinnsvis mindre enn 9, 7,, 3 eller 1%) ved sammenligning 1 måned etter primære administreringer av vaksinen mot vaksinen uten Hib-konjugat. Selv om det ovenfor er angitt Hib og ytterligere bakterielle polysakkarider (den foretrukne utførelsesform) er det antatt at Hib og ytterligere bakterielle oligosakkarider (som naturlig har et lavere antall av repeterende enheter eller

14 som er polysakkarider redusert i størrelse for håndter-barhet kan anvendes, men som fortsatt er i stand til å fremkalle en beskyttende immunrespons hos en vert) som er velkjent på vaksineområdet. Fortrinnsvis blir det multivalente immunogene preparat formulert som en vaksine for in vivo administrering til verten hvor de individuelle komponenter av preparatet blir formulert slik at immunogenisiteten av individuelle komponenter ikke blir svekket av andre individuell komponenter av preparatet (se definisjonen ovenfor). Således, forekommer ingen (betydelig) skadelig effekt for de ytterligere bakterielle polysakkarider (når det gjelder beskyttende effektivitet) i kombinasjonen sammenlignet med deres administrering isolert. Det multivalente immunogene preparat kan formuleres som en vaksine for in vivo administrering til verten, som gir et antistoff-titer bedre enn kriteriet for serobeskyttelse for hver antigen-komponent for en akseptabel prosentdel av humane individer (se definisjonen ovenfor). Anvendelse av det multivalente immunogene preparat ved dette aspekt av oppfinnelsen ved fremstilling av et medikament for behandling eller forebygging av sykdommer forårsaket av infeksjon av Haemophilus influenzae (og fortrinnsvis også de organismer fra hvilke de ytterligere bakterielle polysakkarider er avledet) er også forutsett. Det er mulig å immunisere en human vert mot sykdom forårsaket av Haemophilus influenzae (og fortrinnsvis også de organismer fra hvilke de ytterligere bakterielle polysakkarider er avledet) som omfatter administrering til verten av en immuno-beskyttende dose av det multivalente immunogene preparat. En fremgangsmåte for fremstilling av det multivalente immunogene preparat ved dette aspekt av foreliggende oppfinnelse er også gitt, omfattende trinnet med sammenblanding av de individuelle komponenter. Hvis de ytterligere bakterielle polysakkarider skal adsorberes på et aluminium-adjuvans-salt, må dette utføres før Hib blir satt til preparatet. Fortrinnsvis skal et overskudd av aluminium-adjuvans-salt ikke anvendes. Mest foretrukket skal Hib settes til det aluminium-adjuvans-tilsatte ytterligere polysakkarid ekstemporert før preparatet blir administrert til en vert.

15 14 EKSEMPLER Eksempler er gitt for illustrasjonsformål. Eksempel 1: Fremstilling av en DT-TT-Pw-HepB- (DTPw-HepB) vaksine Denne ble fremstilt som beskrevet i WO 93/ Vaksinen er kommersielt tilgjengelig under navnet Tritanrix-HepB (SmithKline Beecham Biologicals). Eksempel 2: Fremstilling av MenA-MenC-Hib- (MenAC-Hib) vaksiner 1 2 i) MenC-Hib eller MenA-MenC-Hib uten adjuvans MenAC-Hib: N. meningitidis type A kapselpolysakkarid konjugert på protein D (ved anvendelse av CDAP-teknikk), N. meningitidis type C kapselpolysakkarid konjugert på protein D og H. influenzae type b kapsel-polysakkarid konjugert på TT ble blandet sammen i en mengde på g av hvert polysakkarid i hvert konjugat pr. 0, ml human dose. ph ble regulert til 6,1 og det ble lyofilisert i nærvær av sukrose. MenC-Hib: N. meningitidis type C kapselpolysakkarid konjugert på protein D (ved anvendelse av CDAP-teknikk) og H. influenzae type b kapsel-polysakkarid konjugert på TT ble blandet sammen i en mengde på g av polysakkarid i hvert konjugat pr. 0, ml human dose. ph ble regulert til 6,1 det og ble lyofilisert i nærvær av sukrose. ii) Adjuvanstilsatt MenA-MenC-Hib N. meningitidis type A kapsel-polysakkarid konjugert på protein D (ved anvendelse av CDAP-teknikker), N. meningitidis type C kapsel-polysakkarid konjugert på protein D og H. influenzae type b kapsel-polysakkarid konjugert på TT ble hver adsorbert separat i saltvann på aluminiumfosfat ( g av hvert konjugat på henholdsvis 0 g, 0 g og 60 g Al 3+, pr. dose). De adsorberte

16 1 vaksiner ble blandet sammen ved en ph på 6,1 og ble lyofilisert i nærvær av sukrose. Eksempel 3: Klinisk forsøk 1 Undersøkelse MenAC-Hib 001 evaluerer immunogenisiteten, reaktogenisiteten og sikkerheten oppnådd med MenC-Hib og MenAC-Hib (adsorbert og uadsorbert) fremstilt i eksemplet ovenfor gitt som en tre-dose primær vaksinasjon av barn. Undersøkelsen var en fase II, randomisert undersøkelse og omfattet fem undersøkelses-grupper. Preparatene som ble evaluert var et lyofilisert rent og adsorbert preparat av Men AC-Hib og et rent preparat av MenC-Hib. Disse tre preparater ble administrert til de tre første undersøkelsesgrupper av barn ved 3, 4 og måneders alder; Tritanrix-HepB TM ble gitt samtidig (som en separat injeksjon) til disse tre grupper. Det rene preparatet av Men AC-Hib ble også rekonstituert i en flytende difteri, tetanus, helcelle kikhoste, hepatitt B kombinert vaksine (Tritanrix-HepB TM ) og administrert som en enkel injeksjon til den fjerde undersøkelsesgruppen av barn ved 3, 4 og måneders alder. Den femte gruppen (kontroll) ble administrert Tritanrix-HepB TM -Hib vaksine ved 3, 4, måneders alder. Undersøkelsen var åpen, men de to første grupper som mottok de to forskjellig preparater av MenAC-Hib var dobbel-blinde, så vel som de to siste grupper som mottok Tritanrix-HepB TM -MenAC-Hib og Tritanrix-HepB TM -Hib vaksinene. Som oppsummering var undersøkelsesgruppene: 2 Gruppe A MenA g C g -Hib g + DTPw-HepB N=80 Gruppe B MenA g C g -Hib g adsorbert + DTPw-HepB N=80 Gruppe C MenC g -Hib g + DTPw-HepB N=80 Gruppe D DTPw-HepB/MenA g C g -Hib g N=80 Gruppe E DTPw-HepB/MenA g C g -Hiberix N=80 Resultatene viste at hvert preparat som ble evaluert fremkalte en god immunrespons mot hvert antigen (antistoffer mot meningokokk-grupper A og C, Poly-ribosyl-fosfat (kapsel-polysakkaridet av H. influenzae type b), difteri-toksoid, tetanus-toksoid, Bordetella pertussis og hepatitt B ble målt). Hvert vaksinepreparat ble godt tolerert.

17 16 Post III anti Poly-Ribosyl-Fosfat (PRP) Gruppe MenAC-Hib N=67 MenAC-Hib_ads N=71 MenC-Hib N=66 DTPw-HepB /MenAC-Hib N=67 DTPw-HepB/Hiberix N= 69 0,1 g/ml % [L.L.-U.L.] 98, [92,0-0,0] 0,0 [94,9-0,0] 0,0 [94,6-0,0] 98, [92,0-0,0] 98,6 [92,2-0,0] 1,0 g/ml % [L.L.-U.L.] 98, [92,0-0,0] 90,1 [80,7-9,9] 9, [87,3-99,1] 94,0 [8,4-98,3] 92,8 [83,9-97,6] GMC ( g/ml) [L.L.-U.L. ] 19,0 [13,7-26,3] 7,6 [,6-,7] 12,6 [9,2-17,2] 8,7 [6,2-12,2] 7, [,-11,3] 0,1 og 1,0 g/ml er typiske titerterskler som blir observert for å bedømme serobeskyttelse. Det er ingen Hib-interferens med DTPw-HepB/ MenAC-Hib vaksinen. Dette kan også sees i Fig. 1 som viser revers kumulativ kurve (RCC) av dataene. I tillegg er det overraskende at ikke- MenAC-Hib-vaksinen oppviste betydelig høyere anti-prp-titere sammenlignet med det adsorberte preparatet.

18 17 Post III anti Protein D IgG Gruppe MenAC-Hib N=64 MenAC-Hib_ads N=66 MenC-Hib N=63 DTPw-HepB /MenAC-Hib N=63 DTPw-HepB/Hiberix N= 64 0 ELU/ml % [L.L.-U.L.] 96,9 [89,2-99,6] 0,0 [94,6-0,0] 9,2 [86,7-99,0] 0 [94,3-0,0] 14,1 [6,6-2,0] GMC (ELU/ml) [L.L.-U.L. ] 842 [662-72] 1480 [ ] 0 [ ] 181 [ ] 62,1 [4-72] Se også Fig. 2 for de respektive RCC anti-pd IgG kurver. Som det kan sees fremkalte alle preparater en immunrespons på bærerproteinet (protein D). Post III anti PSA (kapsel-polysakkarid av meningokokk A) IgG Gruppe MenAC-Hib N=2 MenAC-Hib_ads N= MenC-Hib N=39 DTPw-HepB /MenAC-Hib N=61 DTPw-HepB/Hiberix N= 7 0,3 g/ml % [L.L.-U.L.] 0,0 [93,2-0,0] 0,0 [93,-0,0] 17,9 [7,-33,] 98,4 [91,2-0,0] 3, [0,4-12,1] GMC ( g/ml) [L.L.-U.L. ] 7,4 [6,0-9,1] 9,8 [7,9-12,2] 0,22 [0,16-0,29] 1,1 [11,-19,9] 0,16 [0,14-0,18] Denne test er en ELISA-test som måler IgG-innhold mot meningokokk polysakkarid A. Fig. 3 viser RCC-kurver for dataene. Det er ingen interferens av MenA polysakkarid antigen for å fremkalle minst samme mengde av antistoffer når til stede i en DTPw-HepB /MenAC-Hib vaksine.

19 18 Post III anti SBA mot meningokokk serogruppe A Gruppe 1:8 % MenAC-Hib N=2 MenAC-Hib_ads N=44 MenC-Hib N=0 DTPw-HepB /MenAC-Hib N=0 DTPw-HepB/Hiberix N= 7 [L.L.-U.L.] 92, [79,6-98,4] 90,9 [78,3-97,] Ikke utført 92, [79,6-98,4] 0,0 [0,0-8,0] GMT [L.L.-U.L. ] 40,1 [26,2-61,4] 40,6 [24,-67,0] Ikke utført 67,7 [4,3-1,1] 0,16 [0,14-0,18] Denne test er en baktericid-test som måler de baktericide antistoffer mot meningokokk serogruppe A. Det er ingen interferens av MenA polysakkaridantigenet for å fremkalle minst samme mengde av antistoffer når til stede i en DTPw-HepB /MenAC-Hib vaksine. Post III anti PSC (meningokokk C kapsel-polysakkarid) IgG og SBA-MenC Anti-PSC IgG Gruppe % 0,3 g/ml [L.L.-U.L.] MenAC-Hib 0,0 N=2/1 [93,2-0,0] MenAC-Hib_ads N=/7 MenC-Hib N=40/37 270,8 [167,7-437,3] 394,2 [244,8-634,9] DTPw-HepB/MenAC- Hib N=61/61 DTPw-HepB/Hiberix N= 7/9 0,0 [93,-0,0] 0,0 [91,2-0,0] 0,0 [94,1-0,0] 3, [0,4-12,1] GMC [L.L.-U.L. ] 6,9 [,7-8,2],4 [8,6-12,7] 6,4 [,2-7,9] 12,1 [,2-14,4] 0,16 [0,14-0,18] SBA-MenC % 1:8 [L.L.-U.L.] 96,1 [86,-99,] 86,0 [74,2-93,7] 97,3 [8,8-99,9] 91,8 [81,9-97,3] 1,7 [0,0-9,1] GMT [L.L.-U.L. ] 322, [8,7-498,] 144,6 [87,1-239,8] 4,4 [3,6-,3]

20 19 Denne test er en ELISA-test som måler IgG-innhold mot meningokokk polysakkarid C. Fig 4 viser en RCC-kurve for dataene. SBA-MenC er en baktericid-test som måler den baktericide aktivitet til serumet mot meningokokk C. Det er et mål for funksjonelle antistoffer. Fig viser en RCC-kurve for dataene. Det er ingen interferens av MenC polysakkarid-antigen for å fremkalle samme mengde av funksjonelle antistoffer når det er til stede i en DTPw-HepB/MenAC- Hib vaksine. Post III SBA-MenC mot meningokokk serogruppe C SBA-MenC Gruppe % 1:8 [L.L.-U.L.] MenAC-Hib 9,1 N=61 [86,3-99,0] MenAC-Hib_ads N=67 MenC-Hib N= 297,8 [1,4-440,4] 426,9 [271,2-671,9] DTPw-HepB/MenAC- Hib N=61 DTPw-HepB/Hiberix N= 62 8,1 [74,3-92,6] 96,4 [87,-99,6] 93,4 [84,1-98,2] 1,6 [0,0-8,7] GMT [L.L.-U.L. ] 293,4 [19,6-440,3] 11,4 [94,2-242,4] 4,4 [3,7-,2] 1 Denne test er en baktericid-test som måler de baktericide antistoffer mot meningokokk serogruppe A. Det er et mål for funksjonelle antistoffer. Det er ingen interferens på MenC polysakkarid antigen for å fremkalle samme mengde av funksjonelle antistoffer når det er til stede i en DTPw-HepB/MenAC-Hib vaksine.

21 Serumomdannelsesgrader av antistoffer mot difteri, tetanus, B. pertussis celler og HepB Skjema (3-4- måneder) D T BP HepB MenAC-Hib 98, 98, 9, 92, [92,0-0] [92,0-0] [87,3-99,1] [83,4-97,] DTPw-HepB/MenAC-Hib 98, 0 97,0 97,0 [92,0-0,0] [94,6-0] [89,-99,6] [89,6-99,6] DTPw-HepB/Hiberix ,1 97,1 [94,8-0,0] [94,7-0] [89,8-99,6] [89,9-99,6] BP angir B. pertussis. En ELISA-test ble utført som målte IgG mot helcelle bakterier. Geometrisk gjennomsnittstiter (GMT) av antistoffer mot difteri, tetanus, B. pertussis celler og HepB Skjema (3-4- måneder) D T BP HepB MenAC-Hib 2,02 2,18 74,9 37, [1,62-2,1] [1,69-2,82] [61,9-90,8] [236,2-41,2] DTPw-HepB/MenAC- Hib 1,69 [1,36-2,09] 2,42 [1,96-3,00] 71,6 [9,7-8,9] 380,2 [26,1-4,2] DTPw-HepB/Hiberix 1,26 2,08 69,0 379,1 [1,03-1,3] [1,67-2,9] [8,2-81,8] [26,0-42,2] Fra de tidligere to tabeller ble det observert at immunresponsen på DT, TT, 1 Pw og HepB er lignende den oppnådd med den registrerte Tritanrix-HepB vaksine når det gjelder både serumomdannelse og GMT.

22 21 Eksempel 4: Fremstilling av Hib 11 valent pneumokokk-konjugat- (Hib/Strep11V) vaksine H. influenzae type b kapselpolysakkarid konjugert på TT ( g av polysakkarid i konjugatet pr. dose) som hadde vært lyofilisert ved en ph på 6,1 i nærvær av laktose [Hiberix (SmithKline Beecham Biologicals)] ble ekstemporert (på samme dag som anvendelse) oppløst i en væskeløsning av elleve-valent pneumokokk-kapselpolysakkarid (serotyper 1, 3, 4,, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F og 23F) konjugert på PD (1 g av polysakkarid i hvert konjugat pr. dose). Pneumokokk-vaksinen var tidligere adsorbert på 0, mg Al 3+ (som AlPO 4 ). Eksempel : Kliniske forsøk med vaksinen i Eksempel 4 1 Vaksinen fra Eksempel 4 og en kontrollvaksine ble administrert i et tredose- (3, 4, måneders alder) regime til tyske barn. Immunresponsresultater (målt 1 måned etter siste primære administrering) var som følger. Anti pneumokokk IgG antistoffer: GMC ( g/ml) (ved Elisa) PS Gruppe A Gruppe D Antistoff Timing N S+ [%] GMC N S+ [%] GMC Anti-1 PIII 0 1, ,99 Anti-3 PIII 0 2, ,0 1, Anti-4 PIII 0 0, ,03 Anti- PIII 0 1, ,34 Anti-6B PIII 0 0, ,62 Anti-7F PIII 0 1, ,33 Anti-9V PIII 0 1, ,21 Anti-14 PIII 0 2, ,32 Anti-18C PIII 0 1, ,04 Anti-19F PIII 0 2, ,92 Anti-23F PIII 96,7 0, ,76 2 Gruppe A = 11Pn-PD + Infanrix-HeXa TM (Infanrix-Penta pluss tilsatt Hibkonjugat) Gruppe D = 11Pn-PD/Hib + Infanrix-PeNTa TM + indikerer samtidig (i forskjellige lemmer) heller enn kombinert administrering.

23 22 Prosent av individer med antistoff-konsentrasjoner ikke mindre enn 0, g/ml gruppe PS B 7F 7V 14 18C 19F 23F D 84,8 87,9 87,9 90,9 1, 90,9 93,9 97,0 81,8 97,0 72,7 A 86,7 96,7 76,7 90,0 0,0 93,3 90,0 90,0 80,0 96,7 66,7 Anti PRP antistoffer: GMC ( g/ml) (ved Elisa) Gruppe D (N = 34) n 1 GMC µg/ml [µg/ml] [%] Anti PIII 33 0,7 PRP 1 0% av individene hadde anti-prp (Hib-polysakkarid) antistoff-konsentrasjoner på ikke mindre enn 1,0 g/ml. Hiberix (uadsorbert Hib-TT konjugat) har en GMC etter et lignende administreringsregime på ca. 6 g/ml. Immunresponsen, når det gjelder ELISA antistoffer, hos barn som mottok 11Pn-PD/Hib-vaksine var lignende den observert for de som mottok 11Pn-PDvaksine for alle serotypene, med unntak av serotyper 1, 3 og 9V for hvilke en trend med lavere geometriske gjennomsnittskonsentrasjoner ble observert for 11Pn-PD/Hib-vaksinen. Imidlertid var disse forskjeller ikke betydelige som vist ved overlapping av 9% sikkerhets-intervaller. 11Pn-PD/Hib-vaksinen fremkalte funksjonelle (opsonofagocytiske) antistoffer for alle 11 serotyper. Kombinasjon av Hib-vaksine med pneumokokk-konjugat-vaksine grep ikke vesentlig inn i pneumokokk-immunrespons og forbedret overraskende anti-prprespons sammenlignet med begge de registrerte vaksiner Infanrix-HeXa og Hiberix. 2

24 23 Eksempel 6: Klinisk forsøk for effekten av lavere mengder av Hib i en DTPwHepB-vaksine 1 Et randomized forsøk for å bedømme immunogenisiteten av en Hib-TT konjugatvaksine ved forskjellige doser i SB Biologicals DTPwHepB (Tritanrix - HB) vaksine ble utført som en primær vaksinasjon i friske barn 6, og 14 uker gamle. 44 individer i fire grupper (136 hver) ble administrert med de følgende vaksiner: Gruppe 1: DTPw-HepB ekstemporert blandet med en full dose av Hib- TT (PRP g; TT - g; laktose 12,6 g; aluminium [som salter] 0,1 mg); Gruppe 2: DTPw-HepB ekstemporert blandet med en halv dose av Hib-TT (PRP g; TT - g; laktose g; aluminium [som salter] 0,07 mg); Gruppe 3: DTPw-HepB ekstemporert blandet med en kvart dose av Hib-TT (PRP 2, g; TT - g; laktose g; aluminium [som salter] 0,036 mg); Gruppe 4: DTPw-HepB samtidig administrert (i forskjellige lemmer) med en full dose av Hib-TT. Geometrisk gjennomsnittlige titere (GMT) av anti-prp antistoffer én måned etter den tredje dose var som følger: Gruppe N GMT 9% sikkerhets- intervall ,766 11,83 18, ,4 14,9 21, ,0 16,90 26, ,94 18,463 28,38 Den lave doseformuleringen har overraskende de høyeste GMT-verdier. Denne effekten bør være enda større hvis Hib-TT-vaksinen er uadsorbert.

25 24 P a t e n t k r a v 1. Multivalent immunogent preparat, k a r a k t e r i s e r t v e d a t det omfatter et konjugat av et bærerprotein og kapsel-polysakkaridet eller oligosakkaridet fra H. influenzae type B i en dose på 1- g av polysakkarid eller oligosakkarid, hvor nevnte preparat i tillegg omfatter en eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider som er i stand til å gi beskyttelse til en vert mot infeksjon av bakteriene fra hvilke de er avledet, hvor en eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider inkluderer N. meningitides serogruppe C kapsel-polysakkarid eller oligosakkarid konjugert til bærerproteinet, og hvor alle polysakkarid(er) eller oligosakkarid(er) er ikkeadjuvante Multivalent immunogent preparat ifølge krav 1, k a r a k t e r i s e r t v e d a t de/det en eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider omfatter to eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider. 3. Multivalent immunogent preparat ifølge krav 1 eller 2, k a r a k t e r i s e r t v e d a t de ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider er konjugert til et bærerprotein Multivalent immunogent preparat ifølge krav 2, k a r a k t e r i s e r t v e d at to eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider innbefatter N. meningitidis serogruppe A kapsel-polysakkarid eller oligosakkarid konjugert til et bærerprotein, og N. meningitidis serogruppe C kapsel-polysakkarid eller oligosakkarid konjugert til et bærerprotein.. Multivalent immunogent preparat ifølge krav 1, k a r a k t e r i s e r t v e d at to eller flere ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider innbefatter

26 2 N. meningitidis serogruppe C kapsel-polysakkarid eller oligosakkarid konjugert til et bærerprotein, og N. meningitidis serogruppe Y kapsel-polysakkarid eller oligosakkarid konjugert til et bærerprotein. 6. Multivalent immunogent preparat ifølge krav 1 eller 2, k a r a k t e r i s e r t v e d a t det omfatter mer enn syv ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider. 7. Multivalent immunogent preparat ifølge krav 6, k a r a k t e r i s e r t v e d a t ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider er pneumokokk-kapsel-polysakkarider eller oligosakakarider Multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-7, k a r a k t e r i s e r t v e d a t de ytterligere bakterielle polysakkarider eller oligosakkarider er valgt fra en gruppe bestående av: N. meningitidis serogruppe A kapsel-polysakkarid, N. meningitidis serogruppe C kapsel-polysakkarid, N. meningitidis Serogruppe Y kapsel-polysakkarid, N. meningitidis serogruppe W kapsel-polysakkarid, Streptokokk pneumoniae serotype 1 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 2 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 3 kapselpolysakkarid, S. pneumoniae serotype 4 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 6A kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 6B kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 7F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 8 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 9N kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 9V kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype A kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 11A kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 12F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 14 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 1B kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 17F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 18C kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 19A kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 19F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 22F

27 26 kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 23F kapsel-polysakkarid, S. pneumoniae serotype 33F kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe I kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe II kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe III kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe IV kapsel-polysakkarid, Gruppe B Streptokokk gruppe V kapselpolysakkarid, Staphylococcus aureus type kapsel-polysakkarid, Staphylococcus aureus type 8 kapsel-polysakkarid, Vi polysakkarid fra Salmonella typhi, N. meningitidis LPS, M. catarrhalis LPS og H. influenzae LPS eller oligosakkarider derav Multivalent immunogent preparat ifølge krav 1-8, k a r a k t e r i s e r t v e d a t det anvendte bærerprotein(er) er valgt fra gruppen omfattende: tetanus-toksoid, difteri-toksoid, CRM197, rekombinant difteri-toksin, OMPC fra N. meningitidis, pneumolysin fra S. pneumoniae og protein D fra H. influenzae.. Multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-8, k a r a k t e r i s e r t v e d at bærerproteinet som blir anvendt er tetanus toksoid. 11. Multivalent immunogent preparat ifølge krav 9, k a r a k t e r i s e r t v e d a t kapsel-polysakkaridet eller oligosakkaridet fra H. influenzae type B og de ytterligere polysakkarider eller oligosakkarider ikke er konjugert til samme bærer Multivalent immunogent preparat ifølge krav 11, k a r a k t e r i s e r t v e d a t kapsel-polysakkaridet eller oligosakkaridet fra H. influenzae type B og de ytterligere polysakkarider eller oligosakkarider ikke alle er konjugert til CRM Multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-12, k a r a k t e r i s e r t v e d at CDAP blir anvendt for syntese av polysakkarid- eller oligosakkarid- bærerkonjugater. 14. Multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-13, k a r a k t e r i s e r t v e d at det inneholder 1- g av hvert polysakkarid eller oligosakkarid.

28 27 1. Anvendelse av multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-14 ved fremstilling av et medikament for behandling eller forebygging av sykdommer forårsaket av infeksjon med Haemophilus influenzae. 16. Multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-14, for anvendelse i et medikament. 17. Fremgangsmåte for fremstilling av et multivalent immunogent preparat ifølge kravene 1-14 omfattende trinnet med sammenblanding av de individuelle komponenter.

29

30

31

32

33