LINEZOLIDRESISTENS HOS GRAM-POSITIVE KOKKER

Transkript

1 LINEZOLIDRESISTENS HOS GRAM-POSITIVE KOKKER KRISTIN HEGSTAD INNHOLD Linezolid Prevalens resistens Tedizolid nytt oxazolidinon Kliniske brytningspunkter Resistensmekanismer Molekylære metoder for deteksjon 1

2 LINEZOLID Oxazolidinon Tre aromatiske ringer; Bakteriostatisk effekt Inhiberer bakteriell proteinsyntese Blokkerer initiering av proteinsyntesen ved binding til peptidyltransferase sentret i A sete lommen i 50S 50S ribosomal subenhet; 5S + 23S rrna + proteiner 30S ribosomal subenhet; 16S rrna + proteiner Velez & Janech, Nat Rev Nephrol 6: LINEZOLIDRESISTENS PREVALENS Testet isolater samlet inn fra 73 medisinske senter (33 land) fra 5 kontinenter Prevalens fortsatt < 1% for alle testede organismer Mendez 2014 JAC 69:

3 TEDIZOLID Oxazolidinon 4-16 ganger mer potent enn linezolid mot stafylokokker og enterokokker Inhiberer bakteriell proteinsyntese Blokkerer som linezolid initiering av proteinsyntesen ved binding til peptidyltransferase sentret i 50S Kanafani & Corey Expert Opin Investig Drugs 21: NORDICAST BRYTNINGSPUNKTER LINEZOLID Enterokokker og stafylokokker MIC R > 4 mg/l Zone diameter R < 19 mm 19 mm Streptokokker gr A, B, C, G og S. pneumoniae MIC R > 4 mg/l og S 2 mg/l Zone diameter R < 16 mm og S 19 mm 3

4 NORDICAST BRYTNINGSPUNKTER TEDIZOLID Stafylokokker og Streptokokker gr A, B, C, G MIC R > 0.5 mg/l Isolater som er følsomme for linezolid, kan rapporteres som følsomme for tedizolid Streptococcus anginosus gruppen MIC R > 0.25 mg/l MUTASJONSBASERT LINEZOLIDRESISTENS GIR GENERELT KRYSSRESISTENS MOT TEDIZOLID Mutasjoner i 23S rdna domene V Hovedsakelig G2576U mutasjon både hos enterokokker og stafylokokker Funnet flere andre mutasjoner i stafylokokker Få rapporter i streptokokker Mutasjoner i ribosomal protein L3 og L4 hos stafylokokker og enterokokker og mer sjelden i streptokokker Opptrer ofte etter behandling med linezolid Long & Vester 2012 AAC 56:

5 MUTASJONSBASERT RESISTENS (2) Flere kopier av 23S rrna genet 4 i E. faecalis 6 i E. faecium 5 eller 6 i S. aureus 4 i S. pneumoniae Reversibel resistens så lenge ikke alle kopiene har fått mutasjonen Første mutasjonen som gjerne opptrer under seleksjon er ratebegrensende trinn De andre kopiene byttes ut vha rekombinasjon Resistensnivået korrelerer med antall kopier som har mutasjonen Vanligvis minimum 2 kopier for å detektere resistens GENETISK PÅVISNING AV 23S rdna MUTASJON 23S rdna single nukleotid polymorfisme (SNP) analyse PCR og restriksjonskutt som avslører mutasjon (Bonora et al., JCM 44:1153-5) Mutation lead to new restriction site and two new fragments Real time PCR med hybridiseringsprober mot mutasjon/wt (Werner et al., JCM 42: ; Woodford et al., JCM 40: ) Fluorescens in situ hybridisering (FISH) assay med locked nucleic acid (LNA) probe mot punktmutasjonsområdet (Werner et al., JCM 45:3421-3) Pyrosekvensering gir også allelkvantifisering (Sinclair et al., AAC 47:3620-2) 23S rdna sekvens PCR for separat amplifisering av 23S rdna alleler i E. faecalis og deretter sekvensering (Werner et al., JCM 42: ) PCR og sekvensering uten å skille mellom alleler Kloning av enkeltalleler og sekvensering 5

6 OVERFØRBAR LINEZOLIDRESISTENS (1) cfr (chloramphenicol-florfenicol resistance) gen Koder for metyltransferase som katalyserer metylering av A2503 i 23S rrna V domenet Ofte på plasmider med andre resistensgener i nærheten Resulterer i resistens mot 5 antibiotikaklasser Fenikoler, lincosamider, pleuromutiliner, streptogramin A og linezolid Tedizolid beholder sin aktivitet Locke et al., AAC 54: CFR GENSPREDNING Stafylokokker Opprinnelig identifisert på plasmid i et Staphylococcus sciuri isolat fra storfe i 1997 Første kliniske S. aureus isolat i 2005 i USA (MRSA) Nylig funnet globalt i kliniske isolater Første norske isolat identifisert i september 2016 Enterokokker Første kliniske isolat i 2012 Thailand Fortsatt lav prevalens i kliniske isolater Funnet i noen VRE inkludert to isolater fra pasienter overført fra India til Norge Pedersen et al., th ECCMID, Barcelona, Spain, P1547 6

7 CFR GENLOKALISASJON I S. aureus CM05 på 23S rrna allel 4 ko-uttrykt med ermb som del av mlr operon Locke et al., 2012 Antimicrob Agents Chemother 56: Oftere lokalisert på plasmider og med ulike IS elementer og andre antimikrobielle resistensgener i nærheten Pedersen et al., th ECCMID, Barcelona, Spain, P1547 OVERFØRBAR LINEZOLIDRESISTENS (2) Nylig beskrevet cfrb gen 72 (75)% identitet med cfr (Cfr proteinet), usikker antibiotikaprofil Lokalisert på transposon Deshpande 2015 Antimicrob Agents Chemother 59:

8 OVERFØRBAR LINEZOLIDRESISTENS (3) optra (oxazolidinone phenicoltransferable resistance) gen (Wang J Antimicrob Chemother 70: ) Plasmidbåret ABC transporter Resulterer i resistens både mot oxazolidinonene linezolid og tedizolid og mot fenikoler Funnet i kliniske isolater hos enterokokker samt S. sciuri fra gris Locher Phil Trans R Soc B 364: UKJENTE MEKANISMER FOR LINEZOLIDRESISTENS Noen stafylokokker og enterokokker med lavgradig resistens har ikke kjente resistensmekanismer Overuttrykk av multi-drug resistens (MDR) effluks pumper? Linezolid vist å være substrat for noen MDR effluks pumper 8

9 Antall tilfeller GENETISK PÅVISNING AV OVERFØRBAR RESITENS PCR primerer med 100% match med både stafylokokk og enterokokk cfr gen (Kehrenberg & Schwarz, AAC 50: ) Pedersen et al., th ECCMID, Barcelona, Spain, P1547 PCR produkt bekreftes med restriksjonskutt eller sekvensering Multipleks med cfr primerer som over + optra primerer fra Public Health England Fullgenom sekvensering for å påvise geninnhold i bakterieisolater ÅRLIG ANTALL LINEZOLIDRESISTENTE GRAM-POSITIVE I NORGE * År E. faecalis E. faecium S. aureus *3 isolater fra samme sykehus med identiske PFGE mønstre WGS data viser SNP forskjeller i kjernegenomet Status 11/10/2016 K Hegstad Hegstad et al., Scand J Infect Dis 46:

10 Antall tilfeller LINEZOLIDRESISTENSMEKANISMER HOS GRAM-POSITIVE I NORGE E. faecalis E. faecium S. aureus S rrna G2576U mutasjon Status 11/10/2016 K Hegstad cfr+vana cfr optra Resistensmekanisme * * fra samme sykehus WGS data viser at isolatene ikke er beslektet OPPSUMERING; OXAZOLIDINONRESISTENSMEKANISMER Oxazolidinonresistens i Gram-positive Mutasjoner i ribosomet mest vanlig (spesielt i 23S rrna) og gir generelt kryssresistens mot linezolid og tedizolid Overførbar linezolidresistens (Cfr) som metylerer 23S rrna sete funnet i kliniske isolater av enterokokker og stafylokokker også i Norge Overførbar linezolidresistens (OptrA) som pumper ut både linezolid og tedizolid funnet i kliniske isolater av enterokokker også i Norge Long & Vester 2012 AAC 56: