Rapport från genetisk övervakning av varg i Sverige 2003/2004

Transkript

1 Rapport från genetisk övervakning av varg i Sverige 2003/2004 Av: Øystein Flagstad, Malin Johansson, Ceilia Wärdig, Anna-Karin Sundqvist og Hans Ellegren Evolutionsbiologisk Center Uppsala Universitet

2 BAKGRUNN Ulv i Norge og Sverige tilhører en felles bestand med utberedelse på tvers av riksgrensen. Hovedutberedelsen har siden 1980-tallet vært konsentrert til de sørskandinaviske skogtraktene i Värmlands og Dalarnas län i Sverige og i Hedmark fylke i Norge. Bestandsovervåkningen av ulv skjer derfor i nært samarbeid på tvers av landegrensene. Under tellingen vinteren 2004 ble bestanden estimert til å telle ca 100 individer (Wabakken et al. 2004). Hele bestanden kan føres tilbake til tre dyr, som alle var immigranter fra øst (Vila et al 2003). Nyere forskning har vist at det er mulig å identifisere individer basert på DNA isolert fra ekskrementer. Dette åpner opp for en ny metodisk tilnærming i bestandsovervåkningen, som kan supplere de tradisjonelle metodene basert på sporing og registrering av familiegrupper. Ved å samle inn ekskrementer fra de ulike revirene, kan man gjennom moderne DNA-teknologi kartlegge hvor mange individer som finnes i det angitte området og analysere slektskapet mellom de ulike individene. I denne rapporten vil vi redegjøre for analysen av materiale samlet inn i Sverige i 2003 og Vi vil legge vekt på antall ulike individer og slektskap mellom individer innenfor de ulike familiegruppene. METODIKK Sampling og laboratoriearbeid Totalt 180 prøver samlet inn i Västerbotten, Jämtland, Dalarna, Värmland, Väster- Götaland, Örebro, og Gävleborg i 2003 og 2004 ble sendt inn til analyse (Appendix 1). I tilfeller av vellykket ekstraksjon av ulvespesifikt kjerne-dna, har vi gjennomført genotyping på tvers av 19 mikrosatelittmarkører som følger: (c2001, c2006, c2010, c2017, c2054, c2079, c2088 and c2096 (Francisco et al. 1996), vwf (Shibuya et al. 1994), u109, u173, u225, u250 and u253 (Ostrander et al. 1993) and PEZ01, PEZ03, PEZ05, PEZ06 and PEZ12 (Perkin Elmer, Zoogen; FHCRC Dog Genome Project) Siden isolater fra ekskrementer som oftest har en meget lav DNA konsentrasjon er det vesentlig for metodens robusthet å kjøre et antall replikater for hver prøve. Basert på resultatene fra tidligere pilotstudier for bl.a. jerv, har vi valgt å legge følgende kriterier til grunn for robust genotyping. Et individ som er homozygot (dvs. har én genetisk variant) for et locus, må vise dette i tre uavhengige replikater for at dette skal aksepteres som et autentisk resultat. Et individ som er heterozygot (dvs. har to ulike genetiske varianter) for et locus, må vise et slikt mønster i minst to uavhengige replikater for at individet skal aksepteres som heterozygot for dette locuset. Dette betyr i klartekst at alle individuelle prøver må kjøres i minst 2-3 replikater for hvert locus. Dersom noe som helst tvil skulle ligge til grunn etter gjennomføring i henhold til disse kriteriene, er ytterligere replikater blitt gjennomført for de aktuelle prøvene. Alle prøver som gav ulvespesifikt kjerne-dna ble også kjønnsbestemt ved hjelp av to kjønnsbundne DNA-markører (en på X-kromosomet og en på Y-kromosomet). Tre uavhengige replikater ble kjørt for alle prøver ved kjønnsbestemmelsen. Etter endt mikrosatelittanalyse og kjønnsbestemmelse ble de genetiske profilene til alle individuelle prøver sammenlignet. Prøver som var identiske på tvers av alle loci samt representerte samme kjønn, ble klassifisert som representanter for ett og samme individ. 1

3 Dataanalyse - immigrasjon og slektskap mellom individer Den skandinaviske ulvebestanden er genetisk differensiert fra bestandene i Finland og Russland (Vila et al. 2003). Man kan dermed ved hjelp av hvert enkelt individs genotype bestemme sannsynligheten for om det har sin opprinnelse i Skandinavia eller om det er en immigrant fra øst. Vi har brukt metoden til Pritchard et al. (2001) for å bestemme opprinnelsen til hvert av de analyserte individene. Slektskap mellom individer ble bestemt ved hjelp av metoden beskrevet av Marshall et al. (1998). Informasjon om antatt status til de ulike prøvene (f.eks. antatt mor / antatt unge), ble brukt aktivt og testet ved hjelp av DNA-profilene til de ulike prøvene. RESULTATER OG DISKUSJON Suksessrate og genotypningskvalitet Det ble samlet inn totalt 180 prøver hvorav de fleste var spillningsprøver. Ti av totalt 166 spillningsprøver viste seg å komme fra en annen art enn ulv (8 rev, 2 hund). 88 av de resterende 156 prøvene var av god nok kvalitet til å genotypes for mikrosatelitter. Dette gir en suksessrate på 56 % for spillningsprøver, en tilsvarende suksessrate som vi har hatt på jerv siden vi startet opp denne formen for analyse i år Sju av 11 blodspor samlet fra snø (64 %) fungerte, men ingen av de to urinprøvene. Tabell 1 Suksessrate for alle innsamlede prøver Spillning Urin Blod Vävnad fungerer negativ Fungere negativ fungerer negativ fungerer negativ 88 r 78 0 r % 0 % 64 % 100 % Kvaliteten på de genetiske analysene er jevnt over bra, og de fleste fungerende prøver har en lav feilprosent (<10 %), dvs at genotypningsfeil oppstår for mindre enn 10 % av de uavhengige replikatene. Med en lav feilprosent vil genotypningsfeil enkelt kunne detekteres gjennom replikerte analyser. For enkelte prøver er imidlertid feilprosenten en god del høyere, slik at vi totalt ender opp med en feilprosent på 20,9 %. Den største andelen av genotypningsfeilene er såkalte allelic dropouts [dvs. genotypningsfeil der kun det ene av to alleler (genetiske varianter) detekteres i analysen]. En høy dropoutrate kan ha alvorlige konsekvenser for de videre analysene. For det første kan to prøver som kommer fra samme individ ende opp med ulike genotyper i analysen. Disse prøvene vil således tolkes som om de representerer to ulike individer. Videre kan slike genotypningsfeil påvirke slektskapsanalyser, slik at faktiske foreldre/avkoms-relasjoner ikke blir detektert i analysen. En høy dropoutrate behøver likevel ikke bety at vi ender opp med feil i det endelige datasettet. Siden vi kjører et stort antall replikater for alle prøver, vil dropouts i de aller fleste tilfeller oppdages underveis. For noen av prøvene våre har vi kjørt inntil 11 fungerende replikater for et enkelt locus, og gjennomsnittet ligger på mellom 4 og 5 replikater per locus. Analysene våre tyder på at vi har lyktes med å eliminere de fleste genotypningsfeil gjennom en slik replikasjonsstrategi. For det første virker identiteten til de ulike prøvene intuitivt fornuftig (dvs prøver som er samlet svært nær hverandre representerer ofte det samme individet). I tillegg har vi detektert foreldre/avkoms- 2

4 relasjoner med stor grad av sikkerhet, noe som ikke ville vært tilfelle med en høy feilprosent i det endelige datasettet. Antall ulike individer og bestandstilhøriget Figur 1-8 viser den geografiske fordelingen til alle fungerende prøver, samt hvilket individ og kjønn de representerer (se Appendix 1 for mer detaljerte opplysninger). De 95 fungerende prøvene (spillning, blod, vävnad) representerte 43 ulike individer (17 hunner og 25 hanner, 1 ukjent). Våre analyser viser at alle de 44 individene har sin opprinnelse i den Skandinaviske ulvepopulasjonen, og vi har således ingen nye immigranter i dette materialet. Ti av de 44 individene er representert i vår interne database bestående av døde ulver, radiomerkede dyr, samt individer detektert fra tidligere ekskrementanalyser (Tabell 2). Tabell 2 Alle individer som er representert i vår interne database fra tidligere Individ Län Identisk med Kommentar 1 (M) S V125 (rapport 11/04) 5 (F) O V (F) O V02-12 Faecesprøve fra Värmland, (Mars 2004) Radiomerket individ Dals-Ed; voksen hunn, født 2000(?) Radiomerket individ Glaskogen; voksen hunn, sannsynligvis født (M) T V98-04 Radiomerket som valp i Leksand (F) S V02-06 Radiomerket som valp individ; S. Finnskog-Nyskoga 23 (M) W V111 (rapport sept 2003) Faecesprøve fra Dalarna 15 (M) AC V121 (rapport 07/04) Faecesprøve fra Västerbotten 42 (F) W V00-04 Radiomerket som valp i Leksand (M) S V123 (rapport 08/04) Faecesprøve fra Skärfjäll 27 (M) S V123 (rapport 08/04) Faecesprøve fra Skärfjäll Ser vi på de individene som er representert ved flere prøver, er disse stort sett samplet relativt nær hverandre. Noen få unntak finnes dog. I denne sammenhengen kan man spesielt nevne individ 11 (Figur 2), som har beveget seg flere hundre kilometer fra desember 2003 mars Dette individet ble av felt-personell observert i Sundsvall og senere Gävle, og ble karakterisert som en vandringsvarg (Appendix 1; Prøve VS04-140). Vi har totalt 6 observasjoner på denne ulven. Desember 2003 oppholdt den seg i nærheten av Sundsvall. Den vandret så sørover, og oppholdt seg i Januar 2004 i Gävleborgs län. Siden beveget den seg nordover igjen, og ble i slutten av februar og begynnelsen av mars funnet igjen i Jämtlands län. 3

5 Slektskap mellom individer Slektskap mellom individer ble analysert innenfor 5 familiegrupper: (1) Kilsbergen, (2) Furudal, (3) Ockelbo, (4) Filipstad, (5) Ed-Halden (Tabell 3). I Kilsbergen ser det ut til at vi har samplet både alfahannen og alfahunnen, samt 4 avkom. I Furudal og Ockelbo er det sannsynlig at vi har samplet alfahunnen og henholdsvis 6 og 3 avkom. Alle de 13 ungene i disse tre familiegruppene er samplet før april De stammer derfor sannsynligvis fra yngling i 2003, som ble registrert for alle tre familiegrupper (Wabakken et al. 2004). Noen av dem kan også være fra tidligere ynglinger i de respektive revirene. Tabell 3 Alle svenske familiegrupper som var representert i prøvematerialet, og som således kunne testes ved slektskapsanalyser. Revir Figur Mor a) Avkom Far a) Kilsbergen 8 8 7, 12, Furudal , 17, 28, 37, 43, 44 ikke samplet Ockelbo , 32, 34 ikke samplet Filipstad 7 ikke samplet 1, 6, 9 ikke samplet Ed-Halden U02-08 a) Alle foreldre/avkoms-relasjoner hadde et signifikansnivå på p > 0.95 bortsett fra relasjonen mellom individ 33 og 34, samt relasjonen mellom individ 22 og 26. Disse to foreldre/avkoms-relasjonene hadde et signifikansnivå på 0.80 < p < I Ed-Halden foreligger det en svært sannsynlig foreldre/avkoms-relasjon mellom individ 5 og 40, med individ 5 som den mest sannsynlige moren. Siden individ 5 er identisk med V03-07 (Tabell 2), bekrefter dette langt på vei at hun er alfahunnen i reviret. Individ 39 er ubeslektet i forhold til individene 5 og 40. Det viser seg at den gamle alfahannen (U02-08; sannsynlig far for individ 40; se Tabell 3) ble skutt i mai Individ 39 kan således være en ny hann som er i ferd med å innlemmes i reviret. Et nytt valpekull kan være født i 2004, men dette er foreløpig ikke bekreftet (Wabakken et al. 2004). I Filipstad er slektskapsrelasjonene mer uklare. Her har vi samplet 3 individer, som alle synes å være beslektet. En foreldre/avkoms-relasjon kan imidlertid utelukkes for alle parvise kombinasjoner av disse individene. Det dreier seg således mest sannsynlig om tre søsken. Slektskapsrelasjoner i den skandinaviske ulvebestanden kan være problematiske å påvise i og med at alle individer til en viss grad er i slekt med hverandre (3 founders). For eksempel kan det være problematisk å skille helsøskenstatus fra foreldre/avkomstatus. Vi føler likevel at de presenterte slektskapsdataene har en relativt høy grad av sikkerhet, og konfidensnivået ligger over 95% for de aller fleste foreldre/avkomsrelasjoner (Tabell 3). Revirmarkerende par For seks av de sju revirmarkerende par som ble registrert i Sverige vinteren 2004 (Wabakken et al. 2004), er minst et individ representert i ekskrementmaterialet. For revir Henvålen i Jämtland var hannen representert (Individ 27; Figur 2). Begge revirmarkerende individer ble avlivet Feb 2004 etter fellingstillatelse. For revir Amungen var både hannen og hunnen representert (Individene 10 og 13; Figur 4). For revirene Halgån og Liljendal var henholdsvis hunnen (individ 20) og hannen (individ 4) representert (Figur 5). For revir Kroppefjäll var både hannen og hunnen 4

6 representert (Individene 25 og 36; Figur 6). Også for revir Uttersberg var både hannen og hunnen representert (Individene 18 og 30; Figur 7). KONKLUSJON Vurdert ut i fra de presenterte dataene, ser det ut som denne typen av noninvasive monitoring kan bidra med viktig informasjon for overvåkningsarbeidet på ulv i årene framover, og således fungere som et verdifullt supplement til tradisjonell sporing og yngleregistrering. I og med at det fortsatt er et relativt begrenset antall familiegrupper i Skandinavia (11 vinteren 2003/2004) er situasjonen relativt oversiktlig, og vi bør i løpet av to-tre innsamlingssesonger ha relativt god oversikt over de ulike familiegruppene. Samplingsstrategien som er brukt ser generelt ser det ut til å gi ganske god dekning innenfor de ulike familiegruppene, og også for de revirmarkerende parene. I forhold til det som ble anslått fra bestandsregistreringen vinteren 2003/2004, ser det ut til at vi har en dekningsprosent på godt over 50% for de fleste familiegruppene. For tre familiegrupper ser det ut til at vi har samplet bortimot alle individer (Ockelbo, Furudal, Kilsbergen). Likevel har vi bare funnet to sannsynlige alfahanner i materialet vårt (Kilsbergen + ny hann i Ed-Halden). Det kunne derfor være ønskelig med en enda tettere sampling i revirene. En god oversikt over alfaparene vil være av betydning for detaljert overvåkning av bestanden i årene framover. Når det gjelder resultatene fra slektskapsanalysene synes vi de er relativt oppløftende. Som nevnt ovenfor, kan det være problematisk å skille helsøskenstatus fra foreldre/avkom-status. Det kan derfor være vanskelig å tilbakeføre utvandrede ulver til det reviret de ble født, og vi har valgt å droppe denne typen betraktninger for det foreliggende materialet. Med en god og kontinuerlig oversikt over alfaparene, vil denne typen analyser forenkles betraktelig. REFERANSER Francisco LV, Langston AA, Mellersh CS, Neal CL Ostrander EA (1996) A class of highly polymorphic tetranucleotide repeats for canine genetic mapping. Mammalian Genome 7, Marshall, TC, Slate J, Kruuk L, Pemberton JM (1998) Statistical confidence for likelihood-based paternity inference in natural populations. Mol Ecol 7, Ostrander, EA, Sprague GF, Rine J (1993) Identification and characterization of dinucleotide repeat (ca)n markers for genetic-mapping in dog. Genomics 16, Pritchard JK, Stephens M, Donnelly P (2001) Inference of population structure using multilocus genotype data. Genetics 155, Shibuya H, Collins BK, Huang TH, Johnson GS (1994) A polymorphic (AGGAAT)n tandem repeat in an intron of the canine von Willebrand factor gene. Anim Genet 25, 122. Vilà C, Sundqvist A-K, Flagstad Ø, Seddon J, Björnerfeldt S, Kojola I, Casulli A, Sand H, Wabakken P, Ellegren H (2003) Rescue of a severely bottlenecked wolf (Canis lupus) population by a single immigrant. Proc R Soc Lond B Biol Sci 270, Wabakken P, Aronson Å, Sand H, Strømseth TH, Kojola I (2004) Ulv i Skandinavia: Statusrapport for vinteren Høgskolen i Hedmark; Oppdragsrapport nr

7 VS VS VS Västerbotten km Figur 1 Alle fungerende prøver fra Västerbotten. Blå=hanner; Rød=hunner. Tallene angir hvilket individ som er representert. 6

8 Mars Feb Des 2003 Gävleborg, Västernorrland og Jamtlands län km Jan Jan Figur 2 Fungerende prøver fra Jämtland, Västernorrland og Gävleborgs län. Blå=hanner; Rød=hunner. Tallene angir hvilke individer som er representert. 7

9 Revir Ockelbo (~4 ulver) VS VS VS VS VS VS Gävleborgs län km Figur 3 Fungerende prøver fra sørlige Gävleborgs län. Blå=hanner; Rød=hunner. Tallene angir hvilke individer som er representert. Antall ulver i revir Ockelbo er hentet fra Wabakken et al. (2004). VS VS VS VS VS VS VS Revir Furudal (9-11 ulver) Östra Dalarna VS VS VS Figur 4 Fungerende prøver fra östra Dalarnas län. Blå=hanner; Rød=hunner. Tallene angir hvilke individer som er representert. Antall ulver i revir Furudal er hentet fra Wabakken et al. (2004). 8 VS VS04 13 VS VS VS VS VS VS VS km VS

10 VS VS VS VS VS VS VS VS VS Norra Värmland & Dalarna km Figur 5 Fungerende prøver fra västra Dalarna og norra Värmlands län. Blå=hanner; Rød=hunner. Tallene angir hvilke individer som er representert. 9

11 2 VS VS0 VS VS VS VS VS Revir Ed-Halden (~6 ulver) 25 VS VS VS Värmland & Västre Götaland km Figur 6 Fungerende prøver fra Värmland og Västra Götalands län. Blå=hanner; Rød=hunner. Tallene angir hvilke individer som er representert. Antall ulver i revir Ed-Halden er hentet fra Wabakken et al. (2004). 10

12 VS VS VS VS VS VS VS Revir Filipstad; (~7 ulver) 24 VS VS VS VS VS VS Revir Kilsbergen; (se Figur 8) 8 VS VS Östra Värmland & Örebro län km Figur 7 Fungerende prøver fra östra Värmland og Örebros län. Blå=hanner; Rød=hunner. Tallene angir hvilke individer som er representert. Antall ulver i revir Filipstad er hentet fra Wabakken et al. (2004). 11

13 VS VS VS Revir Kilsbergen (6-7 ulver) 8 VS VS VS VS VS km Centrala Örebro län 0 2,5 5 Figur 8 Fungerende prøver fra centrala Örebros län. Blå=hanner; Rød=hunner. Tallene angir hvilke individer som er representert. Antall ulver i revir Kilsbergen er hentet fra Wabakken et al. (2004). 12

14 Appendix 1 Detaljoversikt over alle innsamlede prøver. Individnummer og kjønn er angitt for alle fungerende prøver. EBC-nr Avsändare DNA-profil Individ Kön insamlar nr. VS Nelly Grönberg + 1 M VS Lars Furuholm + 1 M VS Nelly Grönberg + 1 M VS Mats Rapp + 2 M VS Therese Lundell + 2 M VS Per Larsson + 3 F VS M M? Se prov ? + 3 F VS Per Larsson + 3 F VS Urban Mossberg Per Larsson + 3 F VS Lars-Axel Magnusson + 4 M VS Lars-Axel Magnusson + 4 M VS Mats Rapp + 4 M Insaml. Datum Län, plats Typ av prov Kommentarer Sandsjömossen spillning revir: filipstad, 1spårlöpa Verkar vara osäkert om prov 1 eller 5 och om koordinaterna stämmer S spillning Se blankett S, Sandsjömossen spillning revir:filipstad S Imman spillning 1 spårlöpa S, Ulvsbyn spillning spillning Tik i tisjön spillning B-prov spillning S(W), SV Digerberget W län spillning 1 spårlöpa, Barmark väg W, spillning 1 spårlöpa, hane insamlat längs samma spårlöpa som men efter väg. Kan vara W, spillning annan individ W/S, Fjällrämmen spillning 1 spårlöpa, revir:tyngsjö öst 13

15 VS Mats Rapp + 4 M VS Kent-Åke Gustavsson + 5 F VS Kent-Åke Gustavsson + 5 F VS Nelly Grönberg + 6 M VS Nelly Grönberg + 6 M VS Lars Furuholm + 6 M 04-58b VS Dagmar Jonsson + 6 M VS William Lundin + 7 M VS William Lundin + 7 M VS William Lundin + 8 F VS William Lundin + 8 F VS Lars Furuholm + 9 F 04-58a VS Lars Furuholm + 9 F 04-58c VS Dagmar Jonsson + 9 F Peter Edholm, Arne VS Mortensen + 9 F VS Åke Aronson + 10 M VS Åke Aronson + 10 M W/S, Fjällrämmen spillning 1 spårlöpa, revir:tyngsjö öst O, Solittjärn Toftdal spillning 2 spårlöpor, revir: Ed-Halden O blod S, S. Sandsjömossen spillning 4 spårlöpor, revir: Filipstad S, S. Sandsjömossen spillning 4 spårlöpor, revir: Filipstad ev samma koordinater som 04-58a, S, spillning revir: Filipstadsreviret Filipstadsreviret spillning Filipstadsreviret Bredtjärnen spillning 6 spårlöpor T, spillning 6 spårlöpor revir: Kilsbergen T, Hemsjön spillning T, Hemsjön spillning 6 spårlöpor S, spillning 3 spårlöpor, revir Filipstad ev samma koordinater som 04-58a, S, spillning revir: Filipstadsreviret spillning revir: Filipstad spillning revir: Filipstad flera spårlöpor men sannolikt bara W, spillning djur W, Bingsjö-Dådran spillning Revir :Balungen. Möjligen nytt par. 14

16 VS Åke Aronson + 10 M VS Lennart Nilsson + 11 M VS Tommy Forsström + 11 M VS Roland Näslund + 11 M VS Artur Olsson + 11 M VS Lars Svanberg + 11 M VS Lars Svanberg + 11 M Dan Wemer, Anita Eriksson, VS William Lundin + 12 F VS Anita Eriksson, Dan Wemer + 12 F Dan Wemer, Anita Eriksson, VS William Lundin + 12 F VS Hans Hedblom + 13 F VS Sture Nordlund + 13 F VS Åke Aronson + 13 F VS Hans Hedblom VS Åke Aronson VS Åke Aronson W, Bingsjö-Dådran spillning Västernorrland, Solberg, Njurunda spillning 1 spårlöpa X, spillning X, Lingbo/Klubbäcken spillning X Gävleborg, Slättfors spillning 1 spårlöpa flera spårlöpor men sannolikt bara 2 djur. Revir: Balungen Vandringsvarg Sundsvall-Gävle, Iggesund Vandringsvarg! Ensam varg, 1 spårlöpa Provet är från samma? Varg som prov stam????? (A1)=040228, se VS / SA Z spillning Z Kilberget spillning Kilsbergen spillning Kilsbergen spillning Pellasflyten ca 7km norr om Dådren spillning 2 spårlöpor, revir: Bingsjö W, Tänger spillning 1 spårlöpa W, spillning Dalarna blod W blod W blod Varg som kom österifrån (Fernsele? Västernorrland) 2 spårlöpor, Nytt par? (Bingsjöparet) eller Furudalsparet? Nya Löpan. Ej blod i urin, utan bloddroppar utmed spårlöpan. Ev ny parbildning. Blod i vargspår men blod i älgspår fanns också på platsen varför det kan vara älgblod 15

17 VS Mats Rapp + 14 M VS Mats Rapp + 14 M VS Ulf Eskilsson + 15 M VS Lars Danielsson + 15 M VS Tord Gustavsson + 15 M VS Tord Gustavsson + 15 M VS Lars Danielsson + 15 M VS Lena Berg + 16 M VS Lena Berg + 17 M Ore älv spillning revir: furudal Fililngsåsen, Furudal spillning Barmark flera plus AC spillning AC spillning AC spillning AC spillning AC spillning hane W spillning W spillning Rendez vousplats 1, 9-11 vargar Rendez vousplats 1, 9-11 vargar VS Lena Berg + 17 M VS Lena Berg + 17 M W spillning W spillning Rendez vousplats 1, 9-11 vargar Rendez vousplats 1, 9-11 vargar VS Lena Berg + 17 M VS Kent Sköld, Maria Levin + 18 F VS Nils Johansson + 18 F 0437a W spillning T spillning T blod Rendez vousplats 1, 9-11 vargar Spillningen i prov 04-30,04-31, och kan komma från två olika individer. Vet ej om blod samlats från urin eller skadad tass. Blankett skriven av Åke Aronsson 16

18 VS Nils Johansson + 18 F 0437b VS Åke Aronson + 18 F VS Kent-Åke Gustavsson + 19 F VS Per Larsson + 20 F VS Per Larsson + 20 F VS Roland Näslund + 21 M VS Leif Holst + 21 M VS William Lundin + 22 F VSC 04- VS William Lundin + 22 F 86 VS Alf Nordin + 23 M VS Alf Nordin + 23 M VS Mats Rapp + 24 M VS Lasse Larsson + 24 M VS Kent-Åke Gustavsson + 25 M VS Kent-Åke Gustavsson + 25 M VSC 04- VS William Lundin + 26 M T blod T blod Vet ej om blod samlats från urin eller skadad tass. Blankett skriven av Åke Aronsson Ej blod i urin utan från tass/ben. Skador höger framfot, sannolikt hona O, Klingarudstjärn Laxarby spillning revir: Glaskogen S, Stackelåsen spillning insamlat på barmark S, Stackelåsen spillning Gävleborg, öster Gopen efter väg spillning 2 spårlöpor Gävleborg, revir:ockelbo spillning 4 spårlöpor Bredtjärnstorp spillning S.Tolsboda spillning W spillning W, spillning insamlat på barmark, revir:kilsbergen? troligen valp, insamlat på barmark, revir:kilsbergen?, 1 spårlöpa och från samma spårlöpa. Karta bifogad S, N Blåsjön spillning revir:stadr?, 2 spårlöpor 03-15? spillning O, Svingsjön Kroppefjäll spillning O, Hästestruten Kroppefjäll spillning 1 spårlöpa T, N.Tolsboda spillning Anmäld som trolig varg, mycket osäker på art! 1 spårlöpa Revir: Nilsbergen? Troligen hanen, insamlat på barmark 17

19 VS Lars Liljemark + 27 M VS Lena Berg + 28 F VS Lena Berg + 28 F VS Lena Berg + 28 F Z spillning W, spillning W, spillning W spillning ev valpspillning, 9-10 spårlöpor. På blanketten står 2004 men det ska Rendez vousplats 1, 9-11 vargar Rendez vousplats 1, 9-11 vargar VS M V1157/04 VS Kent Sköld, Maria Levin + 30 M VS Pär Johansson + 31 F W VS Leif Holst + 32 M VS Leif Holst + 33 F VS Leif Holst + 34 M VS Lars-Axel Magnusson + 35 M VS Kent-Åke Gustavsson + 36 F VS Lena Berg + 37 F VS Lars-Axel Magnusson + 38 M Täby vävnad T spillning Spillningen i prov 04-30,04-31, och kan komma från två olika individer W, Humofjärn, Furudal spillning 2 spårlöpor, alfaparet, ny hona?? Gävleborg, Katrineberg spillning 4 spårlöpor, revir: Ockelbo Gävleborg, Vägbanan mellan Katrineberg och Tönsen spillning revir: ockelbo Gävleborg, Katrineberg spillning 4 spålöpor W spillning O, Pöltjärnarna Kroppefjäll spillning W spillning Rendez vous-plats 1, 9-11 vargar W, spillning 1 spårlöpa 18

20 VS Kent-Åke Gustavsson + 39 M VS Kent-Åke Gustavsson + 40? VS Björn Ljunggren + 41 M VS Nisse Pers + 42 F VS Lena Berg + 43 F VS Leif Holst VS Leif Holst VS Leif Holst VS Sture Nordlund VSC 04- VS Nelly Grönberg + Rev 55 VSC 04- VS William Lundin - 79 prov O, Heråälven Dals-Ed spillning 5 spårlöpor. Revir: Ed-Halden O, Norr Torbjörnsmossen Dals-Ed spillning 5 spårlöpor, revir: Ed-Halden Ulriksbergsreviret? spillning Ulriksbergsreviret? 04-?? W, spillning W, spillning Rendez vousplats 1, 9-11 vargar Gävleborg, Vägbanan mellan Katrineberg och Tönsen spillning 4 spårlöpor, revir: Ockelbo Gävleborg, Katrineberg spillning 4 spårlöpor Gävleborg, Vägbanan mellan Katrineberg och Tönsen spillning 4 spårlöpor, revir: Ockelbo Förmodat revir: Filipstad, Tungsjö, Halgån? spillning 2 spårlöpor VS Arne Mortensen VS William Lundin Förmodat revir: Nilsbergen spillning 5 spårlöpor W, Bingsjö spillning 2 spårlöpor? VS Leif Holst VS Kent-Åke Gustavsson VS Åke Aronson VS Lena Berg Sandsjömossen spillning T, Rödsimmen spillning Gävleborg, Vägbanan mellan Katrineberg och Tönsen spillning revir: Ockelbo O,Kvarnhusbäcken Gärdsjö Laxarby spillning 1 spårlöpa vid kadaver-okänt antal djur som varit och ätit 2 spårlöpor, Nytt par? (Bingsjöparet) eller Furudalsparet? W, spillning Älder löpan till parningsplatsen W, spillning Rendez vous-plats 1, 9-11 vargar 19

21 VS Lena Berg VS Kent-Åke Gustavsson VS Per Larsson VS Kent-Åke Gustavsson VSC 04- VS William Lundin - 81 VS Kent-Åke Gustavsson VS Lars Furuholm VSC 04- VS Nelly Grönberg - Rev 56 VS William Lundin + Hund VS Kent-Åke Gustavsson VSC 03- VS Rune Sto??e - 13 VS Börje Dahlén VS William Lundin Dan Wemer, Anita Eriksson, VS William Lundin + Rev VS Linda Andersson VS Börje Dahlén VS Per Larsson W, spillning Rendez vous-plats 1, 9-11 vargar O, Svingsjön Kroppefjäll spillning spillning Nyskogahanen? O, Heråälven Dals-Ed spillning 5 spårlöpor. Revir: Ed-Halden 01-13? T, N.Tolsboda spillning Kilsbergen S, spillning S, S. Sandsjömossen spillning T, Bredtjärnstorp spillning 6 spårlöpor O, Svingsjön Höhsäter Färgelanda spillning BD, spillning O, Bunesjön Kroppefjäll Högsäter spillning 2 spårlöpor, revir:kroppefjäll spillning Kilsberget spillning Kilsbergen spillning Ö Storfors spillning spillning S, Stackelåsen spillning ev samma koordinater som 04-58a, revir: Filipstadsreviret revir: Filipstad, okänt antal individer Gamla Tyngsöreviret. Från hane i (nyetablerat?) par. Plockat vid vägkant. Gamla Tyngsöreviret. Sannolikt från tiken. Plockat vid vägkant. 20

22 VS William Lundin VSC 04- VS William Lundin - 75 VS Mats Rapp VS Mats Rapp VS Lena Berg Peter Edsholm, Arne VS Mortensen VS Mats Rapp VS Kjell Johansson VS Dagmar Jonsson VS Sture Nordlund VS Sture Nordlund VS Sture Nordlund VS Mats Rapp VS Mats Rapp VS Mats Rapp VS Mats Rapp + Rev VS Inge Woxmark VS Mats Rapp T, Bredtjärnstorp spillning 6 spårlöpor 6 spårlöpor, troligen valp, revir: T, Svinfallet spillning killsbergen W/S, Fjällrämmen spillning 1 spårlöpa, revir:tyngsjö öst W/S, Fjällrämmen spillning 1 spårlöpa, revir:tyngsjö öst W spillning Ben spillning vuxet djur Filipstadsreviret spillning W/S, Fjällrämmen spillning 1 spårlöpa, revir:tyngsjö öst S. St. Hättsjön (Svarta hålet) spillning Vargspillning på väg Filipstadsreviret spillning Filipstadsreviret X, Gammel Homna spillning Lostiken?, 1 spårlöpa Voxna Bruk spillning 1 spårlöpa Voxna Bruk spillning 1 spårlöpa Furudal spillning revir: furudal, barmark Ore älv spillning revir: furudal, valpspillning? Furudal spillning valp?,barmark Furudal spillning valpspillning (räv?), barmark +15. Tillvaratagen av Gerd , W, spillning Spillningen har legat ett tag W, Ore älv. spillning 21

23 VS Mats Rapp VS Lena Berg VS Mats Rapp VS Mats Rapp VS William Lundin VS Kent-Åke Gustavsson VS Kurt Sköld, Maria Levin VS Lars-Axel Magnusson + Rev VS William Lundin VS Lena Berg VS Lena Berg VS Sture Nordlund VS Alf Nordin + Rev VS Jörgen Johansson VS Lena Berg Furudal spillning Barmark W, spillning Rendez vous-plats 1, 9-11 vargar Furudal spillning och hittade på samma ställe men olika färg på spillningen. 2 olika individer? och hittade på samma ställe men olika färg på Furudal spillning spillningen. 2 olika individer? T, Bredtjärnstorp spillning 6 spårlöpor O, Svingsjön Kroppefjäll spillning Spillningen i prov 04-30,04-31, och kan komma från två T spillning olika individer W, spillning T, Rödsimmen spillning revir: Kilsbergen, 3 spårlöpor W, spillning Rendez vousplats 1, 9-11 vargar W, spillning Rendez vousplats 1, 9-11 vargar W, spillning 1 spårlöpa W, spillning Dalarna W, "Studentvägen" Venjan-Mora spillning W, spillning Rendez vousplats 1, 9-11 vargar 22

24 VS04-143? spillning VS Lars-Axel Magnusson W, spillning VS Mats Rapp Furudal spillning Barmark +15 furudal VS Mats Rapp Furudal spillning Barmark +15 furudal VS Lena Berg W spillning VS04-151? ?? spillning VS04-152? ?? spillning VS Roland Näslund Gävleborg, Spångsund Mosjön spillning revir: ockelbo VS Nelly Grönberg S, Sandsjöälven spillning revir:filipstad, 2 spårlöpor VS Kent Sköld, Maria Levin T spillning Spillningen i prov 04-30,04-31, och kan komma från två olika individer. VS Lena Berg VS Alf Nordin + Rev VS Sture Nordlund VS Lena Berg VS04-169? + Rev W spillning W, spillning Skäfttjärn spillning 1 spårlöpa W spillning Byråsen spillning Rendez vousplats 1, 9-11 vargar Osäkert om varg. Osäkert om spillning, sekret eller urin pga regn. Extraherat som spillning och från samma spårlöpa. Karta bifogad. Rendez vousplats 1, 9-11 vargar 23

25 VS04-171? VS William Lundin VS Kent Sköld, Maria Levin VS Lars Danielsson VS Lars Danielsson VS PJ VS Åke Aronson ? spillning revir: Kilsbergen, 3 spårlöpor, T, Kilsgergen spillning Barmark T blod (?) AC urin Troligtvis en hane AC urin Urinerar hukande W blod Ej blod i urin, utan bloddroppar W blod utmed spårlöpan. Ev ny parbildning. Förmodat revir: Nyskoga, Antal VS Per Larsson Värmland blod spårlöpor vid spårningen: 2 VS Anders Salomonsson - Nr spillning Varg eller räv? VS Alf Nordin - Nr spillning VS Alf Nordin + Hund Nr spillning VS Johan Månsson C (Uppsala län) Korsgården spillning VS blod VS Lars-Gunnar Wagenius Z spillning 24