Laboratorieundersøkelser av mykobakterier. Christian Lidstedt. Bioingeniør ved avdeling for medisinsk mikrobiologi

Størrelse: px

Begynne med side:

Download "Laboratorieundersøkelser av mykobakterier. Christian Lidstedt. Bioingeniør ved avdeling for medisinsk mikrobiologi"

Patrick Rasmussen
8 år siden
Visninger:

1 Laboratorieundersøkelser av mykobakterier Christian Lidstedt. Bioingeniør ved avdeling for medisinsk mikrobiologi

2 1. Arbeid i P3-lab 2. Bakteriens virulensegenskaper 3. Prøvetakning

3 Strenge smittevernregler på tuberkuloselaboratoriet Arbeid i P3-lab smitterisikogruppe 3: en biologisk faktor som kan forårsake alvorlig infeksjonssykdom hos mennesker og utgjøre en alvorlig fare for arbeidstakerne, det kan være risiko for spredning til samfunnet, men det finnes vanligvis effektive forebyggende tiltak eller behandling 1. Arbeid i P3-lab

utgjøre en alvorlig fare for arbeidstakerne, det kan være risiko for spredning til

4 Sluse med ren og skitten del 1. Arbeid i P3-lab

5 Undertrykk mellom alle rom på TB-lab 1. Arbeid i P3-lab

6 Mikrober som kommer inn på tuberkuloselaboratoriet Mycobacterium tuberculosis-komplekset er den vanligste mikroben i smitterisikogruppe 3. Andre bakterier er: Brucella (ulike spesies, de vanligst er Brucella melitensis og Brucella canis). Burkholderia pseudomallei og Burholderia mallei Bacillus anthracis 1. Arbeid i P3-lab

Andre bakterier er: Brucella (ulike spesies, de vanligst er Brucella melitensis

7 P4-lab 1. Arbeid i P3-lab

8 Mycobacterium-tuberculosis-kompleks M. tuberculosis M. bovis M. africanum M. microti M. canetti Disse artene er nært beslektet og kalles Mycobacterium-tuberculosis-komplekset (MTBC). Alle disse artene kan gi sykdommen tuberkulose. 2. Bakteriens virulensegenskaper

9 Hva er det som gjør Mycobacterium tuberculosis komplekset så farlig? Den har ingen kjent toksinproduksjon Den kan ikke lure infeksjonsforsvaret ved å endre bakteriecellens overflate (fasevariasjon) De er : Ikke-bevegelige Ikke sporedannende Har ingen kapsel 2. Bakteriens virulensegenskaper

infeksjonsforsvaret ved å endre bakteriecellens overflate

10 Den viktigste virulensfaktoren til Mycobacterium tuberculosis er dens evne til å overleve i makrofager. Bakteriecellen, og spesielt celleveggen, har et høyt lipidinnhold. Celleveggen har en uvanlig lav permeabilitet, og dette bidrar til mikrobens resistens mot antibakterielle midler. 2. Bakteriens virulensegenskaper

Bakteriecellen, og spesielt celleveggen, har et høyt lipidinnhold.

11 Makrofager infisert med tuberkulose

12 Prøvetakning ekspektorat Ekspektorat er den viktigste prøvetype ved mistenkt lungetuberkulose. Prøve tas fra det første oppspyttet om morgenen og før det første måltidet. Pasienten må instrueres om å hoste opp fra brystet (ca 5 ml). Det bør tas minst tre prøver: én prøve hver dag på tre påfølgende dager. Prøvene skal ikke utsettes for dagslys Prøvene skal oppbevares i kjøleskap Det skal ikke være søl på utsiden av glasset 3. Prøvetakning

Pasienten må instrueres om å hoste opp fra brystet (ca 5 ml).

13 Utføres på SUS: dyrkning på mykobakterier direkte mikroskopi Quantiferon (utføres på seksjon for virus) Utføres ikke på SUS: Direkte- PCR (Haukeland og Rikshospitalet) Identifisering av isolat (Folkehelseinstituttet) Resitensbestemmelse (Folkehelseinstituttet)

Direkte- PCR (Haukeland og Rikshospitalet) Identifisering av

14 Quantiferon Quantiferon er en TB-undersøkelse som undersøkes i blodprøver. Det tilsettes antigener som ligner på TBmikroben i blodet. De hvite blodcellene vil gjenkjenne disse og produserer et cytokin som aktiverer immunforsvaret. Mengden av dette cytokinet blir målt. Spesifisitet: 98% Sensitivitet: 90% Testen kan ikke skille mellom aktiv og latent tuberkulose.

De hvite blodcellene vil gjenkjenne disse og produserer et cytokin som aktiverer

15 Quantiferon 2013 på SUS 1432 prøver 72,6 % negative 25,1 % positive 2,4 % inkonklusive

16 Direkte mikroskopi Ziehl Nielsen benyttes som fargemetode for å farge syrefaste staver og består av 3 trinn: 1. Karbolfuksin (rød farge) under oppvarming 2. Saltsyrealkohol avfarger andre bakterier enn syrefaste 3. Malakittgrønn som kontrastfarge Karbolfuksin Malakittgrønn

Karbolfuksin (rød farge) under oppvarming 2.

17 Bildet viser syrefaste staver (M.tuberculosis) i direkte mikroskopi fra ekspektoratprøve

18 Det finnes andre bakterier enn M. tubercuolsis som er syrefaste Det må være ca bakterier pr. ml ekspektorat for å kunne påvises i direkte mikroskopi 100 synsfelt blir mikroskopert og mengden av syrefaste staver blir oppgitt til rekvirent: sparsomt middels rikelig rikelig

ml ekspektorat for å kunne påvises i direkte mikroskopi 100 synsfelt

19 Direkte mikroskopi direkte mikroskopi undersøkelser ca 4 % var positive

20 Positive direkte miroskopi prøver sendes til PCR-undersøkelse til Haukeland Prøven sendes til PCR-undersøkelse av MTBC hvis det er funn av syrefaste staver i direkte mikroskopi Nedre deteksjonsgrense for PCR er 10 bakterier Ved funn av MTBC kan det settes opp en genteknologisk metode for påvisning av rifampicinresistens. Denne testen er viktig fordi rifampicinresistens er markør for sannsynlig multiresistens.

deteksjonsgrense for PCR er 10 bakterier Ved funn av MTBC kan det settes opp en genteknologisk metode

21 Dyrkning på mykobakterier Alle prøver dyrkes i 37 o C i 6 12 uker i kulturer. Usterilt prøvemateriale forbehandles: Prøvematerialet dekontamineres Seige ekspektorat blir homogenisert Antibiotika mot andre bakterier enn mykobakterier blir tilsatt kulturen Vekstfaktorer for mykobakterier tilsettes i kulturen Antatt sterilt prøvemateriale: tilsatt vekstfaktorer for mykobakterier Kultur til dyrkning

22 BacT/ALERT 3D

24 Vekstkurven (måler økning CO 2 nivået) blir avlest for alle flasker som flagger ut som positive MTBC kan flagge ut som positive prøver etter 8-40 døgn Under optimale forhold har mikroben en generasjonstid på timer. Vekstkurve tilhørende MTBC

25 Alle positive prøver blir dyrket på blod- og brunskål Prøver som har en svak stigning på vekstkurven blir dyrket på Løwenstein-Jensen-medium Løwenstein-Jensen-medium

26 Mycobacterium tuberculosis i cords fra kultur

27 Mycobacterium-avium-komplekset (atypiske mycobacterier) fra kultur

28 Mycobacterium fortuitum (atypiske mycobacterier) fra kultur

29 Hurtigtest for påvisning av Mycobacteriumtuberculosis-komplekset Ved oppvekst av syrefaste staver i kultur kan det settes opp hurtigtest som påviser MTBC. Påviser MPT 64 antigen som utskilles fra MTBC under kulturdyrkning. Analysetid er 15 minutter. Oppgitt av produsent å være 100 % spesifikk Kan gi falske negative prøvesvar

30 Prøven blir videresendt til Folkehelseinstituttet Positive dyrkningsprøver som ikke er kjent fra tidligere sendes til Folkehelseinstituttet. Folkehelseinstituttet utfører species identifikasjon som kan utføres direkte fra tilsendt kultur. Testen tar ca. 5 timer

31 Genetisk resistensbestemmelse utføres på Folkehelseinstituttet. Rifampicin resistensgen utføres på Folkehelseinstituttet. Denne settes opp direkte fra tilsendt kultur og utføres ca. 2-3 ganger i uken på FHI.

32 Svar genetisk resistensbestemmelse fra FHI NEGATIV: «Det er IKKE påvist mutasjon i genet som koder for resistens. Stammen er derfor med ca. 95% sannsynlighet følsom for rifampicin.» POSITIV: «Det er påvist mutasjon i genet som koder for rifampicin. Stammen er derfor RESISTENT FOR RIFAMPICIN. Isolat av denne typen er ofte også resistente overfor isoniazid (MDR- TB). Spesialist på behandling av denne typen pasienter bør kontaktes.»

33 Resistensbestemmelse fra vekst utføres på FHI Norge: - Alle nye MTBC isolat - Ved mistanke om behandlingssvikt Automatiserte maskiner sammenligner vekst i rør med og uten antibiotikum Folkehelseinstituttet setter opp resistensbestemmelse og det tar ca. 3 uker før vi får svar på denne.

34 Fingerprint utføres på alle nye stammer på FHI Alle prøver som sendes inn til Folkehelseinstituttet blir fingerprintet. Dette er en genteknologisk metode som kan skille mellom ulike M. tuberculosisstammer Dersom det oppdages identiske stammer vil det bli satt i gang smitteoppsporing og eventuelle tiltak for å hindre videre smitteutbredelse.»

35 Årstall Totalt Antall dyrkningsprøver Dyrkningsprøver påvist MTBC Antall pasienter påvist MTBC nye nye 1 afric * nye 1 afric * nye nye * Mycobacterium africanum Antall dyrkningsprøver og pasienter hvor MTBC er påvist ved SUS

36 norsk kvinne født Ingen nye nordmenn norske menn født 1928 og Ingen nordmenn kvinner og 1 mann født Ingen nordmenn pasient med MDR (Asylsøker fra Tsetjenia)

Like dokumenter

TBC. Hva er tuberkulose? Tæring. Tone Ovesen Tuberkulosekoordinator UNN Tromsø/ Regional tuberkulosekoordinator KORSN 25.

TBC. Hva er tuberkulose? Tæring. Tone Ovesen Tuberkulosekoordinator UNN Tromsø/ Regional tuberkulosekoordinator KORSN 25. TBC Hva er tuberkulose? TB Tæring Tone Ovesen Tuberkulosekoordinator UNN Tromsø/ Regional tuberkulosekoordinator KORSN 25. November 2010 Tuberkulose fortsatt aktuelt? Rundt 9 millioner nye tilfeller med